糖的质量比对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响如图4 和5。当脂药比20:1时，包封率达最大值，而载药量随着脂药比的增加而增加，当15:1以后 不再增加。
[0073] GUPL制备方法同实施例4,其中，大豆磷脂和胆固醇的质量比（w/w)分别为10:1、 8:1、5:1、4:1、2:1，观察不同膜材比对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响。
[0074] 不同膜材比对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响如图6和7。当大豆磷脂与 胆固醇的比率为8:1时，包封率和载药量均达到最大值。
[0075] GUPL制备方法同实施例4,其中，旋转蒸发温度分别为25、35、45、55、65°C，观察不 同旋转蒸发温度对甘草多糖脂质体包封率和载药量影响。
[0076] 不同旋转蒸发温度对甘草多糖脂质体包封率和载药量影响如图8和9。当旋转蒸 发温度为45 °C时，包封率和载药量达到最大值。
[0077] GUPL制备方法同实施例4,其中，吐温80和大豆磷脂的质量比（w/w)分别为1: 1、 1: 4、1: 8、1:10、1:16、1:20,观察不同含量的吐温80对甘草多糖脂质体包封率和载药量的 影响。
[0078] 不同含量的吐温80对甘草多糖脂质体包封率和载药量的影响如图10和11。包封 率和载药量随着吐温80量的增加先增加后降低，当吐温80与磷脂比为1:8时，包封率达最 大值，而吐温80与磷脂比为1:16时，载药量达最大值。
[0079] 实施例8
[0080] 在实施例7的基础上，选出对脂质体影响较大的3个因素：脂药比（\)、水浴温度 (X2)和超声时间（X3)。各自变量水平见表1。以脂质体的包封率为响应值，脂药比、水浴温 度和超声时间三个因子为自变量，采用Design-Expert 8. 0软件设计响应面试验见表1。选 用BBD模型，以脂质体的包封率为响应值，做3因素3水平共17个试验点（5个中心点）二 次回归正交组合试验。
[0081] 表1试验各因素与水平
[0082]
[0084] 设该模型通过最小二乘法拟合的二次多项方程为：
[0085] Y = C0+C1X1+C2X2+C 3X3+C12X1x2+C 13X1X3+C23X2X 3+C11X12+C22X 22+C33X32
[0086] 式中：Y为预测响应值，C。为常数项，C p C2、(：3分别为线性系数，C 12、C13、C23为交互 项系数，Cn、C 22、C33为二次项系数。
[0087] 试验设计及结果见表2。
[0088] Y = -266. 57854+10. 92531Χ!+8· 54345Χ2+4· 76856Χ3+0· 020044X32+0· 04641X33+0. 030589Χ2Χ3-0. 29945Χ/-0. 10250Χ/-0. 22568Χ/
[0089] 表2试验设计及结果
[0090]
[0092] 从该模型的方差分析表3可知，本试验所选用的二次多项模型具有高度的显著性 (Ρ m〇del〈0. 0001)，失拟项的P = 0.6123,不显著；模型中的X1X2 (脂药比和水浴温度交互 作用）、X1XJ脂药比和超声时间交互作用）、X2X3 (水浴温度和超声时间交互作用）、X22(水 浴温度和水浴温度的交互作用）的"P"值均小于0.05,说明其对脂质体包封率有显著影响； 相关性R2= 0. 9984,校正决定系数R Adj2= 0. 9964,仅有约I %的脂质体包封率总变异不能 由此模型进行解释。综上表明，此模型拟合度好。
[0093] 表3响应面模型方差分析表
[0094]
[0096] 响应面的3D图和等高线如图12到图14为各因素交互作用的响应面的3D图和等 高线图，分别表示以脂药比、水浴温度和超声时间3个因素其中1个因素取零水平时，其余2 个因素对脂质体包封率的影响。从图12可知，包封率随着脂药比的增大先增大后减小，随 着旋转蒸发温度的升高，先增加后减少，且曲线表现平滑，表明这两个因素的交互作用对包 封率的影响不明显。据图像可知，包封率的最优值应该出现在脂药比介于19:1到25:1，旋 转蒸发温度介于40°C到50°C的范围内。
[0097] 如图13所示，脂药比和超声时间交互作用的相应曲面坡度较大，说明这两个因素 相互作用对包封率影响显著，从等高线图可以看出最大包封率出现在脂药比19:1到25:1， 超声时间在12到18min之间。
[0098] 图14所示，超声时间和旋转蒸发温度交互作用时，坡度较大，说明这两个因素对 包封率的影响较大，从等高线图可以看出最大包封率出现在旋转蒸发温度在40°C到50°C 的范围内，超声时间在14到18min之间。
[0099] 对脂药比、旋转蒸发温度和超声时间3个因素单独作用以及两两交互作用对脂质 体包封率的影响进行研究后，由Design-Expert 8. 0软件对制备条件做进一步优化，得出 最佳制备条件以及根据实际情况作出调整后的组合见表4。根据最佳制备条件组合进行验 证性试验，得到的脂质体包封率为78. 33±0. 25%，与预测值的相对误差仅为1. 0%。
[0100] 表4响应面优化后的最佳制备条件组合
[0101]
[0103] 上述虽然结合附图对本发明的【具体实施方式】进行了描述，但并非对本发明保护范 围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不 需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。
【主权项】
1. 一种甘草多糖脂质体的制备方法，其特征是，包括以下步骤： (1) 取大豆磷脂、胆固醇和吐温80,溶于溶剂中，所述大豆磷脂和胆固醇的质量比为 2:1-10: 1，所述吐温80和大豆磷脂的质量比为1:1-1:20,所述溶剂为氯仿和乙醚的混合溶 液； (2) 将步骤（1)中的混合液导入容器后，加入含甘草多糖的PBS溶液，冰水浴超声形成 W/0型乳剂，所述大豆磷脂与甘草多糖的质量比为5:1-25:1 ; ⑶将步骤⑵得到的乳剂，减压蒸发，形成胶态后加入PBS溶液，继续旋转蒸发，除去 有机溶剂； (4) 将步骤（3)得到的物质，进行超声处理，得到地甘草糖脂质体混悬液； (5) 将步骤（4)得到的混悬液分别挤压过微孔滤膜，得甘草多糖脂质体。2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述步骤（1)中，大豆磷脂与胆固醇的质 量比为8:1。3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述步骤（1)中，吐温80与大豆磷脂的质 量比为1:8。4. 如权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述步骤（2)中，大豆磷脂与甘草多糖的 质量比为20:1。5. 如权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述步骤（3)中，减压蒸发与旋转蒸发的 温度均为45°C。6. 如权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述步骤（4)中，超声时间为15min。7. 如权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述步骤（2)中，大豆磷脂与甘草多糖的 质量比为24. 24:1 ;所述步骤（3)中，旋转蒸发温度为46. 45°C，所述步骤（4)中，超声时间 为 16. Ilmin08. 如权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述步骤（2)中，大豆磷脂与甘草多糖 的质量比为24:1 ;所述步骤（3)中，旋转蒸发温度为46°C，所述步骤（4)中，超声时间为 16min〇9. 如权利要求1-8所述的方法制备的甘草多糖脂质体。10. 权利要求9所述的甘草多糖脂质体在抗肿瘤药物、抗病毒药物、调节免疫系统药 物、抗炎药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种甘草多糖脂质体的制备方法，采用逆向蒸发法，建立的工艺条件为:大豆磷脂和胆固醇的质量比为2:1-10:1，大豆磷脂与甘草多糖的质量比为5:1-25:1，吐温80和大豆磷脂的质量1:1-1:20，水浴温度在25℃-65℃，超声时间在5min-25min。本发明首次将甘草多糖制备成脂质体，通过响应面优化，能够最大可能地节约原材料，同时获得较高的药物包封率(达79.12％)，并且结合超声作用，使制备的脂质体更均一更具有稳定性，其平均粒径为136.4±0.151nm。
【IPC分类】A61P37/04, A61K47/24, A61K9/127, A61K31/715, A61P29/00
【公开号】CN105012239
【申请号】CN201510446828
【发明人】武毅, 李恩涛, 王绍琛, 胡元亮, 刘家国, 王德云, 李友英, 高珍珍, 熊文, 牛亚乐
【申请人】南京农业大学
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年7月27日