淫羊藿苷plga纳米粒子及制备方法及用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药制药技术领域，特别是涉及一种淫羊藿苷PLGA纳米粒子及制备 方法。
【背景技术】
[0002] 淫羊藿苷是从中药淫羊藿中提取的有效活性成分，是一种黄酮苷类化合物，具有 抗肿瘤，促进骨形成，抗骨质疏松，调节机体免疫等药理学活性。淫羊藿苷为水不溶性药物， 能微溶于乙醇，乙酸乙酯，不溶于醚、苯、氯仿。聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA)是生物相 容性可降解高分子聚合物，常用于包载药物，以保护药物活性、缓慢释放药物延长药物作用 时间，对于难溶性药物，可以提高其分散性。
[0003] PLGA包载药物的纳米粒制备常采用溶剂挥发法，将药物和PLGA溶于沸点较低的 二氯甲烷等有机溶剂，通过挥发除去溶剂，但淫羊藿苷既不溶于水，也不溶于醚、苯、氯仿 等易挥发性有机溶剂，故现有的溶剂挥发法不适用于制备淫羊藿苷PLGA纳米粒。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种纳米粒子粒径分布均匀，90%以 上在100 - 300nm之间的淫羊藿苷PLGA纳米粒子。
[0005]本发明的第二个目的是提供一种简便易行的淫羊藿苷PLGA纳米粒子的制备方 法。
[0006] 本发明的第二个目的是提供一种淫羊藿苷PLGA纳米粒子的用途。
[0007] 本发明的技术方案概述如下：
[0008] 淫羊藿苷PLGA纳米粒子的制备方法，包括如下步骤：
[0009] (1)以二甲基甲酰胺为溶剂配制浓度为0. 005-0. 02g/ml的淫羊藿苷溶液为溶液 1;以二甲基甲酰胺为溶剂配制浓度为0. 01-0. 08g/ml的PLGA溶液为溶液2;
[0010] ⑵在冰浴和超声下，按体积比为1-2:3的比例，将溶液1滴加入溶液2中得溶液 3 ；
[0011] (3)在冰浴和超声下，按体积比为1:4-10的比例将溶液3滴加入浓度为IOg/ L_30g/L的PVA水溶液中，形成PLGA淫羊藿苷0/W乳剂；
[0012] (4)将PLGA淫羊藿苷0/W乳剂置于透析袋中，放入装有水的容器中，在转速 20_50rpm透析 6_10h;
[0013] (5)将透析袋中的液体在4°C离心，收集固化的纳米粒，冷冻干燥即得淫羊藿苷 PLGA纳米粒子，所述PLGA为聚乳酸-羟基乙酸共聚物的缩写，所述PVA为聚乙烯醇的缩写。
[0014] 超声的条件优选为：频率为20HZ，振幅为20% -35%。
[0015] 离心的转速优选为20,OOOrpm，离心的时间为30min。
[0016] 上述方法制备的淫羊藿苷PLGA纳米粒子。
[0017] 上述淫羊藿苷PLGA纳米粒子在制备促进软骨细胞增殖药物的应用。
[0018] 本发明的优点：
[0019] 本方法使用的载药材料PLGA生物相容性好，颗粒小，均匀，溶解性好。本方法制得 的淫羊藿苷PLGA纳米粒相比未包封的药物，在水中的分散性能显著提高，并缓慢释放淫羊 藿苷以延长作用时间。本发明中的制备方法使用的材料简单，方法易操作，重复性好。制备 的纳米粒子粒径分布均勾，粒径在在100 - 300nm之间。
【附图说明】
[0020] 图1本发明的淫羊藿苷PLGA纳米粒子扫描电镜图。
[0021] 图2本发明的淫羊藿苷PLGA纳米粒子的粒径图。
[0022] 图3本发明的淫羊藿苷PLGA纳米粒子的Zeta电位图。
[0023] 图4本发明的淫羊藿苷PLGA纳米粒子的体外累计释放曲线。
[0024] 图5本发明的淫羊藿苷PLGA纳米粒子对软骨细胞增殖影响的实验。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
[0026] 淫羊藿苷购于中国药品生物制品检定所，批号：110737-200415 [00 27] 实施例1
[0028] 淫羊藿苷PLGA纳米粒子的制备方法，包括如下步骤：
[0029] (1)以二甲基甲酰胺为溶剂配制浓度为0.01g/ml的淫羊藿苷溶液为溶液1 ; 以二甲基甲酰胺为溶剂配制浓度为0. 05g/ml的PLGA溶液为溶液2 ;PLGA分子量为 7600-11500Da；
[0030] (2)在冰浴和超声下，按体积比为1. 5:3的比例，将溶液1滴加入溶液2中得溶液 3;所述超声频率为20HZ，振幅为30%，超声时间IOmin,每超声30S间隔5S;
[0031] (3)在冰浴和超声下，按体积比为1:6的比例将溶液3滴加入浓度为10g/L的PVA 水溶液中，形成PLGA淫羊藿苷0/W乳剂；PVA的分子量为30000-70000Da，所述超声频率 20HZ,振幅为30%，超声时间15min，每超声30S间隔5S;
[0032] (4)将PLGA淫羊藿苷0/W乳剂置于透析袋[MD34 (8000-14000D)]中，放入装有水 的容器中，在转速30rpm磁力搅拌，透析8h;
[0033] (5)将透析袋中的液体在4°C，20,OOOrpm下超速离心30min,收集固化的纳米粒， 用蒸馏水洗涤，在4°C，20,OOOrpm下超速离心30min，收集固化的纳米粒，冷冻干燥即得淫 羊藿苷PLGA纳米粒子。所述PLGA为聚乳酸-羟基乙酸共聚物的缩写，所述PVA为聚乙烯 醇的缩写。
[0034] 实施例2
[0035] 淫羊藿苷PLGA纳米粒子的制备方法，包括如下步骤：
[0036] (1)以二甲基甲酰胺为溶剂配制浓度为0.005g/ml的淫羊藿苷溶液为溶液1; 以二甲基甲酰胺为溶剂配制浓度为0.Olg/ml的PLGA溶液为溶液2 ;PLGA分子量为 7600-11500Da；
[0037](2)在冰浴和超声下，按体积比为1:3的比例，将溶液1滴加入溶液2中得溶液3; 所述超声频率为20HZ，振幅为20%，超声时间15min，每超声30S间隔5S;
[0038] (3)在冰浴和超声下，按体积比为1:4的比例将溶液3滴加入浓度为15g/L的PVA 水溶液中，形成PLGA淫羊藿苷0/W乳剂；PVA的分子量为30000-70000Da，所述超声频率 20HZ,振幅为20%，超声时间15min，每超声30S间隔5S;
[0039] (4)将PLGA淫羊藿苷0/W乳剂置于透析袋[MD34 (8000-14000D)]中，放入装有水 的容器中，在转速20rpm磁力搅拌，透析IOh;
[0040] (5)将透析袋中的液体在4°C，20,OOOrpm下超速离心30min,收集固化的纳米粒， 用蒸馏水洗涤，在4°C，20,OOOrpm下超速离心30min，收集固化的纳米粒，冷冻干燥即得淫 羊藿苷PLGA纳米粒子。
[0041] 实施例3
[0042] 淫羊藿苷PLGA纳米粒子的制备方法，包括如下步骤：
[0043] (1)以二甲基甲酰胺为溶剂配制浓度为0.02g/ml的淫羊藿苷溶液为溶液1 ; 以二甲基甲酰胺为溶剂配制浓度为0. 08g/ml的PLGA溶液为溶液2 ;PLGA分子量为 7600-11500Da；
[0044] (2)在冰浴和超声下，按体积比为2:3的比例，将溶液1滴加入溶液2中得溶液3 ; 所述超声频率为20HZ，振幅为35%，超声时间8min，每超声30S间隔5S;
[0045] (3)在冰浴和超声下，按体积比为1:10的比例将溶液3滴加入浓度为30g/L的 PVA水溶液中，形成PLGA淫羊藿苷0/W乳剂；PVA的分子量为30000-70000Da所述超声频 率20HZ,振幅为35%，超声时间lOmin，每超声30S间隔5S;
[0046] (4)将PLGA淫羊藿苷0/W乳剂置于透析袋[MD34 (8000-14000D)]中，放入装有水 的容器中，在转速50rpm磁力搅拌，透析6h;
[0047] (5)将透析袋中的液体在4°C，20,OOOrpm下超速离心30min,收集固化的纳米粒， 用蒸馏水洗涤，在4°C，20,OOOrpm下超速离心30min，收集固化的纳米粒，冷冻干燥即得淫 羊藿苷PLGA纳米粒子。
[0048] 实施例4
[0049] 淫羊藿苷PLGA纳米粒子体外表征：
[0050] (1)粒度分布：取实施例1制备的淫羊藿苷PLGA纳米粒子少许溶于水中，吸取Iml 样品溶液，注入到纳米粒度和Zeta电位分析仪的石英测量池和毛细管小池中，测定样品的 粒径和Zeta电位，见图1、2和图3。
[0051] ⑵稳定性测试：将实施例1制备的淫羊藿苷PLGA纳米粒子少许溶于水中，分别 于〇天，7天，14天，30天取样，测定样品的粒径，多分散体系和Zeta电位，考察纳米粒的长 期稳定性，见表1。
[0052]表1
[0053]
【主权项】
1. 淫羊藿苷PLGA纳米粒子的制备方法，其特征是包括如下步骤： (1) 以二甲基甲酰胺为溶剂配制浓度为0. 005-0. 02g/ml的淫羊藿苷溶液为溶液1 ;以 二甲基甲酰胺为溶剂配制浓度为0. 01-0. 08g/ml的PLGA溶液为溶液2 ; (2) 在冰浴和超声下，按体积比为1-2:3的比例，将溶液1滴加入溶液2中得溶液3 ; (3) 在冰浴和超声下，按体积比为1:4-10的比例将溶液3滴加入浓度为10g/L-30g/L 的PVA水溶液中，形成PLGA淫羊藿苷0/W乳剂； (4) 将PLGA淫羊藿苷0/W乳剂置于透析袋中，放入装有水的容器中，在转速20-50rpm 透析6-1 Oh ; (5) 将透析袋中的液体在4°C离心，收集固化的纳米粒，冷冻干燥即得淫羊藿苷PLGA纳 米粒子，所述PLGA为聚乳酸-羟基乙酸共聚物的缩写，所述PVA为聚乙烯醇的缩写。
2. 根据权利要求1所述的淫羊藿苷PLGA纳米粒子的制备方法，其特征是所述超声的条 件为：频率为20HZ，振幅为20% -35%。
3. 根据权利要求1所述的淫羊藿苷PLGA纳米粒子的制备方法，其特征是所述离心的转 速为20,OOOrpm，离心的时间为30min。
4. 权利要求1的方法制备的淫羊藿苷PLGA纳米粒子。
5. 权利要求2的淫羊藿苷PLGA纳米粒子在制备促进软骨细胞增殖药物的应用。
【专利摘要】本发明公开了淫羊藿苷PLGA纳米粒子及制备方法及用途，制备方法为：以二甲基甲酰胺为溶剂配制淫羊藿苷溶液为溶液1；配制PLGA溶液为溶液2；在冰浴和超声下，将溶液1滴加入溶液2中得溶液3；在冰浴和超声下，将溶液3滴加入PVA水溶液中,形成PLGA淫羊藿苷O/W乳剂；置于透析袋中透析；将透析袋中的液体离心，冷冻干燥即得淫羊藿苷PLGA纳米粒子。本方法制得的淫羊藿苷PLGA纳米粒子相比未包封的药物，在水中的分散性能显著提高，并缓慢释放淫羊藿苷以延长作用时间，粒子粒径分布均匀，90％以上在100‐300纳米之间。本发明的方法使用的材料简单，方法易操作，重复性好。
【IPC分类】A61K31-352, A61P19-08, A61K47-34, A61K9-19, A61P19-10
【公开号】CN104758261
【申请号】CN201510218289
【发明人】孙洪范, 缪丹丹, 张超
【申请人】中国医学科学院生物医学工程研究所
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年4月30日