mg，用甲醇溶解并定容 至5mL，分别吸取0 · 05mL，0 · IOmL，0 · 15mL，0 · 20mL，0 · 25mL，0 · 30mL，0 · 35mL，0 ·40mL至比色管 中，并用甲醇分别定容至10mL，将各管溶液至于分光光度计，在276nm处进行扫描，绘制标准 曲线，得回归方程。精密称取甘草总黄酮供试品适量，按同法操作，计算总黄酮含量。
[0022] 经过发明人的对比优选后，确定了上述有效部位的最佳重量配比为:土鳖虫小肽3 重量份、熟地黄总多糖5重量份、当归总酚酸4重量份、甘草总黄酮3重量份。按照比例取上述 土鳖虫小肽、熟地黄总多糖、当归总酚酸、甘草总黄酮，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制 成药学上可接受的剂型。
[0023] 本发明药物组合物可制成的剂型为软膏剂或凝胶剂。
[0024] 以上所说的药剂学常规辅料包括但不限于基质，如油脂性基质、乳剂型基质、水溶 性基质、水性凝胶基质;乳化剂，如一价皂、多价皂、十二烷基硫酸钠、硬脂酸甘油酯、脂肪酸 山梨坦、聚山梨酯；抗氧剂，如没食子酸烷酯、丁羟基茴香醚、抗坏血酸、亚硫酸盐、枸橼酸、 酒石酸；防腐剂，如乙醇、异丙醇、苯甲酸、山梨酸、肉桂酸、苯酚、水杨酸、对羟基苯基酸酯、 苯扎氯铵等。
[0025] 本发明有效部位组合物用于治疗色素斑、美白皮肤、减少色素生成。
[0026] 有益成果 本发明中药组合物，是按传统中医药理论同时结合现代医学研究成果组方而成，具备 中医学特色，同时符合现代医学的治疗原则。
[0027]现代研究证明，人的皮肤颜色主要由黑色素细胞合成黑色素的活力决定的，皮肤 黑色素的形成受多种因素的影响造成皮肤黑色素生成的原因有多种，如紫外线、废气、活 性氧等环境因素。某些食物也是皮肤变黑的祸根，如富含铜、铁、锌等金属的食物易使人 的皮肤变黑，这是因为这些金属可直接或间接地增加与黑色素生成有关的酪氨酸酶及多 巴醌等物质的数量与活性。不少药物也会改变正常肤色，如氯喹对黑色素的亲和力特别 强，会加重肤色变黑。不少疾病也会改变正常肤色，使其变黑，如营养不良性疾病，体内 氧化与抗氧化平衡失调；内分泌失调；微生态失衡；代谢紊乱；机体微量元素含量异常 等。皮肤颜色的深浅与黑色素形成的量以及转移到角质细胞中的黑色素的量是成正比的。
[0028] 当黑色素过速增长和分布不均时，就会造成局部皮肤过黑及色素沉着。另外，黑 色素细胞接受到存在于细胞外部一种称之为"内皮素"的物质，就得到了加速制造黑色素 的信息，而且酪氨酸酶也被激活，皮肤就变黑了。皮肤不同区域产生的内皮素多少不同， 皮肤就会产生颜色深浅不一，从而产生色斑。另外，日晒或紫外线辐射也促进皮肤黑色素形 成，若生成的黑色素不能及时代谢而聚集、沉积或对称分布于表皮，则使皮肤出现雀斑、黄 褐斑等色素斑。
[0029] 本发明以传统中医理论为指导思想，同时结合国内外的相关研究成果，在治疗色 素斑，美白皮肤，减少色素生成方面效果显著。方中土鳖虫性咸，寒，有小毒，归肝经，功效破 血逐淤，入肝经血分，消积通经，治干血成劳，现代药理研究证明，土鳖虫小肽具有降低血液 粘度，抗凝血的作用，为本发明中主要成分;熟地黄性甘，微温，归肝、肾经，功效补血养阴， 填精益髓，可用于血虚诸症，补阴益精以生血，为养血补虚、补肾阴之要药，现代药理研究证 明熟地黄具有补血、抗衰老的作用；当归性甘、辛，温，归肝心脾经，功效补血调经，活血止 痛，用于血虚诸症，长于补血，为补血之圣药，长以本品补血活血，调经止痛，现代药理研究 证明当归具有调节免疫、补血抗凝血的功效;甘草性甘、平，归心肺脾胃经，功效补脾益气， 清热解毒，调和诸药，善入中焦，可用于脾气虚症，现代药理研究证明甘草具有增强免疫、降 血脂的作用，其甜味浓郁，可矫正方中药味。
[0030] 本发明产品成分明确，疗效稳定，服用量小，安全性高，符合传统中医对于色素斑， 皮肤暗沉采用补血、活血、养气的治疗原则，而且符合现代中医药的发展原则，对推动医药 产业从仿制向自主创新转变以及对推动我国中药国际化具有重要意义。经查阅相关文献和 专利，未检索到以土鳖虫小肽，熟地黄多糖，当归总酚酸，甘草总黄酮做为原料，生产加工并 制成适宜药物制剂用于祛斑美白的治疗或辅助治疗的报道。
[0031] 为进一步验证本发明的药理作用，用本发明软膏剂进行人体药效学实验。
[0032] 试验内容:对人体色素斑，皮肤暗沉的防治。
[0033] 1样品和受试对象 1.1供试样品 样品1:(本发明软膏剂） 取土鳖虫药材6kg，粉碎过80目筛，加10倍量水煮沸15 min，待冷至40°C，以稀盐酸溶 液调节pH 1.5~2.0，加入1%土鳖虫量的胃蛋白酶，40°C保温酶解Ih，以20%氢氧化钠溶液 调节pH7.5~8.0，加入1%土鳖虫量的胰蛋白酶，40°C保温酶解3 h，加热煮沸15min，减压浓 缩，干燥，得土鳖虫小肽(含量60%);取熟地黄干燥品9kg，加入8倍量的水，于98°C中浸提2 次，每次4h，溶液滤过，合并滤液，减压浓缩至相当于生药量0.5mg/mL。加95%的乙醇使醇沉 浓度达到80%，静置24h。抽滤，得粗多糖，再加95%乙醇反复洗涤，脱脂和除去部分单糖。将沉 淀放至无醇味，加水溶解，过滤，定容，减压浓缩，干燥，得熟地黄总多糖(含量38%);取适当 粉碎的当归药材9kg，加入12倍量70%的乙醇提取3次，每次Ih，合并提取液，离心，取上清 液，减压浓缩，干燥，得醇提物干粉，加水溶解，离心，取上清液，用稀盐酸调至pH为3，通过D-101大孔树脂柱，然后用水洗至流出液无色，再用8倍量柱体积70%的乙醇溶液以4mL/min的 流速进行洗脱，收集醇洗脱液，挥干溶剂，干燥得提取物干粉，用等量的乙酸乙酯萃取3次， 合并萃取液，用少量水洗涤萃取液，分取乙酸乙酯层，挥干溶剂，干燥得当归总酚酸提取物 (含量45%);取甘草药材粗粉7kg，用95%乙醇提取2次，乙醇第1次用量为甘草的8倍量，第2 次用量为甘草的6倍量，合并提取液过滤，减压回收乙醇，浓缩物加入5倍量蒸馏水溶解，过 滤，弃去沉淀;将过滤液上AB-8树脂柱，继而以蒸馏水、80%乙醇洗脱树脂柱，用量分别为4倍 量树脂柱体积，收集80%乙醇洗脱部位，减压回收乙醇，浓缩物真空干燥得甘草总黄酮提取 物(含量60%)。
[0034]取土鳖虫小肽30g、熟地黄总多糖50g、当归总酚酸40g、甘草总黄酮30g研细过60目 筛，备用；取硬脂酸甘油酯210g、硬脂酸300g、白凡士林360g和液状石蜡300g加热融化至90 °C为油相，另将甘油360g和1500mL蒸馏水加热至90°C，再加入十二烷基硫酸钠30g及羟苯乙 酯3g溶解为水相，然后在相同温度下将水相缓缓加入油相中，边加边搅，直至冷凝，即得乳 剂型基质，将过筛的有效部位加入上述基质中，搅拌均匀，制成软膏剂。 样品2:(本发明凝胶剂） 采用样品1制备的有效部位原料。
[0035]取土鳖虫小肽60g、熟地黄总多糖100g、当归总酚酸80g、甘草总黄酮60g，备用；再 取卡波普940 40g、聚山梨酯80 8g加入1200mL蒸馏水混合，氢氧化钠16g溶于400mL蒸馏水 后加入上液搅匀，再将4g羟苯乙酯溶于乙醇后搅匀，得透明凝胶;将上述有效部位用少量水 研细，分散，混于透明凝胶中搅拌均匀，制成凝胶剂。
[0036] 样品 3: 采用样品1制备的有效部位原料。
[0037] 取土鳖虫小肽10g、熟地黄总多糖30g、当归总酚酸20g、甘草总黄酮15g，备用;再取 卡波普940 10g、聚山梨酯80 2g加入300mL蒸馏水中混合，氢氧化钠4g溶于IOOmL蒸馏水后 加入上液搅匀，再将Ig羟苯乙酯用于乙醇后搅匀，得透明凝胶;将上述有效部位用少量水研 细，分散，混于透明凝胶中搅拌均匀，制成凝胶剂。
[0038] 样品4: 采用样品1制备的有效部位原料。
[0039] 取土鳖虫小肽30g、熟地黄总多糖50g、芍药总苷40g、甘草总黄酮30g研细过60