用于治疗血液病症的GLYT1抑制剂的制作方法

本发明的一个方面涉及用于治疗上述疾病的式I的GlyT1抑制剂，其中所述GlyT1抑制剂选自下式的化合物其中R1是卤素、卤素取代的低级烷基、氰基或S(O)2-低级烷基；R2是低级烷基、卤素取代的低级烷基或是(CH2)o-环烷基；R3是低级烷基、NH2或被一个或两个低级烷基取代的氨基；X是C或N；n是1或2；o是0、1或2；及其药用酸加成盐。式I的化合物及其制备方法是已知的并被描述于WO2005/014563中。以下具体实例涉及式I的化合物：[4-(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-哌嗪-1-基]-(2-异丙氧基-5-甲磺酰基-苯基)-甲酮[5-甲磺酰基-2-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-[4-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-甲酮4-异丙氧基-N-甲基-3-[4-(4-三氟甲基-苯基)-哌嗪-1-羰基]-苯磺酰胺，或[4-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮。本发明的另一个目的涉及用于治疗上述疾病的式II的化合物，其中所述GlyT1抑制剂选自下式的化合物其中R1是卤素、低级烷基、卤素取代的低级烷基、低级烷氧基、氰基或S(O)2-低级烷基；R2是低级烷基、卤素取代的低级烷基或是(CH2)o-环烷基；R3是低级烷基、NH2或被一个或两个低级烷基取代的氨基；X是C或N；X1是C或N；其中X和X1中仅一个是N；n是1或2；o是0、1或2；及其药用酸加成盐。式II的化合物及其制备方法是已知的并且被描述在WO2006/082001中。以下具体实例涉及式II的化合物：[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-(3-三氟甲基-5,7-二氢-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-甲酮[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-(6-三氟甲基-1,3-二氢-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基)-甲酮，或[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-(5-甲氧基-6-三氟甲基-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-甲酮。已知甘氨酸转运蛋白抑制剂适用于治疗神经和神经精神病症。涉及的大部分疾病状态是精神病(psychoses)、精神分裂症(schizophrenia)(ArmerRE和MillerDJ,Exp.Opin.Ther.Patents,11(4):563-572,2001)、精神病情绪病症如严重的重度抑郁症、与精神障碍相关的情绪病症如急性躁狂(acutemania)或抑郁，与双相型障碍相关的情绪病症以及与精神分裂症相关的情绪病症(PralongET等,Prog.Neurobiol.,67:173-202,2002)、自闭病症(CarlssonML,J.NeuralTrans,.105:525-535,1998)、认知病症如痴呆(dementia)，包括年龄相关性痴呆和阿尔茨海默类型的老年痴呆、包括人在内的哺乳动物中的记忆病症、注意力缺乏症和疼痛(ArmerRE和MillerDJ,Exp.Opin.Ther.Patents,11(4):563-572,2001)。因此，通过抑制GlyT-1来增加NMDA受体的激活可以导致治疗精神病、精神分裂症、痴呆和认知过程受损的其他疾病如注意力缺乏症或阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease)的药剂。现在已经发现，式I和II的化合物可以用于治疗血液疾病如镰状细胞病和地中海贫血或用于治疗铁超载综合征，如遗传性血色素沉着。虽然镰状细胞病及其临床表现已经在西非被认知达数百年，但出现在医学文献中的第一例镰状细胞病报告在1910才出现(JamesB.Herrick)。据信目前在世界范围内存在超过四百万镰状细胞病患者。其大部分在非洲，大多在中部和西部区域。约100.000名患者(主要是非洲裔或拉美裔)生活在美国，另有100.000名在欧洲。该疾病还影响在中东、印度、南美和加勒比地区的四百万至五百万人。据信该遗传性病症始于西非和中非。在那些地区，镰状细胞特性或携带者状态是有益的，因为单个基因实际上保护人免于疟疾。因此，在受影响的非洲地区，带有该基因的那些人在疟疾流行后幸存。然而，自双亲遗传了该受到影响的基因的人具有被称为镰状细胞贫血的病症。除了镰状细胞贫血以外，其他遗传性改变可能导致类似病症并被归类在镰状细胞病下。镰状细胞贫血是最常见的镰状细胞病类型。同一类别中的其他主要病症包括：SC疾病(镰状突变和血红蛋白C突变的组合)和Sβ-地中海贫血或Sα-地中海贫血(镰状突变和β-地中海贫血突变或α-地中海贫血的组合)。在所有这些病症中，患者都可能有严重的疼痛发作和器官损伤。镰状细胞贫血和镰状血红蛋白(HbS)的存在是最早在分子水平上被了解的遗传疾病。目前其被认为是在β球蛋白链的第6位处的甘氨酸到缬氨酸置换的形态学和临床结果。遭受镰状细胞病的患者的发病和死亡的主要原因是镰状细胞导致的血管阻塞，这导致急性和慢性形式的重复的疼痛发作并且还导致随时间加剧的器官损伤。完全去氧合后的镰状细胞红血球的变形和扭曲由镰状血红蛋白S的聚合和细胞内凝胶化导致。HbS的细胞内凝胶化和聚合可能发生在红血球通过血管系统期间的任何时间。因此，患有镰状细胞病的患者中的不含有聚合的血红蛋白S的红血球可以在不变成镰状的情况下通过微循环并且回到肺部，但是可能在静脉中或在毛细血管中变成镰状。对于在毛细血管中变成镰状的红血球，存在若干可能的后续事件，从不影响通行时间，到毛细血管通行阻塞，到可能最终导致周围细胞缺血或梗死的更永久性的堵塞，并且导致红血球破坏。当血管被堵塞时，氧和营养物不能被带至受影响的血管所覆盖的区域并且所述区域中的组织将死亡并且导致严重炎症和心脏病发作。这不只发生一次或两次，而是在一年中发生接近若干次。目前，治疗镰状细胞病的措施有限。过去50年抗生素的使用在很大程度上防止了患有该病的儿童中的致命感染，使得发达国家中存活率有很大提高。镰状细胞病的唯一治愈手段是干细胞移植；然而，由于匹配供者的不足，非常有限数目的患者才能获得干细胞移植。自90年代中期起，被称为羟基脲(Hydroxyurea)的口服药物已可被用于防止“疼痛危险期(painfulcrises)”。对于定期服用该药物的人，该药物极大提高了其生活质量。然而，该药物是原本被设计成用于特定类型的癌症的药物并且具有许多副作用，包括抑制对抗感染的白血球、皮肤溃疡、胃部问题和贫血。现在已经发现，本发明的式I和II的化合物，由于独特的作用机制和非常明确的剂量依赖效应，可以减少血红素和血红蛋白的产生以及发育的成红血细胞和网状细胞中铁的吸收。该效应提供机会以在疾病中诱导产生小红细胞性的低色素细胞(这得益于细胞内Hb浓度的降低)，并且减少疾病中的红血球生成铁吸收(其表征为氧化剂损伤和增加的红血球铁吸收)。在所有动物研究中，观察到如果用式I或II的化合物处理，则细胞Hb值(MCH)以剂量依赖的方式减小，在最高剂量最多至约20％。结果，代表性的小红细胞性红血球生成(erythropoisesis)发展至正常色素或低色素阶段，导致所有测试物种(小鼠、大鼠、食蟹猴和人)中的系统性Hb水平下降。因此，本发明的式I和II的化合物可以用于治疗血液病症，尤其是用于镰状细胞病和地中海贫血，或用于治疗铁超载综合征，如遗传性血色素沉着。因此本发明的目标是如本文所述的式I和II的化合物，其用于治疗镰状细胞病。本发明的另一个目标是式I和II的化合物，其用于治疗地中海贫血。本发明的另一个目标是式I和II的化合物，其用于治疗铁超载综合征，如遗传性血色素沉着。本发明的另一个目标是特定的式I的化合物的用途，所述化合物是[4-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮。本发明的另一个目标是特定的式II的化合物的用途，所述化合物是[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-(3-三氟甲基-5,7-二氢-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-甲酮。本发明的一个目标涉及用于在需要此种治疗的受治者中治疗或预防血液病症，尤其是用于镰状细胞病和地中海贫血，或用于治疗患有铁超载综合征如遗传性血色素沉着的患者的方法，所述方法包括向所述受治者施用治疗有效量的如本文所述的GlyT1抑制剂。本发明的另一个目标涉及用于治疗或预防血液病症，尤其是用于镰状细胞病和地中海贫血，或用于治疗铁超载综合征如遗传性血色素沉着的药物组合物，所述药物组合物包含药用形式的如本文所述的GlyT1抑制剂。本发明的另一个方面涉及如本文所述的GlyT1抑制剂用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防血液病症，尤其是用于镰状细胞病和地中海贫血，或用于治疗患有铁超载综合征如遗传性血色素沉着的患者。以下对本说明书中使用的通用术语的定义不论所述术语单独出现还是与其他基团组合出现都适用。术语"低级烷基"，单独地或与其他基团组合，表示可以是直链的或具有单个或多个分支的支链的烃基，其中所述烷基通常包含1至6个碳原子，例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、2-丁基、叔丁基、异戊基、2-乙基-丙基、1,2-二甲基-丙基等。术语“卤素取代的低级烷基”或“羟基取代的低级烷基”是指如本文所限定的C1-6-烷基，其被一个或多个卤素或羟基取代，例如CF3、CH(CH3)CF3、CH2CF2CF3、CH2CF2CHF2、C(CH3)2OH或CH(CH3)OH。术语"卤素"，单独地或与其他基团组合，是指氯(Cl)、碘(I)、氟(F)和溴(Br)。优选的“卤素”是F。术语“环烷基”表示具有3至6个环碳原子的单价饱和单环烃基。单环环烷基的实例有环丙基、环丁基、环戊基或环己基。术语"药用盐"是指适用于与人和动物的组织接触的盐。合适的与无机和有机酸的盐的实例有，但不限于，乙酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、盐酸、乳酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、对甲苯磺酸、琥珀酸、硫酸、硫酸、酒石酸、三氟乙酸等。特别是甲酸、三氟乙酸和盐酸。特别是盐酸、三氟乙酸和富马酸。与酸的相应的药用盐可以通过本领域技术人员已知的标准方法获得，例如通过将式I的化合物溶解在合适的溶剂如例如二烷或THF并且添加适量的相应的酸。产物通常可以通过过滤或色谱法分离。利用碱的式(I)或(II)的化合物向药用盐的转化可以通过用所述碱处理所述化合物进行。一种可能的用于形成此种盐的方法是例如通过将1/n当量的碱式盐如例如M(OH)n(其中M＝金属或铵阳离子并且n＝氢氧根阴离子的数目)添加到所述化合物在合适溶剂(例如乙醇、乙醇-水混合物、四氢呋喃-水混合物)中的溶液中并且通过蒸发或冻干除去溶剂。实验数据暴露于[4-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮和[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-(3-三氟甲基-5,7-二氢-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-甲酮在大鼠中在所有剂量水平均引起小红细胞性低色素红细胞生成，其表征为总血红蛋白浓度下降(图1和2)以及细胞内血红蛋白MCH的减少(图3和4)。总血红蛋白浓度的总体最大减小不超过20％并且该效应在处理停止后是可逆的。图14-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮对雌性大鼠中的平均组血红蛋白的作用(8周研究)通过饮食混合每日向雌性Wistar大鼠施用4-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮达8周，实现1、3和8mg/kg/天的剂量，之后是4周的无处理恢复期。对照组在整个研究期间仅接受标准饮食。在研究的不同时间点，使用SYSMEXXT分析仪研究外周血中的包括Hb在内的血液参数。数据为组平均值并且误差条指示标准差(SD)。图2[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)苯基]-(3-三氟甲基-5,7-二氢-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-甲酮对雌性大鼠中的平均组血红蛋白的作用(26周研究)每天以2、6和12mg/kg/天的剂量通过口服强饲向每组20只雌性Wistar大鼠施用[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)苯基]-(3-三氟甲基-5,7-二氢-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-甲酮达26周，之后是4周的无处理恢复期，为此每个剂量组分配额外的6只雌性大鼠。在用药期间，对照组用载体对照处理。在研究期间的不同时间点，使用Bayer，ADVIA120血液学分析仪研究外周血中的包括Hb在内的血液参数。数据为组平均值并且误差条指示标准差(SD)。图34-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮对雌性大鼠中平均组MCH的作用(8周研究)通过饮食混合每日向雌性Wistar大鼠施用4-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮达8周，实现1、3和8mg/kg/天的剂量，之后是4周的无处理恢复期。对照组在整个研究期间接受标准饮食。在研究的不同时间点，使用SYSMEXXT分析仪研究外周血中的包括MCH在内的血液参数。数据为组平均值并且误差条指示标准差(SD)。图4[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)苯基](3-三氟甲基-5,7-二氢-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-甲酮对雌性大鼠中平均组MCH的作用(26周研究)每天以2、6和12mg/kg/天的剂量通过口服强饲向每组20只雌性Wistar大鼠施用[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)苯基](3-三氟甲基-5,7-二氢-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-甲酮达26周，之后是4周的无处理恢复期，为此每个剂量组分配额外的6只雌性大鼠。在用药期间，对照组用载体对照处理。在研究期间的不同时间点，使用Bayer，ADVIA120血液学分析仪研究外周血中的包括Hb在内的血液参数。数据为组平均值并且误差条指示标准差(SD)。此外，在用4-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮处理的食蟹猴的外周血样品中4-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮引起可溶性转铁蛋白受体(sTfrR，一种由骨髓成红血球细胞表达的截短形式的蛋白质)的剂量依赖性减少(图5)，这指示这些细胞中的铁吸收减少。图54-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮对雌性食蟹猴中的sTrfR的作用通过胶囊经由口服强饲以对照载体、1、3和9mg/kg/天的剂量水平向每组4只雄性和4只雌性食蟹猴施用4-(3-氟-5-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-[5-甲磺酰基-2-((S)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-苯基]-甲酮达36周。将来自对照和高剂量组的每个性别另外的2只动物再维持13周恢复期以评估任何发现的可逆性。在外周血样品中，在研究的不同时间，进行sTfR的测量。使用SISCAPAAssayTechnologiesInc.开发的测定进行测量，所述测定被设计成使用工作流程结合质谱来确定血清、血浆和血液中的人转铁蛋白受体(sTfR)的可溶性片段。人测定适合于并且用食蟹猴sTf测量验证。显示的数据为组平均值，误差条指示标准差。药物组合物式I或II的化合物及其药用盐可以用作药物，例如以药物制剂的形式。该药物制剂可以口服给药，例如，以片剂、包衣片剂、糖锭剂、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂或混悬剂形式。然而，也可以通过直肠实现给药，例如，以栓剂的形式，或者经肠胃外给药，例如，以注射溶液的形式。式I或II的化合物及其药用盐可以与制药学惰性的、无机或有机的赋形剂一起进行加工以用于制备片剂、包衣片剂、糖锭剂和硬明胶胶囊。例如，可以使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等作为用于片剂、糖锭剂和硬明胶胶囊的此种赋形剂。用于软明胶胶囊的适合赋形剂是例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。用于制备溶液和糖浆的适合赋形剂是例如水、多元醇、蔗糖、转化糖、葡萄糖等。用于注射溶液的适合赋形剂是例如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。用于栓剂的适合赋形剂是例如天然或硬化油、蜡、脂肪、半固体或液体多元醇等。此外，药物制剂可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可以含有其它在治疗学上有价值的物质。剂量可以在宽范围内变化，并且当然，在每个具体病例中将适合个体需求。通常，在口服给药的情形中，约10至1000mg/人的式的化合物的日剂量应当是合适的，但是当需要时，也可以超过以上上限。根据本发明的组合物的实例有，但不限于：实施例A以通常方式制造以下组成的片剂：制造程序1.将成分1、2、3和4混合，并用纯水粒化。2.将颗粒在50℃干燥。3.使颗粒通过合适的研磨设备。4.加入成分5并混合三分钟；在合适的压机上压制。实施例B-1制备以下组成的胶囊：制造程序1.将成分1、2和3在合适的混合机中混合30分钟。2.加入成分4和5，并混合3分钟。3.填充至合适的胶囊中。将式I或II的化合物、乳糖和玉米淀粉首先在混合机中混合，并且之后在粉碎机中混合。将混合物送回混合机；将滑石加入其中并充分混合。将混合物通过机器填充至合适的胶囊中，例如硬明胶胶囊。实施例B-2制备以下组成的软明胶胶囊：成分mg/胶囊式I或II的化合物5黄蜡8氢化大豆油8部分氢化的植物油34大豆油110总计165制造程序将式I或II的化合物溶解在其它成分的温暖熔体中，并将混合物填充至适当大小的软明胶胶囊中。根据一般程序处理所填充的软明胶胶囊。实施例C制备以下组成的栓剂：成分mg/栓剂式I或II的化合物15栓剂块1285总计1300制造程序将栓剂块在玻璃或钢容器中熔化，充分混合并冷却至45℃。随后，将细粉化的式I的化合物加入其中并搅拌直至其完全分散。将混合物倒入合适大小的栓剂模具中，放置冷却；之后将栓剂从模具移出并单独地包装在蜡纸或金属箔中。实施例D制备以下组成的注射溶液：成分mg/注射溶液式I的化合物3聚乙二醇400150乙酸适量至pH5.0注射溶液用水至1.0ml制造程序将式I或II的化合物溶解在聚乙二醇400和注射用水(部分)的混合物中。将pH通过乙酸调节至5.0。通过加入余量的水将体积调节至1.0ml。将溶液过滤，使用适当过量装入小瓶中并灭菌。实施例E制造以下组成的小药囊(sachet)：成分mg/小药囊式I或II的化合物50乳糖，细粉1015微晶纤维素(AVICELPH102)1400羧甲基纤维素钠14聚乙烯吡咯烷酮K3010硬脂酸镁10调味添加剂1总计2500制造程序将式I或II的化合物与乳糖、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠混合，并且用聚乙烯吡咯烷酮在水中的混合物造粒。将颗粒与硬脂酸镁和调味添加剂混合，并装入小药囊中。当前第1页1 2 3