专利名称：一种复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，涉及一种抗高血压药物阿替洛尔的新剂型，特别涉及一种复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物。
背景技术：
阿替洛尔(Atenolol)，分子式=C14H22N2O3,分子量266. 34。本品为心脏选择性β_受体阻断剂，无膜稳定作用，无内源性拟交感活性。一般用于窦性心动过速及早搏等，也可用于高血压、心绞痛及青光眼。阿替洛尔有肾上腺素β受体部位竞争性地抑制儿茶酚胺的作用，但主要使β I受体的活动处于抑制状态。通过减弱或防止β受体兴奋而使心脏的收缩力与收缩速度下降，通过传导系统的传导速度减慢，使心脏对运动或应激的反应减弱。因此，用于心绞痛的治疗，减低心肌氧耗，增加运动耐量。由于阻滞心脏起搏点电位的肾上腺素能兴奋故用于治疗心律失常。可能本品通过中枢、肾上腺素能神经元阻滞、抗肾素活性以及心排血量减低等降低血压，适用于治疗高血压。由于本品能拮抗儿茶酚胺效应，也用于治疗嗜铬细胞瘤及甲状腺机能亢进，使β 和β2受体的活动均处于抑制状态。阿替洛尔为长效、选择性β I肾上腺素受体阻滞药，其心脏选择性作用明显强于美托洛尔，而对血管及支气管平滑肌的β 2受体抑制较弱。无内源性拟交感活性，无膜稳定性，也无抑制心肌收缩力的作用。本品可降低高血压患者的血压，减轻由运动所致的血压增高。同时，通过减低心率(8% 34%)和心率、血压乘积(9% 40% )，减少心绞痛发作的严重程度和频率，改善急性心肌梗死患者的耗氧指数。因此早期应用该药可缩小心肌梗死面积和预防再梗死，长期应用可降低心肌梗死或卒中的死亡率。现在市场上已有如阿替洛尔片剂的降压药物，虽然口服后能从胃肠道吸收，但吸收速度慢、吸收不完全，另外片剂中药物的溶出速率慢，生物利用度差，再加上阿替洛尔本身作用缓慢，使得阿替洛尔的药效无法迅速得到利用。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷与不足，本发明的目的在于提供一种分布均匀，稳定性好，生物利用度高，疗效显著的复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物。实现上述发明目的的技术方案是一种复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物，各原料及其质量百分比为
阿替洛尔1% 15%
表面活性剂5% 35%
助表面活性剂1% 20%
油1% 20%
杜仲水提物O. 5% 10%牡丹皮水提物O. 5 % 10 %
其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。本发明选用的杜仲，甘微辛，温。①《本经》“味辛，平。”②《别录》“甘，温，无毒。”③《药性论》味苦。”入肝、肾经。①王好古“肝经气分。”②《雷公炮制药性解》入肾经。”③《本草经解》“入手太阴肺经。”
杜仲的皮、叶、枝条、果实和花中含有的成分大致可分为以下几类
木脂素类(Iignans)杜仲膏包括松脂醇二葡萄糖苷(pinoresinol diglucoside)这一主要降压成分、丁香脂醇二葡萄糖昔、橄榄脂素、吉尼波西狄克酸甲脂(geniposidicacid methylester)、儿茶素-(7,8_b, c) _4 α -(3,4_ 二轻苯基)-α -(3Η)卩比喃糖、儿茶素-(7，8-13，(3) -4 0-(3，4-二羟苯基)-(1-(3 )吡喃糖等，迄今为止，从杜仲中已分离出木脂素类化合物27种，其中许多有效成分在抗肿瘤方面具有很好的活性。苯丙素类化合物(penylpropanoids):包括香豆酸(coumaric)、咖啡酸乙酯(caffeic acid ethylester)、绿原酸(chlorogenic-acid)、松柏苷(syringin)。迄今为止，杜仲中发现苯丙素类化合物有11种。环烯醚職类(iridoids):杜仲醇(encommiol)、杜仲醇苷(encommio-side)、京尼平(genipin)、京尼平苷酸(geniposidic acid)、京尼平苷(geniposide)、桃叶珊瑚苷(aucubin)、筋骨草苷(ajugoside)、哈帕苷丁酸酯(harpagide acetate)、雷扑妥苷(reptoside)、车叶草酸、去乙酰车叶草酸、10 —乙酰鸡屎藤苷、表杜仲醇。到目前为止，从杜仲中分离的环烯醚萜类化合物共15个。
黄酮类黄酮类化合物也是杜仲的主要有效成分之一，其含量的高低是判断杜仲生药及其产品质量的重要指标，对杜仲黄酮类化合物的报道多见于含量测定和分离提取工艺的研究。经研究发现杜仲中所含黄酮类化合物主要为山奈酚(kaempfeiOl)、槲皮素(quercetin)、紫云英苷(astragal in)、陆地锦苷(hirsutin)、芦丁(rutin)。杜仲水提物的药理作用
I.降压作用树皮的提取物及煎剂对动物有持久的降压作用。用其浸膏5毫升(生药I 2克)给麻醉犬静脉注射后产生显着的降压作用，可持续2 3小时，呈〃快速耐受〃现象。在3只肾型高血压狗，每天以煎剂5 8克/公斤灌胃，共4周，收缩压降低最多时只有8 22毫米汞柱(4 10%)，因此疗效不够满意。杜仲的炮制与剂型对降压作用有一定影响，煎剂作用强于酊剂，炒杜仲的降压作用较生杜仲为大。杜仲对猫有降压作用，但持续较短，〃快速耐受〃现象不显著。对胆留醇动脉硬化家兔之降压作用较对正常家兔更为显著，但亦能产生〃快速耐受〃。至于降压原理，因尚未确定有效成分，故属于初步性质，已证明急性降压与迷走神经无大关系，亦不受阿托品之影响。对离体兔心，杜仲小量时先兴奋，后略呈抑制；也有报告其对心脏的抑制作用与其pH有关(pH在4 5之间)，经调整后，对大鼠与家兔离体心脏皆呈兴奋作用。杜仲对正常兔耳血管有直接扩张作用，但同样浓度却使实验性胆留醇动脉硬化兔耳血管呈收缩作用，对正常家兔的冠状血管与肾血管在低浓度时多呈扩张作用，高浓度时则相反，对动脉硬化家兔的冠状血管在低浓度时亦呈收缩作用。因其降压与心及血管的直接关系不大，故推论其为中枢性者。
2.利尿作用杜仲的各种制剂对麻醉犬均有利尿作用，且无“快速耐受”现象。对正常大鼠、小鼠亦有利尿作用。杜仲中含钾0. 4%，故推论利尿可能与钾有关。牡丹皮，为毛茛科植物牡丹干燥根皮。《本草纲目》滋阴降火，解斑毒，利咽喉，通小便血滞。后人乃专以黄蘖治相火，不知丹皮之功更胜也。赤花者利，白花者补，人亦罕悟，宜分别之。”现代研究，所含牡丹酚及其以外的糖苷类成分均有抗炎作用；牡丹皮的甲醇提取物有抑制血小板作用；牡丹酚有镇静、降温、解热、镇痛、解痉等中枢抑制作用及抗动脉粥样硬化、利尿、抗溃疡等作用。性味归经性寒，味苦；凉；微寒。归心；肝；肾；肺经。味苦、辛，微寒。归心、肝、肾经。鲜根含牡丹酹原式(paeonolide)约5% 6%，但在干燥及忙藏过程中易酶解成牡丹酹式(paeonoside)和一分子L-阿拉伯糖；根皮还含牡丹酹、苟药式(paeonifolorin)轻基芍药甙、苯甲酰芍药甙及苯甲酰羟基芍药甙、挥发油，以及苯甲酸、植物留醇、蔗糖、葡萄糖、阿拉伯糖等.
对心血管系统的作用静脉注射牡丹皮提取物对犬冠脉结扎所致心肌缺血有明显保护作用.煎剂、去牡丹酚煎剂或牡丹酚静脉注射，对麻醉狗及大鼠均有降压作用；煎剂、去牡丹酚煎剂或牡丹酚灌胃，对实验性高血压狗给药I周后血压显著下降，可维持I 3周.牡丹皮在体外有显著的抗凝血作用，对内毒素、ADP和胶原诱导的大鼠及人的血小板聚集均有显著抑制作用。牡丹皮对麻醉犬心能增加冠脉血流量，减少心输出量，降低左室作功的作用。对实验性心肌缺血有明显保护作用，并且持续时间较长，同时降低心肌耗氧量。丹皮煎剂，去牡丹酚后的煎剂I. O 3. 0g/kg或牡丹酚80 120mg/kg静脉注射，对麻醉犬和大鼠均有降压作用。原发和肾型高血压犬，用牡丹皮煎剂5g/kg灌胃，连续5天，于第6天，第7天剂量增至10g/kg，血压明显下降。肾型高血压犬，用去牡丹酚后的煎剂10g/kg灌胃，连续10天血压下降。用牡丹酚0.5 I. 0g/kg给肾型高血压犬和大鼠也出现一定的降压效果。牡丹酚能显著抑制正常心肌细胞快相(5分钟)和慢相(120分钟)45Ca摄取及搏动频率，显著抑制钙反常心肌细胞45Ca摄取和降低胞内过氧化脂质含量，且呈剂量依赖性，表明牡丹酚减轻钙反常损伤与阻止Ca2+内流及抗氧化有关。牡丹酚磺酸钠除能抑制钙离子摄取外，且能显著抑制钙反常心肌细胞的45Ca摄取及其胞膜SA含量，与剂量呈相关关系。另用食饵性动脉粥样硬化模型，研究牡丹酚的抗动脉粥样硬化作用。结果造型加牡丹酚组主动脉内膜病变肉眼定级及形态学组化分析，均比造型对照组显著减轻。表明腹腔注射牡丹酚IOOmg/kg · d，连续6周能明显抑制动脉粥样硬化斑块形成。本发明选用的表面活性剂是非离子表面活性剂聚氧乙烯醚-40氢化蓖麻油(Cremophor RH 40),蓖麻油聚氧乙烯醚40 (EL40)、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或任意一种与span80的混合物。这些表面活性剂对人体低毒、安全、无刺激。本发明选用的油是大豆油、菜籽油、三乙酸甘油酯、棕榈酸异辛酯、油酸、油酸乙酯、肉豆蘧酸异丙酯(IPM)或乙酸乙酯等可食用油类中的任意一种或几种的混合物。安全、
母O为了达到更好的效果，本发明在上述表面活性剂中加入助表面活性剂无水乙醇、 1，2-丙二醇、丙三醇、聚乙二醇200 (PEG200)、聚乙二醇400 (PEG400)或聚乙二醇600(PEG600 )中的任意一种，或几种的混合物。本发明中助表面活性剂在复方阿替洛尔纳米乳的构建中同样是很好的药物助溶齐U，本发明在药物中加入刺激性小的助表面如乙醇、1，2-丙二醇、丙三醇或聚乙二醇200，聚乙二醇400，聚乙二醇600，除了助溶作用外，助表面活性剂主要是为了调整表面活性剂的亲水亲油平衡值(HLB)，使得油水界面张力进一步降低，增大界膜的油水性和刚性。助表面活性剂掺入到界面膜中，促进曲率半径很小膜的形成，扩大复方阿替洛尔纳米乳的乳区面积。本发明的复方阿替洛尔纳米乳，一方面极大的提高了阿替洛尔的溶解度，减少了 药物在体内的首过效应，促进药物的胃肠道吸收。阿替洛尔是BCS 二类药物，在水中极难溶解，使药物的转运及吸收变得困难，纳米乳基质为阿替洛尔提供了良好的溶解环境。口服时可经淋巴吸收，克服首过效应和分子通过胃肠道时的屏障；另一方面通过复配杜仲水提物及牡丹皮水提物，使得本药物降压更平稳，效果更持久。本发明的复方阿替洛尔纳米乳与现有技术相比，具有以下优点
I.本发明的阿替洛尔抗高血压纳米乳的药物粒径在10. I 50. 7nm之间，平均粒径为22. 89 nm，是将阿替洛尔溶于油相，加入表面活性剂和助表面活性剂，用溶解杜仲水提物及牡丹皮水提物的蒸馏水滴定到均匀、透明的纳米乳体系。形成的复方阿替洛尔纳米乳含阿替洛尔达8. 1%。2.本发明的阿替洛尔抗高血压纳米乳分布均匀，体系透明、稳定性好，有较低的表面张力，油包水型纳米乳具有良好的流动性。3.本发明的阿替洛尔抗高血压纳米乳给药后迅速被网状内皮细胞吞噬，使药物迅速起效，并维持恒定的血药浓度及药理效应，提高药物的生物利用度，减少药物的用量和使用次数。4.本发明的阿替洛尔抗高血压纳米乳通过中西药结合，发挥两者优点，一方面降压迅速、起效快，另一刚面药效稳定、作用持久，符合高效安全的治疗标准。5.本发明的阿替洛尔抗高血压纳米乳药效稳定，生耗能低。6.本发明制成纳米乳后可制成口服液直接服用、也可经胶囊包封或经冻干粉技术等处理。
图I为本发明复方阿替洛尔纳米乳电镜照片。图2为本发明复方阿替洛尔纳米乳粒径分析曲线图。
具体实施例方式发明人给出具体制备方法实施例及使用药效试验来进一步说明本发明药物的效
果O试验例I本发明复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物粒径大小分析
本发明的最优配比经透射电子显微镜检测(图1)，液滴呈类球形，分散性好，无粘连；经马尔文粒度分析仪检测(图2)其直径分布在17. I 60. Inm之间，平均粒径为42. 3nm。试验例2本发明复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物稳定性分析
通过以下离心试验、光稳定性试验、温度稳定性试验等观察本发明复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物的稳定性，观察本发明是否有分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。I.高速离心试验
取适量制备好的本发明复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物于离心管中，以10 OOOr/min的转速离心15 min,离心试验后,本发明复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物依然保持离心前的澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。2.光稳定性试验
将适量制备好的复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物装入透明好的无色、透明玻璃瓶中，密封，放置于正常光照条件下10d，分别于ld、2d、4d、6d、8d、10d取样观察。结果表明复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物每份样品均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。3.温度稳定性试验
将适量制备好的复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物装入透明好的无色、透明玻璃瓶中，密封，放置于4°C、室温(25°C)和40°C三中温度条件下留样考察各30d，每隔5d取样观察。结果表明，复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物在此三种温度条件下均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。4.长期稳定性试验
将3批纳米乳密封于棕色玻璃瓶内，置于(25±2)°C、相对湿度(60±5)%条件下12个月，分别于0、3、6、9和12个月时取样，考察纳米乳的性状及含量变化，并参考文献统计分析方法，计算复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物的有效期。试验结果表明在长期试验条件下，复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物的外观一直保持澄明、均一，未见分层、色变、絮凝和破乳等现象；体系中的阿替洛尔含量随时间延长而逐渐降低，其含量一时间变化曲线提供的线性回归方程，计算出复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物的有效期为32. 7个月。试验例3大鼠尾部测压法测定复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物的药效(与市售阿替洛尔片对比)
SHR大鼠3只随机分为3组，每组10只，分别设为SHR阳性对照组、阿替洛尔片组、复方阿替洛尔纳米乳组分别给予阿替洛尔片溶液、复方阿替洛尔纳米乳各20 mg/kgd，溶于饮水中，均从饮水中给药，I次/d，连续14周。WKY6只为正常对照组，对照组不给药物，饮水不限。测量各组大鼠尾动脉血压。鼠龄为6周时(即用药前)测压I次，鼠龄7周(用药后I周)测压I次，以后每隔两周测I次血压，直到实验结束。结果见表I。表I各组大鼠SBP的比较(x±s , η = 6)_
组另Il_收缩压(mmHg)
雨7性对照Τ00Γ2±10. 3
雨舂洛尔片142. 7± 11. 5
复方阿替洛尔纳米乳—132. 3 ±10.1—
正常对照组|l23. 6±9. 7
结果显示，复方阿替洛尔纳米乳与阳性对照组和阿替洛尔片比较，差异均极显著，表明
阿替洛尔不但能显著降低阳性大鼠的血压，而且降压效果与阿替洛尔片剂相比效果更好。试验例4毒性试验
I.毒理研究项目及结论本发明产品严格按照新药非临床安全性评价方法与市售阿替洛尔片剂对比进行了急性毒性试验，重复给药毒性试验、遗传毒性试验(包括Ames试验、小鼠骨髓微核试验、体外培养哺乳动物细胞染色体突变试验)、生殖毒性试验(一般生殖毒性试验、致畸敏感期毒性试验、围产期毒性试验)、致癌试验、免疫毒性试验和局部刺激性试验，试验结果如下。本品对小鼠急性毒性实验结论与市售阿替洛尔片剂对比，复方阿替洛尔纳米乳未出现剂量内不良反应及死亡。
本发明产品的Ames试验、小鼠精子畸形试验和睾丸染色体畸变试验等遗传毒性试验的结果均为阴性。大鼠30d喂养本发明产品的结果表明与市售阿替洛尔片剂对比，在试验期内，复方阿替洛尔纳米乳剂量内各实验组动物生长发育良好，体重、摄食量、血常规、血生化、脏器系数等指标均在正常范围内，病理组织学检查亦未见异常。本品长期毒性实验结论与市售阿替洛尔片剂对比，在试验期内，复方阿替洛尔纳米乳剂量内，本药品在连续灌胃给药三个月未见大鼠不良反应，各项检查指标均在正常范围内，病理检查其主要脏器及靶器官均未见该药引起的中毒性病理改变。试验例5药物动力学
试验结果表明，复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物口服吸收好，口服后吸收率达82%，血药达峰时间为4h。生物利用度约91%，血浆蛋白结合率约76%。体内分布广泛，能进入脑部，能迅速透过胎盘。肾功能正常的成年患者消除半减期约7h。肾功能异常者清除率降低，主要与肾小球滤过率有关。实施例I
精确称取EL40 18g，乙酸乙酯10g，阿替洛尔8. lg，1，2-丙二醇15g在室温(25°C )条件下搅拌均匀，然后向其中缓慢滴入已溶解杜仲水提物及牡丹皮水提物的蒸馏水。随着蒸馏水量的增加，体系黏稠度增大，当蒸馏水量使得体系由油包水变为水包油型纳米乳时，体系粘稠度从最粘稠的状态变稀，此时产生的是无色透明的复方阿替洛尔纳米乳，杜仲水提物6. lg，牡丹皮水提物4. Sg，余量为水。此实施例为复方阿替洛尔纳米乳的最佳配比。以下实施例步骤同实施例I :
实施例2
阿替洛尔7g，吐温80 28g，肉豆蘧酸异丙酯12g，乙醇12g，杜仲水提物5g，牡丹皮水提物4g，余量为水32 g。实施例3
RH40 28g，油酸10g，阿替洛尔8g，PEG400 3g，杜仲水提物5g，牡丹皮水提物7g，蒸馏水
39g0实施例4
EL40氢化蓖麻油30g，油酸乙酯7g，阿替洛尔6g，丙三醇3g，杜仲水提物3. 5g，牡丹皮水提物6. 5g，蒸馏水44g。实施例5
泊洛沙姆188 25g，肉豆蘧酸异丙酯10g，阿替洛尔8g，PEG200 12g，杜仲水提物6g，牡丹皮水提物3g，蒸馏水36g。实施例6RH40 22g，大豆油10g，阿替洛尔8g，聚乙二醇600 17g，杜仲水提物2g，牡丹皮水提物4g,蒸懼水37g。实施例7
阿替洛尔lg，吐温80 5g，肉豆蘧酸异丙酯lg，乙醇20g，杜仲水提物10g，牡丹皮水提物IOg,蒸懼水53 go实施例8
阿替洛尔3g，RH40 10g，油酸4g，PEG400 17g，杜仲水提物8g，牡丹皮水提物12g，蒸馏水 46g。实施例9
阿替洛尔5g，EL40 15g，油酸乙酯7g，丙三醇13g，杜仲水提物7g，牡丹皮水提物8g，蒸懼水45 go实施例10
阿替洛尔7g，泊洛沙姆188 20g，肉豆蘧酸异丙酯10g，PEG200 10g，杜仲水提物5g，牡丹皮水提物5g，蒸馏水43g。实施例11
阿替洛尔9g，RH40 25g，大豆油13g，聚乙二醇600 7g，杜仲水提物4g，牡丹皮水提物3g,蒸懼水39g。实施例12
阿替洛尔12g，吐温80 30g,肉豆蘧酸异丙酯16g，乙醇3g，杜仲水提物2g，牡丹皮水提物3g，蒸馏水34 g0实施例13
阿替洛尔15g，RH40 35g，油酸20g，PEG400 lg，杜仲水提物0. 5g，牡丹皮水提物0. 5g，蒸馏水28g。权利要求
1.一种复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物，其特征在于，其原料及其质量百分比为阿替洛尔1% 15% 表面活性剂5% 35% 助表面活性剂1% 20%油1% 20% 杜仲水提物O. 5% 10% 牡丹皮水提物O. 5 % 10 % 其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100% ； 所述的表面活性剂为聚氧乙烯醚-40氢化蓖麻油，蓖麻油聚氧乙烯醚40、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或任意一种与span80的混合物； 所述的油是大豆油、菜籽油、三乙酸甘油酯、棕榈酸异辛酯、油酸、油酸乙酯、肉豆蘧酸异丙酯或乙酸乙酯等可食用油类中的任意一种或几种的混合物； 所述的助表面活性剂为无水乙醇、1，2-丙二醇、丙三醇、聚乙二醇200 (PEG200)、聚乙二醇400 (PEG400)或聚乙二醇600 (PEG600)中的任意一种，或几种的混合物。
2.根据权利要求I所述的复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物，其特征在于该药的粒径介于10 50nm之间。
全文摘要
本发明公开了一种复方阿替洛尔纳米乳抗高血压药物，其原料及其质量百分比为阿替洛尔1％～15％、表面活性剂5％～35％、助表面活性剂1％～20％，油1％～20％，杜仲水提物0.5％～10％，牡丹皮水提物0.5％～10％，其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。本纳米乳乳滴颗粒小、分布均匀、粘度小、流动性好。阿替洛尔制备成纳米乳剂型后，明显增加了透过血脑屏障的能力、显著提高了原药的生物利用度，延长了药物的半衰期，减少给药次数；纳米乳提高了阿替洛尔的药物溶解及渗透能力，增加阿替洛尔的稳定性；而且与杜仲和牡丹皮的水提物复配后，具有明显的协同作用，药物疗效发挥更加充分。
文档编号A61K31/165GK102631428SQ20121014272
公开日2012年8月15日 申请日期2012年5月10日 优先权日2012年5月10日
发明者孙江宏, 欧阳五庆, 郭建军, 高士孔 申请人:西北农林科技大学