短抗微生物脂肽的制作方法
【专利摘要】本发明公开了具有生物活性及治疗活性的肽。具体公开了展现抗微生物活性的KPV或KdPT的脂化二肽或三肽类似物。具体而言，本发明的肽提供比基础三肽，赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸及赖氨酸-d-脯氨酸-酪氨酸增强的抗微生物活性。所公开的肽具有通式C12-18脂质-KXZ-NH2，其中K是赖氨酸；X是脯氨酸、d-脯氨酸、组氨酸或精氨酸；Z是任选地且如果存在则Z是缬氨酸、苏氨酸、丙氨酸或亮氨酸；且末端COOH是NH2酰胺化的。该C12-18脂质优选是月桂酸(C12)、肉豆蔻酸(C14)、十五烷酸(C15)、棕榈酸(C16)或硬脂酸(C18)的脂质部分。本发明进一步涉及使用这些肽来治疗侵袭皮肤及其它相关粘膜体表(例如口腔)的多种损伤、发炎或细菌感染的方法。
【专利说明】短抗微生物脂肽
[0001] 本申请要求2012年3月20日提交的美国临时申请号61/613, 212的优先权益，其 通过引用整体并入本文。
【技术领域】
[0002] 本发明涉及具有生物活性及治疗活性的肽。具体而言，本发明涉及展现抗微生物 活性的KPV或KdPT的脂化二肽或三肽类似物。具体而言，本发明的肽提供比基础三肽，赖 氨酸-脯氨酸-缬氨酸和赖氨酸-d-脯氨酸-酪氨酸增强的抗微生物活性。本发明进一步 涉及使用这些肽来治疗侵袭皮肤及其它相关体表（例如口腔）的多种损伤、发炎或细菌感 染的方法。
[0003] 发明背景 数十年来研究者一直致力于开发抗微生物治疗和试剂。最近，存在对用于治疗数目渐 增的耐药性细菌、病毒及真菌感染的新的抗微生物剂的需求。
[0004] 在科学文献和已颁布专利二者中已报道多种生物活性肽。肽在历史上已从天然来 源分离，且最近已成为结构-功能关系研究的对象。此外，天然肽已充当设计合成肽类似物 的起点。
[0005] 有多个专利描述了含有短肽的化妆品组合物。例如，美国专利号6, 492, 326提出 了含有五肽和皮肤护理活性成份的皮肤护理组合物的制备和用途。
[0006] Strom 等人 2003 o/ifet/ic/aa/ CXeffii1Sizy 46: 1567-1570)描述含有 化学修饰的抗细菌短肽，主要集中于极短肽（二聚体和三聚体）。也描述了某些六肽。然 而，并未测试或讨论这些六肽的抗微生物活性。
[0007] α -促黑激素 （a -MSH)是具有有效抗炎活性的13-氨基酸神经肽。其是通过较 大前体分子前阿黑皮素（pre-opiomelanocortin)的翻译后加工来产生。已证实a-MSH 的羧基末端三肽（由残基11至13构成）KPV在体内和体外发挥抗炎活性（Brzoska，T.、 Luger, TA.等人，a -melanocyte-stimulating hormone and related tripeptides: biochemistry, anti-inflammatory and protective effects in vitro and in vivo, and future perspectives for the treatment of immune-mediated inflammatory diseases. TfeKie，2009. 29 (5): 581-602)。已描述了结构相关衍生物 KdPT (KPT)与IL-I β的残基193-195共线且似乎能够与IL-I I型受体相互作用（Luger Τ. A.及 Brzoska T. a -MSH related peptides: a new class of anti-inflammatory and immunomodulating drugs. Ann Rheum Dis 2007; 66 (增干丨J III): iii52_iii55) 〇 有一篇报道提出，KPV对金黄色葡萄球菌（5： 及白色念珠菌（C 具有 抗微生物影响但并未确定MIC (Cutuli M等人，2000，antimicrobial effects of a-MSH peptides，J 哗:r，67:233-239)。与 KPV 不同，从未报道 KdPT 三肽具有 抗微生物影响。
[0008] 因此，本领域需要开发具有针对众多微生物（包含革兰氏（gram)阴性及革兰氏阳 性细菌）的宽范围有效抗微生物活性的肽。抗微生物肽的制造成本对医药及化妆品应用而 言也是关键考虑因素。我们在本发明中公开了有成本效益的抗微生物短肽，其可在医药或 化妆品组合物中使用，用于局部治疗或管控与细菌及真菌感染相关的皮肤状况。
【发明内容】
[0009] 本发明涉及展现抗微生物活性的KPV或KdPT的脂化二肽或三肽类似物。具体而 言，本发明的肽提供比基础三肽赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸及赖氨酸_d脯氨酸-酪氨酸增强 的抗微生物活性。分离肽的目标抗细菌活性是针对那些侵袭皮肤及相关粘膜表面的细菌。 尽管不欲限于任何具体机制，但本发明肽能够通过抑制细菌生长和抑制与细菌感染相关的 发炎来促进皮肤健康。
[0010] 本发明的一个实施方案是关于以下通式的脂化二肽或三肽： C12_18 脂质-KXZ-NH2, 其中K是赖氨酸；X是脯氨酸、D-脯氨酸（脯氨酸的D-异构体）、组氨酸或精氨酸；Z是 任选的，且如果存在则Z是缬氨酸、苏氨酸、丙氨酸或亮氨酸；且末端COOH经NH2酰胺化。该 肽是经C 12_18脂质脂化且优选是经以下酸的脂质部分：月桂酸（C12)、肉豆蘧酸（C14)、十五 烷酸（C15)、棕榈酸（C16)或硬脂酸（C18)。十五烷酰基及棕榈酰基是最优选的脂质基团。 [0011] 优选的脂化二氨基酸及三氨基酸包含 C12_18脂质-赖氨酸-脯氨酸-纟颜氨酸-NH2 ; C12_18脂质-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸-NH2 ; C12_18脂质-赖氨酸-脯氨酸-丙氨酸-NH2 ; C12_18脂质-赖氨酸-脯氨酸-壳氨酸-NH2 ; C12_18脂质-赖氨酸-脯氨酸-NH2 ; C12_18脂质-赖氨酸-d-脯氨酸-NH2 ; C12_18脂质-赖氨酸-组氨酸-NH2 ;及 C12_18脂质-赖氨酸-精氨酸-nh2。
[0012] 本发明的另一实施方案是关于含有医药上或化妆品上可接受的载体和一或多种 上述肽的组合物。这些组合物中的肽浓度优选介于约0. 1 μ g/mL至约20 μ g/mL或约0. 1 μ g/mL至约10% (w/v)范围内。适于局部应用的优选组合物形式是气溶胶、乳液、液体、水 溶液、洗剂、乳霜、糊剂、软膏、粉剂及泡沫剂。
[0013] 本发明还涉及使用上述组合物来治疗或预防哺乳动物皮肤的微生物感染的方法。 通常，治疗方法意味着向皮肤（表皮）及相关粘膜组织的受侵袭区域施用有效量的含肽组 合物且保持有效时间量。当细菌感染是由选自痤疮丙酸杆菌0°. 、金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌cWi)及白色念珠菌的细菌引起时也可使用这些方法。
[0014] 此外，本发明的肽及含有这些肽的组合物可提供纳入一般皮肤护理及化妆品制剂 (例如各种皮肤化妆品、皮肤乳霜、洗剂、防晒剂及治疗性洗剂或乳霜（例如抗痤疮制剂）） 中的有用特征。
[0015] 发明详述 为更充分理解本文所描述的本发明，进行以下详细描述。本发明一般性涉及包括以下 通式的KPV或KdPT的抗微生物脂化二肽或三肽类似物的组合物及方法： C12_18 脂质-KXZ-NH2, 其中K是赖氨酸；X是脯氨酸、d-脯氨酸、组氨酸或精氨酸；Z是任选的，且如果存在则 Z是缬氨酸、苏氨酸、丙氨酸或亮氨酸；且末端COOH经NH2酰胺化。
[0016] 可用来提供本发明化合物的C1,_1S脂
【权利要求】
1. 式C12_18脂质-KXZ-NH2的肽，其中K是赖氨酸；X是脯氨酸、d-脯氨酸、组氨酸或精氨 酸；Z是任选的，且如果存在则Z是缬氨酸、苏氨酸、丙氨酸或亮氨酸；且末端COOH经NH2酰 胺化。
2. 如权利要求1的肽，其中所述C12_18脂质是月桂酸（C12)、肉豆蘧酸（C14)、十五烷酸 (C15)、棕榈酸（C16)或硬脂酸（C18)的脂质部分。
3. 如权利要求1的肽，其中所述肽是 c12_18脂质-赖氨酸-脯氨酸-纟颜氨酸-nh2 ; C12_18脂质-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸-NH2 ; C12_18脂质-赖氨酸-脯氨酸-丙氨酸_NH2 ; C12_18脂质-赖氨酸-脯氨酸-壳氨酸_NH2 ; c12_18脂质-赖氨酸-脯氨酸-nh2 ; C12_18脂质-赖氨酸-d-脯氨酸-NH2 ; C12_18脂质-赖氨酸-组氨酸_NH2 ;或 c12_18脂质-赖氨酸-精氨酸-nh2。
4. 如权利要求3的肽，其中所述C12_18脂质是棕榈酰基或十五烷酰基。
5. 如权利要求1的肽，其中所述肽是 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸-NH2; 棕榈酰基-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸-NH2 ; 十五烷酰基-赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸_NH2 ; 十五烷酰基-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸-NH2 ; 硬脂酰基-赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸-nh2 ; 硬脂酰基-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸-NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸-丙氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸-亮氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-d-脯氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-组氨酸_NH2 ;或 棕榈酰基-赖氨酸-精氨酸-nh2。
6. 组合物，其包括至少一种如权利要求1的肽及医药上可接受的载体。
7. 如权利要求6的组合物，其中所述肽是以介于约0.1yg/mL至约10% (w/v)范围内 的浓度存在。
8. 如权利要求6的组合物，其中该组合物是呈以下形式：气溶胶、化妆品制剂、喷雾剂、 乳液、液体、洗剂、乳霜、糊剂、软膏、粉剂或泡沫剂。
9. 如权利要求6的组合物，其中所述肽是 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸_NH2 ; 十五烷酰基-赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸_NH2 ; 十五烷酰基-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸-NH2 ; 硬脂酰基-赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸-nh2 ; 硬脂酰基-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸-丙氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸-亮氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-d-脯氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-组氨酸_NH2 ;或 棕榈酰基-赖氨酸-精氨酸-nh2。
10. 如权利要求6的组合物，其可用于预防或治疗以下皮肤病况：痤疮、异位性皮炎、酒 渣鼻、细菌性阴道炎、头皮屑或足癣。
11. 预防或治疗哺乳动物皮肤或粘膜组织的微生物感染的方法，所述方法包括向所述 哺乳动物的感染区域施用治疗有效量的根据权利要求6的组合物，并持续有效量的时间。
12. 如权利要求11的方法，其中所述包含肽的组合物的治疗有效量以约0.1iig/mL至 约10% (w/v)范围的浓度。
13. 如权利要求11的方法，其中所述细菌感染是由选自下列的细菌引起：痤疮丙酸 杆菌0°.acfles)、金黄色葡萄球菌（51aureys)、大肠杆菌（A.coJ7)及白色念珠菌（C albicans)。
14. 如权利要求11的方法，其中所述组合物的该肽是 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸_NH2 ; 十五烷酰基-赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸_NH2 ; 十五烷酰基-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸-NH2 ; 硬脂酰基-赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸-nh2 ; 硬脂酰基-赖氨酸-d-脯氨酸-苏氨酸-NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸-丙氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸-亮氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-脯氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-d-脯氨酸_NH2 ; 棕榈酰基-赖氨酸-组氨酸_NH2 ;或 棕榈酰基-赖氨酸-精氨酸-nh2。
15. 如权利要求11的方法，其中所述皮肤的微生物感染是痤疮、异位性皮炎、酒渣鼻、 细菌性阴道炎、头皮屑或足癣。
【文档编号】A61K47/48GK104379177SQ201380014970
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2013年3月7日 优先权日:2012年3月20日
【发明者】L.张, R.卡迈克尔 申请人:赫里克斯生物医疗公司