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【发明内容】
[0023]本发明的目的在于提供槲皮素在制备预防及治疗与ApoE蛋白水平有关疾病的药物中的应用。
[0024]大量实验发现，槲皮素可增加ApoE蛋白水平，减少AD小鼠模型大脑皮层中不溶性Aβ水平及总Αβ水平，减少AD小鼠模型大脑皮层中Αβ斑块数量。可作为治疗AD药物的新的化合物。
[0025]1)槲皮素增加永生化星形胶质细胞(immortalized astrocytes)和原代星形胶质细胞(primary astrocytes)胞外ApoE水平。
[0026]2)槲皮素可抑制细胞外ApoE蛋白降解。
[0027]3)槲皮素可增加AD小鼠模型的大脑皮层中apoE蛋白水平，减少大脑皮层中不溶性Αβ (包括Αβ40和Αβ42)水平和总Αβ水平。
[0028]4)槲皮素可减少AD小鼠模型的大脑皮层中Αβ斑块数量。
[0029]槲皮素可通过增加ApoE蛋白的稳定性从而增加ApoE蛋白水平，在AD小鼠模型中槲皮素可显著降低不溶性Αβ水平及Αβ斑块的数量。
[0030]由此可见，槲皮素可在制备治疗ApoE蛋白水平降低引起的疾病药物中的应用，所述疾病包括但不限于ApoE蛋白水平降低引起的机能障碍疾病、阿尔茨海默病(alzheimer sdisease,AD)。
【附图说明】
[0031]图1为槲皮素增加永生化星形胶质细胞及原代星形胶质细胞胞外ApoE水平。n.S.，无显著意义；*，ρ〈0.05;**，p〈0.01 ;***，p〈0.001 oCtrl，空白对照；Que，槲皮素；Bex，bexarotene。
[0032]图2为槲皮素抑制厶口(^蛋白降解实验。*，口<0.05;林，口<0.01;林*，口<0.001。Ctrl,空白对照；Que,槲皮素;Bex, bexarotene。
[0033]图3为槲皮素可增加AD小鼠模型大脑皮层中apoE蛋白水平，减少大脑皮层中不溶性Αβ(包括ΑΜ0和AM2)水平及总Αβ水平。n.s.表示无显著性意义；*，p〈0.05;**，p〈
0.01 ;***，p〈0.0010n = 8?90Ctrl，空白对照；Que，懈皮素；Bex,bexarotene0
[0034]图4为槲皮素可减少阿尔茨海默病转基因小鼠模型(5xFAD)大脑皮层中Αβ斑块数量。n.s.表示无显著性意义;*，ρ〈0.05 ，ρ〈0.01 ;***，ρ〈0.001，n = 8?90Ctrl,玉米油；Que,懈皮素；Bex, bexarotene.
【具体实施方式】
[0035]以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。
[0036]图1给出槲皮素增加永生化星形胶质细胞及原代星形胶质细胞胞外ApoE水平。我们用槲皮素(10μΜ)及bexarotene((ΙμΜ，阳性对照组)分别处理永生化星形胶质细胞及原代星形胶质细胞，然后用Western blot分析和定量永生化星形胶质细胞(A,C，D)及原代星形胶质细胞(B，F，G)胞内外ApoE蛋白水平。同时我们采用qRT-PCR技术检测永生化星形胶质细胞(E)及原代星形胶质细胞(H)的mRNA水平。结果发现槲皮素增加永生化星形胶质细胞及原代星形胶质细胞胞外ApoE水平，但不提高mRNA转录水平。用one-way AN0VA with Tukey’spost hoc 3此15^18方法分析，]1.8.，无显著意义；*，？〈0.05;**，卩〈0.01; ***，p〈0.001。Ctrl,空白对照；Que,槲皮素;Bex, bexarotene。
[0037]图2给出槲皮素抑制ApoE蛋白降解实验。我们收集了AP0E3和AP0E4基因替换永生化星形胶质细胞培养液(内含有分泌到胞外的ApoE蛋白)，分别与槲皮素和bexarotene共同孵育，每间隔6小时取样分别用Western blot(A，B，C)和ELISA(D，E)定量ApoE蛋白水平。我们发现了槲皮素能有效抑制ApoE蛋白的降解。用two-way AN0VA with Bonferroni’s posthoc analysis方法分析，*，ρ<0.05;**，ρ<0.01;***，p<0.001。Ctrl,空白对照；Que,槲皮素；Bex,bexarotene.
[0038]图3给出槲皮素可增加AD小鼠模型大脑皮层中apoE蛋白水平，减少大脑皮层中不溶性Αβ (包括Αβ40和Αβ42)水平及总Αβ水平。分别用槲皮素及bexarotene (阳性对照组)灌胃2个月大5xFAD小鼠10天，取小鼠大脑皮层。用Western blot和qRT-PCR法分别定量大脑皮层中ApoE蛋白水平，我们发现了槲皮素增加大脑皮层中ApoE蛋白水平。同时分别用TBS缓冲液(Tris-HCl), TBSX缓冲液(包含1 % Triton X-100)和⑶N-HC1 (含5M盐酸胍缓冲液)分别提取TBS可溶性，TBSX缓冲液可溶和不溶性(GDN-HC1中可溶)Αβ，用ELISA定量，结果表明，灌胃给药能显著降低大小鼠大脑皮层中不溶性AM0(F)和Αβ42(Ι)水平，因大脑皮层中TBS可溶性，TBSX缓冲液可溶AM0(D，E)和AM2(G，H)远少于不溶性Αβ40和ΑΜ2水平，因此，槲皮素也同时降低了大脑皮层中的总Αβ40和Αβ42水平。用one-way AN0VA with Tukey’s post hoc&肪15^丨8方法分析，]1.8.表示无显著性意义;*4〈0.05;**4〈0.01 ;***，ρ〈0.001οη = 8-9οCtrl,空白对照；Que,槲皮素;Bex, bexarotene。
[0039]图4给出槲皮素可减少阿尔茨海默病转基因小鼠模型(5xFAD)大脑皮层中Αβ斑块数量。将2个月大的小鼠用槲皮素灌胃10天，取脑切片，用M0AB-2抗体做免疫组化分析。结果表明槲皮素可显著减少5xFAD小鼠大脑皮层中Αβ斑块数量，即减轻AD小鼠病理特征jone-way ANOVA with Tukey’s post hoc analysis方法分析，n.s.表示无显著性意义；*，p〈0.05;**，p〈0.01 ;***，p〈0.001，n = 8_90Ctrl，玉米油;Que，懈皮素；Bex，bexarotene0
【主权项】
1.槲皮素在制备预防及治疗与ApoE蛋白水平有关疾病的药物中的应用。2.如权利要求1所述应用，其特征在于所述疾病包括但不限于ApoE蛋白水平降低引起的机能障碍疾病、阿尔茨海默病。
【专利摘要】槲皮素在制备预防及治疗与ApoE蛋白水平有关疾病的药物中的应用，涉及槲皮素。槲皮素可增加ApoE蛋白水平，减少AD小鼠模型大脑皮层中不溶性Aβ水平及总Aβ水平，减少AD小鼠模型大脑皮层中Aβ斑块数量；可作为治疗AD药物的新的化合物；可增加永生化星形胶质细胞和原代星形胶质细胞胞外ApoE水平；可抑制细胞外ApoE蛋白降解；可增加AD小鼠模型的大脑皮层中apoE蛋白水平，减少大脑皮层中不溶性Aβ水平和总Aβ水平；可减少AD小鼠模型的大脑皮层中Aβ斑块数量。槲皮素可在制备治疗ApoE蛋白水平降低引起的疾病药物中的应用，疾病包括但不限于ApoE蛋白水平降低引起的机能障碍疾病、阿尔茨海默病。
【IPC分类】A61K31/352, A61P25/28
【公开号】CN105412074
【申请号】CN201510988203
【发明人】庄江兴, 卜国军, 许华曦, 章喜林, 胡进
【申请人】厦门大学
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月24日