一种凝胶制剂及其制备方法与流程

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种凝胶制剂及其制备方法。

背景技术：

地衣含有独特而多样的化学物质，早在明代李时珍的《本草纲目》中就有作为药物的记载。此外，地衣在食用、日用香料、生物试剂等方面也具有极好的应用价值。实验研究表明，地衣多糖有较强的还原力，树花多糖抑制oh、o-的ic分别为6.45mg/ml和10.63mg/ml,2种自由基的抑制能力由大小为oh>o-。顶果珊瑚枝(stereocaulonpomiferum)等富含5-甲基-β-苔黑酚酸甲酯(methyl5-methy-β-orcinolcarboxylate),苔色酸(orsellinicacid),扁枝衣酸(everainicacid),苔色酸甲酯(methylorsellinate),赤星衣酸乙酯(ethylhematommate),β-苔黑酚酸甲酯(methylβ-orcinolcarboxylate),假杯点素a(pseudocyphellarina),黑茶渍素(atranorin),茶渍酸(lecanoricacid),斑点酸(sticticacid),降斑点酸(norsticticacid),藻纹苔酸(salazinicacid),富马原岛衣酸(fumarprotocetraricacid),左旋和右旋松萝酸(usnicacid),左旋地衣硬酸〔(-)-lichesterinicacid〕,右旋原地衣硬酸〔(+)-protolichesterinicacid〕和无羁萜(friedelin)，是较好的苔香型香料来源。

地衣体内普遍含有地衣酸，并且含量较高，如松萝酸，是较为理想的天然化妆品原料来源。

本发明是首次利用地衣聚筛蕊原料制备凝胶制剂的应用。

技术实现要素：

本发明旨在提供一种凝胶制剂及其制备方法，首次利用地衣聚筛蕊原料制备凝胶制剂，该凝胶制剂对绿脓杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌均有一定的抑菌作用，并对自由基有明显的清除作用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种凝胶制剂，以重量份1000份计包括如下组分：聚筛蕊提取物100份；卡波姆11份；丁二醇200份；甘油160份；吐温10份；ve0.25份；三乙醇胺1.2份；玫瑰精油1.5份；蒸馏水余量。

上述凝胶制剂的制备方法，包括如下步骤：

s1称取聚筛蕊药材粉碎，以丙酮回流提取2h，过滤，浓缩成稠膏状，得聚筛蕊提取物；聚筛蕊药材和丙酮的料液比为1:15(g/ml)；

s2取卡波姆置入适量蒸馏水中，静置过夜，使其充分溶胀，然后往其中加入甘油、吐温、丁二醇和ve并搅匀；加入聚筛蕊提取物，搅匀；再加入玫瑰精油和三乙醇胺，调节ph至6.0～7.0；加蒸馏水调整到1000份，搅拌均匀，分装即得。

本发明的有益效果在于：本发明的凝胶制剂对绿脓杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌均有一定的抑菌作用，并对自由基有明显的清除作用。另外，经实验证明，本发明的凝胶制剂对于实验家兔皮肤的涂药部位未见明显的刺激性作用。

附图说明

图1为本发明的制备方法的流程示意图；

图2为本发明凝胶制剂对dpph自由基清除率实验结果示意图；

图3为本发明凝胶制剂对羟基自由基清除率实验结果示意图；

图4为本发明凝胶制剂对超氧自由基清除率实验结果。

具体实施方式

以下将结合附图对本发明作进一步的描述，需要说明的是，本实施例以本技术方案为前提，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围并不限于本实施例。

一种凝胶制剂，以重量份1000份计包括如下组分：聚筛蕊提取物100份；卡波姆11份；丁二醇200份；甘油160份；吐温10份；ve0.25份；三乙醇胺1.2份；玫瑰精油1.5份；蒸馏水余量。

如图1所示，上述凝胶制剂的制备方法，包括如下步骤：

s1称取聚筛蕊药材粉碎，以丙酮回流提取2h，过滤，浓缩成稠膏状，得聚筛蕊提取物；聚筛蕊药材和丙酮的料液比为1:15(g/ml)；

s2取卡波姆置入蒸馏水中，静置过夜，使其充分溶胀，然后往其中加入甘油、吐温、丁二醇和ve并搅匀；加入聚筛蕊提取物，搅匀；再加入玫瑰精油和三乙醇胺，调节ph至6.0～7.0；加蒸馏水调整到1000份，搅拌均匀，分装即得。

以下将通过实验对本发明作进一步的描述。

1、聚筛蕊提取工艺的研究

按3个因素，每个因素3水平进行优选。称取聚筛蕊药材共9份，按正交表l9(34)进行正交试验。按照表1的因素水平，表2的实验设计进行实验，进行直观分析和方差分析。

表1聚筛蕊提取工艺因素水平表l9(3⁴)

表2聚筛蕊提取工艺正交试验安排表

按照巴巴酸的含量测定结果指标评价，进行直观分析发现，各因素对巴巴酸提取效率的影响顺序为a>c>b，方差分析结果表明，因素a、b、c对结果均无显著性影响。结合直观分析，优选出最佳工艺为a1b1c2，即提取溶剂为丙酮、提取时间2h、料液比1:15。试验结果如表3所示。

表3聚筛蕊提取工艺条件l9(3⁴)正交试验结果

按丙酮、提取时间2h、料液比1:15提取方法，平行制备3份聚筛蕊提取物，并按分别对巴巴酸的含量进行测定，验证实验结果表明，巴巴酸的百分含量分别为1.37、1.41、1.35，均大于正交设计试验值，rsd＝1.9％，表明该提取工艺稳定可行。

2、凝胶制剂的成型工艺研究

通过正交试验考察卡波姆-u20、丙二醇、甘油的用量3个因素试验结果对制剂成型工艺的影响以确定最佳工艺参数，正交试验水平与因素设计如表4所示。

表4正交试验水平与因素设计l9(3⁴)

外观、流动相、涂展性为评价指标，进行直观分析发现，根据极差可知，各因素对外观、流动相、涂展性影响顺序为c>b>a，方差分析结果表明，因素a、b、c对结果均无显著性影响。结合直观分析，优选出最佳工艺为c2b3a3，即各因素的用量为卡波姆1.1g、甘油16g、丁二醇20g。试验结果如表5所示。

表5正交试验结果及分析

四、初步药效学研究资料

试验结果表明，所述聚筛蕊提取物对绿脓杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌均有一定的抑菌作用，并且对自由基有明显的清除作用。另外，本发明的凝胶制剂对于实验家兔皮肤的涂药部位未见明显的刺激性作用。

1、dpph自由基的清除试验

配制0.1mmol/l的dpph溶液，18支干净具塞试管，每个浓度3只试管，分别编为号1～3号，根据表6，分别在试管中加入相应体积的溶液，振摇均匀；把18支装有供试液的试管在室温下，避光静置30min；计算好时间后，在紫外分光光度计517nm处分别测定每只试管的吸光度值。实验试剂用量如表6所示。

表6dpph自由基清除率实验试剂用量表

实验的数据经过处理计算后，聚筛蕊提取物在517nm处，6个浓度对dpph自由基的清除率分别为：1︰1浓度的清除率为35﹪、1︰2浓度的清除率为55﹪、1︰3浓度的清除率为58﹪、1︰4浓度的清除率为60﹪、1︰5浓度的清除率为61﹪、1︰6浓度的清除率为65﹪，如图2所示。

2、羟基自由基的清除试验

配制不同浓度聚筛蕊提取物、邻二氮菲溶液、硫酸亚铁铵溶液以及ph为7.4的tris-hcl溶液，待用；取8只干净的具塞试管，编号1～8号；先向8支试管分别加入0.3ml邻二氮菲溶液，再加入1mlph为7.4的tris-hcl溶液，然后再加入0.3ml硫酸亚铁铵溶液；取出1～6号试管，分别依次加入6个浓度的聚筛蕊提取物；7号试管加入0.3mlh2o2；8号试管用去离子水定容，即可进行测量吸光度。试验数据如表7所示。

表7聚筛蕊提取物对羟基自由基清除率试验数据

实验结果表明聚筛蕊提取物在517nm处，测定6个浓度吸光度值计算清除率。1︰1浓度的清除率为62﹪；1︰2浓度的清除率为75﹪；1︰3浓度的清除率为75﹪；1︰4浓度的清除率为78﹪；1︰5浓度的清除率为79﹪；1︰6浓度的清除率为85﹪。如图3所示。

3、超氧自由基清除试验

配制不同浓度的聚筛蕊提取物，取6支干净的具塞试管，编号1～6号，1～5号试管加入ph值为8.2的tris-hcl溶液；再加入0.3ml不同浓度待测聚筛蕊提取物；6号试管加入0.3ml去离子水作为空白对照；将6支试管放入37℃水浴锅中恒温水浴20min，取出后立即加入0.3ml7.5mmol/l的连苯三酚溶液，迅速振摇均匀，在吸收波长320nm处，每间隔30s测一次吸光度值，连续测定5min，取出10次结果的间隔值算出其平均值，再计算出吸光度值即可。实验数据如表8所示。

表8聚筛蕊提取物对超氧自由基清除率浓度组实验数据

聚筛蕊提取物对超氧自由基的清除实验结果表明：提取物浓度为1︰1的清除率为44﹪、浓度为1︰2的清除率为56﹪、浓度为1︰3的清除率为60﹪、浓度为1︰4清除率72﹪、浓度为1︰5的清除率为80﹪、浓度为1︰6的清除率为88﹪。如图4所示。

4、钢环法考察聚筛蕊提取物的抑菌效果

称取聚筛蕊原药材10g，加入丙酮150ml，然后回流提取4小时，趁热过滤，弃去滤渣，然后与水浴锅上蒸发浓缩至50ml，得药物浓度为0.2g/ml的聚筛蕊丙酮提取液，用0.9％生理盐水将聚筛蕊提取液稀释4个倍数，即1:1，1:2，1:3，1:4，备用。在无菌操作台上分别用棉签蘸取大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌菌种放入已准备好的肉汤内进行细菌接种，然后再放入37℃的温箱内培养6～8小时。

在无菌操作台上，分别将每个菌种用棉签蘸取均匀涂于营养琼脂制作的平板上，每个菌种做三个，每个平板放入5个钢环，中间放阳性对照品庆大霉素周围放4个不同稀释倍数的聚筛蕊提取物。然后将每个平板放入37℃的温箱，24小时后观察结果，并测定抑菌圈直径。结果如表9所示。

表9聚筛蕊提取物钢环法抑菌结果

注：1、2、3、4分别为4个不同稀释倍数比例的聚筛蕊提取物。抑菌圈直径在20mm以上为极敏，15-20mm为高敏，10-14mm为中敏，10mm以下为低敏。以上样品平行测定3次。

用钢环法做抑菌试验，结果表明聚筛蕊提取物对绿脓杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌均具有良好的抑菌作用。

5、本发明凝胶制剂对家兔皮肤刺激性试验

选择6只健康白色的实验家兔，购买于重庆藤鑫生物技术有限公司，由第三军医大学提供，合格证号：scxk(军)2012-0010。体重分别在2.0-2.5kg之间，雌雄各半，把实验用兔分别单独关笼饲养，每只实验用兔给相同的食物和水进行喂食。在进行实验之前，需要把6只实验家兔放置于实验中动物房内地方中喂养3d以适应环境，同时给相同质量食物和水。

进行实验前1d，分别将实验家兔背部两侧毛用电子剃毛器剃除，然后去除干净，去毛范围控制在3cm×3cm，涂抹面积2.5cm×2.5cm，左侧去毛区作为自身对照，不给予干预，而右侧去毛区用棉签蘸取0.5g本发明的凝胶制剂在指定的区域里涂抹均匀。涂抹4h后用温水洗去残留的凝胶制剂，并在去除凝胶制剂后的1h、24h、48h、72h时观察涂抹部位有无红斑、水肿等情况变化，观察结果均与动物左侧去毛区皮肤作为自身对照以判断是否存在皮肤刺激性。

根据《中药药理实验方法学》，以红斑、水肿等为评价指标，结果如表10所示。

表10本发明凝胶制剂给药对家兔皮肤刺激性实验结果

本发明的凝胶制剂经皮肤给药动物试验结果表明，涂药部位与空白对照比较无明显红肿、红斑水肿等刺激性作用，其皮肤刺激性平均分值<0.25分。

对于本领域的技术人员来说，可以根据以上的技术方案和构思，作出各种相应的改变和变形，而所有的这些改变和变形都应该包括在本发明权利要求的保护范围之内。