表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球的制备
[0045] (1)将分别将透明质酸(平均相对分子质量0. 06X IO6) 0. 4g、三聚磷酸钠0. lg、表 皮生长因子0.1 g溶解于1000ml纯化中。
[0046] (2)将壳聚糖(平均相对分子质量0. 08 X 106,脱乙酰度88%) 2g溶解于1000ml纯 化水中。
[0047] (3)将步骤（1)得到的溶液加入到步骤（2)得到的溶液中并用电磁搅拌器不断搅 拌混合，加入速度l〇〇ml/min，加入时间IOmin,搅拌转速：600转/min,搅拌时间30min，得 到含有透明质酸-壳聚糖微球的混悬液。
[0048] (4)将上述步骤（3)中得到的混悬液离心，离心力lOOOOg，离心时间30min ;弃去上 清液，收集沉淀。
[0049] (5)将上述步骤（4)得到的沉淀加入到纯化水中，纯化水的质量为沉淀的20倍，并 用振荡器将其振摇分散。
[0050] (6)将上述步骤（5)得到的混悬液离心，离心力1000 Og,离心时间30min ;弃去上清 液，收集沉淀。
[0051] (7)将沉淀冻干除去水分，得成品。
[0052] 实施例3
[0053] 含有表皮生长因子微球的膜剂制备
[0054] A.取聚乙烯醇(型号2699) 120g加入到1000ml纯化水中溶解，取可溶性淀粉IOg 加入其中并搅拌溶解。将上述溶液加热到70°C~80°C，分别加入甘油20g、吐温10g、二甲 基硅油8g并搅拌，室温放置降温，过滤，加入2g载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微 球，备用。
[0055] B.制备10%聚乙烯醇的水溶液，备用。
[0056] C.制备4%的硝化纤维素醇、醚混合液(醇醚体积比1:1 )，备用。
[0057] D.制备4%胶原蛋白的冰醋酸溶液，备用。
[0058] 将B液均匀涂布于玻璃板上，在40°C条件下真空干燥，然后依次涂布C液、A液、D 液，并在40°C条件下真空干燥，然后分割成小片，即得。
[0059] 实施例4
[0060] 含有表皮生长因子微球的凝胶剂制备
[0061] (1)将卡伯姆(型号940) IOg均匀的撒于900ml蒸馏水面上，静置24h溶解，充分 溶胀。
[0062] (2)将2g载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球分散至上述卡波姆溶液中。
[0063] (3)在上述溶液中滴加三乙醇胺，调至pH值6~7左右，加水至1000ml，搅拌均匀， 分装即可。
[0064] 实施例5
[0065] 含有表皮生长因子微球的粉末剂制备
[0066] 处方：贪冇表皮.1:. 1(；_了.的透明质酸-堯聚糖微球 2 g
[0067] 羧帀基纤维素钠 70 g 克聚糖 23 g 透明质酸 5 g 六计 100 g
[0068] 制备：将羧甲基纤维素钠、壳聚糖以及透明质酸混合均匀，然后加入含有表皮生长 因子微球，混合均匀，灭菌，分装，即得。
[0069] 实施例6
[0070] 含有表皮生长因子微球的软膏剂的制备 Μ?:炎皮1·: K：w γ·的透Iiim酸聚糖微球 2 g 液体心船 5 g
[0071] 处方： 凡I:林 43 g -frii' 50 g
[0072] 制备：取液体石蜡和凡士林加入到研钵中搅拌成糊状，撒入含有表皮生长因子的 透明质酸-壳聚糖微球，搅匀即得。
[0073] 实施例7
[0074] 载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球用于烧烫伤治疗的动物实验
[0075] 采用大鼠深II度烧烫伤模型，观察载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球 (实施例1法制得)对烧烫伤组织的治疗作用。具体内容如下：取Wistar大鼠90只，随机分 为三组，每组30只，即载药微球实验组、空白微球实验组、阳性对照组和阴性对照组。在大 鼠背部涂上硫化钠脱毛剂，数分钟后轻轻刮去，用清水洗净，使背部脱毛面积达8cmX 6cm。 脱毛后24小时，以1. 8%戊巴比妥钠按36mg/kg麻醉大鼠。仰卧位将大鼠固定于造模木板 上，使大鼠的背部皮肤暴露于模板孔内，将模板置人电热恒温水浴锅内80°C烫12秒，造成 深II度烫伤。（取阴性对照组大鼠1只，于烫伤后48小时作病理学检查，结果表明烫伤局部 表皮消失，表皮、真皮及皮下组织血管扩张，皮下组织水肿，真皮、皮下组织中可见急慢性炎 细胞浸润，符合大鼠深II度烫伤标准)。烫后用纱布轻轻擦干水渍，先用〇. 1 %新洁尔灭液擦 洗，再用0.05%醋酸氯己定消毒创面。对于载药微球实验组大鼠，用载有表皮生长因子的透 明质酸-壳聚糖微球冻干粉末撤在其被烫伤部位，使成均匀一层，每只给药量为150mg ;对 于空白微球实验组大鼠，用不含药的空白透明质酸-壳聚糖微球冻干粉末撤在其被烫伤部 位，使成均匀一层，每只给药量为150mg，其中空白微球的制备方法同实施例1 ;对于阳性对 照组大鼠，将磺胺嘧啶银乳膏用棉棒均匀涂抹于被烫伤部位，每只给药量为250mg ;阴性 对照组不给任何药。单笼饲养。观察指标：①第7天、第14天的创面结痂面积；②脱痂愈合 时间。实验结果进行t检验。
[0076] 表1载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球进行动物实验的烧烫伤创面愈合 情况（/1=30 i7土 )
【主权项】
1. 一种载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球，其特征在于由以下方法制得： (1) 将透明质酸、三聚磷酸钠、表皮生长因子溶解于水中， (2) 将壳聚糖溶解于水中， (3) 将步骤（1)和步骤（2)中得到的溶液进行搅拌混合，得到含有透明质酸-壳聚糖微 球的混悬液， (4) 将上述步骤（3)中得到的混悬液离心，弃去上清液，收集沉淀， (5) 将上述步骤（4)得到的沉淀加入纯化水，振摇分散， (6) 将上述步骤（5)得到的混悬液离心，弃去上清液，收集沉淀， (7) 将沉淀冻干除去水分，得成品。
2. 根据权利要求1所述的载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球，其特征在于： 所述表皮生长因子在微球中的质量百分比为〇. 01%~10%。
3. 根据权利要求1所述的载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球，其特征在于： 所述透明质酸和壳聚糖的质量比例为透明质酸：壳聚糖=1:3~1:9。
4. 根据权利要求1所述的载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球，其特征在于： 所述壳聚糖的脱乙酰度大于70%。
5. 根据权利要求1所述的载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球，其特征在于： 所述壳聚糖的平均相对分子质量小于〇. 2X106。
6. 根据权利要求1所述载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球的制备方法，其特 征在于：所述步骤（1)中的透明质酸浓度为0.lmg/ml~0. 5mg/ml。
7. 根据权利要求1所述载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球的制备方法，其特 征在于：所述步骤（1)中的三聚磷酸钠浓度为0.Olmg/ml~0.lmg/ml。
8. 根据权利要求1所述载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球的制备方法，其特 征在于：所述步骤（2)中壳聚糖的浓度为0? 5mg/ml~3.Omg/ml。
9. 根据权利要求1所述载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球的制备方法，其特 征在于：所述步骤（3)中的两种溶液的混合体积比例为步骤（1)得到的溶液：步骤（2)中得 到的溶液=1:0. 5~1:2。
10. 以载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球为活性成分的药物组合物。
11. 根据权利要求10所述的药物组合物，其特征在于：所述组合物的剂型为凝胶剂、膜 齐U、粉末剂和软膏剂。
12. 根据权利要求10或11所述的药物组合物在制备烧烫伤药物中的应用。
【专利摘要】本发明提供一种环保、简便的载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球制备方法，通过在保护剂作用下离子聚合、离心沉淀、纯化、冻干而得。所述载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球，可用于制备治疗烧烫伤创面的药物制剂（包括凝胶剂、膜剂、粉末剂和软膏剂等）。本发明制备的载有表皮生长因子的透明质酸-壳聚糖微球及其药物制剂，可实现表皮生长因子在烧烫伤创面的持续释放，促进创面细胞增殖，同时也发挥玻璃酸钠和壳聚糖对烧烫伤组织的保护作用及促创伤愈合作用，并为创面增殖细胞提供支架，从而获得一种良好的烧烫伤治疗药物。
【IPC分类】A61K38-18, A61K47-36, A61P17-02, A61K9-16
【公开号】CN104840428
【申请号】CN201410050110
【发明人】凌沛学, 曹心珂, 金艳, 张岱州, 董爱梅, 刘正平, 张新房, 祝美华, 李大伟, 孙利民
【申请人】山东省生物医药科学院, 山东福瑞达医药集团公司
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2014年2月13日