用于治疗肌萎缩性侧索硬化症的新组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于治疗肌萎缩性侧索硬化症的组合物和方法。更具体而言，本发明涉及用于治疗肌萎缩性侧索硬化症或相关障碍的新颖的组合疗法。
【专利说明】用于治疗肌萎缩性侧索硬化症的新组合物 发明领域
[0001] 本发明涉及用于治疗肌萎缩性侧索硬化症及相关障碍的组合物与方法。更具体而 言，本发明涉及用于治疗肌萎缩性侧索硬化症及相关障碍的新型组合疗法。
[0002] 发明背景
[0003]肌萎缩性侧索硬化症（ALS)，也称为路格里克氏病，是最常见的成人运动神经元疾 病。该病由法国神经专家Jean-MartinCharcot在1869年首次描述。这种疾病的特征是 运动神经元的退化与死亡，导致全身乏力和肌肉萎缩。疾病的进程是无情地渐进的，50%的 患者在发病的3年内死亡。ALS表现为一种罕见的疾病，患病率每年每100000人4-6例，发 病率每年每100000人1-2例。
[0004] 大多数病例（90% )分类为偶发ALS(SALS)，其余10 %是遗传的，称为家族性 ALS(FALS)，具有孟德尔遗传模式。从临床的角度来看，家族（FALS)和偶发（SALS)病例彼 此无法区分，除了SALS的平均发病年龄比FALS晚10年（56岁对46岁）[1]。大多数ALS 病例的原因未知，临床病程高度可变，表明多个因素构成疾病机理的基础。个别治疗方法是 可用的。
[0005] 这种疾病的标志是位于脑干、运动神经皮层和脊髓中的运动神经元的选择性死 亡，导致随意肌麻痹。这种麻痹局灶性开始并以表明退化在连续的运动神经元池中扩展的 模式扩散。当隔膜控制变弱并丧失呼吸能力时，通常导致死亡。
[0006] ALS的特征在于下运动神经元和上运动神经元的功能障碍的进行性表现。下运动 神经元将脑干和脊髓连接到肌肉纤维。其功能障碍导致肌肉萎缩、痉挛和肌束震颤（小的、 局部的不随意肌收缩）。上运动神经元源于大脑皮质或脑干的运动区域，运载运动信息至直 接响应的运动神经元以刺激目标肌肉。它们的功能障碍导致痉挛（干扰步态、运动和语音 的持续的肌肉收缩）和病理反射[2]。其它相关的运动神经元疾病通常通过受损的神经细 胞的类型来区分，即上运动神经元或下运动神经元：它们被称为原发性侧索硬化症（PLS)、 进行性肌萎缩症（PM)、假延髓病型麻痹和进行性延髓性麻痹（PBP)。
[0007] ALS的诊断基于临床症状，由神经科医生基于病史、神经元缺失的分布以及某些特 征细胞学变化的发现来建立。但是，并无可用的ALS的明确诊断测试。临床特征根据受影 响的神经区域（其为延髓、颈和腰椎）划分。
[0008] 如已经提到的那样，ALS的退化主要影响运动系统。但是，最近也报道了认知和行 为以及感觉的症状[3,4]，并且存在额颞叶痴呆（FTD)与ALS之间在临床与病理上重叠的证 据[17]。
[0009] 一些弱的证据表明，ALS发病可能由推定的环境因素触发[5-6]。
[0010] 已经报道了几种突变的基因或基因组区域引发或使得易患ALS以及ALS及额颞叶 痴呆（FTD) [7-9]。例如，所有FALS病例的大约20至25%和SALS病例的大约1%因超氧化 物歧化酶SODl的突变而发生[10]。用不一定会造成均匀表型的相同SODl突变获得了在同 一家庭中的多种临床表现。在酶活性、临床进展与疾病表型之间没有明显的相关性。但是， 无论突变是什么，疾病的周期是类似的。在历史上，发现SODl突变导致ALS的第一动物模型 的产生。它们开发了非常类似于人类ALS的运动神经元疾病[11-12]。在涉及ALS或相关运 动神经元疾病发展的其它基因中，可以提到以下基因：alsin，一种Rab5A的交换因子[13]， senataxin，可能涉及RNA加工，调节囊泡运输的VAPB蛋白，主要的轴突逆行马达蛋白-- 动力蛋白激活蛋白，细胞色素C氧化酶和异亮氨酸tRNA合成酶的线粒体基因[14-15]，血管 生成调节剂VEGF和血管生成素[16]。
[0011]ALS是一种复杂的疾病，具有多种成因并且涉及该疾病发病机理的确切机理尚未 解决。这对于发现有效的药物疗法形成了挑战。临床试验表明，在ALS中通过利鲁唑可以 适度延长生存而非功能[18]。尽管如此，利鲁唑目前是唯一批准的药物和唯一已知的ALS 疗法。关于疾病的严重程度，因此将其作为疾病修饰化合物施用于所有患有ALS的患者。
[0012] WO2009/133128、WO2009/133141、WO2009/133142、WO2011/054759、WO 2009/068668和WO2009/153291公开了几种神经退行性疾病，尤其是ALS的潜在治疗方法。
[0013] 首次试图建立对非药物疗法的指导方针。但是，标准仍基于专家意见并在各国之 间存在差异。
[0014] 因此，在本领域仍然强烈需要用于治疗肌萎缩性侧索硬化症的新颖有效的疗法。
[0015] 发明概沐
[0016] 本发明提供了用于治疗ALS及相关障碍的新颖的组合物与方法。本发明尤其源于 识别向患有ALS的对象提供改善的治疗效果和临床益处的药物组合。
[0017] 更特别地，本发明的目的涉及一种用于治疗ALS或相关障碍的组合物，包含选自 阿坎酸、巴氯芬、西那卡塞、美西律、磺胺异噁唑和托拉塞米，或其任意化学纯度的盐、前药、 衍生物，或缓释制剂的至少两种药物。
[0018] 本发明的又一目的是用于治疗需要其的对象的ALS或相关障碍的方法，包括向该 对象施用至少两种药物，所述药物选自阿坎酸、巴氯芬、西那卡塞、美西律、磺胺异噁唑和托 拉塞米、或其任意化学纯度的盐、前药、衍生物，或缓释制剂。
[0019] 用于本发明的药物组合的优选实例包括例如巴氯芬和阿坎酸；托拉塞米和巴氯 芬；巴氯芬和西那卡塞；托拉塞米和磺胺异噁唑；美西律和西那卡塞；或巴氯芬和阿坎酸和 托拉塞米。
[0020] 在本发明的特定实施方案中，该组合物进一步包含利鲁唑，或其任意化学纯度的 盐、前药、衍生物，或缓释制剂。
[0021] 本发明的组合物可以进一步包含一种或几种可药用载体或赋形剂，并且它们可以 重复施用给对象。优选的组合物是口服给药的。此外，该药物可以一起、单独地或相继地配 制或给药。
[0022] 本发明适于治疗在疾病的任何阶段的任何哺乳动物对象，特别是人类对象的ALS。 本发明可用于延缓疾病的发展，减轻、延迟或预防麻痹、运动神经元退化和/或疼痛，和/或 提高存活率。
【专利附图】
【附图说明】
[0023]m:巴氯芬与阿坎酸组合疗法针对谷氨酸盐对神经元皮层细胞的毒性的效果。 通过巴氯芬（400nM)和阿坎酸（1.6nM)的组合显著防止了谷氨酸盐中毒，然而，在那些浓度 下，单独的巴氯芬和阿坎酸对中毒没有显著效果。* :P〈〇. 001，显著不同于谷氨酸盐中毒； (ANOVA+DunnettPost-Hoc试验）〇
[0024] 图2:巴氯芬与阿坎酸组合疗法针对在神经-肌肉细胞共培养樽型中对运动单位 的数量（A)、面积（B)和神经突长度（C)的谷氨酸盐（GLU)毒性的效果。无论所考虑的终点 如何，通过巴氯芬（BCL，80nM)和阿坎酸（ACP，0. 32nM)的组合显著防止了谷氨酸盐中毒，然 而，在那些浓度下，单独的巴氯芬和阿坎酸对中毒没有显著效果。* :p〈〇. 05,显著不同于谷 氛酸盐中毒；（ANOVA+DunnettPost-Hoc试验）。
[0025] 胤上西那卡塞与美西律组合疗法针对谷氨酸盐对神经元皮层细胞的毒性的效 果。通过西那卡塞^4pM)和美西律（25. 6pM)的组合显著防止了谷氨酸盐中毒，然而，在那 些浓度下，单独的西那卡塞和美西律对中毒没有显著效果。* :P〈〇. 001，显著不同于谷氨酸 盐中毒；（ANOVA+DunnettPost-Hoc试验）。
[0026] 图4:磺胺异噁唑与托拉寒米组合疗法针对谷氨酸盐对神经元皮层细胞的毒性的 效果。通过磺胺异噁唑（6. 8nM)和托拉塞米（400nM)的组合显著防止了谷氨酸盐中毒，然 而，在那些浓度下，单独的西那卡塞和美西律对中毒没有显著效果。* :P〈〇. 001，显著不同于 谷氛酸盐中毒；（ANOVA+DunnettPost-Hoc试验）。
[0027] 胤丘巴氯芬（BCL)与阿坎酸（ACP)组合充当针对在神经-肌肉细胞共培养模 型中对运动单位的数量（A)、面积（B)和神经突长度（C)的谷氨酸盐（GLU)毒性的利鲁 唑（RIL)保护效果的增强剂。与对ACP(0. 32nM)BCL(80nM)获得的效果相比时，使用低至 ACP(0. 14nM)BCL(36nM)的浓度时观察到明显更强的增强效果。
[0028] 巴氯芬（BCL)和阿坎酸（ACP)与利鲁唑一起协同作用于在神经-肌肉共培养 模型中针对谷氨酸盐毒性保护神经肌肉接头。当测量运动单位的数量、面积以及神经突长 度时观察到保护的重要改善。A)对ACP(0. 14nM)BCL(36nM)混合物观察到端点由2至5% 的改善；当单独使用利鲁唑（0. 04yM)时为12至16% ;然而三种药物的组合导致由39至 43%的改善。B)对ACP(0. 14nM)BCL(36nM)混合物观察到端点由2至5%的改善；当使用利 鲁唑5yM时为70至188%;然而三种药物的组合导致由131至165%的改善。（* :p〈0. 001， 显著不同于谷氨酸盐中毒；? :p〈0. 001，显著不同（ANOVA+DunnettPost-Hoc试验））。
[0029] 发明详沐
[0030] 本发明提供了用于治疗ALS或相关障碍的新的治疗方法。更特别地，本发明公开 了能够有效校正此类疾病并可用于任何哺乳动物对象的新颖的组合疗法。
[0031] 在本发明的上下文中，障碍的"治疗" 一词包括治疗、防止、预防、延迟或减少由该 障碍引起的疼痛。术语治疗特别包括控制疾病进展和相关症状。关于ALS，术语治疗还描述 了延迟或延缓麻痹的开始，减少或防止运动神经元退化，减少疼痛，和/或提高存活率。
[0032] 术语"ALS相关障碍"是指运动神经元障碍，如原发性侧索硬化症（Primary LateralSclerosis,PLS)、进行性肌萎缩症（ProgressiveMuscularAtrophy,PMA)、假 延髓病型麻痹和进行性延髓性麻痹（PseudobulbarPalsyandProgressiveBulbar Palsy,PBP)，以及额颞叶痴呆（FrontoTemporalDementia,FTD) 〇
[0033] 术语"组合或组合治疗/疗法"是指其中至少两种或多种药物共同施用于对象以 引起生物效应的治疗。在本发明的组合疗法中，该至少两种药物可以一起或单独地，同时或 依次给施用。此外，该至少两种药物可以通过不同的路线和方案施用。因此，尽管它们可以 一起配制，但组合的药物也可以单独配制。
[0034] 如上所述，本发明涉及用于治疗需要其的对象的ALS或相关障碍的药物组合物和 方法。
[0035] 更特别地，本发明涉及用于治疗肌萎缩性侧索硬化症（ALS)或相关障碍的组合 物，该组合物包含至少两种药物，所述药物选自阿坎酸、巴氯芬、西那卡塞、美西律、磺胺异 噁唑和托拉塞米，或其任意化学纯度的盐或前药或衍生物，或缓释制剂。
[0036] 本发明人惊讶地发现，组合在一起的这些化合物表现出针对谷氨酸盐毒性的保护 性活性，在ALS的体外模型中，所述谷氨酸盐毒性是神经元死亡的原因之一。
[0037] 更特别地，本发明显示，本发明的药物在运动神经元上施加了针对谷氨酸盐毒性 (其为ALS中神经退化的致病原因之一）的令人惊讶的保护性活性。此外，本发明人已经观 察到，这些化合物在低剂量下协同作用以有效地保护运动单位。这是特别显著的优点，避免 了任何潜在的副作用。此外，如试验部分所示，这些组合疗法可以在ALS的动物模型中在体 内延缓麻痹的发作，并延长寿命。这些组合疗法因此在ALS对象的治疗中表现出显著的改 进。
[0038] 因此，本发明涉及一种用于治疗肌萎缩性侧索硬化症（ALS)或相关障碍的组合 物，包含至少两种药物，所述药物选自阿坎酸、巴氯芬、西那卡塞、美西律、磺胺异噁唑和托 拉塞米，或其任意化学纯度的盐或前药或衍生物，或缓释制剂。
[0039] 本发明还涉及用于治疗需要其的对象的肌萎缩性侧索硬化症（ALS)或相关障碍 的方法，包括向该对象施用至少两种药物，所述药物选自阿坎酸、巴氯芬、西那卡塞、美西 律、磺胺异噁唑和托拉塞米，或其任意化学纯度的盐或前药或衍生物，或缓释制剂。
[0040] 本发明还涉及选自阿坎酸、巴氯芬、西那卡塞、美西律、磺胺异噁唑和托拉塞米，或 其任意化学纯度的盐或前药或衍生物，或缓释制剂的化合物与至少一种选自阿坎酸、巴氯 芬、西那卡塞、美西律、磺胺异噁唑和托拉塞米，或其任意化学纯度的盐或前药或衍生物，或 缓释制剂的第二化合物结合通过结合、单独或相继施用于需要其的对象以便治疗肌萎缩性 侧索硬化症（ALS)或相关障碍。
[0041] 用于本发明的优选组合包含用于同时、相继或单独施用的下列药物组合的至少一 种：
[0042] -巴氯芬和西那卡塞，
[0043] _西那卡塞和阿坎酸，
[0044] -巴氯芬和阿坎酸，
[0045] -巴氯芬和阿坎酸和托拉塞米，
[0046] _美西律和西那卡塞，
[0047] -托拉塞米和巴氯芬，或
[0048] -托拉塞米和磺胺异噁唑，
[0049] 或其任意化学纯度的盐或前药或衍生物，或缓释制剂，用于治疗ALS或相关障碍。 包含此类组合的组合物也代表本发明的特定目的。
[0050] 本文中所用的术语"前药"指的是本发明的化合物的任何功能性衍生物（或前 体），其当施用于生物系统时因例如自发化学反应、酶催化化学反应和/或代谢化学反应而 生成所述化合物。与所得药物相比，前药通常是无活性或活性较低，并可例如用于改善药物 的生理化学性质、将药物靶向特定组织、改善药物的药代学和药动学性质和/或减少不合 意的副作用。顺从前药设计的一些常见官能团包括但不限于羧基、羟基、胺、磷酸/膦酸根 和羰基。通常经由这些基团的修饰所制得的前药包括但不限于酯、碳酸酯、氨基甲酸酯、酰 胺和磷酸酯。用于选择合适前药的具体技术指南是公知常识（19-23)。此外，前药的制备可 以通过本领域技术人员已知的常规方法完成。在大量关于该主题的综述（20 ;24-30)中描 述了可用于合成其它前药的方法。例如，在ChemIDplusAdvance数据库化!^。://。!^!]!. sis.nlm.nih.gov/chemidplus/)中列举了普阿氯芬，并且普阿氯芬是公知的巴氯芬的前药 (31-32)。在Hanafi等人，2011 (33)中给出了巴氯芬前药的具体实例，特别是巴氯芬酯及巴 氯芬酯氨基甲酸酯，其特别可用于CNS靶向。因此，此类前药特别适于本发明的组合物。上 文提及的普阿氯芬也是公知的前药，并因此可用于替代本发明的组合物中的巴氯芬。巴氯 芬的其他前药可以在下列专利申请中找到：W02010102071、US2009197958、W02009096985、 W02009061934,W02008086492,US2009216037,W02005066122,US201102157U W02003077902、W02010120370。
[0051] 阿坎酸的可用前药，如泛酸酯新戊基磺酰基酯、阿坎酸的新戊基磺酰基酯前药 或遮蔽的羧化新戊基磺酰基酯前药都显著地列举在以下专利申请中：W02009033069、 W0200903306UW02009033054,W0200905219UW02009033079,US2009/0099253,US 2009/0069419、US2009/0082464、US2009/0082440 和US2009/0076147。
[0052] 化合物的"衍生物"一词包括与所述化合物在功能和/或结构上相关的任何分 子，如此类化合物的酸、酰胺、酯、醚、乙酰化变体、羟基化变体或烷基化（C1-C6)变体。术 语衍生物还包括失去一个或多个如上列举的取代基的结构上相关的化合物。例如，高牛磺 酸是阿坎酸的去乙酰化衍生物。化合物的优选衍生物是具有如通过已知的方法测定的显 著程度的与所述化合物的相似性的分子。类似化合物连同它们与母体分子的相似性指数 可以在许多数据库中找到，如PubChem(http: //pubchem.nebi.nlm.nih.gov/search/)或 DrugBank(http://www.drugbank.ca/)。在更优选的实施方案中，衍生物应具有与母体药物 的大于0. 4、优选大于0. 5、更优选大于0. 6、甚至更优选大于0. 7的谷本（Tanimoto)相似性 指数。Tanimoto相似性指数广泛用于测量两种分子之间的结构相似性的程度。Tanimoto相 似性指数可以通过可在线获得（http://www.ebi.ac.uk/thornton-srv/software/SMSD/) 的软件如theSmallMoleculeSubgraphDetector(34_35)来计算。优选的衍生物应当在 结构和功能上与母体化合物相关，即它们还应保留至少部分母体药物活性，更优选它们应 当对运动单位表现出针对谷氨酸盐毒性的保护活性（如试验部分中所例示的那样）。
[0053] 术语衍生物还包括药物的代谢产物，例如，在施用于有机体后通常通过专门的酶 促体系来自于所述药物的（生化）改性或加工，并显示或保留该药物的生物活性的分子。已 经公开了代谢产物是母体药物大部分治疗作用的原由。在一个具体实施方案中，本文中所 用的"代谢产物"指的是保留母体药物的至少部分活性的改性或加工药物，更优选它们应当 对运动单位表现出针对谷氨酸盐毒性的保护活性（如试验部分中所例示的那样）。代谢产 物的实例包括托拉塞米来自于该药物肝脏代谢的托拉塞米的羟基化形式（Drugbank数据 库（36))。
[0054] 术语"盐"指的是本发明的化合物的可药用和相对无毒的、无机或有机酸加成盐。 药物盐的形成包括使酸性、碱性或两性离子药物分子与抗衡离子配对以生成该药物的盐形 式。在中和反应中可以使用多种化学物类。本发明的可药用盐由此包括通过使充当碱的主 要化合物与无机酸或有机酸反应以形成盐而获得的那些，所述盐例如乙酸、硝酸、酒石酸、 盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、樟脑磺酸、草酸、马来酸、琥珀酸或柠檬酸的盐。本发明的可药用 盐还包括其中主要化合物充当酸并且与适当的碱反应以形成例如钠、钾、钙、镁、铵或胆碱 盐的那些。尽管所给活性成分的大多数盐是生物等价物，但是其中一部分可以具有提高的 溶解度或生物利用度性质。盐选择目前是药物开发过程中的普通标准操作，如由H.Stahl 和C.GWermuth在他们的手册（37)中所教导的那样。
[0055] 在一个优选实施方案中，化合物的名称指的是描述化合物本身，以及其任何可药 用盐、水合物、异构体或外消旋物。
[0056] 下表1提供了用于本发明的化合物以及该化合物的盐、衍生物、代谢产物和/或前 药的CAS号。
[0057] 表 1
[0058]
【权利要求】
1. 一种在治疗ALS或相关障碍中使用的组合物，包含选自阿坎酸、巴氯芬、西那卡塞、 美西律、磺胺异噁唑和托拉塞米，或其任何化学纯度的盐、前药、衍生物，或缓释制剂的至少 两种药物。
2. 根据权利要求1使用的所述组合物，包含下列药物组合的至少一种： -巴氯芬和阿坎酸， -巴氯芬和阿坎酸和托拉塞米， -美西律和西那卡塞， -托拉塞米和巴氯芬， -巴氯芬和西那卡塞，或 -托拉塞米和磺胺异卩惡挫。
3. 根据权利要求1或2使用的所述组合物，进一步包含利鲁唑，或其任意化学纯度的 盐、前药、衍生物，或缓释制剂。
4. 根据前述权利要求中任一项使用的所述组合物，其进一步包含可药用载体或赋形 剂。
5. 根据前述权利要求中任一项使用的所述组合物，其中该化合物一起、单独或相继配 制或施用。
6. 根据前述权利要求中任一项使用的所述组合物，其中所述组合物重复施用于对象。
7. 根据权利要求3至6中任一项使用的所述组合物，其中利鲁唑以每天0. 1至50毫克 的剂量施用。
8. 根据权利要求1至7中任一项使用的所述组合物，其中阿坎酸当存在时以小于每天 50毫克、更优选小于每天10毫克的剂量施用。
9. 根据权利要求1至8中任一项使用的所述组合物，其中巴氯芬当存在时以小于每天 30毫克的剂量施用。
10. 根据前述权利要求中任一项使用的所述组合物，其中所述组合物口服施用。
11. 根据前述权利要求中任一项使用的所述组合物，其中至少两种选自阿坎酸、巴氯 芬、西那卡塞、美西律、磺胺异噁唑和托拉塞米的药物的组合口服施用并与利鲁唑交错地每 隔一天重复施用。
12. 根据前述权利要求中任一项使用的所述组合物，其中该化合物配制在一起。
13. 利鲁唑，或其任意化学纯度的盐、前药、衍生物，或缓释制剂用于与巴氯芬，或其任 意化学纯度的盐、前药、衍生物，或缓释制剂组合并与选自阿坎酸，西那卡塞，美西律，磺 胺异噁唑和托拉塞米的化合物，或其任意化学纯度的盐、前药、衍生物，或缓释制剂进一步 组合以便通过合并、单独或相继施用于需要其的对象治疗ALS的用途。
【文档编号】A61K31/42GK104487064SQ201380011310
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2013年2月28日 优先权日:2012年3月1日
【发明者】丹尼尔·科恩, 谢尔盖·纳伯罗金, 伊利亚·丘马科夫, 鲁道夫·哈加 申请人:法耐斯特公司