液等量接种到含有不同质量浓度NaCl的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30°C培养 3-7d，接种到含有不同质量浓度NaCl的牛肉膏蛋白胨液体培养基中的菌株分别以不接种的 含有与接种菌株相同质量浓度NaCl的牛肉膏蛋白胨液体培养基为阴性对照，观察菌株生长 情况，试验重复三次。
[0075] 4)生长pH值范围试验
[0076] 将牛肉膏蛋白胨液体培养基用pH计分别调节pH值至5.0、6.0、7.0和8.0,分装试 管，每管5mL，灭菌备用。各取1 OOyL菌液等量接种到不同pH值的牛肉膏蛋白胨液体培养基 中，3 0 °C培养7 d，接种到不同p Η值的牛肉霄蛋白胨液体培养基中的菌株分别以不接种的与 接种菌株相同pH值的牛肉膏蛋白胨液体培养基为阴性对照，观察其生长情况，试验重复三 次。
[0077] 5)柠檬酸盐利用试验
[0078] 取新鲜菌划线接种于柠檬酸盐培养基斜面上，30°C培养3-7d后观察结果。培养基 呈现碱性颜色(指示剂蓝色或桃红色)表明菌株利用了有机酸，记为阳性，否则为阴性，试验 重复二次。
[0079] 6)ν-Ρ试验（甲基乙酰甲醇试验）
[0080] 取100yL菌液接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基中，30°C培养7d，以不接种的磷 酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基为阴性对照。检测时与质量浓度为40%的NaOH溶液等体积混 合，再滴入200yL质量浓度为0.3 %的肌酸溶液，猛烈振荡2-10min后，若培养液出现红色，即 为V-P阳性反应，如未变色则为阴性，试验重复三次。
[0081] 7)接触酶试验
[0082] 取新鲜菌体划线接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，30°C培养24h，将体积百分浓 度为3 %的双氧水直接滴加于菌苔上，观察有无气泡产生，若30s内有气泡产生则为阳性，无 气泡产生即为阴性，试验重复三次。
[0083] 8)吲哚反应试验
[0084]取100yL菌液接种于胰蛋白胨水培养基中，30°C培养2-4d，检测时加入3-5mL的对 二甲基氨基苯甲醛试剂，若在液层界面形成红色圆环，则表明有吲哚产生，记为阳性，否则 记为阴性，试验重复三次。
[0085] 9)淀粉水解试验
[0086] 取新鲜菌以点接法接种于淀粉水解培养基平板上，30°C培养l-2d，检测时在平板 上滴加碘液，覆盖到整个菌落，若菌落周围有无色透明圈出现，则说明淀粉被水解，记为阳 性，试验重复二次。
[0087] 10)卵磷脂酶试验
[0088]用75%的乙醇将新鲜鸡蛋表面消毒，并用经火焰灭菌的镊子将鸡蛋打一个孔，倾 去蛋清，然后用5mL无菌吸管吸出卵黄，加入到融化后冷却至50°C左右的琼脂培养基中，使 卵黄体积含量为培养基总体积的2-3%，混匀后倒平板，点接菌种，30°C培养24h后观察，若 菌落边缘出现浑浊圈者为卵磷脂酶阳性，试验重复三次。
[0089] 11)苯丙氨酸脱氨酶试验
[0090] 取新鲜菌划线接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面上，于37°C培养8-24h观察结果。检 测时在斜面上滴加4-5滴质量浓度为10%的FeCl 3溶液，若培养基呈现出绿色，表明有苯丙 酮酸产生，记为阳性，颜色不变记为阴性，试验重复三次。
[0091] 12)酪氨酸试验
[0092] 将待测菌以点接法接种于酪氨酸试验培养基平板上，30°C培养l-2d后观察，若酪 氨酸变透明记为阳性，否则记为阴性，试验重复三次。
[0093] 13)酪素水解试验
[0094]取新鲜菌以点接法接种于酪素培养基平板上，30°C培养24_48h，检测时观察有无 水解圈产生，若有记为阳性，否则记为阴性，试验重复三次。
[0095] BUABN-01菌株的生理生化结果如表2所示。
[0096] 表2、BUABN_01菌株的生理生化特征
[0097]
[0098]
[0099] 注："+"代表阳性或生长，代表阴性或不生长。
[0100] 2.2.4、分子鉴定
[0101] 将BUABN-01菌株培养后提取DNA，进行16s rDNA的PCR扩增，具体步骤如下：用枪头 挑取活化菌落，溶于l〇〇yL无菌水中，混匀后取lyL作为模板，并加入如下引物、dNTP、Taq酶 和去离子水进行PCR扩增反应，引物序列如下：16 (+)F: 5 '-AGAGTTTGATCCTGGCTCAGAACGAACG CT-3'，16(-)R:5'-TACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCC-3'。反应体系如下： MASTER MIX 25. ΟμL. 模板 DM Ι.?μL 引物 1 (16(+)F) (lOpmol/μ L) 2, ΟμΙ.
[0102] 引物 2 (16(-)R) (lOpmol/μυ 2. ΟμΚ 无菌去离子水 2(λ 〇μ丨. Total 50. ()μL.
[0103] PCR反应条件如下：
[0104]
[0105] 将BUABN-01菌株的16S rDNA序列的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图4 所示:得到约1.5Kb的DNA片段。测序后，通过Blast进行序列比对分析，枯草芽孢杆菌(Baci llus subti 1 is)BUABN_01 CGMCC Νο·9754与枯草芽抱杆菌属（Bacillus subtilis) GenBank Accession Number为AB018486.1的菌株相似性为99.7 %，根据枯草芽抱杆菌 (Bacillus subtilis)BUABN-01 CGMCC No.9754的形态特征和 16S rDNA序列，将其鉴定为 枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis) jUABN-Ol菌株的 16S rDNA序列如SEQ ID No. 1 所不， 核苷酸序列长度为1445bp。
[0106] 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)BUABN-01 CGMCC No.9754已于2014年 10月10 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC)，其在中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.9754,保藏地址为北京 市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，下文简称枯草芽孢杆菌BUABN-01。
[0107] 3、将枯草芽孢杆菌BUABN-01接一环于发酵培养基中，37°C培养24h得到种子液，以 3%的接种量将种子液接到装有1001^发酵培养基的5001^的三角瓶中，37°〇、180印111(旋转 半径20mm)振荡培养48h，得到枯草芽孢杆菌BUABN-01发酵液。该枯草芽孢杆菌BUABN-01发 酵液中枯草芽孢杆菌BUABN-01的菌体含量为10 9cf u/ml。
[0108] 4、生物有机肥的制备
[0109]将步骤1.3的双孢蘑菇菌渣干粉和步骤3的枯草芽孢杆菌BUABN-01发酵液混合均 匀，得到生物有机肥1和生物有机肥2。该生物有机肥1中的枯草芽孢杆菌BUABN-01的菌体含 量为5X 107cfu/g。该生物有机肥2中的枯草芽孢杆菌BUABN-01的菌体含量为1 X 108cfu/g。
[0110] 实施例2、利用植物栽培基质在阳台栽培奶油生菜
[0111] 将实施例1的生物有机肥1、黄土和蛭石按照1:1:2的体积比均匀混合，得到植物栽 培基质1。植物栽培基质1中，枯草芽孢杆菌BUABN-01和双孢蘑菇菌渣的配比为10 7cfu枯草 芽孢杆菌BUABN-01: lg双孢蘑菇菌渣，该双孢蘑菇菌渣的质量以含水量为15%计。植物栽培 基质1中，枯草芽孢杆菌BUABN-01的菌体含量为2X10 7cfu/g。
[0112] 将实施