一种含柠条籽药用提取物的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种含柠条籽药用提取物的制备方法，包括：萃取富集；减压分离；分散混匀；分离包封；匀质过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。本发明在超临界二氧化碳的环境下从柠条种籽中萃取富集出油状药用提取物并经膜材料混合包封成的含药脂质体纳米粒；相比于传统的将柠条籽熬油或烧炭存性研末的药用加工方法，本发明的操作过程参数更可控，且温度低，能较好地保存植物有效成分不被破坏，无溶剂残留等；本发明制成的含药脂质体纳米粒具有靶向给药、长效释放的特点，并且由于其类细胞结构具有细胞相容性，因此可通过细胞膜进行释药，从而可提高治疗指数，更适合于皮炎、牛皮癣、黄水疮、皮肤瘙痒等皮肤病的治疗。
【专利说明】一种含柠条籽药用提取物的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于皮肤病药物领域，尤其涉及一种含柠条籽药用提取物的制备方法。
【背景技术】
[0002]朽1条籽，是指豆科(Leguminasae)蝶形花亚科(Fabaceae)锦鸡儿属(Caragana)的朽1条锦鸡儿(Caragana Korshinskii Kom.)、中间锦鸡儿(Caragana intermedia Kuanget H.C.Fu)或小叶锦鸡儿(Caragana microphylla Lam))的成熟种子，是一种传统的药用植物资源。柠条籽的功能主治为止痒、杀虫，可治疗神经性皮炎、牛皮癣、黄水疮、脓包疮；其传统给药方式为柠条籽熬油外涂、或者柠条籽烧炭存性研末后撒于疮面。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种含柠条籽药用提取物的制备方法，旨在解决使用柠条籽治疗皮炎、牛皮癣、黄水疮和脓包疮时熬油或烧炭研末的传统制备方法存在工艺参数不可量化、破坏植物有效成分、所制备的药用有效成分相对浓度低的问题。
[0004]本发明是这样实现的，一种含柠条籽药用提取物的制备方法，该含柠条籽药用提取物的制备方法的具体步骤包括:
[0005]步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将柠条籽干燥和粉碎后装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为25?35MPa，温度为40°C?50°C，C(V流量为25?40L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集60?llOmin ；
[0006]步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为0?lOMPa，温度降为30?35°C，维持15?30min，得到柠条籽药用提取物；
[0007]步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将柠条籽药用提取物注入到已装入膜材料和去离子水的密封釜中，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为35?40°C，压力为25?30MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的C02介质中分散混匀35?45min ；
[0008]步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为25?30°C、压力降为7?lOMPa时，维持30?40min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物；
[0009]步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤S104得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为30°C，超声功率为45KHz，超声处理5次，每次3min，间隔5min，待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
[0010]进一步，步骤一中所述柠条籽，是指豆科蝶形花亚科锦鸡儿属的柠条锦鸡儿、中间锦鸡儿或小叶锦鸡儿的成熟种子。
[0011]进一步，步骤三中所述的膜材料，是指按质量比2:1?20:1的磷脂与胆固醇的混合物。其中，磷脂选自天然的卵磷脂、豆磷脂、脑磷脂或合成的二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱。
[0012]进一步，步骤三中所述的膜材料和去离子水的加入量，需根据所用膜材料和去离子水能够使萃取富集得到的柠条籽药用提取物充分包封为衡量指标进行调整和确定。
[0013]进一步，含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒的给药方式是:外用涂抹。
[0014]进一步，该含柠条籽药用提取物的制备方法的装置包括:第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第九阀门、第十阀门、第十一阀门、二氧化碳储气瓶、冷却系统、萃取釜、第一分离釜、氮气储气瓶、超声釜、第二分离釜、密封釜；
[0015]二氧化碳储气瓶通过第一阀门连接冷却系统，二氧化碳储气瓶通过第一阀门和第四阀门连接第一分离釜，冷却系统通过高压泵和第二阀门连接萃取釜，萃取釜通过第三阀门连接第一分离釜，第一分离釜通过第五阀门连接密封釜，冷却系统和萃取釜通过高压泵、第二阀门和第六阀门连接密封釜，二氧化碳储气瓶通过第一阀门和第十阀门连接第二分离釜，氮气储气瓶通过第九阀门连接超声釜，第二分离釜通过第八阀门连接超声釜，密封釜通过第七阀门连接第二分离釜；第十一阀门连接超声釜。
[0016]进一步，该含柠条籽药用提取物的制备方法包括以下步骤:
[0017]步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将干燥并粉碎后的250g柠条锦鸡儿种籽装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为25MPa，温度为50°C，C02流量为25L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集llOmin ；
[0018]步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为OMPa，温度降为35°C，维持15min，得到柠条籽药用提取物16.8g，萃取富集率为6.72%，萃取富集得到的柠条籽药用提取物为黄色澄清油状液体；
[0019]步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将16.8g柠条籽药用提取物注入到已装入32g卵磷脂、1.6g胆固醇和适量去离子水的密封釜中，卵磷脂和胆固醇的质量比为20:1，膜材料与柠条籽药用提取物的质量比为2:1，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为35°C，压力为30MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的C02介质中分散混匀45min ；
[0020]步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为25°C、压力降为lOMPa时，维持30min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物；
[0021]步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤四得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为30°C，超声功率为45KHz，超声处理5次，每次3min，间隔5min，待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
[0022]进一步，该含柠条籽药用提取物的制备方法包括以下步骤:
[0023]步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将干燥并粉碎后的250g中间锦鸡儿种籽装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为35MPa，温度为40°C，C02流量为40L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集60min ；
[0024]步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为lOMPa，温度降为30°C，维持30min，得到柠条籽药用提取物15g，萃取富集率为6.00%，萃取富集得到的柠条籽药用提取物为黄色澄清油状液体；
[0025]步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将15g柠条籽药用提取物注入到已装入30g卵磷脂、15g胆固醇和适量去离子水的密封釜中，卵磷脂和胆固醇的质量比为2:1，膜材料与柠条籽药用提取物的质量比为3:1，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为40°C，压力为25MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的C02介质中分散混匀35min ；
[0026]步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为30°C、压力降为7MPa时，维持40min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物；
[0027]步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤四得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为35°C，超声功率为40KHz，超声处理10次，每次4min，间隔8min，待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
[0028]进一步，该含柠条籽药用提取物的制备方法包括以下步骤:
[0029]步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将干燥并粉碎后的250g小叶锦鸡儿种籽装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为30MPa，温度为45°C，C02流量为30L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集90min ；
[0030]步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为5MPa，温度降为33°C，维持20min，得到柠条籽药用提取物18.3g，萃取富集率为7.32%，萃取富集得到的柠条籽药用提取物为黄色澄清油状液体；
[0031]步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将18.3g柠条籽药用提取物注入到已装入25g卵磷脂、2.5g胆固醇和适量去离子水的密封釜中，卵磷脂和胆固醇的质量比为10:1，膜材料与柠条籽药用提取物的质量比为1.5:1，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为40°C，压力为25MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的C02介质中分散混匀35min ；
[0032]步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为28°C、压力降为8MPa时，维持35min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物；
[0033]步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤四得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为38°C，超声功率为44KHz，超声处理6次，每次4min，间隔6min，待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
[0034]效果汇总
[0035]本发明的优点在于:
[0036]1、本发明所提供的制备方法工艺参数可量化、工艺更可控、更适合现代化仪器操作及规模化工业生产；并且本发明的制备方法不产生烟雾粉尘和溶剂废液，因此不会造成工业污染，属于环保制备工艺。
[0037]2、本发明所提供的制备方法无需加热，因而能更好的保留植物中的有效活性成分不被破坏。
[0038]3、本发明所提供的制备方法对柠条籽中的药用有效成分进行了选择性的萃取和富集，因而提高了柠条籽药用有效成分的相对浓度，降低了柠条籽的用药剂量。
[0039]4、本发明所提供的制备方法所制成的含柠条籽药用提取物的脂质体纳米粒具有靶向给药、长效释放的特点，并且由于含药脂质体纳米粒的类细胞结构具有细胞相容性，可通过细胞膜进行释药，从而可提高柠条籽对神经性皮炎、牛皮癣、黄水疮、脓包疮这四种皮肤疾病经皮给药的治疗指数。
【专利附图】
【附图说明】
[0040]图1是本发明实施例提供的含柠条籽药用提取物的制备方法流程图；
[0041]图2是本发明实施例提供的含柠条籽药用提取物的装置的结构示意图；
[0042]图中:1、第一阀门；2、第二阀门；3、第三阀门；4、第四阀门；5、第五阀门；6、第六阀门；7、第七阀门；8、第八阀门；9、第九阀门；10、第十阀门；11、第i^一阀门；12、二氧化碳储气瓶；13、冷却系统；14、萃取爸；15、第一分离爸；16、氮气储气瓶；17、超声爸；18、第二分离釜；19、密封釜。
【具体实施方式】
[0043]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0044]如图1所示，本发明实施例的含柠条籽药用提取物的制备方法包括以下步骤:
[0045]S101:萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将柠条籽干燥和粉碎后装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为25?35MPa，温度为40°C?50°C，C02流量为25?40L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集60?llOmin ；
[0046]S102:减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为0?lOMPa，温度降为30?35°C，维持15?30min,得到朽1条籽药用提取物；
[0047]S103:分散混匀:打开第五阀门，将柠条籽药用提取物注入到已装入膜材料和去离子水的密封釜中，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为35?40°C，压力为25?30MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的C02介质中分散混匀35?45min ；
[0048]S104:分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为25?30°C、压力降为7?lOMPa时，维持30?40min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物；
[0049]S105:匀质过滤:打开第八阀门，将步骤S104得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为30°C，超声功率为45KHz，超声处理5次，每次3min，间隔5min，待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
[0050]步骤S101中所述柠条籽，是指豆科蝶形花亚科锦鸡儿属的柠条锦鸡儿、中间锦鸡儿或小叶锦鸡儿的成熟种子。
[0051]步骤S103中所述的膜材料，是指按质量比2:1?20:1的磷脂与胆固醇的混合物。其中，磷脂选自天然的卵磷脂、豆磷脂、脑磷脂或合成的二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱。
[0052]步骤S103中所述的膜材料和去离子水的加入量，需根据所用膜材料和去离子水能够使萃取富集得到的柠条籽药用提取物充分包封为衡量指标进行调整和确定。
[0053]所述的含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒的给药方式是:外用涂抹。
[0054]如图2所示，本发明实施例的含柠条籽药用提取物的装置主要包括:第一阀门1、第二阀门2、第三阀门3、第四阀门4、第五阀门5、第六阀门6、第七阀门7、第八阀门8、第九阀门9、第十阀门10、第i^一阀门11、二氧化碳储气瓶12、冷却系统13、萃取釜14、第一分离釜15、氮气储气瓶16、超声釜17、第二分离釜18、密封釜19 ；
[0055]二氧化碳储气瓶12通过第一阀门1连接冷却系统13，二氧化碳储气瓶12通过第一阀门1和第四阀门4连接第一分离釜15，冷却系统13通过高压泵和第二阀门2连接萃取釜14，萃取釜14通过第三阀门3连接第一分离釜15，第一分离釜15通过第五阀门5连接密封釜19，冷却系统13和萃取釜14通过高压泵、第二阀门2和第六阀门6连接密封釜19，二氧化碳储气瓶12通过第一阀门1和第十阀门10连接第二分离釜18，氮气储气瓶16通过第九阀门9连接超声釜17，第二分离釜18通过第八阀门8连接超声釜17，密封釜19通过第七阀门7连接第二分离釜18 ;第^^一阀门11连接超声釜17。
[0056]本发明的具体实施例:
[0057]实施例:一种含柠条籽药用提取物的制备方法，包括以下步骤:
[0058]步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将干燥并粉碎后的250g柠条锦鸡儿种籽装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为25MPa，温度为50°C，C02流量为25L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集llOmin ；
[0059]步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为OMPa，温度降为35°C，维持15min，得到柠条籽药用提取物16.8g，萃取富集率为6.72%，萃取富集得到的柠条籽药用提取物为黄色澄清油状液体,并具清淡香气。
[0060]步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将16.8g柠条籽药用提取物注入到已装入32g卵磷脂、1.6g胆固醇和适量去离子水的密封釜中(其中，卵磷脂和胆固醇的质量比为20:1，膜材料与柠条籽药用提取物的质量比为2:1)，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为35°C，压力为30MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的C02介质中分散混匀45min。
[0061]步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为25°C、压力降为lOMPa时，维持30min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物。
[0062]步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤四得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为30°C，超声功率为45KHz，超声处理5次，每次3min，间隔5min。待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
[0063]实施例2 —种含柠条籽药用提取物的制备方法，包括以下步骤:
[0064]步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将干燥并粉碎后的250g中间锦鸡儿种籽装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为35MPa，温度为40°C，C02流量为40L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集60min ；
[0065]步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为lOMPa，温度降为30°C，维持30min，得到柠条籽药用提取物15g，萃取富集率为6.00%，萃取富集得到的柠条籽药用提取物为黄色澄清油状液体，并具清淡香气。
[0066]步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将15g柠条籽药用提取物注入到已装入30g卵磷脂、15g胆固醇和适量去离子水的密封釜中(其中，卵磷脂和胆固醇的质量比为2:1，膜材料与柠条籽药用提取物的质量比为3:1)，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为40°C，压力为25MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的C02介质中分散混匀35min。
[0067]步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为30°C、压力降为7MPa时，维持40min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物。
[0068]步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤四得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为35°C，超声功率为40KHz，超声处理10次，每次4min，间隔8min。待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
[0069]实施例3 —种含柠条籽药用提取物的制备方法，包括以下步骤:
[0070]步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将干燥并粉碎后的250g小叶锦鸡儿种籽装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为30MPa，温度为45°C，C02流量为30L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集90min ；
[0071]步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为5MPa，温度降为33°C，维持20min，得到柠条籽药用提取物18.3g，萃取富集率为7.32%，萃取富集得到的柠条籽药用提取物为黄色澄清油状液体,并具清淡香气。
[0072]步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将18.3g柠条籽药用提取物注入到已装入25g卵磷脂、2.5g胆固醇和适量去离子水的密封釜中(其中，卵磷脂和胆固醇的质量比为10:1，膜材料与柠条籽药用提取物的质量比为1.5:1)，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为40V，压力为25MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的C02介质中分散混匀35min。
[0073]步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为28°C、压力降为8MPa时，维持35min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物。
[0074]步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤四得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为38°C，超声功率为44KHz，超声处理6次，每次4min，间隔6min。待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
[0075]上述虽然结合附图对本发明的【具体实施方式】进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性的劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种含柠条籽药用提取物的制备方法，其特征在于，该含柠条籽药用提取物的制备方法的具体步骤包括: 步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将柠条籽干燥和粉碎后装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为25?35MPa，温度为40°C?50°C，CO2流量为25?40L/h,在此条件下将朽1条籽萃取富集60?IlOmin ； 步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为O?lOMPa，温度降为30?35°C，维持15?30min,得到朽1条籽药用提取物； 步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将柠条籽药用提取物注入到已装入膜材料和去离子水的密封釜中，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为35?40°C，压力为25?30MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的CO2介质中分散混匀35?45min ； 步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为25?30°C、压力降为7?1MPa时，维持30?40min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物； 步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤S104得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为30°C，超声功率为45KHz，超声处理5次，每次3min，间隔5min，待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
2.如权利要求1所述的含柠条籽药用提取物的制备方法，其特征在于，步骤一中所述柠条籽，是指豆科蝶形花亚科锦鸡儿属的柠条锦鸡儿、中间锦鸡儿或小叶锦鸡儿的成熟种子。
3.如权利要求1所述的含柠条籽药用提取物的制备方法，其特征在于，步骤三中所述的膜材料，是指按质量比2:1?20:1的磷脂与胆固醇的混合物；其中，磷脂选自天然的卵磷脂、豆磷脂、脑磷脂或合成的二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱。
4.如权利要求1所述的含柠条籽药用提取物的制备方法，其特征在于，步骤三中所述的膜材料和去离子水的加入量，根据所用膜材料和去离子水能够使萃取富集得到的柠条籽药用提取物充分包封为衡量指标进行调整和确定。
5.如权利要求1所述的含柠条籽药用提取物的制备方法，其特征在于，所述的含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒的给药方式是:外用涂抹。
6.如权利要求1所述的含柠条籽药用提取物的制备方法，其特征在于，该含柠条籽药用提取物的制备方法的装置包括:第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第九阀门、第十阀门、第十一阀门、二氧化碳储气瓶、冷却系统、萃取爸、第一分离爸、氮气储气瓶、超声爸、第二分离爸、密封爸； 二氧化碳储气瓶通过第一阀门连接冷却系统，二氧化碳储气瓶通过第一阀门和第四阀门连接第一分离釜，冷却系统通过高压泵和第二阀门连接萃取釜，萃取釜通过第三阀门连接第一分离釜，第一分离釜通过第五阀门连接密封釜，冷却系统和萃取釜通过高压泵、第二阀门和第六阀门连接密封釜，二氧化碳储气瓶通过第一阀门和第十阀门连接第二分离釜，氮气储气瓶通过第九阀门连接超声釜，第二分离釜通过第八阀门连接超声釜，密封釜通过第七阀门连接第二分离釜；第十一阀门连接超声釜。
7.如权利要求1所述的含柠条籽药用提取物的制备方法，其特征在于，该含柠条籽药用提取物的制备方法包括以下步骤: 步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将干燥并粉碎后的250g柠条锦鸡儿种籽装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为25MPa，温度为50°C，CO2流量为25L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集IlOmin ； 步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为OMPa，温度降为35°C，维持15min，得到柠条籽药用提取物16.8g，萃取富集率为6.72%，萃取富集得到的柠条籽药用提取物为黄色澄清油状液体； 步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将16.Sg柠条籽药用提取物注入到已装入32g卵磷月旨、1.6g胆固醇和适量去离子水的密封釜中，卵磷脂和胆固醇的质量比为20:1，膜材料与柠条籽药用提取物的质量比为2:1，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为35°C，压力为30MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的CO2介质中分散混匀45min ； 步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为25°C、压力降为1MPa时，维持30min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物； 步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤四得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为30°C，超声功率为45KHz，超声处理5次，每次3min，间隔5min，待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
8.如权利要求1所述的含柠条籽药用提取物的制备方法，其特征在于，该含柠条籽药用提取物的制备方法包括以下步骤: 步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将干燥并粉碎后的250g中间锦鸡儿种籽装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为35MPa，温度为40°C，CO2流量为40L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集60min ； 步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为lOMPa，温度降为30°C，维持30min，得到柠条籽药用提取物15g，萃取富集率为6.00%，萃取富集得到的柠条籽药用提取物为黄色澄清油状液体； 步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将15g柠条籽药用提取物注入到已装入30g卵磷脂、15g胆固醇和适量去离子水的密封釜中，卵磷脂和胆固醇的质量比为2:1，膜材料与柠条籽药用提取物的质量比为3:1，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为40°C，压力为25MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的CO2介质中分散混匀35min ； 步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为30°C、压力降为7MPa时，维持40min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物； 步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤四得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为35°C，超声功率为40KHz，超声处理10次，每次4min，间隔8min，待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
9.如权利要求1所述的含柠条籽药用提取物的制备方法，其特征在于，该含柠条籽药用提取物的制备方法包括以下步骤: 步骤一，萃取富集:打开第一阀门、第二阀门、第三阀门、第四阀门，将干燥并粉碎后的250g小叶锦鸡儿种籽装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为30MPa，温度为45°C，CO2流量为30L/h，在此条件下将柠条籽萃取富集90min ； 步骤二，减压分离:设定第一分离釜内的梯度降温降压程序，即在120min内每分钟降压0.208MPa、每分钟降温0.083°C，直至压力降为5MPa，温度降为33°C，维持20min，得到柠条籽药用提取物18.3g，萃取富集率为7.32%，萃取富集得到的柠条籽药用提取物为黄色澄清油状液体； 步骤三，分散混匀:打开第五阀门，将18.3g柠条籽药用提取物注入到已装入25g卵磷月旨、2.5g胆固醇和适量去离子水的密封釜中，卵磷脂和胆固醇的质量比为10:1，膜材料与柠条籽药用提取物的质量比为1.5:1，关闭第二阀门、第三阀门、第四阀门、第五阀门，打开第六阀门、第七阀门、第十阀门，设定密封釜温度为40°C，压力为25MPa，在此条件下将柠条籽药用提取物、膜材料和去离子水在超临界状态的CO2介质中分散混匀35min ； 步骤四，分离包封:设定第二分离釜内的梯度降温降压程序，即在110分钟内每分钟降温0.083°C、每分钟降压0.167MPa，直至温度降为28°C、压力降为8MPa时，维持35min，得到含柠条籽药用提取物的脂质体包封物； 步骤五，匀质过滤:打开第八阀门，将步骤四得到的含柠条籽药用提取物的脂质体包封物注入到超声釜中，关闭第一阀门、第六阀门、第七阀门、第八阀门、第十阀门，打开第九阀门，在常压、氮气阻氧条件下，设定超声釜中的温度为38°C，超声功率为44KHz，超声处理6次，每次4min，间隔6min，待超声匀质结束，关闭第九阀门，打开第十一阀门，依次经孔径为0.45um微米和0.22微米的膜过滤，收集得到含柠条籽药用提取物的无菌脂质体粒。
【文档编号】A61K9/127GK104382984SQ201410717196
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年12月1日 优先权日:2014年12月1日
【发明者】王小艳, 王洪伦, 索有瑞 申请人:中国科学院西北高原生物研究所