活性级分的分级接着是标准方案。开始，将粗提物悬浮在水中，顺 序用己烧、CH 2Cl2、和EtOAc提取，以产生四个不同急性的亚级分。在来自该初始部分的活性 级分上进行的第一次色谱分离是Sephadex LH20色谱法，使用纯甲醇或混合溶剂系统作为 洗脱剂。当情况允许时，通过开管柱快速硅胶或快速反相色谱法、HPLC (正相和/或反相）、 或离心逆流色谱法（在Ito Coil装置上）等进行随后的分级。通过光谱分析，使用ID和 2D NMR技术和质谱法，包括装备有冷冻探针的Bruker AV600NMR光谱仪和NANUC Varian 800MHz NMR光谱仪（埃得蒙顿，亚伯达省，加拿大），完成了新代谢物的结构阐明。使用 以上在实施例1中描述的筛选（ARE-萤光素酶活性和NTD反式激活）测试纯化的化合物的 活性，然后用于在实施例3中描述的二次筛选。
[0224] 实施例3
[0225] 通过应用二次筛选确认化合物。测试纯化的化合物它们抑制以下的能力：雄激素 受体N-末端结构域（AR NTD)的反式激活；其它类固醇受体（特异性）；PSA mRNA的内源性 表达；AR在ARE上的相互作用；N/C相互作用；和前列腺癌细胞响应于雄激素的增殖。
[0226] AR NTD的反式激活
[0227] 在缺乏血清和雄激素的情况下，刺激PKA活性的毛喉素（FSK)和IL-6两者都通 过涉及AR NTD反式激活的机制来增加前列腺癌细胞中的PSA基因表达（Sadar，M. D.，J. Biol. Chem.(生物化学杂志）274,7777-7783(1999);1^(1&，1'.，8^1。11〇￥81^，1，5&(^『，]\1 D.，J. Biol. Chem.(生物化学杂志）277,7076-7085(2002);1^(^，1'.，]\&?^1州· R.，Bruchovsky, N.，Sadar, M. D.，J. Biol. Chem.(生物化学杂志）277, 38087-38094 (2002B); Quayle SN，Mawji NR，Wang J，Sadar M.D·，Proc Natl Acad Sci U S A.(美国国家科学 院院报）2007年1月23日；104 (4) :1331-6.)。通过将人AR NTD的氨基酸1-558克隆到 Gal4DBD的C末端中，测试185-9-2抑制AR NTD的反式激活的能力。将这些嵌合蛋白的表达 载体与报道基因共转染到LNCaP细胞中，所述报道基因含有Gal4-结合位点作为顺式作用 元件（ P5xGal4UAS-TATA-萤光素酶）。将细胞用比卡鲁胺（BIC，ΙΟμΜ)或185-9-2(5ug/ml =12 μ M))预处理，之后加入FSK或IL-6。对照包括比卡鲁胺，其不影响该测定，因为它与 AR的LBD结合，而在GaWDBD-AR 1 558嵌合体中不存在AR的LBD。观察到185-9-2将FSK-诱 导的AR NTD的反式激活和IL-6-诱导的AR NTD的反式激活两者降低至基线水平（图5)。 观察到185-9-2对于AR NTD反式激活的抑制具有~6. 6 μ M的IC5。。
[0228] 类固醇受体特异性
[0229] AR中的氨基酸与相关人类固醇受体PR和糖皮质激素报道基因（GR)的序列相似性 在一些结构域如DBD中是显著的。AR NTD与PR和GR共有小于15%的同源性，但是这些受 体与这些蛋白中的一些（例如SRC-I和CBP)相互作用。因此，使用报道基因测定来确定阻 断AR活性的候选化合物是否对于GR和PR转录活性具有任何影响。将细胞用全长hGR，PR β 和相关报道分子（即，PGR-Luc或PRE-Elb-Luc报道分子）的表达质粒共转染。然后用乙醇 载体、地塞米松（GR)、4_孕烯-3, 20二酮（孕酮）（PR)处理细胞，接着测量萤光素酶活性。 185-9-2抑制AR转录活性，但是不抑制响应于配体的PRE-萤光素酶或GRE-萤光素酶活性 (图6)。与此对比，比卡鲁胺（10 μ M)抑制PR的转录活性。当前在临床上使用的一些抗雄 激素药具有孕酮和糖皮质激素活性。在成年男性中，PR活性的作用是不清楚的。185-9-2 不抑制其它类固醇受体的反式激活。这些研究还提供了证据表明185-9-2对转录或翻译不 具有非特异性和一般的作用，因为它不抑制这些萤光素酶报道分子响应于它们关联配体的 诱导。由于185-9-2阻断可由雄激素和FSK诱导的含有数个ARE的PSA-萤光素酶报道基 因的活性，所以支持它的抑制作用是在转录水平上。这些研究提示，185-9-2是AR特异性 的，暗示与如果使用其它类固醇受体相对比，系统递送应当副作用较小。
[0230] 内源性基因表达
[0231] 在LNCaP细胞中R1881 (配体依赖性）和FSK(非配体依赖性）两者对PSA mRNA 的诱导是依赖于 AR 的（Sadar, M.D.，J. Biol. Chem.(药物化学杂志）274,7777-7783 (1999); Wang G, Jones SJ, Marra MA, Sadar MD, Oncogene (癌基因）2〇〇6;25:7311_23·)。为了测 试化合物是否对于内源性基因表达具有影响，测量在暴露于R1881的LNCaP细胞中PSA mRNA水平。将LNCaP细胞（在无血清和无酚红培养基中）与化合物温育1小时，之后加入 R1881(lnM)另外16小时，之后收获和分离总RNA。使用QPCR测量mRNA水平。将PSA mRNA 水平针对GAPDH mRNA水平正规化。观察到185-9-2将R1881对内源性PSA mRNA的诱导阻 断至几乎基线水平（图7)。
[0232] AR与DNA上ARE的相互作用
[0233] 使用染色质免疫沉淀（ChIP)来评估185-9-2是否防止AR结合至在染色质结构 的生理条件下PSA基因增强子区域中的内源性ARE。AR显示在PSA启动子ARE上的组成 型占据，而增强子ARE具有响应于雄激素的可诱导的占据（Jia L，Coetzee GA. ,Cancer Res.(癌症研究）2005年9月1;65 (17) :8003-8)。AR在这些调节区域上的占据在雄激素 治疗 16 小时时达到顶峰（Jia L，Choong CS，Ricciardelli C，Kim J, Tilley WD, Coetzee GA.,Cancer Res.(癌症研究）2004Apr l;64(7):2619-26;Louie MC,Yang HQ,Ma AH,Xu W, Zou JX, Kung HJ, Chen Hff., Proc Natl Acad Sci U S A.(美国国家科学院院刊）2003年 3月4日；100(5):2226-30;此即0，〇&^〇11几，8『〇￥11]\1，]\1〇10611.(分子细胞）20055印 2 ; 19 (5) : 631-42.)。将LNCaP细胞用DHT加上或减去185-9-2处理短时间（3h)或最佳时 间（16h)，之后与1 %甲醛交联和收获细胞。将细胞裂解，超声处理，并将提取物用于使用 抗-AR抗体的免疫沉淀。185-9-2抑制LNCaP细胞中AR响应于雌激素与PSA增强子上的 ARE相互作用（图8A)。AR与ARE的相互作用的减少不是由于AR蛋白水平降低。来自全裂 解物的AR蛋白的蛋白质印迹分析揭示185-9-2不降低AR蛋白水平（图8B)，所述全裂解物 制备自在这些相同时间点收获的LNCaP细胞。将LNCaP细胞与185-9-2长期温育也不降低 AR蛋白水平（图9)。因此，认为185-9-2不是通过降低AR蛋白水平来抑制AR转录活性。 这提示185-9-2的作用机制相比于其它化合物是独特的，所述其它化合物如AR mRNA锤头 型核酶，AR siRNA，吡喃香豆素，需|丐蛋白酶，异硫氰酸苯乙酯，氟维司群（fulvestrant),前 胡素，LAQ824，和黄芩黄素，它们降低AR蛋白水平并且正在其它实验室中研究。
[0234] 185-9-2不抑制AR的核易位
[0235] 这些抑制剂中任一种可以减少AR反式激活的另一种可能机制可以包括阻止AR蛋 白的核易位。在缺乏雄激素或通过备选途径刺激的情况下，AR主要是在细胞质中。细胞分 级和荧光显微镜检查法（图1〇Α，Β)揭示185-9-2不导致在缺乏雄激素情况下AR它自身的 核易位，也不阻止AR蛋白响应于雄激素（二氢睾酮，DHT)的核易位。
[0236] N/C相互作用
[0237] AR的配体依赖性活性要求氨基（N)和羧基（C)末端之间相互作用以形成逆平 行二聚体（He B，Kemppainen JA，Voegel JJ，Gronemeyer H，Wilson EM.，J Biol Chem. (生物化学杂志）1999, 274 (52) : 37219-25.)。抗雄激素药如比卡鲁胺、氟他胺和醋酸 环丙孕酮不刺激它们自身的这种相互作用，并且每个抑制由雄激素诱导的N/C相互 作用（Wong, C.I·，Zhou, Z.X·，Sar, M·，和 Wilson, E.M. (1993) J. Biol. Chem.(生物化 学杂志）268,19004-19012 ;Langley，E·，Zhou, Z.X·，和 Wilson, E.M. (1995) J. Biol. Chem.(生物化学杂志）270,29983-29990;Kemppainen，J.A.，Langley，E.，Wong，C. I.，Bobseine, K·，Kelce, W.R·，和 Wilson, E.M. (1999) Mol. Endocrinol.(分子内分泌 学）13,440-454 ;Masiello D，Cheng S，Bubley GJ，Lu ML，Balk SP. (2002) J. Biol. Chem. (生物化学杂志），277, 29, 26321-26326)。使用哺乳动物双杂交系统来测量该相互作用。 用关于AR NTD的氨基酸1-565在N-末端与VP16融合的融合蛋白（VP16-ARTAD，N末端） 的表达载体、关于与AR的LBD融合的Gal4的DBD(氨基酸628-919 ;Gal4-ARLBD ;C末端） 的表达载体 AR 和 Gal4-萤光素酶报道分子（Masiello D，Cheng S，Bubley GJ，Lu ML, Balk SP. (2002) J. Biol. Chem.(生物化学杂志），277, 29, 26321-26326)共转染 CVl 细胞。在缺 乏雄激素的情况下没有检测到VP16-ARTAD和Gal4-ARLBD之间的相互作用（图11)。如 通过增加的萤光素酶活性所测量，雄激素刺激该相互作用，其被比卡鲁胺阻断（还参见，例 如 Masiello D，Cheng S，Bubley GJ，Lu ML，Balk SP. (2002) J.Biol. Chem.(生物化学杂 志），277, 29, 26321-26326)。重要的是，观察到185-9-2抑制雄激素刺激的N/C相互作用 (比较柱形图6和2)。因此，认为185-9-2通过阻碍N/C相互作用来抑制AR的转录活性。
[0238] 增殖测定
[0239] 前列腺是雄激素依赖性器官，在这雄激素是主要的促有丝分裂刺激（Isaacs JT, Scott ffff，Coffey DS. ,Prog Clin Biol Res.(临床生物学研究进展）1979 ; 33:133-44)。这种对于雄激素的依赖提供了用化学或外科手术去势治疗前列腺癌的理论基 础。雄激素（0.1 nM)刺激LNCaP细胞的增殖。为了测试185-9-2干扰AR AF-I功能是否减 少LNCaP细胞的雄激素依赖性增殖（类似于关于临床使用的抗雄激素药所观察到的），将 LNCaP细胞用比卡鲁胺（10 μ M，阳性对照）或185-9-2 (5 μ g/ml)预处理1小时，之后加入 0.1 nM R1881。4天后测量BrdU掺入，以指示响应于雄激素的在增殖方面的变化（图12)。 相对于对照（用于R1881和小分子的载体），R1881 (0.1 nM)增加增殖。观察到185-9-2与 比卡鲁胺在抑制雄激素-诱导的增殖方面同样有效。观察到185-9-2不阻止PC3人前列 腺癌细胞的增殖（图13, p>0. 05)，所述PC3人前列腺癌细胞不表达功能性AR并因此不依 赖于AR来生长和存活（Kaighn等1978Natl. Cancer Inst. Monogr.(国家癌症研究所专 论）49, 17-21)〇
[0240] 实施例4
[0241] 使用皮下异种移植物模型来测试体外抑制雄激素受体激活的小分子是否 对于这些肿瘤具有任何作用。使用LNCaP和PC3皮下异种移植物模型体内测试 PNG01-185-017-9-2。进行体内实验来提供与以下相关的信息：毒性，AR内源性表达的要 求，和PNG01-185-017-9-2是否对于肿瘤生长和发展为非雄激素依赖性具有效果。在两种 异种移植物模型中监视肿瘤体积。
[0242] PNG01-185-017-9-2减小LNCaP异种移植物的肿瘤体积
[0243] LNCaP人前列腺癌细胞表达内源性雄激素受体（AR)和前列腺特异性抗原（PSA)， 并且在去势宿主中发展为非雄激素依赖性。将LNCaP细胞（IOfVml)皮下植入至少8周 龄的NOD-SCID雄性小鼠。将细胞和75 μ 1基质胶（Matrigel)悬浮在75 μ I RPMI培养 基1640(5%FBS)中，并在麻醉下注射到宿主腰窝区域。当肿瘤约为100mm3(平均值= 131. 1±24. 9mm3;n = 19)时将动物去势并随机分为两组。在去势后一周，每5天用20mg/kg 体重的肿瘤内（i. t.)剂量的185-9-2或匹配体积的载体（对照，DMS0)处理动物。在25天 期间用185-9-2注射动物，并在最后一次注射后5天收获动物。对动物提供总共5次剂量。 每5天测量肿瘤体积和体重。观察到185-9-2显著减小肿瘤，即使在第一次注射后也是如 此（图14)。在实验期间，185-9-2-处理的肿瘤是35. 4±15. 7mm3,而载体处理的肿瘤继续 生长并且是435. 6 ±334. 9mm3。因此，观察到185-9-2减小肿瘤体积，并且不仅仅是减缓生 长。这提示185-9-2对于非雄激素依赖性前列腺癌可以是有疗效的。I. T递送相关化合物， 外消旋BADGE. 2HC1 (B3)，也观察到将肿瘤体积从109. 6 ± 17. 4mm3减小至79. O ±63. 6mm3,与 此相比，根据关于185-9-2的相同治疗方案，I. T.递送DMSO持续生长（从105. 2± 15. Imm3 开始，直至256. 6±73. 4mm3)(图15A)。血清PSA测量值与肿瘤体积数据相互关联（血清 PSA数据未显示）。
[0244] 重要的是，每隔一天通过尾静脉注射静脉内递送（50mg/kg体重）显示了相似的肿 瘤减瘤率（rate of cytoreduction)(图15A)。在仅2周内，观察到静脉内注射185-9-2将 肿瘤从105. 6± 12. Omm3减小到64. 3±29. 6mm3,而在接受静脉内注射DMSO的动物中肿瘤为 187. 9±42. 8mm3。这些有希望的数据强调了系统递送在减轻非雄激素依赖性前列腺癌中是 有效的。使用细胞凋亡（TUNEL)和增殖（Ki67)的标记的免疫组织化学（IHC)显示静脉内 递送185-9-2增加了细胞凋亡和减少了增殖（图15B)，这与肿瘤减瘤一致。通过不知晓治 疗的商业实验室制备IHC数据。观察到185-9-2不导致对于动物的一般毒性，如通过动物 行为或体重没有变化所指示（图14C和15C)。从通过i. V.递送接受185-9-2或DMSO的小 鼠中收获的肺、心、肝、脾和肾的病理学检查显示没有毒性迹象（图16)。
[0245] 在收获的异种移植物中AR蛋白的水平
[0246] IHC(图17A)和蛋白质印迹分析（图17B)提供了证据证明：与在载体处理的异种 移植物中的AR蛋白水平相比，I. V.或I. T递送185-9-2没有降低异种移植物中AR蛋白水 平。测量细胞角蛋白18水平作为在异种移植物样品中上皮细胞的量的指示。
[0247] 对血管生成的影响
[0248] 在前列腺癌中的血管生成主要依赖于血管内皮生长因子（VEGF)。睾酮是前列腺 中VEGF的强力诱导剂（HiggSbrdm等1999J Urol.(泌尿学杂志）161，1620-1625)，并且 在非雄激素依赖性肿瘤中VEGF的再表达与雄激素调节的基因的再表达一致（Gregory等 1998Cancer Res.(癌症研究）58,5718-5724)。VEGF的表达与非雄激素依赖性（Mitsiades 等2001Expert Opin Investig Drugs.(研究药物专家评论）10,1099-1115)和侵略性转移 疾病（Harper 等 1998J Pathol.(病理学杂志）186, 169-177 ;Balbay 等 1999Clin Cancer Res.(临床癌症研究）5, 783-789 ;Melnyk 等 1999J Urol.(泌尿学杂志）161，960-963)相 关。收获的肿瘤关于VEGF染色，揭示PNG01-185-017-9-2抑制VEGF的表达（图18)。
[0249] 在非去势宿主中皮下PC3异种移植物模型
[0250] 使用PC3异种移植物模型来提供以下指示，即对于化合物减轻肿瘤负荷而言，内 源性AR是否必须表达。PC3是不表达功能性AR的人前列腺癌细胞，并因此不响应于使 用这些小分子的治疗，所述小分子已经针对它们阻断AR-NTD反式激活的特异性进行了选 择。将PC3细胞皮下植入NOD-SCID雄性小鼠。当肿瘤约为IOOmm 3 (η = 9和10 ;平均肿瘤 体积=112. 1± 19. 7mm3)时，将动物随机分成两组。每5天用皮下剂量为20mg/kg体重的 PNG01-185-017-9-2或匹配体积的载体（对照，DMS0)处理动物。每5天测量肿瘤体积和体 重。与LNCaP异种移植物相比，PNG01-185-017-9-2不减小肿瘤，而是稍微减慢PC3异种移 植物的生长（图19A，B)。与本文所示的先前实验一致，没有观察到毒性，如通过动物行为所 指示和在治疗期间体重所测量（图19C)。
[0251] 实施例5
[0252] 为了改善185-9-2的递送，制备BADGE. HCL. H20的甘氨酸酯衍生物（图20A)。它 是容易水可溶的。将该化合物进行基于细胞的测试，并且观察到抑制由白介素-6(IL-6)诱 导的AR NTD的反式激活（图20B，比较泳道2和泳道4)。
[0253] 以下表5包括与所示化合物相关的实验数据。
[0254] 表 5
[0255]
[0256]
[0257] 实施例6
[0258] (R) -BAGE(I)
[0259]
[0260] 将作为在矿物油中的60%分散体的NaH(96mg，2. 40mmol，2. 2当量）在氩气气氛下 悬浮在无水二甲基甲酰胺（5mL)中。将混合物冷却至0°C，并加入双酸A(250mg, I. 09mmol, 1 当量）。在15分钟后，通过注射器加入（R)-表氯醇（214 μ L, 2. 73mmol，2. 5当量，99 % ee)， 并使得混合物在室温反应7小时。然后，将溶液用去离子水（~3mL)猝灭，将混合物用乙 酸乙酯（3x 3mL)萃取。将有机层用去离子水（2mL)洗涤，通过无水硫酸镁干燥，过滤并减 压浓缩。将获得的残余物通过快速柱色谱法在硅胶上纯化（洗脱剂：二氯甲烷和在二氯甲 烷中的2 %甲醇）以提供作为白色泡沫残余物的（R) -BAGE (67mg，22 % )。
[0261] 1H NMR (400MHz，DMS0-d6) : δ 9. 13 (s，1H)，7. 09 (d，J = 8. 8, 2H)，6. 97 (d，J =8. 4, 2H) , 6. 83 (d, J = 8. 8, 2H) , 6. 63 (d, J = 8. 8, 2H) , 4. 25 (dd, J = 11.2,2.8, 1H), 3. 78 (dd, J= 11. 2, 6. 4, 1H), 3. 29 (m, 1H), 2. 82 (t, J = 4. 8, 1H), 2. 68 (dd, J =4.8,2.4，lH)，1.54(s，6H)。13C 匪R(100MHz，DMS0-d6):Sl56.5，155.6，143.8，141.3 ，128. 0, 127. 9, 115. 2, 114. 4, 69. 5, 50. 4, 44. 4, 41. 7, 31. 4. TLC (在二氯甲烷中的 5 % 甲 醇），Rf:0.45(UV，对甲氧基苯甲醛）。
[0262] (R)-BADGE x H2O (5)
[0263]
[0264] 向（R)_BAGE(13mg，0· 045mmol，1当量）在无水二甲基甲酰胺（0· 3mL)中的搅拌溶 液在室温下加入K2C03(6mg，0· 045mmol，1当量）和外消旋缩水甘油（9 μ L，0· 135mmol，3当 量）。在60°C搅拌6小时后，将去离子水（0.2mL)加入获得的橙棕色溶液。将混合物用乙 酸乙酯（3x ImL)萃取。将有机层用去离子水（2mL)洗涤，通过无水硫酸镁干燥，过滤，并减 压浓缩。将获得的残余物通过快速柱色谱法在硅胶S印pak 2g上纯化（洗脱剂：二氯甲烷 和在二氯甲烷中的5%甲醇）以提供（R)-BADGE X H2O(K). 3mg，63% )，为无色油。
[0265] 1H NMR(400MHz, DMS〇-d6) : δ 7. 08 (dd, J = 8. 0, 5. 2, 4H) , 6. 83 (dd, J =10. 8, 8, 4H) , 4. 89 (d, J = 5. 2, 1H) , 4. 62 (t, J = 5. 6, 1H) , 4. 26 (dd, J =11. 6, 2. 8, 1H) , 3. 93 (dd, J = 9. 6, 4. 0, 1H) , 3. 78 (m, 3H) , 3. 42 (t, J = 5. 6, 2H) , 3. 29 (m, 1H) , 2. 82 (t, J = 4. 8, 1H) , 2. 68 (dd, J = 4.8,2.4J = 11. 6, 2. 8, 1H)，I. 57 (s, 6H)。TLC (在二氯甲烷中的 5 % 甲醇），Rf: 0. 36 (UV,对甲氧基苯甲 醛）。
[0266] (R)-BADGE X HI X H2O (6)
[0267]
[0268] 向（R)-BADGE x H20(10mg, 0· 029mmol, 1 当量）在乙腈（0· 5mL)中的溶液加入 CeCl3 · 7H20(21mg, (λ 057mmol, 2 当量）和 NaI (9mg, (λ 057mmol, 2 当量）。在室温搅拌 6 小 时后，将获得的黄色悬浮液减压浓缩。将反应混合物用二氯甲烷（2mL)溶解并用氏0(31 〇.5mL)洗涤，将有机层通过无水MgSO 4干燥，减压去除溶剂。获得的残余物通过快速柱色 谱法在硅胶S印pak 2g上纯化（洗脱剂：二氯甲烷和在二氯甲烷中的10%甲醇）以提供 (R)-BADGE X HI X H2O(9mg, 67% )，为无色泡沫。
[0269] 1H NMR (400MHz, DMS〇-d6) : δ 7. 09 (m, 4H) , 6. 8 I (m, 4H) , 5. 5 2 (d, J = 4. 8, 1H), 4. 86 (d, J = 4. 8, 1H), 4. 59 (t, J = 5. 6, 1H), 3. 88 (m, 3H), 3. 75 (m, 3H), 3. 40 (m, 3H ),3. 31 (m, 1H), 1. 57 (s, 6H) 〇13C NMR(100MHz, DMS〇-d6) : δ 157. I, 156. 7, 143. 4, 143. 0, 128. O ，127. 9, 114. 5, 114. 4, 71. 4, 70. 6, 70.1 , 68. 6, 63. 4, 41. 8, 31. 3, 12. 7· TLC(在二氯甲烷中的 5%甲醇），Rf :0. 30 (UV,对甲氧基苯甲醛）。
[0270] 实施例7
[0271] 外消旋 BADGE (9)
[0272]
[0273] 将圆底烧瓶顺序用 NaH(200mg, 4. 80mmol, 2. 2 当量）和双酚 A(500mg, 2. 18mmol, 1 当量）填充，将内容物置于氩气气氛下。通过注射器导入无水二甲基甲酰胺（5mL)，并将获 得的混合物室温搅拌。在15分钟后，通过注射器加入外消旋表氯醇（700 μ L, 8. 96mmol, 4. 1 当量），使得混合物在室温反应18小时。然后，将溶液用去离子水（~ImL)猝灭，并将混合 物用乙酸乙酯（3x 4mL)萃取。将有机层用去离子水（2mL)洗涤，通过无水硫酸镁干燥，过 滤，并减压浓缩。将获得的残余物通过硅胶快速柱色谱法纯化（洗脱剂：二氯甲烷），以提 供外消旋BADGE (536mg，72 % )，为白色泡沫残余物。
[0274] 1H NMR (400MHz，DMS0-d6) : δ 7. 10 (d，J = 8. 8, 4H)，6. 84 (d，J = 8. 8, 4H), 4. 25 (dd, J =