一种双花千里光总黄酮的制备方法及其应用
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，具体涉及一种双花千里光总黄酮的制备方法及其应用，其主要制备方法包括：a.将双花千里光于60℃烘干粉碎，得粗粉；b.超声?微波提取；c.大孔吸附树脂纯化，乙醇洗脱，收集洗脱液；d.浓缩，干燥，即得双花千里光总黄酮。经药效学评价，该提取物具有良好的抗氧化作用，效果明显，可将其用于制备抗氧化的药品中，具有疗效显著、使用方便等优点。
【专利说明】
一种双花千里光总黄酮的制备方法及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种双花千里光总黄酮的制备方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 自由基是人体生命活动中多种生化反应的中间代谢产物。细胞在正常的代谢过程 中，或者受到高能辐射，以及高压氧、药物、香烟烟雾和光化学空气污染等作用，都会产生自 由基。
[0003] 研究表明，自由基从产生到衰亡的过程就是电子转移的过程。在生命体系中，电子 的转移是一种最基本的运动，而氧的得电子能力很强，因此，生物体内许多化学反应都与氧 有关。研究发现损害人体健康的自由基几乎都与那些活性较强的含氧物质有关，与这些物 质相结合的自由基叫做活性氧自由基。活性氧自由基对人体的损害实际上是一种氧化过 程。因此，要降低自由基的损害，就要从抗氧化做起。
[0004] 西藏药用植物双花千里光为一种菊科千里光属的多年生草本植物，具有清热解毒 的特效。近年来一些藏族同胞将双花千里光用作美容，效果良好。黄酮类化合物具有降脂、 抗衰老、抗氧化、抗血栓、清除自由基、抗心律失常、抗癌等功效。
[0005] 传统的提取方法包括溶剂提取、沉淀分离法、水蒸气蒸馏法、分子蒸馏技术等。虽 然这些方法在天然产物提取被大多数人采用，但也存在不少缺点，如提取过程中普遍使用 大量有机溶剂;处理时间长;操作步骤多等。因而实验过程中样品损失严重，产生的误差较 大。
[0006] 本发明采用现代的微波-超声提取技术，快速高效的提取双花千里光总黄酮。且通 过文献检索，国内尚未见双花千里光总黄酮用于制备抗氧化药物。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于寻求新型高效的天然抗氧化剂的开发利用，提供了一种双花千 里光总黄酮的制备方法及其应用。
[0008] 为实现上述目的，本发明的技术方案如下： a. 将双花千里光总黄酮于60°C烘干，得粗粉； b. 将双花千里光粉末置于微波-超声装置中，加入原料重量3~5倍的70~80%的乙醇溶 液，设置超声500W常开、微波功率为600~800W，提取2~3h，过滤，滤液减压浓缩得浓缩液； c. 将浓缩液加入到大孔吸附树脂柱，先用2~3BV的蒸馏水洗脱，再用4~6BV的65~75%的 乙醇洗脱，收集洗脱液； d. 洗脱液浓缩，干燥，即得双花千里光总黄酮。
[0009] 步骤C中所述的大孔吸附树脂类型为AB-8、HPD300、XDA-1中的一种。
[0010] 本发明制备的双花千里光总黄酮在制备具有抗氧化作用的药物中的应用。
[0011] 本发明获得的双花千里光总黄酮，通过对其抗脂质过氧化能力、清除超氧阴离子 自由基Γ〇2)2能力和清除DPPH自由基能力等指标的研究表明：双花千里光总黄酮具有很强 的抗脂质过氧化能力，同时还可以有效清除超氧阴离子自由基和DPPH自由基。因此，双花千 里光总黄酮是开发新型高效的天然抗氧化剂的一个好选择。
[0012]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】 [0013] 实施例1: 将双花千里光总黄酮于60°C烘干，得粗粉;将1000g双花千里光粉末置于微波-超声装 置中，加入4L的80%的乙醇溶液，设置超声500W常开、微波功率为800W，提取3h，过滤，滤液减 压浓缩得浓缩液;将浓缩液加入到HPD300大孔吸附树脂柱，先用2倍柱体积的蒸馏水洗脱， 再用6倍柱体积的75%的乙醇洗脱，收集洗脱液;洗脱液浓缩，干燥，即得双花千里光总黄酮 110. lg。经UV检测，双花千里光总黄酮的含量为78.9%。
[0014] 实施例2: 将双花千里光总黄酮于60°C烘干，得粗粉;将1000g双花千里光粉末置于微波-超声装 置中，加入3L的70%的乙醇溶液，设置超声500W常开、微波功率为600W，提取2h，过滤，滤液减 压浓缩得浓缩液;将浓缩液加入到AB-8大孔吸附树脂柱，先用2倍柱体积的蒸馏水洗脱，再 用4倍柱体积的65%的乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液浓缩，干燥，即得双花千里光总黄酮 114.8g。经UV检测，双花千里光总黄酮的含量为81.2%。
[0015] 实施例3: 将双花千里光总黄酮于60°C烘干，得粗粉;将1000g双花千里光粉末置于微波-超声装 置中，加入5L的75%的乙醇溶液，设置超声500W常开、微波功率为600W，提取2.5h，过滤，滤液 减压浓缩得浓缩液;将浓缩液加入到XDA-1大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水洗脱， 再用5倍柱体积的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液;洗脱液浓缩，干燥，即得双花千里光总黄酮 113.2g。经UV检测，双花千里光总黄酮的含量为83.6%。
[0016] 具体药效学研究实验： 将lg上述3个实施例中所得的双花千里光总黄酮，分别用30%的乙醇将其溶解定容在 5〇mL容量瓶中，记为A、B、C，备用。
[0017] a.抗脂质过氧化能力的测定 分别于样品管中依次加入lmL 10mg/mL卵磷脂溶液(LLS)、1 mL 0.4mmo 1 /L硫酸亚铁、 lmL上述A、B、C三个样品，混匀，避光于37°C水浴60min，加入2mL三氯乙酸(TCA)-硫代巴比妥 酸(TBA)-HCl混合液，90°0100°C水浴15min，迅速冷却，以3000r/min离心10min，取上清液 在535nm测吸光度(As)，参比管中以lmL蒸馏水代替lmL卵磷脂。抗坏血酸(VC)为阳性对照。 结果见表1。
[0018] 抑制率=[Ac_As/ Ac] X100% 式中:Ac为对照品（以蒸馏水代替样品）的吸光度； As为加入A、B、C三个样品时的吸光度。
[0019] 表1双花千里光总黄酮抗脂质过氧化能力测定(士.土S)
双花千里光总黄酮对Fe2+引发的卵磷脂脂质体过氧化有明显的抑制作用，抑制率随样 品中总黄酮含量的增加而增大。由表1可以看出，双花千里光总黄酮抗脂质过氧化能力与抗 坏血酸相当。
[0020] b.清除超氧阴离子自由基Γ〇2)2能力的测定 采用邻苯三酚自氧化法，取50mmol/L Tris-HCl缓冲溶液(ρΗ=8.2)4.5mL，置于25°C水 浴中预热20min，分别加入lmL样品和0.4mL 25mmol/L邻苯三酸溶液，混勾后于25°C水浴中 反应5min后，加入8mol/L HC1 0.8mL终止反应。自氧化管以lmL蒸馏水代替样品管中样品， 操作方法同样品管，在325nm处测定吸光值，以等体积pH值8.2的Tris-HCl缓冲液为空白。结 果见表2: 超氧阴离子的清除率zUtHU/Ao] X100% 式中:A〇为自氧化管的吸光度； Μ为样品管的吸光度。
[0021]表2双花千里光总黄酮清除超氧阴离子自由基能力测定(i.土S)
双花千里光总黄酮对清除超氧阴离子自由基有较好的清除效果，清除率随样品中总黄 酮含量的增加而增大。由表2可以看出，双花千里光总黄酮对超氧阴离子自由基的清除率尤 为显著，明显强于Vc(在浓度为lmg/mL时，清除率为69.34%)。
[0022] c.对DPPH自由基的清除作用 在试管中分别加入2 . OOmL各浓度的稠李叶总黄酮溶液，编号为A、B、C，加入 2. OOmLO. 2mml/LDPPH乙醇溶液，摇匀，放置30min，以2.OOmL无水乙醇代替样品和2.00mL70% 乙醇混合后作为参比，测定517nm波长处的吸光度(AO。空白对照组以2.OOmL无水乙醇代替 样品，测定517nm波长处的吸光度(A〇)，同时测定2 · OOmL待测液与2 · OOmL无水乙醇在517nm 波长处的吸光度(Aj)。以Vc为对照品。结果见表3: DPPH自由基清除率按一下公式计算： 清除率=[A0 - (Ai-Aj)]/ ΑοΧΙΟΟ% 式中:A〇-不加黄酮的吸光值，Ai-测定液的吸光值，Aj-黄酮的本底吸光值。
[0023] 表3双花千里光总黄酮对DPHH自由基能力测定(?土S)
从表3中可以看出，随着含量的增加，双花千里光总黄酮清除DPPH自由基的能力随着浓 度的增大而增大，有明显的剂量依赖性，实验结果说明双花千里光总黄酮是良好的质子供 体，具有显著的抗氧化作用。
【主权项】
1. 一种双花千里光总黄酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： a. 将双花千里光总黄酮于60°C烘干，得粗粉； b. 将双花千里光粉末置于微波-超声装置中，加入原料重量3~5倍的70~80%的乙醇溶 液，设置超声500W常开、微波功率为600~800W，提取2~3h，过滤，滤液减压浓缩得浓缩液； c. 将浓缩液加入到大孔吸附树脂柱，先用2~3BV的蒸馏水洗脱，再用4~6BV的65~75%的 乙醇洗脱，收集洗脱液； d. 洗脱液浓缩，干燥，即得双花千里光总黄酮。2. 根据权利要求1所述的一种双花千里光总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤c中所 述的大孔吸附树脂类型为AB-8、HPD300、XDA-1中的一种。3. 根据权利要求1或2所述方法制备的双花千里光总黄酮在制备具有抗氧化作用的药 物中的应用。
【文档编号】A61P39/06GK106038644SQ201610306676
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司