专利名称：包含皮质甾类的脂质体的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物组合物，它含有某特定皮质甾类作为活性组分，特别适用于通过吸入治疗法治疗哮喘，并涉及制备该药物组合物的方法。
环境污染增加的结果导致阻塞性支气管肺病如支气管炎和支气管哮喘大量传播开来。它们的发病原因和严重性各不相同。由环境影响(例如废气，天气转化层)引起的外源过敏性支气管哮喘和内源支气管哮喘常以各种呼吸困难严重发作为特征。咳嗽强度和痰也不同。过渡型和混合型哮喘是常见的并且在治疗中必须给予重视。
为了治疗该种强度和起源不同的疾病，在不考虑联合制剂的情况下，可获得具有可接受危险性的确定的三组活性成分。这三组成分是β2-拟肾上腺素剂如肾上腺素，巴美生，克仑特罗，非诺特罗，Sulbutamol和特布他材，黄嘌呤衍生物如茶碱和二羟丙茶碱，和包含阿托品衍生物异丙托溴铵和氧托溴铵的抗胆碱能剂。如果使用以这三组活性组分为基础的制剂治疗不成功，那么建议通过口服或吸入给药使用某些皮质甾类如倍氯半松(beclomethasone)或布地奈德。目前只有在吸入治疗中所使用的皮质甾类制剂除了具有需要的抗过敏性、抗渗出性-抗炎性外，还具有因吸收所吸入的皮质甾类而引起的轻度但不期望的系统副作用。通常，用皮质甾类治疗必须经过很多年，因而明显增加系统副作用问题。
意外地发现，当包封在脂质体中给药时，9α-氯-6α-氟-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基雄甾-1，4-二烯-17β-羧酸甲酯具有特别好的抗哮喘性，过去曾建议将该化合物用作皮肤科软膏剂、霜剂、凝胶剂和泡沫剂的活性组分。也已发现，该化合物的全身吸收非常低。
因此，一方面，本发明提供含有活性组分式I化合物并将其包封在脂质体或脱水脂质体中的药物组合物。
如英国专利说明书1578243中所述，可制备式I化合物，9α-氯-6α-氟-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基雄甾-1，4-二烯-17β-羧酸甲酯。为了用吸入装置给药，脂质体可以是水性悬浮液或脱水形式，如干粉。
已发现，在过敏诱导的嗜曙红细胞增多的Brown-Norway大鼠模型中，含式I化合物的脂质体易于被肺泡巨噬细胞摄入并有效地抑制嗜曙红细胞的补充。
适宜的脂质体通常包括那些其中类脂组分至少包含-种合成磷脂的脂质体。合成磷脂的实例为合成的磷脂酰胆碱如二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱，二棕榈酰基磷脂酰胆碱，二硬脂酰基磷脂酰胆碱，二油酰基磷脂酰胆碱，二亚油酰基磷脂酰胆碱，二月桂酰基磷脂酰胆碱，1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱，1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱和1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，合成的磷脂酰甘油如二月桂酰磷脂酰甘油，二肉豆蔻酰磷脂酰甘油，二棕榈酰磷脂酰甘油和二油酰磷脂酰甘油，合成的磷脂酸如二肉豆蔻酰磷脂酸和二棕榈酰磷脂酸，合成的磷脂酰乙醇胺如二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺和二棕榈酰磷脂酰乙醇胺和合成的磷脂酰丝氨酸如二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸，二棕榈酰磷脂酰丝氨酸和二油酰磷脂酰丝氨酸。
优选地，脂质体的脂类组分包含合成的磷脂酰胆碱，如上文所描述的那些，可有可无地和合成的磷脂酰丝氨酸或合成的磷脂酰甘油，如上文所描述的那些，优选地，磷脂酰胆碱与磷脂酰丝氨酸或磷脂酰甘油的重量比为60∶40-95∶5，特别是70∶30-90∶10。
在优选实例中，脂质体的类脂组分包含合成的、基本上纯的式II磷脂。
其中R1为具有偶数个碳原子的C10-C20链烷酰基，R2为具有偶数个碳原子的C10-C20链烯酰基，Ra，Rb和Rc为氢或C1-C4烷基，并且n为2-4的整数。
在式II磷脂中，作为具有偶数个碳原子的C10-C20链烷酰基的R1优选为正十二烷酰基，正十四烷酰基，正十六烷酰基，正十八烷酰基或正二十烷酰基。
优选地，作为具有偶数个碳原子的C10-C20链烯酰基的R2为9-顺式-十二碳烯酰基，9-顺式-十四碳烯酰基，9-顺式-十六碳烯酰基，6-顺式-十八碳烯酰基，6-反式-十八碳烯酰基，9-顺式-十八碳烯酰基，9-反式-十八碳烯酰基，11-顺式-十八碳烯酰基或9-顺式-二十碳烯酰基。在式II磷脂中，优选地，Ra，Rb和Rc为C1-C4烷基，特别是甲基。
在式II中，n为2-4的整数，优选2。式-(Cn-H2n)-的基团为非支化或支化亚烷基，例如，1，1-亚乙基，1，1-，1，2-或1，3-亚丙基或1，2-，1，3-或1，4-亚丁基。优选1，2-亚乙基(n＝2)。
在特别优选的式II磷脂中，R1为正-十二烷酰基，正-十四烷酰基，正-十六烷酰基或正-十八烷酰基并且R2为9-顺式-十二碳烯酰基，9-顺式-十四碳烯酰基，9-顺式-十六碳烯酰基，9-顺式-十八碳烯酰基或9-顺式-二十碳烯酰基，Ra，Rb和Rc为甲基，并且n为2。
特别优选的式II磷脂为合成的1-正-十六-烷酰基-2-(9-顺式-十八碳烯酰基)-3-sn-磷脂酰胆碱。
在一些特别优选的脂质体中，类脂组分包含与合成的，基本上纯的式III磷脂化合的式II磷脂
其中R3和R4各独立地为具有偶数个碳原子的C10-C20链烯酰基，n为1-3的整数，并且Y为可药用碱的阳离子。
在式III磷脂中，优选地，作为具有偶数个碳原子的C10-C20链烯酰基的R3和R4为9-顺式-十二碳烯酰基，9-顺式-十四碳烯酰基，9-顺式-十六碳烯酰基，6-顺式-十八碳烯酰基，6-反式-十八碳烯酰基，9-顺式-十八碳烯酰基，9-反式-十八碳烯酰基，11-顺式-十八碳烯酰基或9-顺式-二十碳烯酰基。
可药用碱的阳离子Y为，例如，碱金属离子，例如锂，钠或钾离子，铵离子，一、二或三C1-C4烷基铵离子，例如三甲基-，乙基-，二乙基-或三乙基铵离子，四甲基铵离子，2-羟乙基-三-C1-C4-烷基-铵离子，例如胆碱阳离子，或2-羟乙基铵离子，或碱性氨基酸的阳离子，例如赖氨酸或精氨酸。优选地，Y为钠离子。
在特别优选的式III磷脂中，R3和R4是相同的并且为例如9-顺式-十二碳烯酰基，9-顺式-十四碳烯酰基，9-顺式-十六碳烯酰基，9-顺式-十八碳烯酰基或9-顺式-二十碳烯酰基，n为1并且Y为钠离子。
特别优选的式III磷脂为合成的1，2-二(9-顺式-十八碳烯酰基)-3-sn-磷脂酰S-丝氨酸。
在另一优选实例中，脂质体的类脂组分包含二(C10-C20链烷酰)磷脂酰胆碱和二(C10-C20链烷酰)磷脂酰甘油，链烷酰基具有偶数个碳原子并且优选的重量比如上所述，在各磷脂中，两个链烷酰基可以是相同的或不同的并且优选为正-十二烷酰基(月桂酰基)，正-十四烷酰基(肉豆蔻酰基)，正-十六烷酰基(棕榈酰基)，正-十八烷酰基(硬脂酰基)或正-二十烷酰基。在特别优选的实例中，二(C10-C20链烷酰基)磷脂酰胆碱为二硬脂酰磷脂酰胆碱且二(C10-C20链烷酰基)磷脂酰甘油为二棕榈酰磷脂酰甘油。
除磷脂外，脂质体的类脂组分可包含胆甾醇，胆甾醇的量为，例如，总脂类组分量的20-60，优选30-50mol％。在另一优选实例中，脂质体中脂类组分包含合成的磷脂酰胆碱(如上文所述)，合成的磷脂酰丝氨酸或磷脂酰甘油(“如上文所述”)和胆甾醇，优选的磷脂酰胆碱与磷脂酰丝氨酸或磷脂酰甘油的重量比如上文所述并且优选的胆甾醇与总磷脂组分的重量比为1∶1-1∶5。在特别优选的实例中，脂类组分包含二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，胆甾醇和二油酰磷脂酰丝氨酸。
通常要求活性组分与脂类的重量比尽可能高并且与脂质体的稳定性一致。该重量比的最大值可根据类脂组分的性质和组成而变化，但通常大约为1∶20。然而，已发现，重量比为1∶100-1∶50的脂质体可获得好结果。
可利用已知的生产含药脂质体的方法来制备含活性化合物的本发明脂质体。例如，在第一种方法中，将式I化合物和一种或多种脂类在有机溶剂如醇，醚或卤代烃或其混合物中的溶液逐渐加入，优选滴加到搅拌下的水性介质如磷酸盐缓冲的盐水中，得到脂质体的水性悬浮液。在另一方法中，将一种或多种脂类和式I化合物溶解在有机溶剂如醇，醚或卤代烃或其混合物中，然后通过冻干或通过旋转蒸发从得到的溶液中除掉溶剂，并将残余物分散在水性介质，如磷酸盐缓冲的盐水或糖例如乳糖的水溶液中，得到脂质体的水性悬浮液。
可通过已知的方法来处理水性脂质体悬浮液，由此除掉溶剂并减小脂质体的大小。例如将通过上述第一种方法，用水可混溶的有机溶剂制备的水性脂质体悬浮液可有可无地进一步用水性介质稀释后进行渗析，并通过超滤将渗析过的悬浮液浓缩。将通过第一种方法，但用水不混溶性有机溶剂制备的水性脂质体悬浮液蒸发除掉溶剂，然后通过超滤浓缩。将通过上述第二种方法制备的，通常导致多层囊(MLV)形成的水性脂质体悬浮液经过具有选择孔径的一个或多个膜，例如聚碳酸酯膜挤压处理来减小脂质体的大小。优选地，本发明使用的脂质体粒度小于1μm，更优选20-200nm，特别为50-100nm。
优选地，通过冻干(冷冻干燥)，将含式I化合物的脂质体脱水，得到干粉，在治疗哮喘中用于通过干粉吸入器给药。通过在病人的气道内流动，脱水的脂质体再水合。通常在防冻剂存在下进行脂质体的冻干，其中，将防冻剂并入脂质体形成中所使用的水性介质中。优选地，防冻剂为糖，例如单糖如葡萄糖，聚合糖如葡聚糖或者优选二糖如蔗糖，乳糖，麦芽糖，海藻糖。特别优选的防冻剂为乳糖和海藻糖。按照常规冷冻干燥技术，优选在低于待冻干物质的相转变温度下进行初级冻干。
在防冻剂存在下将脂质体脱水得到包含脱水脂质体和防冻剂混合物的干粉形成。如果防冻剂存在于形成脂质体的水性介质中，那么防冻剂在脂质体颗粒的内外两面。尽管如果需要可使用较低或较高的比率，但通常脂质体中防冻剂与脂类的重量比为1∶1-4∶1。
如果需要，将通过含式I化合物的脂质体脱水，特别是通过在防冻剂存在下冻干脱水得到的产物研磨，得到适用于吸入治疗的粒度，例如使用干粉吸入器装置给药进行吸入治疗。通常适宜的粒度小于10μm，优选1-7μm。在吸入治疗中，如果需要，也可以在经过上述处理，将脂质体的粒度减小到适宜的范围后，以在水性介质中的悬浮液的形式使用含式I化合物的脂质体。为了以该形式使用，可在吸入治疗中用作溶媒的水性介质中制备脂质体或者可在另一种介质中制备并从中分离出来，并且在并入吸入治疗中用作溶媒的水性介质中之前任选地如上所述进行脱水。水性介质可以是通常在吸入治疗中用作溶媒的水性介质；它通常是包含溶解在其中的一种或多种可药用赋形剂如氯化钠，缓冲剂，抗氧剂和表面活性剂的水。常见的水性介质为磷酸盐缓冲的盐水，它可以含有抗氧剂如α-生育酚。当在吸入治疗中使用时，可通过已知雾化器，例如气动雾化器来给与本发明水性脂质体悬浮液。
可将包封在脱水脂质体中的含式I化合物的本发明干粉放在用于干粉吸入装置的胶囊例如明胶或塑料胶囊中或泡中。优选地，胶囊或泡包含剂量单位的干粉，它可以包含，例如，10-1000μg优选50-400μg的式I化合物和足够的载体以得到4-40mg优选20-30mg的干粉。或者，可将干粉放在适于释放的多剂量干粉吸入装置的储存器中，例如每次驱动喷出2mg干粉。
另一方面，本发明提供治疗哮喘的方法，它包括通过吸入有效量包含在上述脂质体或脱水脂质体中的上述式I化合物来给药。
可根据治疗病人的年龄、体重和疾病严重性来改变式I化合物的每日剂量。通常，每日剂量可在50-2000μg，尤其在100-1000μg范围内。
通过下列实施例来说明本发明，除另外说明，单位由重量表示。实施例1在40℃下，将1-正-十六烷酰-2-(9-顺式-十八碳烯酰基)-3-sn-磷脂酰胆碱(700mg)和1，2-二(9-顺式-十八碳烯酰)-3-sn-磷脂酰S-丝氨酸钠(300mg)溶解在叔丁醇(20ml)中。将得到的溶液与通过在40℃下将9α-氯-6α-氟-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基雄甾-1，4-二烯-17β-羧酸甲酯(化合物I)(10mg)溶解在叔丁醇(5ml)中形成的溶液混合并使温度回到40℃。在室温下，将得到的溶液滴加到pH7.4并充分搅拌的磷酸盐缓冲的盐水溶液(PBS)(200ml)中。在氮气环境下，利用AMICONYM100膜，将得到的水性脂质体悬浮液在PBS中渗析，并浓缩至20ml。将浓缩的水性脂质体悬浮液相继通过孔径为0.8μm和0.2μm的滤器过滤并分配到无菌小瓶(每小瓶2ml)中。在吸入法治疗哮喘中，得到的悬浮液适用于通过喷雾器给药。实施例2重复实施例1的制备方法，但在脂质体形成和渗析中，用每升含94.4g乳糖一水合物和0.24g氯化钠的水溶液来代替实施例1中所使用的磷酸盐缓冲的盐水，得到浓缩的水性脂质体悬浮液。实施例3在Lyovac GT4冻干器中，将实施例2中制备的浓缩水性脂质体悬浮液冻干。用Trost空气冲击喷雾器将得到的饼状物粉碎，得到具有6-7μm中等粒度的干粉，它在吸入法治疗哮喘中适用于通过干粉吸入装置给药。实施例4将二硬脂酰磷脂酰胆碱(700mg)，二棕榈酰磷脂酰胆碱(300mg)和化合物I(20mg)溶解在氯仿和甲醇的2∶1(体积比)混合物(20ml)中。通过旋转蒸发除掉溶剂。将残余物分散在40ml每升含94.4g乳糖一水合物和0.24g氯化钠的乳糖水溶液中，得到脂质体的水性悬浮液。将该溶液在70℃和氮气环境下通过2个200nm聚碳酸酯膜挤压两次，通过2个100nm聚碳酸酯膜挤压十次来减小脂质体的粒度。如实施例3，将得到的悬浮液冻干并粉碎，得到适用于在吸入法治疗哮喘中通过干粉吸入装置给药的干粉。实施例5将二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(678mg)，胆甾醇(193mg)，二油酰磷脂酰丝氨酸(81mg)和化合物I(20mg)溶解在叔丁醇(20ml)中。通过冷冻干燥，将叔丁醇从得到的溶液中除掉。将残余物分散在实施例4所述的乳糖水溶液中并将得到的脂质体如实施例4所述挤压，但用35℃代替70℃，将脂质体的粒度减小到100nm。如实施例3，将得到的悬浮液冷干并粉碎，得到适于在吸入法治疗哮喘中通过干粉吸入装置给药的干粉。实施例6如ElWood等人在J.Allergy Clin.Immunol 1991，88，951-60中所述，在过敏诱导嗜曙红细胞增多的Brown-Norway大鼠模型中测定包封式I化合物的脂质体对嗜曙红细胞补充的作用。用四组体重为180-220g的近亲繁殖雄性鼠进行研究。
组1通过腹膜内注射0.9％(wt/vol)卵白蛋白(1mg)/Al(OH)3(100mg)悬浮液(1ml)，将动物致敏，21天后，在单一的盐水气雾剂中暴露15分钟。
组2如组1所示，用卵白蛋白将动物致敏，21天后，暴露到1％卵白蛋白气雾剂中15分钟。
组3如组1所示，用卵白蛋白将动物致敏，19天后，在氯胺酮麻醉下，经气管注射含3μg化合物I的实施例1脂质体悬浮液(0.5ml)并在24小时后，再经气管注射。第二次注射后24小时，将动物暴露在1％卵白蛋白气雾剂中15分钟。
组4如组3所示来处理动物，但代替含式I化合物的脂质体，使用通过相同方法制备但不含式I化合物的空白脂质体。
就各组大鼠而言，暴露到气雾剂中24小时后，进行支气管肺泡灌洗来测定嗜曙红细胞数。结果显示如下组 每只大鼠嗜曙红细胞数1(盐水攻击) 0.25×1052(卵白蛋白攻击) 19.0×1053(化合物1脂质体) 10.3×1054(空白脂质体)16.9×10权利要求
1.一种药物组合物，它包含包封在脂质体或脱水脂质体中，作为活性组分的式I化合物
2.权利要求1组合物，其中脂质体或脱水脂质体中类脂组分包含至少一种合成的磷脂。
3.权利要求2组合物，其中类脂组分包含合成的磷脂酰胆碱，可有可无地还包含合成的磷脂酰丝氨酸或合成的磷脂酰甘油。
4.权利要求3组合物，其中存在磷脂酰丝氨酸或磷脂酰甘油并且磷脂酰胆碱与磷脂酰丝氨酸或磷脂酰甘油的重量比为60∶40-95∶5。
5.权利要求4组合物，其中所述重量比为70∶30-90∶10。
6.任一权利要求3-5的组合物，其中类脂组分包含合成的式II磷脂
其中R1为具有偶数个碳原子的C10-C20链烷酰基，R2为具有偶数个碳原子的C10-C20链烯酰基，Ra，Rb和Rc为氢或C1-C4烷基，并且n为2-4的整数。
7.权利要求6组合物，其中式II磷脂为1-正十六烷酰基-2-(9-顺式-十八链烷酰基)-3-sn-磷脂酰胆碱。
8.任一权利要求3-7的组合物，其中类脂组分包含如权利要求6所述的合成的式II磷脂和合成的式III磷脂
其中R3和R4各独立地为具有偶数个碳原子的C10-C20链烯酰基，n为1-3的整数，并且Y为可药用碱的阳离子。
9.权利要求8组合物，其中式III磷脂为1，2-二(9-顺式-十八碳烯酰基)-3-sn-磷脂酰S-丝氨酸钠。
10.任一权利要求3-5的组合物，其中脂类组分包含二(C10-C20链烷酰基)磷脂酰胆碱和二(C10-C20链烷酰基)磷脂酰甘油。
11.权利要求10组合物，其中磷脂酰胆碱为二硬脂酰磷脂酰胆碱并且磷脂酰甘油为二棕榈酰磷脂酰甘油。
12.权利要求2-11中任一一项的组合物，其中类脂组分也包含胆甾醇。
13.权利要求12组合物，其中脂甾醇的量为总脂类含量重量的20-60mol％。
14.权利要求12或13的组合物，其中类脂组分包含二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，胆甾醇和二油酰磷脂酰丝氨酸。
15.任一权利要求1-14的组合物，其中式I化合物与类脂的重量比为1∶100-1∶50。
16.任一权利要求1-15的组合物，其中脂质体的粒度小于1μm。
17.任一权利要求1-16的组合物，其中脂质体为水性悬浮液。
18.任一权利要求1-16的组合物，其形式为干粉，它包含(a)含式I化合物的脱水脂质体和(b)防冻剂的混合物。
19.权利要求18组合物，其中脂质体中防冻剂与脂类的重量比为1∶1-4∶1。
20.制备权利要求1-17中任一项的组合物的方法，它包括将式I化合物和一种或多种脂类在有机溶剂中的溶液逐渐加到搅拌的水性介质中，得到脂质体的水性悬浮液。
21.制备权利要求1-17中任一项组合物的方法，它包括将溶剂从一种或多种脂类和式I化合物在有机溶剂中的溶液中除掉并将残余物分散在水性介质中，得到脂质体的水性悬浮液。
22.制备权利要求1，18和19的组合物的方法，它包括将含式I化合物的脂质体脱水，得到干粉。
23.权利要求22的方法，其中通过冻干进行脱水。
24.治疗哮喘的方法，它包括通过吸入有效量的、包封在脂质体或脱水脂质体中的权利要求1所述式I化合物而对需要所述治疗的病人给药。
25.权利要求1-19中任一项的组合物在制备治疗哮喘药物中的应用。
26.权利要求1组合物，基本上如任一实施例所述。
27.权利要求20的方法，基本上如实施例1或2所述。
28.权利要求2 1的方法，基本上如实施例4或5所述。
29.权利要求22的方法，基本上如实施例3所述。
全文摘要
一种药物组合物，它包含包封在脂质体或脱水脂质体中，作为活性组分的式I化合物。
文档编号A61K9/00GK1169115SQ9619159
公开日1997年12月31日 申请日期1996年1月17日 优先权日1995年1月24日
发明者P·W·泰勒, J·C·马斯 申请人:诺瓦蒂斯有限公司