专利名称：：在哺乳动物中抑制病毒和肿瘤生长的含n－氯苯基甲氨酸化合物、n－氯苯基硫代甲氨酸...的制作方法
技术领域：
：本发明是在哺乳动物，特别是人和温血动物中，抑制癌症和肿瘤生长的药物组合物。此组合物包含(1)N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物，以及(2)N-膦酰甘氨酸衍生物的混合物，它们都是内吸性除草剂。该组合物还可用于治疗病毒感染。
背景技术：
：癌症是动物和人的主要死因。癌症的确切病因不明，但是很多研究者已证明，某些活动如吸烟或暴露于致癌剂与某些类型癌症和肿瘤的发病率之间存在联系。很多类型化疗剂已证明对癌症和肿瘤细胞有效，但并非所有类型的癌症和肿瘤对这些化疗剂产生反应。不幸的是这些药物很多也损伤正常细胞。这些化疗剂的确切作用机制并非总是明了的。尽管癌症肿瘤领域有所进展，但迄今领先的治疗是手术、放射和化学治疗。化学治疗被用于对付已转移的癌症或特别是有侵袭性的癌症。这样的杀细胞剂或细胞抑制剂对生长指数高的癌症(即其细胞迅速分裂的癌症)的作用最好。迄今，激素(特别是雌激素、孕酮和睾酮)、各种微生物产生的一些抗生素、烷化剂和抗代谢剂，构成了肿瘤学家可利用的治疗药物的主体。对癌症和肿瘤细胞有特异性而又不影响正常细胞的理想的细胞毒剂，将是特别令人满意的。不幸的是，并未发现这样的细胞毒剂，取而代之的是人们使用的是针对分裂特别快的细胞(肿瘤和正常细胞)的药物。显然，开发出因对肿瘤细胞有独特的特异性而针对肿瘤细胞的物质，将是一个突破。或者，对肿瘤细胞有细胞毒性而对正常细胞仅有轻度作用的物质将是令人满意的。因此，本发明的目的是提供有效抑制哺乳动物肿瘤和癌生长，而对正常细胞作用小或无作用的药物组合物。更具体地说，本发明的目的是提供一种抗癌的组合物，它包含药物载体和本文所定义的N-氯苯基甲氨酸化合物或N-氯苯基硫代甲氨酸化合物衍生物以及N-膦酰甘氨酸衍生物。还提供了治疗这些癌症的方法。这些组合物还可有效地抗病毒。因此，本发明的另一目的是提供一种有效地治疗疱疹病毒、HIV、流感病毒和鼻病毒等感染的组合物和方法。从下面的本发明详细描述中，这些和其它的目的会变得明显起来。发明概述治疗哺乳动物特别是温血动物和人的药物组合物，它包含药物载体和有效量的抗癌化合物，该抗癌化合物选自由(1)下式N-膦酰甘氨酸衍生物，以及这些化合物的某些盐，其中这些盐选自原子序数在30以内的I和II族金属、盐酸盐、乙酸盐、水杨酸盐、吡啶、铵、低级脂烃胺、低级烷醇胺和苯胺，其中X选自羟基、12个碳原子以内的烷氧基或氯氧基(chloroxy)，低级链烯氧基，环己氧基，吗啉代，吡咯烷基，哌啶子基和NHR＇；Y和Z各自独立地选自氢和低级烷基；R选自氢、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、硝基苯甲酰基和氯代苯甲酰基；R＇选自氢、低级烷基和低级链烯基、环己基、8个碳原子以内的苯烷基(phenalkyl)、苯基，氯代苯基和茴香基。与(2)下式N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物，及其药学上可接受的有机和无机酸盐所构成的混合物其中X为氧或硫，n为1-3，而R选自氢、低级烷基或低级链烯基、环己基、8个碳原子之内的苯烷基、和苯基。通过口服、直肠内、局部或胃肠外、静脉内或直接注射在肿瘤附近或之内，而施用有效量的N-膦酰甘氨酸衍生物及N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物，可将这些组合物用于抑制人体或动物体内癌症和其它恶性肿瘤的生长。这些组合物在杀灭或减慢肿瘤生长上是有效的，对正常、健康的细胞也比阿霉素安全。该组合物对病毒，如HIV、疱疹病毒、流感病毒等也是有效的。发明的详述A.定义本文中，术语“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的药物组合物。因此，术语“主要由…组成”和“由…组成”包含在术语“含有”中。本文中，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。本文中，术语“安全有效量”指按本发明的方式使用时足以获得需要的治疗反应而无过度不良反应(如毒性、辐射和变态反应)即有合理的效益/风险比的成分的量。显然，具体的“安全有效量”因各种因素而异，如受治疗的特殊病情、患者的身体条件、受治疗的哺乳动物的种类、疗程、同时进行的治疗的种类(如果有的话)、所应用的具体制剂和化合物或其衍生物的结构。本文中，“药物加成盐”包括抗癌化合物的药学上可接受的盐。这包括胺的酸盐，以及羧酸的碱金属或碱土金属盐。本文中，“药物载体”是用于将抗癌剂传送给动物或人的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体，是根据脑中计划的给药方式而选择的。本文中，“癌症”指哺乳动物出现的所有类型的癌或赘生物或肿瘤。本文中，“抗癌化合物”是与N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物相混合的膦酰甘氨酸。本文中，“病毒”包括在温血动物上引起疾病(病毒感染)的病毒，如HIV病毒、疱疹病毒、流感病毒和鼻病毒等。B.抗癌化合物抗癌化合物是因其除草剂活性而为人所知的(1)膦酰甘氨酸和(2)N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物的混合物。它们是用于防止和根除某些植物或野草、或调节植物生长的内吸性除草剂。甲氨酸化合物具有如下结构其中n为1-3，R选自氢、低级烷基或低级链烯基、环己基、8个碳原子之内的苯烷基、和苯基，而X为氧或硫；以及这些化合物的药学上可接受的盐。优选的化合物是这样的化合物，其中R是1-4个碳原子的烷基，更佳地为异丙基，而X是氧。这些化合物按1954年授予Witman的美国专利No.2,695,225和1956年授予Strain的美国专利2,734,911中描述的方法进行制备。下式膦酰甘氨酸，以及这些化合物的某些盐，其中这些盐选自原子序数在30以内的I和II族金属、盐酸盐、乙酸盐、水杨酸盐、吡啶、铵、低级脂烃胺、低级烷醇胺和苯胺，其中X选自羟基、12个碳原子以内的烷氧基或氯氧基，低级链烯氧基，环己氧基，吗啉代，吡咯烷基，哌啶子基和NHR＇；Y和Z各自独立地选自氢和低级烷基；R选自氢、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、硝基苯甲酰基和氯代苯甲酰基；R′选自氢、低级烷基和低级链烯基、环己基、8个碳原子以内的苯烷基、苯基，氯代苯基和茴香基。膦酰甘氨酸化合物按1974年授予Franz的美国专利No.3,799,758中的方法进行制备。(1)膦酰甘氨酸和(2)N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物的混合物，按摩尔重量计，相互之比为约10∶1-1∶10。较佳地比例为5∶1-1∶5，最佳地为1∶1混合物。C.剂量本发明可用任何合适的剂量。化合物和载体的类型以及数量可以很不相同，这取决于温血动物或人物种、体重、和待治疗的肿瘤等。一般，合适的剂量是约2-400毫克(mg)/千克(kg)体重。较佳地，使用约15-150毫克/千克体重。一般，给人的剂量低于给小温血动物如小鼠的剂量。剂量单位包括一种化合物，或者该化合物与其他化合物或其他抑制癌症的化合物形成的混合物。剂量单位还可含有稀释剂、填充剂(extender)、载体等。剂量单位可为固体或凝胶胶形式，如丸剂、片剂、胶囊等，或者是液体形式，它们适合口服给药、直肠给药、局部给药或肠胃外给药、或者静脉内给药、或者注射在肿瘤部位中或其周围。D.释药剂型抗癌化合物一般与药学上可接受的载体混合。载体可以是固态的或液态的，一般根据所用的给药方式而选择类型。活性物质可以以片剂或胶囊形式(作为附聚粉末)，或者以液体形式一起给药。固态载体的例子包括乳糖、蔗糖、明胶和琼脂。胶囊或片剂可以容易地制备，并且便于吞咽或咀嚼；其他的固体剂型包括颗粒和疏松粉末(bulkpowder)。片剂可含有适当的粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、调味剂、流动诱导剂(f1ow-inducingagent)和助融剂(meltingagent)。液态剂型的例子包括在水、药学上可接受的脂肪或油、醇或其他有机溶剂(包括酯)中的溶液或悬浮液、酏剂、糖浆、乳剂、用非泡腾颗粒再生的溶液和/或悬浮液、以及用泡腾颗粒再生的泡腾制剂。这样的液态剂型可含有，例如，适当的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、增稠剂和助融剂。口服剂型可含调味剂和着色剂。肠胃外和静脉内给药的剂型还可含有矿物质和其他物质，以便使它们与注射或所选的释药系统类型相配伍。可用于配制本发明口服剂型的、具体的药学上可接受的载体和赋形剂例子，在美国专利No.3,903,297(1975年9月2日授予Robert)中有描述。用于制造本发明的有用剂型的技术和组合物，在下列文献中有描述7种现代制剂(7ModernPharmaceutics).第9和10章(BanKer&Rhodes编辑，1979)；Lieberman等人，药物剂型片剂(PharmaceuticalDosageFormsTablets)(1981)；和Ansel，药物剂型导论(IntroductiontoPharmaceuticalDosageForms)2版(1976)。E.治疗方法治疗方法可以是，治疗具体的待治疗病毒、癌症或肿瘤类型中任何适当的有效方法。治疗可以是口服给药、直肠给药、局部给药、肠胃外给药、静脉内给药、或者注射在肿瘤部位中或其周围等。施用有效量药物的方法还取决于待治疗的肿瘤。据信，通过与合适的载体、其他抑制癌症的化合物或方便给药的稀释剂一起配制，并通过静脉内、皮下或肌内给药的肠胃外治疗方法，是将化合物施用于温血动物的优选方法。治疗病毒感染的方法也可以是口服给药、直肠给药、肠胃外给药、局部给药或静脉内给药。确切的时间和剂量将取决于病毒感染类型、给药方式以及所需的血液中浓度。下列实施例是阐述性的，并不用于限制本发明。结肠、乳房和肺肿瘤细胞试验进行下列的细胞培养试验，以测试N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物对结肠、乳房和肺肿瘤细胞的毒性。通过在MTT(3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基)溴化四唑)还原后观察，测试细胞的存活。MTT试验是熟知的测定细胞活力的方法。在添加10％胎牛血清的Eagle极限必需培养基中，培养结肠肿瘤细胞(HT29，来自美国典型培养物保藏中心(ATCC))和乳房细胞(MX1，来自ATCC的细胞系)。在添加10％胎牛血清的Ham＇sF12培养基中培养肺肿瘤细胞(A549，来自ATCC的细胞系)。将肿瘤细胞进行传代，并以所需的细胞密度接种于培养瓶中。将培养基倾析掉，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤细胞层2次。在接种于瓶中之前，细胞用胰蛋白酶消化并被研制(triturated)。除非另外说明，培养物在37±1℃，于空气含5±1％二氧化碳的潮湿氛围中温育。温育培养物，直至汇合度为50-80％。当培养瓶中是亚汇合状态时，对细胞进行继代培养。从培养瓶中吸去培养基，用PBS漂洗细胞层2次。然后，将胰蛋白酶溶液加至每个培养瓶中，覆盖细胞层。在30-60秒后移去胰蛋白酶溶液，然后培养瓶在室温下温育2-6分钟。当90％细胞被分离(dislodged)后，加入生长培养基。通过研制而取出细胞，然后转移至无菌离心管中。测定悬浮液中的细胞浓度，并通过适当的稀释获得5000细胞/毫升的密度。细胞在96孔生物检定板上的指定孔中进行继代培养(200微升细胞悬浮液/孔)。在所有的其余孔中加入PBS以维持湿度。板被温育过夜，然后用测试物的处理。用100微升每种稀释液处理4个孔的培养物，来测试每种剂量的测试物。那些被指定为溶剂对照的孔，接受另外的100微升甲醇对照物；阴性对照孔接受另外100微升处理培养基。在其余不用测试物或培养基处理的孔中加入PBS。然后培养板再温育约5天。在5天温育结束时，每个剂量组通过显微镜检查来评估毒性。在处理培养基中制备0.5毫克/毫升的MTT稀释液，然后经0.45微米过滤器过滤而去除不溶的晶体。从生物检定板的各孔倾析掉培养基。然后马上将2000微升经过滤的MTT溶液加至所有的测试孔中，但2个未处理的空白测试孔除外。这2个空白孔接受200微升处理培养基。培养板再返回培养箱约3小时。在温育后，倾析掉含MTT的培养基。将过量的培养基加至每个孔中，在室温下振动培养板约2小时。用MolecularDevices(MenloPark.CA)VMax板读数仪测定每个孔在550纳米的吸光度(OD550)。计算溶剂对照孔、各测试物稀释液孔以及各空白孔和阳性对照孔的平均OD550。从溶剂对照孔和测试物孔的平均OD550值中分别减去空白孔的平均OD550，从而得到相应的平均OD550。剂量反应曲线被制成半对数图，其中纵坐标为％对照(线性)，而横坐标为测试物浓度(对数)。从各测试物的曲线内插得出EC50。对于以甲醇给予的测试物，制作各自的反应曲线以便对甲醇数据进行校正。阿霉素被用作阳性对照。在所有的例子中，它比任何测试物的毒性高1或2个对数单位。阿霉素是目前使用的较强的药物中的一种，而且它的副作用也很大。其他相当有效的化疗剂的峰血浆浓度可以比阿霉素的浓度高10-50倍。EC50是一半细胞被杀灭时的浓度。表1</tables>*氯苯胺灵(chloroprofam)和草甘膦的混合物。在正常的健康细胞中，获得下列数据表2</tables>*氯苯胺灵和草甘膦的混合物。这些试验表明，这些组合物在杀灭肿瘤细胞方面是有效的，而且并不明显影响健康细胞。据信，许多内吸性除草剂，单独地或与其他除草剂和杀真菌剂组合时，会表现出这种有用的抗肿瘤效应。(1)膦酰甘氨酸与(2)N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物的混合物对病毒也是有效的，其中包括鼻病毒、HIV、疱疹病毒和流感病毒。权利要求1.一种治疗病毒感染和抑制肿瘤或癌症生长的药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的混合物，该混合物含有(1)下式N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物，以及这些化合物的药学上可接受的盐其中n为1-3，X为氧或硫，而R选自氢、低级烷基或低级链烯基、环己基、和8个碳原子之内的苯烷基；与(2)下式膦酰甘氨酸，以及这些化合物的某些盐，这些盐选自原子序数在30以内的I和II族金属、盐酸盐、乙酸盐、水杨酸盐、吡啶、铵、低级脂烃胺、低级烷醇胺和苯胺，其中X选自羟基、12个碳原子以内的烷氧基或氯氧基，低级链烯氧基，环己氧基，吗啉代，吡咯烷基，哌啶子基和NHR＇；Y和Z各自独立地选自氢和低级烷基；R选自氢、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、硝基苯甲酰基和氯代苯甲酰基；R＇选自氢、低级烷基和低级链烯基、环己基、8个碳原子以内的苯烷基、苯基，氯代苯基和茴香基。2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，含有药学上可接受的载体，以及安全有效量的膦酰甘氨酸衍生物及N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物。3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，该药学上可接受的酸加成盐选自盐酸盐、乙酸盐、水杨酸盐、及其混合物。4.一种治疗温血哺乳动物的癌症的方法，其特征在于，包括施用安全有效量的权利要求1、2或3所述的药物组合物。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，将2-400毫克/千克体重的该混合物，通过口服给药、肠道给药、静脉内给药、肠胃外给药或者注射在肿瘤部位中或其周围而施用。6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，该混合物以固体剂型施用，而且该固体剂型含有选自下组的载体乳糖、蔗糖、明胶和琼脂。7.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，该混合物以液体剂型施用，而且该液体剂型选自水溶液、乳剂、悬浮剂、和从非泡腾制剂和泡腾制剂再生的溶液和悬浮液。8.一种治疗癌症、肿瘤和病毒感染的单位剂型组合物，其特征在于，它含有安全有效量的权利要求1、2或3所述的药物组合物。9.如权利要求8所述的单位剂型组合物，其特征在于，该甲氨酸化合物是氯苯胺灵。10.一种在温血哺乳动物中治疗病毒感染的方法，其特征在于，包括施用安全有效量的权利要求1、2或3所述的药物组合物。11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，将该混合物，通过口服给药、肠道给药、静脉内给药、肠胃外给药或者注射在肿瘤部位中或其周围而施用。全文摘要本发明涉及在哺乳动物,特别是人和温血动物中,抑制癌症和肿瘤生长的药物组合物。该组合物含有10∶1—1∶10的(1)N－氯苯基甲氨酸化合物和N－氯苯基硫代甲氨酸化合物与(2)膦酰甘氨酸衍生物的混合物,这些化合物都是内吸性除草剂。该组合物对治疗病毒感染也有效。文档编号A61K31/66GK1181009SQ96193248公开日1998年5月6日申请日期1996年4月11日优先权日1995年4月12日发明者J·B·卡姆登申请人:普罗克特和甘保尔公司