三氧化二砷在制备治疗细粒棘球蚴病药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及三氧化二砷的药学应用，属于药物化学领域。
【背景技术】
[0002]细粒棘球蝴病(echinococcosisof the liver)，亦称囊性包虫病(cysticechinococcosis，CE)，是由细粒棘球蝴绦虫(echinococcosis granulosus,Eg)的中绦期幼虫所致的一种人畜共患寄生虫病。全身各个脏器均可发病，其目前临床上最常见的发病部位以肝脏为主，其次肺包虫病。在我国以新疆、青海、甘肃、宁夏、西藏、内蒙、陕西和四川西部多见，随着人口流动性增加，其余各省均有散发病例。
[0003]针对上述疾病，目前尚无特效治疗药物，手术仍为唯一有效的治疗方法，主要表现为彭心宇等提出的肝包虫外膜内外囊完整摘除术，该术式沿外膜及外囊间隙进行分离，术中无需阻断血流，也不会发生大出血。可将外囊完整摘除，不仅能降低了包虫病的复发率，并能最大程度地保护正常的肝组织，术后无残腔感染等并发症。
[0004]但当包虫囊肿位于肝脏重要管道周围或体积较大时，无法使用上述手术方案，需要选择其他术式，容易造成囊液外溢，原头节残留，导致疾病复发，甚至导致腹膜内包虫病的二次感染。
[0005]针对上述问题，需要在术中局部使用化疗药物杀死残留头节，目前常用的辅助化学药物有20 %的食盐水，10 %过氧化氢，1.5 %西曲溴铵，0.15 %氯己定，95 %乙醇，10 %聚乙烯吡咯烷酮-碘(聚维酮碘)及阿苯达唑等，这些药物对杀死原头节具有一定的效果，但是大量研究显示此类药物存在着很多缺点，主要表现在生效时间太长，稳定性较差。
【发明内容】
[0006]申请人在长期研究过程中惊喜地发现将三氧化二砷As2O3用作治疗细粒棘球蝴病药物可以有效抑制和杀灭原头节的生长，从而可用于细粒棘球蝴病的临床治疗。
[0007]首先，本发明公开了三氧化二砷在制备治疗细粒棘球蝴病药物中的应用。
[0008]细粒棘球蝴病，既可以是动物体上的，也可以是人体上的，根据该症的临床发病部位，通常指的是囊性肝包虫病。
[0009]因此相应的，本发明还公开了三氧化二砷在制备治疗囊性肝包虫病药物中的应用。
[0010]上述的药物，既可以是单纯的活性成分原料，还可以是将三氧化二砷作为活性成分与其他辅料做成的各种制剂，例如常见的片剂、胶囊、注射液等，对于药物剂型及其相应辅料的选择，本领域技术人员可根据需要进行调整。
[0011]根据需要，在安全剂量范围内(折合As 0.llmg/m3)，可使用不同浓度的三氧化二砷，一般来说，为了有效的杀灭病原，三氧化二砷的浓度不低于2 μπιοΙ/L;优选的，三氧化二砷的浓度为6-8 μ mol/Lo
[0012]优选的，连续用药时间不低于5天。
[0013]在上述浓度下，对细粒棘球蝴原头节具有比较理想的抑制和杀灭效果。
[0014]在此基础上，本发明还公开了三氧化二砷细粒棘球蝴原头节抑制剂的应用。
[0015]本领域技术人员可以理解，在多种实验环境下，尤其是动物离体实验情况下，为了防止由于动物体内的细粒棘球蝴原头节在体外的生长和头节外溢，需要加入必要的抑制剂，例如20%高渗盐水等。
[0016]与上述类似，三氧化二砷的浓度不低于2 ymol/L，优选的，三氧化二砷的浓度为6-8 μmol/L0
【附图说明】
[0017]图1为三氧化二砷对细粒棘球蝴原头节形态的影响，其中，A:对照组原头节；B:2 ymol/L三氧化二砷作用5d的原头节；C:4 ymol/L三氧化二砷作用3d的原头节；D:4 ymol/L三氧化二砷作用5d的原头节；E:6 ymol/L三氧化二砷作用3d的原头节；F:6 ymol/L三氧化二砷作用5d的原头节；G:8 ymol/L三氧化二砷作用3d的原头节；H:8 μ mol/L三氧化二砷作用5d的原头节。
[0018]图2为不同浓度的三氧化二砷对细粒棘球蝴原头节活力的影响。
[0019]图3为三氧化二砷对细粒棘球蝴原头节表面超微结构的影响，其中，A:对照组原头节；Β:2 μ mol/L三氧化二砷作用5d的原头节；C:4 ymol/L三氧化二砷作用3d的原头节；D:4 μ mol/L三氧化二砷作用5d的原头节；Ε:6 μ mol/L三氧化二砷作用3d的原头节；F:6 μ mol/L三氧化二砷作用5d的原头节；G:8 μ mol/L三氧化二砷作用3d的原头节；H:8 μ mol/L三氧化二砷作用5d的原头节。
[0020]图4为三氧化二砷对细粒棘球蝴原头节内部超微结构的影响，其中，A:对照组原头节；Β:2 μ mol/L三氧化二砷作用5d的原头节；C:4 ymol/L三氧化二砷作用3d的原头节；D:4 μ mol/L三氧化二砷作用5d的原头节；Ε:6 μ mol/L三氧化二砷作用3d的原头节；F:6 μ mol/L三氧化二砷作用5d的原头节；G:8 μ mol/L三氧化二砷作用3d的原头节；H:8 μ mol/L三氧化二砷作用5d的原头节。
【具体实施方式】
[0021]为了说明三氧化二砷的应用效果，申请人进行了体外实验说明三氧化二砷对细粒棘球蝴原头节的杀灭效果，申请人进行了下述实验。
[0022]实验1:三氧化二砷体外作用于细粒棘球蝴原头节的效果
[0023]取新鲜的自然感染细粒棘球蝴的绵羊肝脏，清洁羊肝表面，用75%酒精消毒表面，无菌条件下抽取含原头节的囊液，移入无菌瓶中。用PBS (PH = 7.2)清洗原头节3次至澄清，用0.1%伊红染液做染色排斥实验，98%以上拒染。肉眼观察原头节呈细白沙样均匀颗粒，活性好的原头节沉降速率快，活性不好的或者死亡的原头节沉降速率相对比较慢。
[0024]倒置显微镜下观察原头节，虫体呈内陷型，虫体结构饱满，呈椭圆形，结构清晰完整，钙颗粒清亮而明显。然后将原头节分装至含10%小牛血清的RPMI 1640培养基中(青霉素100U/mL，链霉素100U/mL)，置37°C、5% C02培养箱内培养。
[0025]实验分组:RMP1-1640培养基空白对照组、2 μ mol/L三氧化二砷组、4 μ mol/L三氧化二砷组、6 μ mol/L三氧化二砷组、8 μ mol/L三氧化二砷组。取六孔板，每孔设5mL体系，按以上分组，配好相应的培养液。
[0026]将在体外培养5天后的细粒棘球蝴原头节用PBS (pH = 7.2)清洗3遍，每组培养液中加入约2000个原头节，置37°C，5% CO2孵育箱内培养，在倒置显微镜下观察三氧化二砷对细粒棘球蝴原头节形态和活力的影响。
[0027]数据统计方法:加药后24h开始，每组每天均匀抽取200 μ L培养液(平均含原头节约90-120个)，用0.1 %伊红染色15min，倒置显微镜下观察原头节的活力。活头节拒染、不着色，且有活动性；死亡或活力减弱的原头节红染着色，伴有结构破坏。计算每组每天平均死亡率。每隔4d换液