专利名称：：曲美布汀和n-去甲基曲美布汀的盐的制作方法曲美布汀和N-去曱基曲美布汀的盐本申请要求2006年6月6日申请的U，S.临时专利申请No.60/804,067的优先权。发明领域本发明涉及具有改善的止痛性质的曲美布汀和N-单去甲基曲美布汀的独特的盐，及其相应的立体异构体，其通常可用于治疗内脏痛，更尤其可用于治疗特征在于腹痛的病症，其中所迷腹痛例如发病于患有肠疾病，例如炎症性肠病(IBD)和肠易激综合征(IBS)、糖尿病性胃轻瘫和消化不良的病人中。
背景技术：
：自1969年以来，许多国家都将曲美布汀[3，4，5-三曱氧基苯甲酸2-(二甲基氨基)-2-苯基丁酯及其马来酸盐用于治疗功能性肠紊乱，包括IBS。各种临床研究都说明了曲美布汀对于緩解腹痛的功效(参见，例如Ghidini等，(1986)Singledrugtreatmentforirritablecolon:Rociverineversustrimebutinemaleate.CurrTherRes39:541-548)。已证实曲美布汀可以有效治疗患有功能性肠紊乱，尤其是IBS的病人的急性和慢性腹痛，剂量为300-600mg/日。对于表现出腹痛的儿童也有效。人们认为曲美布汀对于胃肠道的作用一部分上是经由下述作用介导的(i)对于外周ji、k和3阿片受体的拮抗作用，和(ii)胃肠肽，例如胃动素的释放，和调节其它肽，包括影响血管的肠肽、胃泌激素和葡萄蛋白的释放。此外，曲美布汀加速胃排空，诱导肠内迁移运动肌复合体的早期相III，和调节结肠的收缩活性。最近据显示，曲美布汀还能降低动物体内由肠腔扩张所诱导的反射，从而调节内脏的刺激感受性。最近据显示，一氧化氮(NO)产生许多抗炎作用，包括降低白细胞对血管内皮的粘着力(Gauthier等，(1994)Nitricoxideattenuatesleukocyte画endothelialinteractionviaP画selectininsplanchnicischemia-reperfusion.AmJPhysiol267:G562-G568),和抑制各种趋化因子的产生(WalfordandLoscalzo(2003)Nitricoxideinvascularbiology.JThrombHaemost1:2112-2118)。此外，据显示将NO-释放结构部分结合在某些药物，例如NSAIDs、对乙酰氨基酚和熊去氧胆酸中可以提高这些药物的活性，而且与母体药物相比其毒性降低。硫化氢(H2S)是另一种类型的气态介质，其可以产生抗炎作用。最近据显示，H2S释放试剂在内脏痛的模型中显示止痛活性(Distrutti等，(2005)EvidencethathydrogensulfideexertsantinociceptiveeffectsinthegastrointestinaltractbyactivatingKATPchannels,JPharmacolExpTher316:325-335)。此外，据显示H2S是肠组织的平滑肌弛緩剂(参见Teague，B.等，(2002)TheSmoothMuscleRelaxanteffectofHydrogenSulfideInVitro:EvidenceforaPhysiologicalRoletoControlIntestinalContractility.Br.J.Pharmacol.137:139-145)。本发明者在本申请中显示，当使用各种NO-释放结构部分、H2S-释放结构部分或结合的NO-和H2S-释放结构部分形成曲美布汀或N-氮去曱基曲美布汀及其相应的立体异构体时，曲美布汀的活性显著升高。尤其，与单独的曲美布汀(曲美布汀马来酸盐)或其代谢物N-单去甲基曲美布汀相比，或者与单独的NO-释放结构部分、H2S-释放结构部分或结合的NO-和H2S-释放结构部分相比，给药这些NO-释放、H2S-释放或结合的NO-和H2S-释放的曲美布汀和N-单去甲基曲美布汀盐会导致止痛性质改善。这些盐尤其可用于治疗特征在于腹痛的病症，例如肠易激综合征、炎症性肠病、糖尿病性胃轻瘫、消化不良等。发明概述总地来说，提供曲美布汀(TMB)及其活性代谢物N-去甲基曲美布汀(Nor-TMB)的盐，及其相应的立体异构体，(R)-TBM、(S)-TMB、(R)-Nor-TBM和(S)-Nor-TBM,所述盐是使用NO-释放、H2S-释放或结合的NO-和H2S-释放结构部分而形成的。通过与NO-释放、H2S-释放或结合的NO-和H2S-释放结构部分形成盐，令人惊讶地提高了TMB和Nor-TMB的抗疼痛效果。更尤其地，在减轻与结直肠扩张有关的内脏痛中，本发明的TMB和Nor-TMB盐优于单独的TMB和Nor-TMB，并且优于单独的NO-释放、H2S-释放或结合的NO-和H2S-释放结构部分。单独的NO-释放、H2S-释放或结合的NO-和H2S-释放结构部分在单独给药时，对与结直肠扩张有关的内脏痛未显示具有任何显著的作用。因此，在本发明的一个方面中，本发明的盐可用于緩解与伴随有腹痛的消化系统的任何病症有关的疼痛。宽泛地说，本发明的盐具有下列通式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>(式I)其中A为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>N-去曱基曲美布汀，及其相应的立体异构体；和X为NO-释放结构部分、H2S-释放结构部分或结合的NO-和H2S-释放结构部分。在优选的实施方案中，X选自下组<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>p-鞋基^L代苯曱酰胺-硝基精氨酸,-应该理解，任何无毒、有效的NO-释放结构部分、H2S-释放结构部分或结合的NO-和H2S-释放结构部分都可以用在本发明中。优选的化合物为下式那些化合物曲美布汀硝基精氨酸盐(I)曲美布汀半胱氨酰-硝基精氨酸盐(n)曲美布汀硫代氨基曱酰基苯甲酸盐(ni)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>曲美布汀5-苯基-l，2-二硫酮-3-二硫酮(ADT)-硝基精氨酸盐(IV)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>曲美布汀p-羟基硫代苯曱酰胺-硝基精氨酸盐(V)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>N-去甲基曲美布汀硝基精氨酸盐(VI)N-去甲基曲美布汀半胱氨酰-硝基精氨酸盐(VII)N-去甲基曲美布汀硫代氨基甲酰基苯甲酸盐(VIII)N-去曱基曲美布汀5-苯基-l，2-二硫酮-3-硫酮(ADT)-硝基精氨酸盐(IX)N-去甲基曲美布汀p-羟基硫代苯甲酰胺-硝基精氨酸盐(X)此外，还提供了具有通式硝基精氨酸-R的、新的结合的NO-和H;jS-释放结构部分，优选其中R为H2S-释放结构部分。在优选的实施方案中，R选自5-p-羟基苯基-l，2-二硫酮-3-疏酮、半胱氨酸和4-(硫代氨基曱酰基)苯甲酸。此外，提供一种为需要这种治疗的患者治疗内脏痛的方法，其包括向所述患者给药使内脏痛减轻的量的本发明化合物。在一个实施方案中，所述内脏痛为腹痛。在另一个实施方案中，所述腹痛是由于肠疾病，例如炎症性肠病(IBD)、肠易激综合征(IBS)、糖尿病性胃轻瘫和消化不良所引起的。附图简述图l(a)显示使用载体和曲美布汀马来酸盐时，在进行内脏痛感知的大鼠模型中的感知分数(AWR分数)。图l(b)显示使用单独的载体和曲美布汀马来酸盐时，在进行内脏痛感知的大鼠模型中的结直肠压力(mmHg)。图2(a)显示使用单独的栽体和硝基精氨酸时，在进行内脏痛感知的大鼠模型中的感知分数(AWR分数)。图2(b)显示使用单独的载体和硝基精氨酸时，在进行内脏痛感知的大鼠模型中的结直肠压力(mmHg)。图3(a)显示使用载体和曲美布汀硝基精氨酸盐(盐I)时，在进行内脏痛感知的大鼠模型中的感知分数(AWR分数)。图3(b)显示使用载体和曲美布汀硝基精氨酸盐(盐I)时，在进行内脏痛感知的大鼠模型中的结直肠压力(mmHg)。图4(a)显示在采用或不釆用L-NAME进行预处理的情况下，使用载体或曲美布汀硝基精氨酸盐(盐I)时，在进行内脏痛感知的大鼠模型中的感知分数(AWR分数)。图4(b)显示在采用或不采用亚曱蓝进行预处理的情况下，使用栽体或曲美布汀硝基精氨酸盐(盐I)时，在进行内脏痛感知的大鼠模型中的感知分数(AWR分数)。图5(a)显示使用载体、曲美布汀马来酸盐和曲美布汀硫代氨基甲酰基苯甲酸盐(盐III)时，在进行内脏痛感知的大鼠模型中的感知分数(AWR分数)。图5(b)显示使用单独的载体和硫代氨基甲酰基苯甲酸(TBZ)时，在进行内脏痛感知的大鼠模型中的感知分数(AWR分数)。图6是显示4-(硫代氨基甲酰基)苯甲酸(TBZ)和5-(4-氨基-苯基)-[l，2二硫杂环戊二烯-3-硫酮(ADT-OH)的H2S生成情况的条形图。优选实施方案的详细描述现在将针对本文中描述的优选实施方案来描迷本发明。但是应该理解这些实施方案是为了说明本发明的目的，并不对权利要求所定义的本发明的范围构成限制。本发明的化合物含有两个活性部分，(l)TMB或Nor-TMB，或者其立体异构体，和(2)NO-释放结构部分、H2S-释放结构部分，或结合的NO-和H2S-释放结构部分。在许多情况下，可以使用已知的原料和试剂制备本发明的盐。可以将本发明的化合物用于治疗内脏痛，例如与各种疾病有关的腹痛，所述疾病包括但不限于克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、传染性结肠炎(例如，伪膜性结肠炎，例如难辨梭菌性结肠炎、沙门氏菌肠炎、志贺氏杆菌感染、耶尔森氏鼠疫杆菌肠道病、隐孢子虫病(cryptosporidiosis)、微孢子虫病(microspridial)感染和病毒感染)、辐射-诱使的结肠炎、在免疫缺失宿主体内的结肠炎、糖尿病性胃轻瘫和消化不良。取决于待治疗的特定症状或疾病状态，可以如本领域熟练技术人员可容易确定的，以任何适当的、治疗有效的和安全的剂量给药本发明的化合物。最希望的是，以单次或分次的剂型，以每日约1-约2000mg的剂量给药这些化合物，但是可以根据被治疗的患者的体重和症状和所选的特定给药途径而进行必要的改变。但是，最希望的是约0.1-约100mg/kg的剂量水平，优选约5-90mg/kg，更优选约5-50mg/kg。不过可以根据待治疗的人的体重和症状及个体对所述药物的反应，以及所选的药物制剂的类型和进行这种给药的周期和间隔而变化。在一些情况下，低于上述范围的低限的剂量可能过量，而在其它情况下采用更大剂量可能也不会引起任何有害的副作用，只要在整日内将这种大剂量先分成若干小剂量给药即可。可以釆用任何药物制剂形式给药本发明的化合物，其形式取决于给药途径。可以釆用常规方法，使用相容的药学上可接受的赋形剂或载体来制备这些药物组合物。这种组合物的例子包括胶囊、片剂、皮肤贴、锭剂、药片、喷剂、糖浆、粉末、颗粒、凝胶、酏剂、栓剂等，用于制备现用溶液的可注射制剂、直肠、鼻、眼睛、阴道制剂等。优选的给药途径是口服或直肠途径。对于口服给药，可以将含有各种赋形剂，例如微晶纤维素、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸二钙和氨基乙酸的片剂与各种崩解剂，例如淀粉(优选玉米、马铃薯或木薯淀粉)、褐藻酸和复合硅酸盐以及类似聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖、凝胶和阿拉伯树胶的颗粒粘结剂一起使用。此外，可以将润滑剂，例如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠和滑石用于制片目的。类似类型的固体组合物还可以用作凝胶胶囊的填料；该结合中的优选材料还包括乳糖或奶糖，以及高分子量的聚乙二醇。如果希望将含水悬浮液和/或酏剂用于口服给药，则可以将活性成分与增甜剂或增味剂、着色物质，以及如果希望与乳化剂和/或悬浮剂连同诸如水、乙醇、丙二醇、甘油及其各种组合的稀释剂一起结合使用。可以将剂型设计为立即释放、受控释放、长期释放、延迟释放或靶向延迟释放形式。这些术语的定义对所属领域熟练技术人员来说是已知的。此外，通过聚合混合物组合物、涂覆的基质组合物、多颗粒组合物、涂覆的多颗粒组合物、离子交换树脂基组合物、渗透基组合物或可生物降解的聚合组合物可以实现剂型释放特性。不希望受理论的限制，人们认为通过有利的扩散、溶解、侵蚀、离子交换、渗透或其組合可以实现释放。对于肠道外给药而言，可以使用活性盐在芝麻或花生油或含水丙二醇中所形成的溶液。如果必要，应当适当緩冲所述水溶液(优选pH大于8)，首先使液体稀释剂等渗。水溶液适合用于静脉注射目的。通过所属领域熟练技术人员公知的标准药物技术就可以容易地获得处于无菌条件下的所有这些制剂。下列非限制性实施例进一步描述了本发明，并且使本领域普通技术人员能够实现和使用本发明。化合物的制备实施例1曲美布汀硝基精氨酸盐(I)的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>向H-Arg(NO2)-OH(0.1mol)和曲美布汀(0.1mol)的混合物中加入水(200mL)和乙醇(20mL),将所得悬浮液在室温下搅拌至澄清。之后冷冻和冻千所述溶液，得到希望的盐(定量的产率)。工H-NMR(400MHz，DMSO-d6):30.60(t，3H)，1.45-1.75(m,4H)，1,80-1.90(m，2H)，2.25(s，6H)，2.90-3.40(m,2H)，3.75(s，9H)，3.95(m，1H)，4.64(dd，2H)，7.15(s，2H)，7.22(t，1H)，7.35(t，2H)，7.46(d，2H)。"C誦NMR(400MHz，DMSO-d6):89.07,22.8，26.4，28.9，29.1，47.9，56.4，60.8，64.4，65.8,107.3，125.2，127.4，128，0，128.5，141.7，142.5，153.4，158.3，165.9，170.2。mp183。C(dec)。实施例2曲美布汀半胱氨酰-硝基精氨酸盐(II)的合成2-(2-氨基-3-巯基-丙酰基氨基)-5-硝基胍基-戊酸(b)的合成向Boc-Cys(Trt)-OH(3.0mmol)在50mL二曱基甲酰胺中形成的溶液中加入羟基苯并三唑(3.3mmol)和DCC(3.3mmo1)，在0。C下搅拌1小时。向反应混合物中加入H-Arg(NO2)-OtBu(3.0mmol),在0。C下机械搅拌3小时，在室温下搅拌24小时。经过滤之后，减压蒸发滤液以除去溶剂。将如此获得的油状剩余物溶解在乙酸乙酯中；用盐水洗涤有机层、在无水MgS04上干燥、过滤并蒸发溶剂。用溶于二氯甲烷中的三氟乙酸溶液(40。/。TFA，DCM中)处理粗中间体a。1小时之后除去溶剂，得到H-Cys-Arg(N02)-OH。用二乙醚沉淀作为粗剩余物的TFA;将所得固体溶解在水中，緩慢加入lNNaOH，得到为白色固体的2-(2-氨基-3-巯基-丙酰基氨基)-5-硝基胍基-戊酸(b)，过滤回收所述固体。曲美布汀半胱氨酰-硝基精氨酸盐(II)的合成向2-(2-氨基-3-巯基-丙酰基氨基)-5-硝基胍基-戊酸(b;O.lmol)和曲美布汀(0.1mol)的混合物中加入水(200mL)和乙醇(20mL)，在室温下将所得悬浮液搅拌至澄清。之后冷冻和冻干所述溶液，得到希望的盐(定量的产率)。实施例3曲美布汀硫代氨基曱酰基苯甲酸盐(III)的合成3，4，5-三甲氧基苯甲酸2-(二甲基氨基)-2-苯基丁酯4-硫代氨基甲酰基苯曱酸盐(曲美布汀硫代氨基曱酰基苯曱酸盐)的制备向4-(硫代氨基甲酰基)苯甲酸(0.1mol)和曲美布汀(0.1mol)的混合物中加入水。00mL)和乙醇(20mL)，在室温下将所得悬浮液搅拌至澄清。之后冷冻和冻干所述溶液，得到希望的盐(定量的产率)。iH-NMR(400MHz，DMSO-d6):S0.60(t，3H)，1.45-1.75(m，4H)，1.80-1.90(m，2H)，2.28(s，6H)，2.90-3.40(m，2H)，3.69(s，9H)，3.95(m，1H)，4.73(dd，2H)，7.01(s，2H)，7.22(t，1H)，7.35(t，2H)，7.46(d，2H)7.93(dd，4H)，9.65(bs，1H，NH)，10.05(bs，1H，NH)。"C画匪R(400MHz,DMSO-d6):59.07,28.9，56.5，60.8，64.5，65.7，107.1，125.3，127.4，128.1，128.6，129.5,129.7，132.3，141.8，142.5，148.5153.4，154.8，165.9，169.4，172.5，188.6。mp66醫68。C(dec)。4-(硫代氨基曱酰基)苯曱酸的合成按照文献中已经报道的步骤合成所述化合物(Fairfull，E.S.，LoweJ.L.，PeakD.A.J.Chem.Soc.1952，742)，其结合入本文作为参考。NH24-(硫代氨基甲酰基)苯甲酸(2)将3g4-氰基苯甲酸1(20.4mmol)溶解在40mL吡啶中并加入2.1mL三乙胺(20.4mmo1)。以稳定的蒸气形式使干燥的疏化氬通过溶液411。之后将混合物倾入水中并过滤收集固体。从石油醚中重结晶，得到2.51g纯化合物2(产率68%)。MS(ESI)，m/e182.2(M+)。&NMR(DMSO-d6):S7.92(dd，4H)，9.68(s，1H，NH),10.12(s，1H，NH)，13.25(s，1H，OH)。13CNMR(DMSO-d6):6127.3，129.6，132.0，148.5，169.4，188.6。m.p.296-298。C(dec.)实施例4曲美布汀ADT-硝基精氨酸盐(IV)的合成碳酸4_硝基-苯基酯4-(5-硫代-5H-[l，2二硫杂环戊二烯-3-基)-苯基酯(a)的合成向ADT-OH(1.04mmol)在CH2Cl2(10ml)+的搅拌悬浮液中加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP，1.16mmol)和4-硝基苯基氯曱酸酯(1.15mmo1)。在室温下搅拌反应混合物10h。薄层色镨法表明形成希望的产物的反应已进行完全。除去溶剂，用二乙醚处理剩余物；通过过滤收集产物a，其不经进一步纯化即使用(产率81%)。5-硝基胍基-2-[4-(5-硫代-5H-[l,2二硫杂环戊二烯-3-基)-苯氧基羰基-氨基-戊酸(b)的合成向a(1.04mmol)在50mLCH2C12中形成的溶液中加入4-二甲基氨基吡啶(1.16mmol)和H-Arg(NO2)-OtBu(1.02mmol),在室温下搅拌所述溶液20h。之后，用CH2C12稀释反应混合物，用饱和NaHC03和饱和NaCl洗涤，并在MgS04上干燥。用三氟乙酸的二氯甲烷溶液(40%TFA，在DCM中)处理粗中间体。lh之后除去溶剂，得到作为粗剩余物的产物b，用二乙醚沉淀所述产物b;将所得固体溶解在水中并緩慢加入lNNaOH，得到为白色固体的5-硝基胍基-2-[4-(5-硫代-5H-[l，2二硫杂环戊二烯-3-基)-苯氧基羰基-氨基卜戊酸(b)，通过过滤对其进行回收。曲美布汀ADT-硝基精氨酸盐(IV)的合成向5-硝基胍基-2-[4-(5-硫代-5H-[l，2二硫杂环戊二烯-3-基)-苯氧基羰基-氨基卜戊酸(b;O.lmol)和曲美布汀(O.lmol)的混合物中加入水(200mL)和乙醇(20mL)，在室温下将所得悬浮液搅拌至澄清。之后冷冻和冻干所述溶液，得到希望的盐(定量的产率)。实施例5曲美布汀p-羟基硫代苯甲酰胺-硝基精氨酸盐(V)的合成碳酸4-硝基-苯基酯4-硫代氨基甲酰基-苯基酯(a)的合成向p-羟基硫代苯甲酰胺(1.04mmol)在CH2Cl2(10ml)+所形成的搅拌悬浮液中加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP，1.16mmol)和4-硝基苯基氯甲酸酯(1.15mmo1)。在室温下搅拌反应混合物10。薄层色傳法表明2o2形成希望的产物的反应进行完全。除去溶剂并用二乙醚处理剩余物；通过过滤来回收产物a，其不经进一步纯化即使用(产率81%)。5-硝基胍基-2-(4-硫代氨基甲酰基-苯氧基羰基氨基)-戊酸(b)的合成向a(1.04mmol)在50mLCH2C12中所形成的溶液中加入4-二甲基氨基吡咬(1.16mmol)和H-Arg(NO2)-OtBu(1.02mmol),在室温下搅拌所述溶液20h。之后，用CH2C12稀释反应混合物，用饱和NaHC03和饱和NaCl洗涤，并在MgS04上干燥。用三氟乙酸的二氯甲烷溶液(40%TFA,在DCM中)处理粗中间体。lh之后除去溶剂，得到作为粗剩余物的产物b，用二乙醚沉淀所述产物；将所得固体溶解在水中并緩慢加入INNaOH，得到为白色固体的5-硝基胍基-2-(4-硫代氨基曱酰基-苯氧基羰基氨基)-戊酸(b)，通过过滤对其进行回收。曲美布汀p-羟基^5克代苯甲酰胺-硝基精氨酸盐(V)的合成向5-硝基胍基-2-(4-硫代氨基甲酰基-苯氧基羰基氨基)-戊酸(b;0.1mol)和曲美布汀(0.1mol)的混合物中加入水(200mL)和乙醇(20mL),在室温下将所得悬浮液搅拌至澄清。之后冷冻和冻干所述溶液，得到希望的盐(定量的产率)。实施例6N-去曱基曲美布汀硝基精氨酸盐(VI)的合成向H-Arg(NO2)-QH(0.1mol)和N-去甲基曲美布汀(0.1mol)的混合物中加入水(200mL)和乙醇(20mL)，在室温下将所得悬浮液搅拌至澄清。之后冷冻和冻干所述溶液，得到希望的盐(定量的产率)。力-醒R(400MHz，DMSO-d6):80.72(t，3H)，1.45-1.75(m，4H)，1.80-1.90(m，2H)，2.07(s，3H)，2.90-3.40(m，2H),3.75(s，9H)，3.95(m，1H)，4.64(dd，2H)，7.07(s，2H)，7.22(t，1H)，7.35(t，2H)，7.51(d，2H)。13C-NMR(400MHz,DMSO-d6):S9.07，22.8,26.4，28.9，29.1，47.9，56.4，60.8，64.4,65.8，107.3，125.2，127.4，128.0，128.5，141.7，142.5，153.4，158.3，165.9，170.2。m.p.78國80。C(dec)N-去曱基曲美布汀的合成对文献中描述的步骤进行轻微变型，据此合成所述化合物(MartinA.，Figad^reB.，SaivinS.,HouinG.,ChomardJ.M.,CahiezG.Arzneim.國Forsch./DrugRes.2000(50)，544)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>苯基甘氨酸乙酯盐酸盐(2)H2NCOOHS0C12COOEtHCIEtOH将22mLSOCl2滴加到30g苯基甘氨酸1(198.5mmol)在200mL无水乙醇中所形成的溶液中。自发产生温和的回流，其持续3h。使反应冷却至室温并搅拌过夜。减压除去溶剂，得到41.8g为白色粉末的2(产率98%)。MS(ESI)，m/e179.8(M+)。N-(苯基亚甲基)甘氨酸乙酯(3)COOEtPhCHOMgS04,Et3NCH2C12N、乂COOEt在室温、氮气氛下，向10.6g苯基甘氨酸乙酯盐酸盐2(49.3mmo1)、lOOmL二氯甲烷、5ml苯曱醛(49.2mmol)和30g硫酸镁(249.2mmo1)的混合物中加入21.25mL三乙胺(152.46mmo1)。搅拌17h之后，用C盐过滤多相反应混合物，并用lOOmL二氯甲烷洗涤所述固体。减压蒸发溶剂，用80mL二乙醚和80mL水搅拌如此获得的粘稠油，直至溶解。经倾析之后，在硫酸钠上干燥有机层并真空蒸发溶剂。得到为浅黄色油的亚胺酯3(12.4g，产率94%)。MS(ESI)，m/e268.3(M+)。h苯基-:2-(N-苯基亚甲基)-丁酸乙酯(4)1.NaH,THF2.Etl,3免CuCl2、在氮气氛、搅拌下，将12.39g(46.4mmo1)3在64mL无水THF中形成的溶液滴加到2.04氢化钠(60%的油分散物，85mmol)、192mgCuCl2和128mL无水THF的混合物中。在室温下经9h之后，将4.66mL(57.7mmo1)乙基碘迅速加入到反应混合物中。持续搅拌18h，将0.86mL无水乙醇小心地加入到反应混合物中。在搅拌过程中，反应的颜色由黄色变为红色，再变为橙色，之后变为绿色。真空浓缩反应混合物之后，加入95.8mL二乙醚和160mL水，搅拌所得混合物10分钟，之后用C盐过滤。在倾析之后用水洗涤有机层3次，并在硫酸钠上干燥，之后减压蒸发二乙醚，得到5.82g4(产率43%)。所得的为黄-橙色油的粗产物足够纯，其不经进一步纯化即可使用。MS(ESI)，m/e296.1(M+)。2-氨基-2-苯基丁酸乙酯盐酸盐(5)在室温下将5.8g4(19.73mmo1)、17.6mLTHF、35.17mL二乙醚、44mL水和2.64mL浓HC1搅拌24h。真空下从反应混合物中除去溶剂并用二乙醚洗涤所得水溶液2次。之后减压蒸发掉水，得到3.8g为橙色油的5(产率79%)。2-氨基-2-苯基丁酸乙酯(6)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>将粗产物5溶解在22mL无水THF中并加入2.64mL三乙胺。搅拌30分钟之后，用C盐过滤所得混合物并用100mL无水二乙醚洗涤固体。使用旋转蒸发器浓缩溶剂，得到2.49g为蓝色油的6(产率77%)。MS(ESI)，m/e208(M+)。2-甲酰基氨基-2-苯基丁酸乙酯(7)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>在搅拌下将12.72mL甲酸以及随后的25.38mL乙酸酐滴加到2，49g(U.(Bmmol)胺6中。在室温下经过15h之后减压除去溶剂，得到3.09g为绿色粘稠油的7(产率100%)。Rf=0.85(CHC13/MeOH9.5:0.5)MS(ESI)，m/e236(M+)。2-甲基氨基-2-苯基丁醇(8)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>向900mg(23.71mmol)氢化铝锂(LiA旧4)在30mL无水THF中所形成的悬浮液中滴加3.09g(13.15mmol)之前制备的7在18mL无水THF中所形成的溶液。回流4h之后使反应混合物冷却至室温并引入额外量的氢化铝锂(900mg)。持续回流4h,之后在-10。C、剧烈搅拌下緩慢加入饱和硫酸镁水溶液，直至形成沉淀。过滤固体并用THF洗涤若干次。减压蒸发有机溶剂直至得到水溶液。向溶液中加入100mL二乙醚，在硫酸钠上干燥有机层。蒸发溶剂，得到1.84g为黄色油的8(产率78%)。MS(ESI)，m/e180.1(M+)。(2-甲基氨基-2-苯基丁基)3,4，5-三甲氧基苯曱酸(N-去曱基曲美布汀(9)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>在-78。C下，向1.84g8(10.3mmol)在28mL无水THF中所形成的溶液中滴加4.11mLn-BuLi(2.5mol/L，在己烷中)。15分钟之后,加入2.31g(lO.Olmmol)3，4，5-三甲氧基苯曱酰氯在15.8mL无水THF中所形成的溶液。之后使反应混合物保温至-30。C(约lh)，并小心地加入19mL乙酸。真空除去溶剂，将55mL二乙醚和55mL水加入到之前获得的油中。在搅拌至完全溶解之后，倾析所得的混合物并用固体Na2C03完全碱化(alcalinized)水层，用二乙醚再次萃取。用碳酸钠饱和水溶液和盐水洗涤有机层2次，之后在硫酸钠上干燥。真空蒸发二乙醚并在硅胶柱(乙酸乙酯/正己烷，7:3)上用色镨法纯化酯9，得到1.4g纯的N-去甲基曲美布汀9(产率490/。)，其为浅黄色油。MS(ESI)，m/e374.1(M+)。NMR(CDC13):S0.72(t，3H)，1.7(s，1H，NH)，1.75-1.9(m，2H)，2.6(s，3H)，3.76(s，6H)，3.80(s，3H)，4.50(dd，2H)，7.07-7.44(m，7H)。13C醒R(DMSO-d6):S7.4,28.5，28.6，55.9，60.1，61,1，66.3，100.5，126.5，127.0，129.3，128.0，142.0，142.5，152.7，165.6。实施例7N-去曱基曲美布汀半胱氨酰-硝基精氨酸盐(VII)的合成2-(2-氨基-3-巯基-丙酰基氨基)-S-硝基胍基-戊酸(b)的合成向Boc-Cys(Trt)-OH(3.0mmol)在50mL二曱基甲酰胺中所形成的溶液中加入羟基苯并三唑(3.3mmol)和DCC(3.3mmo1)，并在0。C下搅拌lh。向反应混合物中加入H-Arg(NO2)-OtBu(3.0mmol),在0。C下机械搅拌3h，在室温下搅拌24h。过滤之后减压蒸发滤液以除去溶剂。将如此获得的油状剩余物溶解在乙酸乙酯中；用盐水洗涤有机层、在无水MgS04上干燥、过滤并蒸发溶剂。用三氟乙酸的二氯甲烷溶液(40%TFA，在DCM中)处理粗中间体a。lh之后除去溶剂，得到H-Cys-Arg(N02)-OH。用二乙醚沉淀作为粗剩余物的TFA;将所得固体溶解在水中并緩慢加入INNaOH，得到为白色固体的2-(2-氨基-3-巯基-丙酰基氨基)-5-硝基胍基-戊酸(b),通过过滤对其进行回收。N-去甲基曲美布汀半胱氨酰-硝基精氨酸盐(VII)的合成向2-(2-氨基-3-巯基-丙酰基氨基)-5-硝基胍基-戊酸(b;O.lmol)和N-去甲基曲美布汀(0.1mol)的混合物中加入水(200mL)和乙醇(20mL)，在室温下将所得悬浮液搅拌至澄清。之后冷冻和冻干所述溶液，得到希望的盐(定量的产率)。实施例83，4，5-三曱氧基苯甲酸2-(甲基氨基)-2-苯基丁酯4-硫代氨基甲酰基苯甲酸酯(N-去甲基曲美布汀硫代氨基甲酰基苯甲酸盐(VIII)的制备将4-(硫代氨基甲酰基)苯甲酸(0.1mol)和去甲基曲美布汀(0.1mo1)的混合物溶解在乙醇(20mL)和乙腈(20mL)中，之后加入水(200mL)，并在室温下将所得悬浮液搅拌至澄清。然后冷冻和冻干所述溶液，得到希望的盐(定量的产率)。力-匪R(400MHz，DMSO-d6):60.72(t，3H)，1.70-1.80(m，4H)，1.80画1.卯(m，2H)，2.08(s，3H)，2.90-3.40(m，2H)，3.69(s，9H),3.95(m，1H)，4.41(dd，2H)，7.07(s，2H)，7.22(t，1H)，7.33(t，2H)，7.52(d，2H)7.93(dd，4H)，9,63(bs，1H，NH)，10.02(bs，1H，NH)。"C-NMR(400MHz，DMSO-d6):39.07，28.7，56.5,60.5，64.6，65.8，107.2，125.5，127.2，128.2，128.6，129.5，129.4，132,5，141.9，142.4，148.5153.5，154.7，165.7,169.4,172.5，188.6。mp65-67。C(dec.)实施例9N-去甲基曲美布汀ADT-硝基精氨酸盐(IX)的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>碳酸4-硝基-苯酯4-(5-硫代-5H-[l，2二硫杂环戊二烯-3-基)-苯酯(a)的合成向ADT-OH(1.04mmol)在CH2Cl2(10ml)的搅拌悬浮液中加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP，1.16mmol)和4-硝基苯基氯甲酸酯(1.15mmol)。在室温下搅拌反应混合物10h。薄层色谦法表明形成希望的产物的反应进行完全。除去溶剂，用二乙醚处理剩余物；通过过滤回s流产物a，其不经进一步纯化即使用(产率81%)。5-硝基胍基-2-[4-(5-硫代-5H-[l，2I二硫杂环戊二烯-3-基)-苯氧基羰基-氨基-戊酸(b)的合成向a(1.04mmol)在50mLCH2C12中所形成的溶液中加入4-二甲基氨基吡咬(1.16mmol)和H-Arg(NO2)-OtBu(1.02mmol)，在室温下搅拌所述溶液20h。之后将反应混合物用CH2Ch稀释，用饱和NaHC03和饱和NaCl洗涤，并在MgS04上干燥。用三氟乙酸的二氯甲烷溶液(40%TFA，在DCM中)处理粗中间体。lh之后除去溶剂，得到作为粗剩余物的产物b，用二乙醚对其进行沉淀；将所得固体溶解在水中并緩慢加入INNaOH,得到为白色固体的5-硝基胍基-2-[4-(5-硫代-5H-[l，2二硫杂环戊二烯-3-基)-苯氧基羰基-氨基卜戊酸(b)，通过过滤对其进行回收。N-去甲基曲美布汀ADT-硝基精氨酸盐(IX)的合成向5-硝基胍基-2-[4-(5-硫代-511-[1,2二硫杂环戊二烯-3-基)-苯氧基羰基-氨基卜戊酸(b;O.lmol)和N-去甲基曲美布汀(0.1mol)的混合物中加入水^00mL)和乙醇(20mL)，并在室温下将所得悬浮液搅拌至澄清。之后冷冻和冻干所述溶液，得到希望的盐(定量的产率)。实施例10N-去甲基曲美布汀p-羟基硫代苯甲酰胺硝基-精氨酸盐(X)的合成碳酸4-硝基-苯酯4-硫代氨基曱酰基-苯酯(a)的合成向p-羟基硫代苯甲酰胺(1.04mmol)在CH2Cl2(10ml)+所形成的搅拌悬浮液中加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP，1.16mmol)和4-硝基苯基氯曱酸酯(1.15mmo1)。在室温下搅拌反应混合物10。薄层色镨法表明形成希望的产物的反应进行完全。除去溶剂并用二乙醚洗涤剩余物；通过过滤回收产物a，其不经进一步纯化即使用(产率81%)。5-硝基胍基-2-(4-硫代氨基甲酰基-苯氧基羰基氨基)-戊酸(b)的合成向a(1，04mmol)在50mLCH2C12中所形成的溶液中加入4-二甲基氨基吡啶(1.16mmol)和H-Arg(NO2)-OtBu(1.02mmol)，在室温下搅拌溶液20h。之后用CH2C12稀释反应混合物，用饱和NaHC03和饱和NaCl洗涤并在MgS04上干燥。用三氟乙酸的二氯甲烷溶液(40。/。TFA，在DCM中)处理粗中间体。lh之后除去溶剂，得到作为粗剩余物的产物b，用二乙醚沉淀所述产物b;将所得固体溶解在水中并緩慢加入INNaOH,获得为白色固体的5-硝基胍基-2-(4-硫代氨基曱酰基-苯氧基羰基氨基)-戊酸(b)，通过过滤对其进行回收。N-去曱基曲美布汀p-羟基硫代苯曱酰胺-硝基精氨酸盐(X)的合成向5-硝基胍基-2-(4-硫代氨基曱酰基-苯氧基羰基氨基)-戊酸(b;O.lmol)和N-去甲基曲美布汀(0.1mol)的混合物中加入水(200mL)和乙醇(20mL)，并在室温下将所得悬浮液搅拌至澄清。之后冷冻和冻干所述溶液，得到希望的盐(定量的产率)。化合物试验实施例11在进行内脏痛感知的大鼠模型中，对盐I曲美布汀硝基精氨酸盐与单独的曲美布汀和单独的硝基精氨酸进行比较将进行内脏痛感知的大鼠模型，患有肠易激综合征的预诊断模型用在下列实施例中。将大鼠(雌性，Wistar,200-250g，得自CharlesRiver，Monza，意大利)收容在塑料笼子中，并维持在于7.00AM开始光照的12-小时光照/黑暗周期的受控条件下。自由使用自来水和标准的实验室食物。在试验之前对大鼠进行单独训练，即每天在树脂玻璃笼子中度过2-3小时，持续2-3天。使他们适应运动-限制的环境。在进行结直肠扩张(CRD)记录之前停止喂食12小时。试验在清醒的大鼠中以隐蔽的方式(blindmanner)每个动物的给药特性。试验那天，给大鼠吸入乙醚，从肛门边缘将2cm长的乳胶充气囊插入到直肠内达2cm并固定在尾部底部。经由双管套管将充气嚢与压力传感器连接起来，用以通过计算机(PowerLabPC,A.D.仪器，Milford，MA，USA)持续监测直肠压力，并且与使充气嚢充气/放气的注射器连接。之后将大鼠收容在放置于升高的PlexiglasTM平台上的小笼子(20x8x8cm)中，使其保持清醒并适应1小时。从镇静作用中恢复过来之后，对进行了CRD步骤和行为响应的动物进行试验。在试验之前的那个晚上，给充气嚢充气并放置过夜，这样乳胶会伸展，充气嚢变得很顺应。将开始于0.4ml并以0.4ml的增量达到1.6ml的水施用于20秒的CRD，每隔5分钟进行一次。为了实现结肠参数和观察作用的精确测量，将每个强度下的扩张重复2次，对每个动物的数据进行平均以进行分析。每个动物进行两组CRD。在第一序列的CRD(0.4mL-1.6mL水)进行20分钟之后，将药物给药至腹膜内(i.p.)并进行第二轮CRD。评估和比较第一和第二轮CRD的行为响应。使用半-定量记分(l)，通过测量腹部撤离反射(AWR)来评估对CRD的行为响应。AWR是一种类似于内脏运动反射的自然的运动反射，但是其与后者相比具有很大的好处，其不需要进行腹部手术来将记录电极和电线移植在腹部肌肉壁上，这种手术会导致附加的致敏作用(参见Ness，T.J.andGebhart，G.F.(1990)Pain41:167-234，其结合入本文作为参考)。AWR的测量包括由不知情的观察者视觉观察动物对分级CRD的响应，和根据之前在Al-Chaer，E.D.等，(2000)Gastroenterology19:1276-85中描述的行为等级来指定AWR分数，所述文献结合入本文作为参考，在该文献中等级0对应于对CRD无行为响应，等级l对应于在刺激开始时有简单的头部运动，之后不动，等级2对应于緩和的腹肌收缩，但是大鼠并未将腹部抬离平台，等级3对应于腹肌的强烈收缩，腹部被抬离平台，等级4对应于由身体弓起和腹部和骨盆和阴嚢抬起所显示的腹肌的严重收缩。使用15只禁食大鼠来确定曲美布汀马来酸盐、硝基精氨酸和曲美布汀硝基精氨酸盐对结肠的依从性和应激性的影响。为了研究给药曲美布汀马来酸盐、硝基精氨酸和曲美布汀硝基精氨酸盐是否会降低由CRD所诱导的疼痛，在第一序列的CRD(载体处理)之后，用10mg/kg剂量的曲美布汀马来酸盐i.p.、6mg/kg剂量的硝基精氨酸i.p和16mg/kg剂量的曲美布汀硝基精氨酸盐i.p.治疗5只大鼠，之后重复第二轮CRD。这些试验的结果示于图l(a)、2(a)和3(a)中。为了确定曲美布汀马来酸盐、硝基精氨酸和曲美布汀硝基精氨酸盐对结肠平滑肌的影响，由结肠-直肠内的体积和压力荻得CRD过程中的依从性并表达为mL/mmHg。这些结果示于图l(b)、2(b)和3(b)中。为了确定NO在曲美布汀硝基精氨酸盐的内脏止痛效果中的角色，进行如下试验在将曲美布汀硝基精氨酸盐(16mg/kgi,p.)或含有亚甲蓝的载体(lmg/kgi.p.)、L-NAME(25mg/kgi.v.)或载体给药之前预处理大鼠10分钟。结果示于图4(a)和4(b)中。提供的所有数据都为平均值士SEM，试样量为5只大鼠/组；通过Studentt-检验进行数据的统计比较。如星号所指示的，关联可能性小于(p值)5%被认为是显著的。图l(a)、2(a)和3(a)显示，在緩解响应结直肠扩张而引起的内脏痛中曲美布汀硝基精氨酸盐比曲美布汀马来酸盐或硝基精氨酸更有效。但是，如图l(b)、2(b)和3(b)所示的，所述化合物中没有任何一个是特别有效的。图4(a)和4(b)显示，用一氧化氮合酶(L-NAME)抑制剂或可溶性鸟苷酸环化酶(亚曱蓝)抑制剂进行预处理大大破坏了曲美布汀硝基精氨酸盐的内脏止痛效果。这些结果表明，从曲美布汀硝基精氨酸盐中释放一氧化氮，和可溶性鸟苷酸环化酶的刺激作用显著促进该化合物的内脏止痛作用。因此，曲美布汀硝基精氨酸盐可用于治疗与各种消化道炎症，以及特征在于加剧的内脏痛的功能性胃肠紊乱(带有或不带有伴随的炎症)，例如肠易激综合征、消化不良等有关的腹痛。实施例12在进行内脏痛感知的大鼠模型中，对盐III曲美布汀硫代氨基甲酰基苯甲酸盐与单独的曲美布汀和单独的硫代氨基甲酰基苯甲酸盐进行比较如实施例11中所述的方式进行试验，只是用载体、曲美布汀马来酸盐(10mg/kg)，或等摩尔剂量的曲美布汀硫代氨基甲酰基苯甲酸盐(盐III)或单独的硫代氨基甲酰基苯甲酸盐对包括5只大鼠的各个组进行治疗。图5(a)和5(b)显示在减轻响应结直肠扩张而引起的内脏痛中，曲美布汀硫代氨基甲酰基苯甲酸盐比曲美布汀马来酸盐或硫代氨基甲酰基苯甲酸盐更有效。因此，曲美布汀硫代氨基甲酰基苯甲酸盐可用于治疗与各种消化道炎症，以及特征在于加剧的内脏痛的功能性胃肠紊乱(带有或不带有伴随的炎症)，例如肠易激综合征、消化不良等有关的腹痛。实施例13由4-(硫代氨基曱酰基)苯曱酸和5-(4-氨基-苯基)-[l，2二硫杂环戊二烯-3-硫酮产生H2S试验了两个化合物，5-(4-氨基-苯基)-[l，2二硫杂环戊二烯-3-硫酮(ADT-OH)和4-(硫代氨基甲酰基)苯甲酸(TBZ)在三个不同的H2S生成条件下所生成的H2S。尤其，测量了在1小时内由lmM浓度的ADT-OH和TBZ所产生的H2S。在三个条件下试验H2S的释放(i)当化合物在緩冲液中时，(ii)当化合物在肝组织匀浆中时，和(iii)当化合物在肝組织匀浆以及H2S合成抑制剂中时，其中所述抑制剂阻碍酶國胱硫醚-Y-裂合酶(PAG-DL-炔丙基甘氨酸；2mM)抑制剂的活性。结果示于表6中。星号(*)表明相对于相应的由载体处理的组有显著的(p〈0.05)增长。阿尔法(a)代表在PAG存在下进行培养所导致的H2S合成的显著降低。权利要求1.下述通式的化合物A+·X-其中A为或及其相应的立体异构体；和X为NO-释放结构部分、H2S-释放结构部分，或结合的NO-和H2S-释放结构部分。2.权利要求l的化合物，其中X选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>3.根据权利要求2的化合物，其中所述化合物为曲美布汀精氨酸盐。4.根据权利要求2的化合物，其中所述化合物为曲美布汀半胱氨酰-硝基精氨酸盐。5.根据权利要求2的化合物，其中所述化合物为曲美布汀硫代氨基曱酰基苯甲酸盐。6.根据权利要求2的化合物，其中所述化合物为曲美布汀5-苯基-1，2-二硫酮-3-硫酮-硝基精氨酸盐。7.根据权利要求2的化合物，其中所述化合物为曲美布汀p-羟基硫代苯甲酰胺-硝基精氨酸盐。8.根据权利要求2的化合物，其中所述化合物为N-去曱基曲美布汀硝基精氨酸盐。9.根据权利要求2的化合物，其中所述化合物为N-去甲基曲美布汀半胱氨酰-硝基精氨酸盐。10.根据权利要求2的化合物，其中所述化合物为N-去曱基曲美布汀硫代氨基曱酰基苯曱酸盐。11.根据权利要求2的化合物，其中所述化合物为N-去甲基曲美布汀5-苯基-l,2-二硫酮-3-硫酮-硝基精氨酸盐。12.根据权利要求2的化合物，其中所述化合物为N-去甲基曲美布汀p-幾基硫代苯甲酰胺-硝基精氨酸盐。13.—种药物组合物，其包含如权利要求1-10中任一项的化合物和药学上可接受的赋形剂或载体。14.一种对需要这种治疗的患者进行内脏痛治疗的方法，包括将减轻内脏痛的量的、根据权利要求1-10中任一项的化合物给药于所述患者。15.如权利要求14中所述的方法，其中所迷内脏痛为腹痛。16.如权利要求15中所述的方法，其中所述腹痛是由于肠疾病，例如炎症性肠病(IBD)和肠易激综合征(IBS)、糖尿病性胃轻瘫和消化不良所引起的。17.具有通式硝基精氨酸-R的化合物，其中R为H2S-释放结构部分，所述化合物用于制备曲美布汀和N-单去甲基-曲美布汀的盐。18.如权利要求17中所述的化合物，其中R选自5-p-羟基苯基-1,2-二硫酮-3-硫酮、半胱氨酸和4-(硫代氨基甲酰基)苯甲酸。19.权利要求1-10中所述的化合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于治疗需要这种治疗的患者的内脏痛。20.如权利要求19中所述的用途，其中所述内脏痛为腹痛。21.如权利要求20中所述的用途，其中所述腹痛是由于肠道疾病，例如炎症性肠病(IBD)和肠易激综合征(IBS)、糖尿病性胃轻瘫和消化不良所引起的。全文摘要提供了具有改善的止痛性质、可用于治疗内脏痛的曲美布汀和N-单去甲基曲美布汀的独特的盐，及其相应的立体异构体。本发明的盐尤其可用于治疗特征在于腹痛，例如炎症性肠病(IBD)和肠易激综合征(IBS)、糖尿病性胃轻瘫和消化不良的病症。文档编号C07C219/14GK101489986SQ200780026454公开日2009年7月22日申请日期2007年6月6日优先权日2006年6月6日发明者G·卡里安多,G·西里诺,J·L·沃雷斯,V·桑塔加达申请人:安泰碧治疗公司