【具体实施方式】
[0037]下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为 常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0038]牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂20g，pH7.0_7.2,蒸馏 水1000mL，121°C湿热灭菌30min，主要用于菌种分离与保藏。
[0039]牛肉膏蛋白胨液体培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 58，？!17.0-7.2，蒸馏水 1000mL，121°C 湿热灭菌 30min。
[0040] 发酵培养基:葡萄糖15g，酵母提取物5g，硫酸镁5g，磷酸氢二钾2g，磷酸二氢钾2g， 氯化钙1.2g，pH值7.0-7.2，蒸馏水1000mL，121°C湿热灭菌30min。主要用于发酵。
[0041] 实施例1、利用枯草芽孢杆菌和食用菌菌渣生产生物有机肥
[0042] 本实施例提供了 2种生物有机肥，分别为生物有机肥1和生物有机肥2。具体制备方 法如下：
[0043] 1、制备双孢蘑菇菌渣
[0044] 1.1、二次发酵制备培养料
[0045]双孢蘑菇培养料由以下成分发酵而成:麦秸600kg、干鸡粪400kg、石膏13kg。麦秸 含水量为17%，用乳草机进行处理，得到草料。将干鸡粪加水充分搅拌后放置7天以上，让其 自然降解，含水量为83%。将草料和水混匀，预湿5天，堆成1个大堆闷堆13小时，使其发热温 度到45°C;将草料和鸡粪混合，再加入石膏混合均匀得到堆体物料。堆体物料在发酵仓中进 行堆腐发酵，发酵仓底下纵向平均分布两道长X宽X高= 6mX0.15mX0.13m的通风槽，在 每道通风槽上铺设带孔不锈钢钢板一块，每块不锈钢钢板的长X宽X厚=6m X 0.19m X 0.003m，在每块不锈钢钢板上平均分布400个直径为0.012m的通气孔以利于通风透气，在通 风槽上铺好不锈钢钢板后，钢板上部刚好与仓底平齐。将堆体物料填入发酵仓，填料宽度为 5m，填料高度为3.5m，在温度为30-35°C，相对湿度为60 %的环境中静置发酵7天，得到第一 次发酵堆体物料1，将第一次发酵堆体物料1转入另一个发酵仓，在温度为30_35°C，相对湿 度为60 %的环境中静置发酵6天，得到第一次发酵堆体物料2，将第一次发酵堆体物料2翻倒 入第三个发酵仓，在温度为30_35°C，相对湿度为60%的环境中静置发酵5天，得到第一次发 酵物料。将第一次发酵物料转入另一个发酵仓，通62°C蒸汽6-8小时，每隔4小时换气一次， 在温度为49-51°C，相对湿度为60%的环境中静置发酵7天，45°C通气降温，得到培养料。 [0046] 1.2将培养料倒入菇床，以每吨培养料5~7kg菌种的接种量进行播种，菌种一般选 用美国Sylvan公司的双孢蘑菇S130、双孢蘑菇S608或中国的双孢蘑菇As2796。本实施选用 双孢蘑菇As2796进行双孢蘑菇栽培，播种后常规管理20~30天，菌丝长到料底，以灭菌的草 炭土作为覆土材料进行覆土，含水量70%，厚度3~5cm。进行常规出菇管理，采收三茬鲜菇 (约60~90d)后，结束出菇管理过程。清理菇床获得的培养料和覆土，即为双孢蘑菇菌渣。 [0047] 1.3、将步骤1.2中收集的双孢蘑菇菌渣在60°C条件下，鼓风烘干6-8小时（烘干处 理期间每1小时翻动一次，使之受热均匀），得到烘干样品;将烘干样品放入高速粉碎机中粉 碎，过60目筛，获得双孢蘑菇菌渣干粉。
[0048] 2、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BUABN-01 CGMCC No.9754菌株的分离及鉴 定
[0049] 2.1、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BUABN-01 CGMCC No.9754的分离
[0050] 采取山西省大同市煤矿地区土壤，通过稀释土壤样品，利用加热稀释土壤溶液至 亚致死温度和培养基中的高pH值作为筛选条件，初筛出具有一定抗逆性的菌株。将初筛获 得的具有一定抗逆性的菌株，根据枯草芽孢杆菌能分泌纳豆激酶的特性，制作纤维蛋白平 板，复筛出具有溶纤活性的菌株，编号为BUABN-01。
[0051 ] 2.2、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BUABN-01 CGMCC No.9754的鉴定
[0052] 2.2.1、形态学鉴定
[0053] 将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)BUABN-01 CGMCC Νο·9754(简称BUABN-01 菌株)在牛肉膏蛋白胨培养基上进行培养，BUABN-01菌株的菌落形态如图1所示，菌落表面 初期光滑，后期粗糙不透明，白色至污白色，边缘初期光滑后变粗糙。
[0054]将BUABN-01菌株在光学显微镜下观察，具体实验步骤如下：
[0055] 1)涂片:取两块载玻片，各滴一小滴蒸馏水于玻片中央，用接种环以无菌操作分别 从培养14_16h的枯草芽孢杆菌斜面上挑取少量菌苔加入到水滴中，混匀并涂成薄膜。载玻 片要洁净无油迹;滴蒸馏水和取菌不宜过多;涂片要均匀，不宜过厚。
[0056] 2)干燥:室温（20_25°C)自然干燥。
[0057] 3)固定：固定时通过火焰2-3次即可，此过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以 固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。热固定温度不易过高，以载玻片背面不烫手为 宜，否则会改变甚至破坏细胞形态。
[0058] 4)染色:滴加染液于涂片上(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜），先用吕氏碱性美蓝染 色l-2min，再用石炭酸复红或草酸铵结晶紫染色约lmin。
[0059] 5)水洗:倾去染液，用自来水冲洗，直至涂片上流下的水无色为止。水洗时，不要直 接冲洗液面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不易过急过大，以免涂片薄膜脱落。
[0060] 6)干燥：自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。
[0061] 7)镜检:涂片干燥后镜检。
[0062] 结果如图2所示，BUABN-01菌株细胞大小为(0.7-0.8)μπιΧ(2-3)μπι，着色均匀。培 养24小时以上大量形成芽孢。无荚膜，周生鞭毛，能运动。
[0063] 2.2.2、生长曲线的测定
[0064]将BUABN-01菌株在牛肉膏蛋白胨培养基上37°C活化24h，然后接种到含有10mL牛 肉膏蛋白胨液体培养基的试管中，37°C在摇床中以180rpm的转速进行恒温培养，每隔4h取 菌液进行〇D_的测量，绘制菌株的生长曲线。
[0065]结果如表1和图3所示，BUABN-01菌株在牛肉膏蛋白胨液体培养基中经过9h的对数 增长期后，达到稳定期。
[0066] 表1、BUABN_01菌液不同时间点的OD6q0值 Γηηκ7? L〇〇68j 2.2.3、生理生化测足
[0069] 1)糖醇利用试验
[0070] 用生长18_24h的幼龄菌接种至4种不同碳源(D-葡萄糖、果糖、D-木糖和D-甘露醇） 的培养基中，30°C培养7-14d观察指示剂颜色的变化，若变黄，则表示发酵产酸，试验重复三 次。
[0071] 2)生长温度范围试验
[0072] 取新鲜菌划线接种于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，分别置于温度为4°C、20°C、30 °C、40°C、45°C和50°C的培养箱中进行培养，以在30°C培养箱中进行培养的菌株为阳性对 照，观察菌株能否生长，试验重复三次。
[0073] 3)耐盐试验
[0074]将牛肉膏蛋白胨液体培养基中NaCl的质量浓度分别调至2%、5%、7%和10%，各 取100yL菌