)材料的选择：纯度90% (w/w)的CPPs为聚阴离子材料、脱乙酷度90%W上且 分子量为130kDa的CS为聚阳离子材料、0邸的纯度90% (w/w)W上，京尼平的纯度为98% (w/w)〇
[0124] (2)分别配制一定浓度的CPPs溶液、CS溶液和0邸溶液，并将溶液的抑值调节至 2.00、化(：1浓度均为1111〇1/1。此外，用0.5%(乂八）的醋酸溶液辅助溶解〔5，用1111〇1/1肥1 调节Ξ种溶液的抑。 阳1巧](3)将CPPs溶液与0邸溶液混合均匀，再将CS溶液逐滴加至处于揽拌状态的CPPs与0EB的混合溶液中，最终溶液中CPPs、CS及0EB占Ξ者的质量分数分别为43%、43%及 14%，溶液中Ξ者总和的终浓度为1. 4mg/mL。 阳126] (4)调节体系的抑至5. 50,观测实验结果。
[0127] 结果：体系中出现絮状沉淀，运说明将CS溶液加入到CPPs溶液与0EB混合溶液不 可行。 阳12引 对比例2改变CPPs、CS和0EB添加顺序
[0129] (1)材料的选择：纯度90% (w/w)的CPPs为聚阴离子材料、脱乙酷度90%W上且 分子量为130kDa的CS为聚阳离子材料、0邸的纯度90% (w/w)W上，京尼平的纯度为98% (w/w)〇
[0130] (2)分别配制一定浓度的CPPs溶液、CS溶液和0邸溶液，并将溶液的抑值调节至 2. 00、化C1浓度均为Imol/L。此外，用0. 5% (v/v)的醋酸溶液辅助溶解CS，用Imol/L肥1 调节Ξ种溶液的抑。 阳13U (3)将CPPs溶液与CS溶液混合均匀后，抑调至5. 50,再将0邸溶液逐滴加至处 于揽拌状态的CPPs与CS的混合溶液中，最终溶液中CPPs、CS及0EB占Ξ者的质量分数分 别为43%、43%及14%，溶液中^者总和的终浓度为1.4111旨/血。 阳13引 （4)调节体系的抑至5. 50,观测实验结果。
[0133] 结果：CPPs-CS已经结合，明显无法将0邸进行有效包埋。 阳134] 对比例3CPP占Ξ者质量等于或大于50%时
[0135] (1)材料的选择：纯度90% (w/w)的CPPs为聚阴离子材料、脱乙酷度90%W上且 分子量为130kDa的CS为聚阳离子材料、0邸的纯度90% (w/w)W上，京尼平的纯度为98% (w/w)ο
[0136] (2)分别配制一定浓度的CPPs溶液、CS溶液和0邸溶液，并将溶液的抑值调节至 2.00、化(：1浓度均为1111〇1/1。此外，用0.5%(乂八）的醋酸溶液辅助溶解〔5，用1111〇1/1肥1 调节Ξ种溶液的抑。
[0137] (3)将CPPs溶液与0邸溶液混合均匀，再逐滴加至处于揽拌状态的CS溶液中，最 终溶液中CPPs、CS及0EB占Ξ者的质量分数分别为50%、25%及25%，溶液中Ξ者总和的 终浓度为1. 8mg/mL。 阳13引（4)调节体系的抑至5. 50,观测实验结果。
[0139] 结果：体系所生成絮状沉淀物，见图7(左1)所示。测得体系中复合物粒径为 33271. 2 + 6704. 6nm。
[0140] 对比例40EB占Ξ者质量分数大于33%时 阳141] (1)材料的选择：纯度90%(w/w)的CPPs为聚阴离子材料、脱乙酷度90%W上且 分子量为130kDa的CS为聚阳离子材料、0邸的纯度90%(w/w)W上，京尼平的纯度为98% (w/w)〇
[0142] (2)分别配制一定浓度的CPPs溶液、CS溶液和0邸溶液，并将溶液的抑值调节至 2. 00、化C1浓度均为Imol/L。此外，用0. 5% (v/v)的醋酸溶液辅助溶解CS，用Imol/L肥1 调节Ξ种溶液的抑。
[0143] (3)将CPPs溶液与0邸溶液混合均匀，再逐滴加至处于揽拌状态的CS溶液中，最 终溶液中CPPs、CS及0EB占Ξ者的质量分数分别为25%、25%及50%，溶液中Ξ者总和的 终浓度为1. 8mg/mL。
[0144] (4)调节体系的抑至5. 50,观测实验结果。
[0145] 结果：体系所生成絮状沉淀物，见图7(右1)所示。测得体系中复合物粒径为 11911. 6 + 7070. 7皿。 阳146] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于包括如下步 骤： (1) 配制一定浓度的CPPs溶液、CS溶液和OEB溶液，并调节这三种溶液的pH值和NaCl 浓度； (2) 将CPPs和OEB及CS三者按一定的添加顺序混合均匀，控制最终溶液中CPP和OEB 占三者的质量分数，且溶液中三者总和终浓度控制在合适范围； (3) 调节体系的pH值，基于自组装原理CPPs和CS包埋OEB的纳米小球生成； (4) 在体系中加入京尼平对小球进行固定，控制京尼平在体系中的浓度，得到纳米混悬 液； (5) 对步骤（4)得到的纳米混悬液进行离心，去掉上清，对离心产物进行清洗、冷冻干 燥，得到月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒。2. 根据权利要求1所述月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特 征在于：步骤（1)中所述的CPPs溶液、所述的CS溶液和所述的OEB溶液的pH值彡3. 00、 NaCl浓度<lmol/L。3. 根据权利要求1所述月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征 在于： 所述的CPPs溶液中的NaCl浓度为lmol/L、pH值为2 ; 所述的CS溶液中的NaCl浓度为lmol/L、pH值为2 ; 所述的OEB溶液中的NaCl浓度为lmol/L、pH值为2。4. 根据权利要求1所述月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征 在于： 步骤（2)中所述的添加顺序如下：先将CPPs与0EB混合均匀，再逐滴加至处于搅拌状 态的CS溶液中； 步骤⑵中所述的最终溶液中CPP和0EB占三者的质量分数为：CPP占三者的质量分 数不超过50% ;0EB占三者的质量分数不超过33%。5. 根据权利要求4所述月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特 征在于：所述的CPP占三者的质量分数为18~43%;所述的0EB占三者的质量分数为9~ 25%〇6. 根据权利要求1所述月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特 征在于： 步骤（2)中所述的总和终浓度为不高于5mg/mL; 步骤⑶中的所述的pH值为不超过6. 00 ; 步骤（4)中所述的Genipin在体系中的浓度不超过1. 0mg/mL。7. 根据权利要求6所述月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征 在于： 所述的总和终浓度为〇· 125~3. 5mg/mL; 所述的pH值为5. 3~5. 8; 步骤（4)中所述的京尼平在体系中的浓度为0. 03~1. 0mg/mL。8. 根据权利要求1所述月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征 在于：步骤（5)中所述的离心的条件为：在4°C、5000~16000g条件下离心15~30min。9. 一种月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒，通过权利要求1~8任一项所述的 制备方法得到。10. 权利要求9所述的月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒在制药领域、食品领 域和保健品领域中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒及制备方法与应用。本发明通过配制CPPs溶液、CS溶液和OEB溶液，将这三种溶液按一定的添加顺序混合均匀，控制最终溶液中CPP和OEB占三者的质量分数，且溶液中三者总和终浓度，再调节体系的pH值，得到纳米小球；然后加入京尼平对小球进行固定，得到纳米混悬液，离心，干燥，得到月见草素B-酪蛋白磷酸肽-壳聚糖纳米粒。该纳米粒具有粒径可调、包埋率高、pH响应、绿色、节能、安全、抗胃酸、缓释等优点，可在制药领域、食品领域和保健品领域中进行广泛应用。
【IPC分类】A61K38/01, A61P39/06, A61K31/722, A61K31/7024, A23L33/18, A23L33/105, C08J3/24, A61K47/48
【公开号】CN105381472
【申请号】CN201510901621
【发明人】赵力超, 曹庸, 陈运娇, 曹素芳, 钟颖儿, 刘梓韬
【申请人】华南农业大学
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年12月8日