专利名称：具有抗血管生成活性的新的桦木酸衍生物,该衍生物的制备方法及其在治疗与血管生成 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的桦木酸衍生物和含有桦木酸衍生物的组合物，桦木酸衍生物的制备方法以及使用该衍生物治疗肿瘤和这类增生疾病的方法。本发明还涉及该新的桦木酸衍生物在抑制和/或预防与肿瘤有关血管生成，特别是与前列腺、肺、卵巢和结肠癌有关的血管生成中的应用。
桦木酸及其某些衍生物的抗癌活性已经用皮下植入小鼠肉瘤180细胞的裸鼠(JP 87,301,580)，其体外抑制p388淋巴细胞白血病细胞的生长(Choi.Y-H等，Planta Medica Vol.XLVII，511-513，1988)，以及抑制癌细胞的生长、特别是通过抑制鸟氨酸脱羧酶发生作用(Yasukawa，K等，Oncology 48WO 95/04526)等得以证明。
最近，本申请人报道了桦木酸及其衍生物的抗白血病和抗淋巴瘤活性以及抗前列腺癌、抗肺癌和抗卵巢癌活性，其ED50值小于4.0μg/ml。(1998年3月18日提交的美国申请09/040,856和1999年2月17日提交的美国申请09/251,309)。
此外，最近本申请人在其1998年10月6日提交的美国申请09/166,809中报道了桦木酸及其衍生物的抗血管生成活性，其中桦木酸及其衍生物显示抑制内皮细胞在Matrigel涂覆的表面上生长时形成管样结构(TLS)。内皮细胞抗增殖活性以及抗-TLS活性暗示了桦木酸衍生物的抗血管生成活性。
Anderson等(WO 95/04526)曾提到，对于某些扩散至患者全身的癌症，必然会发生称作转移，细胞-细胞粘连的过程。特别是，癌细胞一定从其原发部位移行并进入血管以便于其远距离转移。已知某些癌细胞通过其细胞表面的E-选择蛋白配体与E-选择蛋白粘附，并且这是转移过程的一个组成部分。桦木酸及其衍生物干扰选择蛋白的结合。桦木酸抑制P-选择蛋白与2，3，sLex(与P-选择蛋白结合的已知化合物)结合，其IC50值为125μM。它还以剂量依赖的方式抑制P-选择蛋白与HL-60细胞结合，其IC50值为0.75mM。桦木酸及其衍生物还明显干扰结肠癌细胞LS174T与E-选择蛋白结合。
Dasgupta等(WO 96/29068)公开了用活性化合物桦木酸抑制肿瘤生长的方法和组合物。该发明提供了用天然产物衍生的化合物抑制肿瘤生长、尤其是抑制黑素瘤生长的方法和组合物。本发明还提供了用桦木酸预防癌细胞生长和蔓延的治疗方法，其中桦木酸以局部制剂形式使用。
Pezzuto等(美国专利5,869,535)公开了用桦木酸或其衍生物探查抑制肿瘤生长的方法和组合物。桦木酸已经从Ziziphus mauritiana的干部树皮中分离出来，通过选择性细胞毒性方式抗人癌细胞系中的黑素瘤，根据生物活性的特征、使用培养的人黑素瘤细胞(MEL-2)作为探测器分段进行生物测定，并且已经得到作为活性化合物的桦木酸。所得桦木酸可用于抑制肿瘤生长，或者可以转化为衍生物以预防或抑制肿瘤生长。该发明还提供了用桦木酸预防癌细胞生长或蔓延的治疗方法，其中桦木酸或其衍生物以局部制剂的形式使用。已发现，桦木酸体外抑制MEL-2细胞的生长。但是，桦木酸不影响所试验的其他细胞系[A431(鳞状细胞)，BC-1(乳腺)，COL-2(结肠)，HT1080(肉瘤)，KB(人口腔表皮样癌)，LNCaP(前列腺)，LU-1(肺)，U373(神经胶质瘤)和ZR-75-1(乳腺)](即ED50值大于20μg/ml)。
Lee等(WO 96/39033)公开了桦木酸和二氢桦木酸酰基衍生物具有有效的抗-HIV活性。已经对其C3-羟基，C17-羧酸和C20-外亚甲基进行了修饰。抗-HIV分析显示了桦木酸和二氢桦木酸衍生物在急性感染H9淋巴细胞中的有效抗-HIV活性，其EC50值分别小于1.7×10-5μM。
发明目的本发明提供了通过施用药物有效剂量的桦木酸衍生物治疗血管生成的方法。本发明还提供了新的桦木酸衍生物以及含有这些衍生物和可药用添加剂、稀释剂、载体和赋形剂的组合物，组合物中含有或者不含桦木酸。
本发明的另一目的是提供用于抑制血管生成的新的桦木酸衍生物。
本发明的另一目的是提供用天然产物衍生的化合物及其衍生物治疗、抑制和/或预防血管生成的化合物和组合物。
本发明的另一目的是提供用桦木酸衍生物抑制血管生成的治疗方法，其中该衍生物全身给药。
本发明的再一目的是通过使用天然产物衍生的化合物、例如桦木酸或其衍生物，克服与常规抗血管生成化疗剂有关的高毒性问题。
本发明的又一目的是通过使用易于获得的半合成的桦木酸衍生物，克服与合成抗血管生成抗癌药不足的问题。
本发明的另一目的是通过使用易得的天然产物衍生的化合物、例如桦木酸及其衍生物，克服合成抗血管生成剂高成本的问题，预期桦木酸及其衍生物比其他化疗药便宜。
本发明的这些和其他目的通过下面的发明描述将变得清晰可见，下面的描述不是旨在限制本发明的精神和范围，而仅仅是对本发明优选具体实施方案的说明。
发明详述本发明提供了适用于预防/抑制血管生成的药物组合物。桦木酸衍生物抑制内皮细胞增殖并具有高的内皮细胞特异性，因此专一地指向内皮细胞。该衍生物还抑制内皮细胞在Matrigel涂覆的表面上生长时形成管样结构(TLS)。内皮细胞抗增殖活性以及抗-TLS活性非常强烈地暗示了桦木酸衍生物的抗血管生成活性。
该方法包括施用治疗有效量的桦木酸衍生物，可以是仅仅为桦木酸衍生物，也可以是含有该衍生物的药物组合物，以杀死、抑制或预防与肿瘤有关内皮细胞的增殖。在优选的实施方案中，可以将可药用载体、稀释剂、赋形剂和/或溶剂与桦木酸/或其衍生物一起使用。本发明的治疗方法尤其适用于抑制血管生成。
新的桦木酸衍生物具有如下面式1所示的桦木酸的基本结构。 其中R、R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7独立地或组合表示下列基团R是H；R1是H、Br、Cl、F或I；R2是H并且R3是OH、OCO(CH2)nCH3(其中n＝0-14)、OCOC(CH3)3、OCO(CH2)nX(其中n＝1-7，X＝H、Cl、Br、F)、OCOCH2C6HnX[n＝2-4，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]、OSO2(CH2)nX(其中n＝1-7，X＝H或Cl)、OSO2ONH2、OCOC6HnX[n＝0-4，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、OH、OCH3、OC2H5、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]、NH2、NH(CH2)nOR[(n＝2-4)，R＝H或COCH3]、NHR、N(R)2[其中R＝CH3、C2H5、C3H7、C4H9]、NHC6HnX、NHCH2C6HnX(其中n＝2-4)、NHCH2C10HnX(n＝2-7)[X＝H、Cl、Br、F、I、CHCl2、CN、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、RCH2NOH(R＝H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9)、NHOR(R＝H、COCH3、COC6HnX、OCH2C6HnX、OC6HnX)[n＝2-4，X＝Cl、Br、F、I、CF3、CHCl2、CN、NO2、CH3、NH2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1 to 7)]、N＝CHC6HnX(其中n＝2-4)、N＝CHC10HnX(n＝2-6)[X＝H、Cl、Br、F、I、CF3、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-3)]、OCO(CH2)nNH2(n＝1-8)、NHCO(CH2)nX(X＝H、Cl或Br、n＝1-4)、NHCOC6HnX、NHCOC10HnX(n＝2-6)、NHCOCH2C6HnX(n＝2-4)、NHCOCH2C10HnX(n＝2-6)[X＝Cl、Br、F、I、CF3、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]、NHCOC6H4COOH、NHCOC6Hn(COOH)X[其中n＝2或3，X＝H、Cl、Br、F、NO2或NH2)、OCOC6H4COOH、OCOC6Hn(COOH)X(其中n＝2或3，X＝H、Cl、Br、F、NO2或NH2)、OCOCHRR1(R＝H、CH3或Ph；R1＝OH、Cl、Br或OCOCH3)、NHNHC6HnX(n＝2-4)、NHNHCH(OH)C6HnX(n＝2-4)、NHNHC10HnX(n＝2-6)、NHNHCH(OH)C10HnX(n＝2-6)[X＝Cl、Br、F、I、OH、OCH3、OC2H5、NO2、NH2、CHCl2、CF3或CnH2n+1(n＝1-7)]、OCOCH＝C(R)2(R是H、CH3或C2H5)、O-CO-CH＝CH-COOH、O-CO-C(Br)＝CHCOOH、OCOCH2C(R)2COOH(R＝H或CH3)、OCO(CH2)nCOOH(n＝0-3)、 [R＝NH2、NHC6HnX(n＝2-4)、NHC10HnX(n＝2-6)、NHCO(CH2)nX(n＝1-16)[X＝H、Cl、F、Br]、NHCOC6HnX、NHCOCH2C6HnX(n＝2-4)、NHCOC10HnX(n＝2-6)、N＝CHC6HnX(n＝2-4)、N＝CHC10HnX(n＝2-6)、NHCH2C6HnX(n＝2-4)、NHCH2C10HnX(n＝2-6)[X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)、NHSO2(CH2)nX(n＝1-7)、NHSO2C6HnX(n＝2-4)[X＝H、Cl、Br、F、CH3、NO2或NH2]，R2与R3一起为O、NNHC6HnX、NNHCOC6HnX(n＝2-4)、NNHC10HnX(n＝2-6)、NNHCOC10HnX(n＝2-6)、NC6HnX(n＝2-4)、NC10HnX(n＝2-6)[X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、NNHC6HnBrX[(n＝2或3)，X＝F、Cl、NO2、NH2、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)]、NOSO3H、N-OX、NHOX[X是H、CH3、C2H5、COCH3、SO2C6H4CH3、COC6HnX、C6HnX、CH2C6HnX[(n＝2-4)，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)、CF3或CHCl2]、NNHR[R是CH3、C2H5、C2H4OY，Y＝H、烷基、苯基、苄基或其具有Cl、Br、F、I、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)的取代衍生物]，R7是O并且R4是H、OH、Cl、N3、NH2、OR(R＝CH3、C2H5、C3H7、C4H9)、O(CH2)nCOY(n＝1-3)[Y＝OH、OCH3、OC2H5、Cl、CN、N3、NH2]、OCH2CH2OY[Y＝H、CH3、C2H5、COCH3]、OCOCH＝C(R)2(R＝H、CH3或C2H5)、OCO(CH2)nX(n＝1-16)、(X＝H、Cl、F或Br)、OCOC6HnX(n＝0-4)、OCOCH2C6HnX(n＝2-4)[X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、NH(CH2)nCH3(n＝0-9)、NH(CH2)nCOOH(n＝1-8)、OCH2CHO、OCH2CH＝NOX、OCH2CH2NHOX[X＝H、CH3、SO2C6H4CH3、OCOCH3、OCOC6H5、苯基或苄基取代的衍生物]、OCH2CH＝NNHC6HnX、OCH2CH2NHNHC6HnX(n＝2-4)、OCH2CH＝NNHC10HnX(n＝2-6)、OCH2CH2CH2NHNHC10HnX[X＝H、Cl、Br、F、I、CN、CF3、CHCl2、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1)(n＝1-7)]、OCH2CH2N(R)2(R＝H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、C6H5、C6H5CH2或其取代衍生物例如Cl、Br、CN、F、I、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]，R4是H并且R7是NOH、NHOR、N-OR[R是H、CH3、C2H5、SO2C6H4CH3、COCH3、CH2C6HnX、COC6HnX(n＝2-4)，X＝Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CF3、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]、RCH2NOH(R＝H、CH3或C2H5)、NH2、NHSO2(CH2)nX(n＝1-7)、NHSO2C6HnX(n＝2-5)[X＝H、Cl、Br、CH3、NO2或NH2]、(NR)2(R是H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、苯基或苄基或其取代衍生物)、N＝CHC6HnX、NHCH2C6HnX(n＝2-4)、N＝CHC10HnX、NHCH2C10HnX[(n＝2-6)，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、NNHC6HnX、NHNHC6HnX、NHNHCH(OH)C6HnX、NNHCOC6HnX(n＝2-4)、NNHC10HnX、NNHCOC10HnX、NHNHC10HnX、NHNHCH(OH)C10HnX[其中n＝2-6，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)]、NHCOR[R是CH3、CH2Cl、CHCl2、CCl3、C2H5、C2H4Cl、C3H7、C3H6OH、C3H6Cl、C6H5、C6HnX、CH2C6HnX、COCH2C6HnX(n＝2-4)、C10HnX、CH2C10HnX、COCH2C10HnX(n＝2-6)、X＝Cl、Br、CN、F、I、NO2、NH2、CF3、OH、OCH3、OC2H5、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]，R5是H或Br，R6是CH3、CH2Br、CH2OR[R是CO(CH2)nX、(n＝1-7；X＝H、Cl、Br或F)、CHO、CHNOY、CH2NHOY[Y＝H、CH3、C2H5、SO2C6H5、SO2C6H4CH3、CH2C6HnX、C6HnX(n＝2-4)，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)]、RCH2NOH[其中R是H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9]、CH2NH2、CH2NHR或CH2N(R)2[R是CH3、C2H5、C3H7、C4H9、C6H5、C6HnX或CH2C6HnX、COCH2C6HnX(n＝2-4)、CH2C10HnX、COCH2C10HnX(n＝2-6)[X＝H、Cl、Br、F、CN、I、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CF3、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]、COOH、COCl、CONHR(R是烷基或芳基取代的基团)、CO-OCOR(R是烷基或芳基取代的基团)、COCH2COR(R是OH、OCH3、OC2H5、NH2或Cl)、COCH2CH2OR[R是H、CO(CH2)nX(n＝1-16)、COC6HnX、COCH2C6HnX(n＝2-4，X＝H、Cl、Br、CN、F、I、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、COO(CH2)nH(n＝1-5)、COO(CH2)nCOY(n＝1-5、Y＝OH、OCH3、OC2H5、Cl或Br)、CH＝NC6HnX(n＝2-4)、CH＝NC10HnX(n＝2-6)、CH＝NNHC6HnX、CH＝NNHCOC6HnX(n＝2-4)、CH＝NNHC10HnX、CH＝NNHCOC10HnX(n＝2-6)、CH2NHNHC6HnX(n＝2-4)、CH2NHNHC10HnX(n＝2-6)、CH2NHNHCH(OH)C6HnX(n＝2-4)、CH2NHNHCH(OH)C10HnX(n＝2-6)[其中X＝H、Cl、Br、F、I、CN、CF3、NO2、NH2、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、R5和R6一起为O、OH、O(CH2)nX(n＝1-6，X＝H、Cl或Br)、OCOC6HnX、OCOCH2C6HnX[n＝2-5，X＝Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、O(CH2)nCOOH(n＝1-3)、NOR、NHOR(R＝H、CH3、C2H5、C3H7、COCH3、COC6H5、苯基或苄基取代的衍生物)、NH2、(NR)2(R＝H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、C6HnX、CH2C6HnX；n＝2-5、X＝Cl、Br、F、I、CF3、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)]、NHCO(CH2)nX[n＝1-16，X＝Cl或Br]、NHCOC6HnX、NHCOCH2C6HnX(n＝2-4)、NHCOC10HnX、NHCOCH2C10HnX(n＝2-6)(X＝Cl、Br、F、I、CN、CF3、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)]、N＝CHC6HnX(n＝2-4)、N＝CHC10HnX(n＝2-6)、NHCH2C6HnX(n＝2-5)、NHCH2C10HnX(n＝2-6)、NNHC6HnX、NC6HnX、NHC6HnX(n＝2-4)、NC10HnX、NHC10HnX、NNHC10HnX(n＝2-6)、NNHCOC6HnX(n＝2-4)、NNHCOC10HnX(n＝2-6)、NR[R＝C6HnX(n＝2-5)、C10HnX(n＝2-7)[X＝H、Cl、Br、Cl、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OCH3、OC2H5、OH或CnH2n+1(n＝1-7)]。桦木酸衍生物的制备下列方法单独或者组合使用以制备本发明的衍生物。
方法II如方法1所述，用合适的酰氯处理在卤代有机溶剂中的底物。该反应如方法I所述进行后处理，得到相应的纯的3-o-酰基衍生物。可以使用的酰氯的实例是RCH2(CH2)n、COCI，(其中R＝H、Cl或F、Br，并且n＝0-9)或RCH2(CH)nXCOCI(其中R＝H，X＝OH、OCOCH3并且n＝1)。卤代溶剂可以选自CCl4、CH2Cl2或C6H5CH3等。实施例2制备3-氧代衍生物在正常的反应条件下，将底物溶解在有机溶剂中，并加入常规的氧化剂。该反应如方法I所述进行后处理，得到相应的纯的3-氧代衍生物。
可以使用的氧化剂的实例是CrO3/Py、CrO3/H2SO4或CrO3/AcOH等。正常的反应条件是在0℃至室温搅拌底物与氧化剂数小时。有机溶剂可以选自丙酮、CH2Cl2、AcOH或其混合物等。
桦木酸的3-氧代-衍生物、二氢桦木酸或其衍生物可用于实施例4、5、8、10和14的方法。
将苯肼或其苯基取代的类似物或其盐和乙酸钠加入溶解在醇溶剂例如甲醇、乙醇和丙醇等中的3-氧代衍生物中，并使其回流约4小时。该反应如实施例2方法I所述进行后处理，得到相应的纯的苯腙衍生物。
可以使用的卤代溶剂的实例是CCl4、CH2Cl2和CHCl3等。
将底物溶解在卤代溶剂中，并在5-10℃向其中缓缓加入甲磺酰氯。在室温搅拌该混合物2-4小时。通过用水洗涤有机层对反应混合物进行后处理。有机层用无水硫酸盐干燥、过滤、蒸发至干得到残余物，残余物从乙腈中结晶，得到纯的3-o-甲磺酸基衍生物。
向96孔组织培养板(Nunc，Denmark)的各孔中加入30μl ECV304细胞悬浮液(50×104细胞/ml，在含有10％FBS的RPMI 1640中)，然后加入150μl的培养基，并培养(37℃，5％CO2)过夜。然后加入浓度为0.5ug/ml-4ug/ml的20μl试验用桦木酸衍生物。每一浓度一式三份涂板。向对照孔中仅加入20μl培养基。培养72小时后，进行MTT分析(Mosmann，1983)，并计算出所处理细胞的增殖相对于对照细胞的抑制百分数。
对肿瘤细胞的细胞毒性分析在我们1998年3月18日提交的09/040,856号申请中已有详细描述。表I示出了对ECV304和四种不同肿瘤细胞系的ED50值和17种有效衍生物的内皮细胞特异性。
表I
ED50＝引起50％细胞毒性的药物浓度(μg/ml)，其中细胞毒性％＝[1-O.D.处理的/O.D.对照的]*100ECS比率＝ED50肿瘤细胞生长/ED50内皮细胞生长。
ECS小于10＝低ECSECS在10-20＝中等ECSECS大于20＝高ECS我们预测′高′和′中等′ECS化合物专一地指向内皮细胞，并且可以分在有效的抗血管生成化合物组，而′低′ECS化合物将补充其已经报道的对肿瘤细胞的细胞毒活性。
表III
实施例19如下制备合适的桦木酸衍生物制剂。将该衍生物溶解在最小体积的甲醇中。该衍生物还可以溶解在异丙醇、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或任何其他适宜的溶剂中。将取代的β-环糊精例如2-羟基丙基β-环糊精、磺基丁基醚β-环糊精以约50-1000mg/ml、优选250-750mg/ml的浓度分别溶解在水中。将该溶解的桦木酸衍生物以小等分试样加入衍生的β-环糊精溶液中，并在低温下进行声处理直至得到澄清的溶液。通过旋转蒸发除去有机溶剂，并将最终的溶液过滤，得到无菌产物。将所得溶液冻干。
全身给药是指口服、直肠、鼻、透皮和非肠道(即肌内、腹膜内、皮下或静脉内)给药。按照良好的临床惯例，优选以产生抗血管生成作用、而不引起不适当的有害副作用的剂量施用该组合物。该组合物可以单独或者以与其他治疗剂的混合物形式给药。
每单位剂量提供约10mg至1000mg组成的药物组合物优选为按照常规方法得到的片剂、锭剂、胶囊、粉剂、水悬浮液或油悬浮液、糖浆、酏剂、植入物或水溶液。当然，所用药物组合物的性质取决于所需的给药途径。组合物的人用剂量为1.0-200mg/kg/天，优选为1.0-50mg/kg/天。
本发明的一个具体实施方案涉及通过对患者施用药物有效剂量的所述桦木酸衍生物或其组合，用新的桦木酸衍生物或其组合治疗与血管生成有关的肿瘤患者的方法。本发明的患者可以是人、哺乳动物或其他动物。桦木酸衍生物对人脐静脉内皮细胞的ED50值是0.35-4.0μg/ml。桦木酸衍生物对前列腺癌的内皮细胞特异性是1.04-21.1。而桦木酸衍生物对肺癌的内皮细胞特异性是0.43至＞10。然而，桦木酸衍生物对卵巢癌的内皮细胞特异性是0.54-7.0。桦木酸衍生物对结肠癌的内皮细胞特异性是0.87-14.3。
桦木酸衍生物以在可药用添加剂、载体、稀释剂、溶剂、填料、润滑剂、赋形剂、粘合剂或稳定剂中的形式给药。优选地，该桦木酸衍生物以片剂、锭剂、胶囊、粉剂、水悬浮液或油悬浮液、糖浆、酏剂、植入物或水溶液的形式给药，并且该桦木酸衍生物或其组合对患者全身给药。
权利要求
1. 其中R、R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7独立地或组合表示下列基团R是H；R1是H、Br、Cl、F或I；R2是H并且R3是OH、OCO(CH2)nCH3(其中n＝0-14)、OCOC(CH3)3、OCO(CH2)nX(其中n＝1-7，X＝H、Cl、Br、F)、OCOCH2C6HnX[n＝2-4，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]、OSO2(CH2)nX(其中n＝1-7，X＝H或Cl)、OSO2ONH2、OCOC6HnX[n＝0-4，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、OH、OCH3、OC2H5、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]、NH2、NH(CH2)nOR[(n＝2-4)，R＝H或COCH3]、NHR、N(R)2[其中R＝CH3、C2H5、C3H7、C4H9]、NHC6HnX、NHCH2C6HnX(其中n＝2-4)、NHCH2C10HnX(n＝2-7)[X＝H、Cl、Br、F、I、CHCl2、CN、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、RCH2NOH(R＝H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9)、NHOR(R＝H、COCH3、COC6HnX、OCH2C6HnX、OC6HnX)[n＝2-4，X＝Cl、Br、F、I、CF3、CHCl2、CN、NO2、CH3、NH2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1 to 7)]、N＝CHC6HnX(其中n＝2-4)、N＝CHC10HnX(n＝2-6)[X＝H、Cl、Br、F、I、CF3、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-3)]、OCO(CH2)nNH2(n＝1-8)、NHCO(CH2)nX(X＝H、Cl或Br、n＝1-4)、NHCOC6HnX、NHCOC10HnX(n＝2-6)、NHCOCH2C6HnX(n＝2-4)、NHCOCH2C10HnX(n＝2-6)[X＝Cl、Br、F、I、CF3、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]、NHCOC6H4COOH、NHCOC6Hn(COOH)X[其中n＝2或3，X＝H、Cl、Br、F、NO2或NH2)、OCOC6H4COOH、OCOC6Hn(COOH)X(其中n＝2或3，X＝H、Cl、Br、F、NO2或NH2)、OCOCHRR1(R＝H、CH3或Ph；R1＝OH、Cl、Br或OCOCH3)、NHNHC6HnX(n＝2-4)、NHNHCH(OH)C6HnX(n＝2-4)、NHNHC10HnX(n＝2-6)、NHNHCH(OH)C10HnX(n＝2-6)[X＝Cl、Br、F、I、OH、OCH3、OC2H5、NO2、NH2、CHCl2、CF3或CnH2n+1(n＝1-7)]、OCOCH＝C(R)2(R是H、CH3或C2H5)、O-CO-CH＝CH-COOH、O-CO-C(Br)＝CHCOOH、OCOCH2C(R)2COOH(R＝H或CH3)、OCO(CH2)nCOOH(n＝0-3)、 [R＝NH2、NHC6HnX(n＝2-4)、NHC10HnX(n＝2-6)、NHCO(CH2)nX(n＝1-16)[X＝H、Cl、F、Br]、NHCOC6HnX、NHCOCH2C6HnX(n＝2-4)、NHCOC10HnX(n＝2-6)、N＝CHC6HnX(n＝2-4)、N＝CHC10HnX(n＝2-6)、NHCH2C6HnX(n＝2-4)、NHCH2C10HnX(n＝2-6)[X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)、NHSO2(CH2)nX(n＝1-7)、NHSO2C6HnX(n＝2-4)[X＝H、Cl、Br、F、CH3、NO2或NH2]，R2与R3一起为0、NNHC6HnX、NNHCOC6HnX(n＝2-4)、NNHC10HnX(n＝2-6)、NNHCOC10HnX(n＝2-6)、NC6HnX(n＝2-4)、NC10HnX(n＝2-6)[X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、NNHC6HnBrX[(n＝2或3)，X＝F、Cl、NO2、NH2、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)]、NOSO3H、N-OX、NHOX[X是H、CH3、C2H5、COCH3、SO2C6H4CH3、COC6HnX、C6HnX、CH2C6HnX[(n＝2-4)，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)、CF3或CHCl2]、NNHR[R是CH3、C2H5、C2H4OY，Y＝H、烷基、苯基、苄基或其具有Cl、Br、F、I、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)的取代衍生物]，R7是O并且R4是H、OH、Cl、N3、NH2、OR(R＝CH3、C2H5、C3H7、C4H9)、O(CH2)nCOY(n＝1-3)[Y＝OH、OCH3、OC2H5、Cl、CN、N3、NH2]、OCH2CH2OY[Y＝H、CH3、C2H5、COCH3]、OCOCH＝C(R)2(R＝H、CH3或C2H5)、OCO(CH2)nX(n＝1-16)、(X＝H、Cl、F或Br)、OCOC6HnX(n＝0-4)、OCOCH2C6HnX(n＝2-4)[X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、NH(CH2)nCH3(n＝0-9)、NH(CH2)nCOOH(n＝1-8)、OCH2CHO、OCH2CH＝NOX、OCH2CH2NHOX[X＝H、CH3、SO2C6H4CH3、OCOCH3、OCOC6H5、苯基或苄基取代的衍生物]、OCH2CH＝NNHC6HnX、OCH2CH2NHNHC6HnX(n＝2-4)、OCH2CH＝NNHC10HnX(n＝2-6)、OCH2CH2CH2NHNHC10HnX[X＝H、Cl、Br、F、I、CN、CF3、CHCl2、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1)(n＝1-7)]、OCH2CH2N(R)2(R＝H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、C6H5、C6H5CH2或其取代衍生物例如Cl、Br、CN、F、I、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]，R4是H并且R7是NOH、NHOR、N-OR[R是H、CH3、C2H5、SO2C6H4CH3、COCH3、CH2C6HnX、COC6HnX(n＝2-4)，X＝Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CF3、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]、RCH2NOH(R＝H、CH3或C2H5)、NH2、NHSO2(CH2)nX(n＝1-7)、NHSO2C6HnX(n＝2-5)[X＝H、Cl、Br、CH3、NO2或NH2]、(NR)2(R是H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、苯基或苄基或其取代衍生物)、N＝CHC6HnX、NHCH2C6HnX(n＝2-4)、N＝CHC10HnX、NHCH2C10HnX[(n＝2-6)，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、NNHC6HnX、NHNHC6HnX、NHNHCH(OH)C6HnX、NNHCOC6HnX(n＝2-4)、NNHC10HnX、NNHCOC10HnX、NHNHC10HnX、NHNHCH(OH)C10HnX[其中n＝2-6，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)]、NHCOR[R是CH3、CH2Cl、CHCl2、CCl3、C2H5、C2H4Cl、C3H7、C3H6OH、C3H6Cl、C6H5、C6HnX、CH2C6HnX、COCH2C6HnX(n＝2-4)、C10HnX、CH2C10HnX、COCH2C10HnX(n＝2-6)、X＝Cl、Br、CN、F、I、NO2、NH2、CF3、OH、OCH3、OC2H5、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]，R5是H或Br，R6是CH3、CH2Br、CH2OR[R是CO(CH2)nX、(n＝1-7；X＝H、Cl、Br或F)、CHO、CHNOY、CH2NHOY[Y＝H、CH3、C2H5、SO2C6H5、SO2C6H4CH3、CH2C6HnX、C6HnX(n＝2-4)，X＝H、Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)]、RCH2NOH[其中R是H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9]、CH2NH2、CH2NHR或CH2N(R)2[R是CH3、C2H5、C3H7、C4H9、C6H5、C6HnX或CH2C6HnX、COCH2C6HnX(n＝2-4)、CH2C10HnX、COCH2C10HnX(n＝2-6)[X＝H、Cl、Br、F、CN、I、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CF3、CHCl2或CnH2n+1(n＝1-7)]、COOH、COCl、CONHR(R是烷基或芳基取代的基团)、CO-OCOR(R是烷基或芳基取代的基团)、COCH2COR(R是OH、OCH3、OC2H5、NH2或Cl)、COCH2CH2OR[R是H、CO(CH2)nX(n＝1-16)、COC6HnX、COCH2C6HnX(n＝2-4，X＝H、Cl、Br、CN、F、I、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7))、COO(CH2)nH(n＝1-5)、COO(CH2)nCOY(n＝1-5、Y＝OH、OCH3、OC2H5、Cl或Br)、CH＝NC6HnX(n＝2-4)、CH＝NC10HnX(n＝2-6)、CH＝NNHC6HnX、CH＝NNHCOC6HnX(n＝2-4)、CH＝NNHC10HnX、CH＝NNHCOC10HnX(n＝2-6)、CH2NHNHC6HnX(n＝2-4)、CH2NHNHC10HnX(n＝2-6)、CH2NHNHCH(OH)C6HnX(n＝2-4)、CH2NHNHCH(OH)C10HnX(n＝2-6)[其中X＝H、Cl、Br、F、I、CN、CF3、NO2、NH2、CHCl2、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]，R5和R6一起为O、OH、O(CH2)nX(n＝1-6，X＝H、Cl或Br)、OCOC6HnX、OCOCH2C6HnX[n＝2-5，X＝Cl、Br、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、OH、OCH3、OC2H5或CnH2n+1(n＝1-7)]、O(CH2)nCOOH(n＝1-3)、NOR、NHOR(R＝H、CH3、C2H5、C3H7、COCH3、COC6H5、苯基或苄基取代的衍生物)、NH2、(NR)2(R＝H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、C6HnX、CH2C6HnX；n＝2-5、X＝Cl、Br、F、I、CF3、CN、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)]、NHCO(CH2)nX[n＝1-16，X＝Cl或Br]、NHCOC6HnX、NHCOCH2C6HnX(n＝2-4)、NHCOC10HnX、NHCOCH2C10HnX(n＝2-6)(X＝Cl、Br、F、I、CN、CF3、NO2、NH2、OH、OCH3、OC2H5、CnH2n+1(n＝1-7)]、N＝CHC6HnX(n＝2-4)、N＝CHC10HnX(n＝2-6)、NHCH2C6HnX(n＝2-5)、NHCH2C10HnX(n＝2-6)、NNHC6HnX、NC6HnX、NHC6HnX(n＝2-4)、NC10HnX、NHC10HnX、NNHC10HnX(n＝2-6)、NNHCOC6HnX(n＝2-4)、NNHCOC10HnX(n＝2-6)、NR[R＝C6HnX(n＝2-5)、C10HnX(n＝2-7)[X＝H、Cl、Br、Cl、F、I、CN、NO2、NH2、CF3、CHCl2、OCH3、OC2H5、OH或CnH2n+1(n＝1-7)]。
2.具有式2的权利要求1的新的桦木酸衍生物 R2＝O、NNHC6H5、NHNHC6H5、NHNHC6H4(CH3) (4)、OCOC6H3F2(3，5)、OCOC6H3F2(2，4)、OCOC6H4(CF3) (3)、OCOC6H4(CF3) (2)、N＝CHC6H3F2(3，4)、OH、OCOC6H4(C5 H11) (4)、OCOCH2C6H3(OCH3)2(2，5)、N＝CHC6H3F2(2，4)、OCOC6H4(C7H15)(4)、OCOC6F5、NOH、OCOC6H3(OCH3)2(3，4)、OCOC6H3(OCH3)2(2，4)、OCOCClF2、OCOC6H4(C6H5) (4)、OCOCH(Cl)C6H5、OCO(CH2)3COOH、OCOC6H4CI(4)、OCOC6H4(CHCl2) (3)，-OCOC6H2(COOH) (2)Cl2(3，6)、OCOCH(Cl)CH3NNHCOC6H4OH(2)或NOCH2C6H4NO2(4)，R3＝H、-CH2CH2COOCH3-COCH＝CH3或3-去氧二氢桦木酸，R4＝CH2CCH3-CH(CH3)2或BrCH2C(Br)CH3。
3.权利要求1的桦木酸的3-O-酰基桦木酸衍生物的制备方法，其中所述方法包括(i)用酸酐或酰氯在室温处理桦木酸或桦木酸衍生物4-16小时；(ii)向步骤(i)的溶液中加入水，和(iii)用有机溶剂萃取，得到有机层，所述3-o-酰基桦木酸衍生物存在于有机层中。
4.权利要求1的桦木酸的3-氧代-衍生物的制备方法，其中所述方法包括将桦木酸或桦木酸衍生物溶解在有机溶剂中，并加入氧化剂得到3-氧代衍生物。
5.权利要求1的2-溴-3-氧代-二氢桦木酸衍生物的制备方法，其中所述方法包括将3-氧代二氢桦木酸或其衍生物溶解在卤代有机溶剂中，在0-10℃加入溶解在卤代有机溶剂中的液溴，并将该混合物加热至室温，得到2-溴-3-氧代衍生物。
6.权利要求1的3-肟基桦木酸衍生物的制备方法，其中所述方法包括向3-氧代桦木酸衍生物中加入醇溶剂，加入羟胺、苯基羟胺、苄基羟胺或其盐和乙酸钠，使该混合物回流，得到3-肟基桦木酸衍生物。
7.权利要求1的3-氧代桦木酸衍生物的苯腙的制备方法，其中所述方法包括将3-氧代-桦木酸衍生物溶解在醇溶剂中，加入苯肼或其苯基取代的类似物或其盐和乙酸钠，使反应混合物回流，得到苯腙衍生物。
8.权利要求1的17-羧基烷基羧酸酯桦木酸衍生物的制备方法，其中所述方法包括将桦木酸或桦木酸衍生物溶解在无水二甲基甲酰胺中，加入氢化钠，在室温搅拌，加入卤代烷基羧基酯，得到17-羧基烷基羧酸酯桦木酸衍生物。
9.权利要求1的桦木酸的17-羧基烷基羧酸的制备方法，其中所述方法包括将桦木酸衍生物的17-羧基烷基羧酸酯溶解在醇溶剂中，加入氢氧化物，将反应混合物加热至40-50℃，保持2-4小时，得到17-羧基烷基羧酸桦木酸衍生物。
10.权利要求1的2，20，29-三溴桦木酸衍生物的制备方法，其中所述方法包括将3-氧代桦木酸或其衍生物溶解在卤代有机溶剂中，加入溶解在有机溶剂中的液溴，保持反应混合物的温度在0-10℃，使反应混合物恢复至室温，得到2，20，29-三溴桦木酸衍生物。
11.权利要求1的20，29-二溴桦木酸衍生物的制备方法，其中所述方法包括将桦木酸或其衍生物溶解在卤代有机溶剂中，前提是该衍生物不是3-氧代桦木酸或其衍生物，加入溶解在有机溶剂中的液溴，保持反应混合物在0-10℃，使反应混合物的温度升至室温，得到20，29-三溴桦木酸衍生物。
12.权利要求1的20-羧基烷基羧酸酯桦木酸的制备方法，其中所述方法包括将桦木酸或其衍生物溶解在无水二甲基甲酰胺中，加入氢化钠，在室温搅拌，加入卤代烷基羧基酯，得到20-羧基烷基羧酸酯桦木酸衍生物。
13.权利要求1的桦木酸的20-羧基烷基羧酸的制备方法，其中所述方法包括将桦木酸衍生物的20-羧基烷基羧酸酯溶解在醇溶剂中，加入氢氧化物，将反应混合物加热至40-50℃，保持2-4小时，得到20-羧基烷基羧酸桦木酸衍生物。
14.权利要求1的桦木酸的3-氨基衍生物的制备方法，其中所述方法包括(a)在氧化铂催化剂存在下、将桦木酸的3-肟基衍生物溶解在冰醋酸中，(b)过滤步骤(a)的混合物，和(c)蒸发步骤(b)的滤液，得到桦木酸的氨基衍生物；a]将桦木酸的3-氧代衍生物溶解在甲醇中，(b)加入硼氢化钠和硫酸铵并回流；和c]将反应混合物蒸发至干并加入水，得到3-氨基衍生物。
15.权利要求1的3-O-苯甲酰基桦木酸衍生物的制备方法，所述方法包括a)将桦木酸或桦木酸衍生物与苯甲酰氯或其苯基取代的衍生物在室温混合6-10小时；b)向步骤(a)的溶液中加入水，和c)用有机溶剂萃取，得到有机层，所述3-O-苯甲酰基桦木酸衍生物存在于有机层中。
16.权利要求1的3-O-甲磺酸基桦木酸衍生物的制备方法，其中所述方法包括a)将桦木酸衍生物溶解在卤代溶剂中；b)在0-10℃，用甲磺酰氯处理步骤(a)的混合物；c)在室温搅拌该混合物2-4小时；d)向步骤(c)的混合物中加入水，并分离有机层；和e)用无水硫酸钠干燥有机层，蒸发并用腈溶剂使残余物结晶，得到纯的3-O-甲磺酸基衍生物。
17.权利要求1的桦木酸的3-苯基肼基或其苯基取代的衍生物的制备方法，其中所述方法包括a]在铂海绵催化剂存在下、在氢气氛(50-70psi)下，将桦木酸的3-苯基腙或其苯基取代的衍生物溶解在冰醋酸中3-5小时；b]将步骤(a)的混合物过滤；和c]蒸发步骤(b)的滤液，并结晶，得到3-苯基肼基桦木酸衍生物。
18.权利要求1的桦木酸的3-N-羟基乙基衍生物的制备方法，其中所述方法包括将3-氧代衍生物溶解在无水醇溶剂例如甲醇/乙醇中，向上述溶液中加入15-20％盐酸的醇溶液和2-氨基乙醇，并在室温搅拌30-60分钟，然后加入氰基硼氢化钠，并在室温进一步搅拌约72小时，最后通过加入水、然后滤出固体进行后处理，得到粗产物，该粗产物从乙醇中结晶，得到纯的3-N-羟基乙基衍生物。
19.权利要求1的桦木酸的3-N-亚苄基衍生物的制备方法，其中所述方法包括将3-氨基衍生物溶解在醇溶剂例如甲醇/乙醇中，并在碱性碳酸盐例如碳酸钠或碳酸钾存在下、向其中加入苯甲醛或取代的苯甲醛衍生物，在室温至约50℃搅拌上述混合物数小时，最后通过真空除去醇并加入水对反应混合物进行后处理，水层或者过滤、或者用卤代有机溶剂萃取，然后蒸发，得到3-N-亚苄基衍生物。
20.用新的桦木酸衍生物或其组合治疗与血管生成有关的肿瘤患者的方法，该方法是对所述患者施用药物有效剂量的所述桦木酸衍生物或其组合。
21.权利要求20的方法，其中所述患者是人、哺乳动物或其他动物。
22.权利要求20的方法，其中桦木酸衍生物对人脐静脉内皮细胞的ED50值为0.35-4.0μg/ml。
23.权利要求20的方法，其中桦木酸衍生物对前列腺癌的内皮细胞特异性是1.04-21.1。
24.权利要求20的方法，其中桦木酸衍生物对肺癌的内皮细胞特异性是0.43至＞10。
25.权利要求20的方法，其中桦木酸衍生物对卵巢癌的内皮细胞特异性是0.54-7.0。
26.权利要求20的方法，其中桦木酸衍生物对结肠癌的内皮细胞特异性是0.87-14.3。
27.权利要求20的方法，其中桦木酸衍生物以在可药用添加剂、载体、稀释剂、溶剂、填料、润滑剂、赋形剂、粘合剂或稳定剂中的形式对患者给药。
28.权利要求20的方法，其中桦木酸衍生物以片剂、锭剂、胶囊、粉剂、水悬浮液或油悬浮液、糖浆、酏剂、植入物或水溶液的形式给药。
29.权利要求20的方法，其中对人的剂量是1.0-200mg/kg/天。
30.权利要求20的方法，其中桦木酸衍生物或其组合对患者全身给药。
全文摘要
本发明涉及具有抗血管生成活性的新的桦木酸衍生物,该衍生物的制备方法及其治疗与血管生成有关肿瘤的应用。
文档编号A61P43/00GK1373769SQ99816940
公开日2002年10月9日 申请日期1999年9月9日 优先权日1999年9月9日
发明者M·杰吉, S·拉曼多斯, P·拉詹德恩, M·J·阿曼德斯迪奎 申请人:达布尔研究基金会