具有抗白血病活性的化合物及其制备方法

专利名称：具有抗白血病活性的化合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种具有抗白血病活性的化合物及制备该种化合物得到的一种具有抗白血病活性的中间体，以及上述化合物和中间体的制备方法。

背景技术：
白血病是造血干/祖细胞恶性克隆增殖性疾病，已成为危害人类生命的十大恶性肿瘤之一。据最新估计，每年全球被报道的白血病有260,000例，死亡20,000例。我国白血病发病率为4.7/10万人，在恶性肿瘤中居第七位。其中急性淋巴细胞白血病(ALL)已成为儿童恶性肿瘤中最常见的一种(肖志坚等.Cancer Research Clinic，2006，15(1)78-80)。目前在NCI定义的一线抗白血病药物中绝大多数是细胞毒类药物，这类药物的作用机制决定了它不可避免的胃肠道刺激、肝肾毒性及骨髓抑制等毒副作用。另一种不是以干扰DNA合成为作用机制的非细胞毒性抗肿瘤药物，如以细胞有丝分裂、细胞信号转导、细胞凋亡和血管生成为靶点的抗肿瘤药物表现出较强的选择性。
酪氨酸蛋白激酶是体内广泛存在的一系列催化ATP的γ磷酸基转移到特定的酪氨酸酚羟基上的蛋白质，可分为受体型和非受体型两种。酪氨酸蛋白激酶在细胞内信号传导通路中占据可十分重要的地位，它调节着细胞生长、分化、增殖、凋亡、T细胞和B细胞的活化、对外界刺激的反应等一系列生理生化过程。然而，蛋白酪氨酸激酶功能失调则会引发生物体内一系列疾病(Konstantina等Drugs of the Future，2003，28(7)679-697)。已有资料显示超过50％的原癌基因和癌基因产物都具有酪氨酸蛋白激酶的活性。它们的异常表达导致细胞增殖调节紊乱，进而导致肿瘤发生。例如，在正常细胞中，磷酸化的酪氨酸数量很少，仅占磷酸化氨基酸的0.5％，但是一系列证据表明，在带有酪氨酸激酶活性的癌基因病毒转化的细胞中，蛋白质上磷酸化的酪氨酸增加10倍。因此，以酪氨酸蛋白激酶为作用靶点设计合成新型抗肿瘤药物已成为当前抗肿瘤药物研究开发的新方向。
非受体酪氨酸蛋白激酶JAKs(Janus tyrosine kinase)发现于1990年。JAKs通过与信号转道及转录活化蛋白(Signal Transducers and Activators ofTranscription protein，STATs)相偶联形成JAKs-STATs通路而起始细胞因子信号传导。JAKs-STATs通路负反馈调节的反常可引起造血性疾病、自免疫性疾病、炎性疾病及癌症。研究发现，在癌细胞和转染癌基因的细胞中发现JAKs-STATs的表达增高；在多种肿瘤细胞系及其转染细胞系中，如脑瘤、乳腺癌、头颈癌、前列腺癌、肝癌及肺癌等，STAT3持续活化；持续激活的STAT3或促进细胞增殖，或阻碍细胞凋亡，从而使细胞发生恶性转化导致肿瘤(Alexander等，Current Biology，2002，12R288-R290.)。
与许多细胞中普遍存在的JAK1、JAK2和TYK2不同，JAK3具有明显的特异性。它高浓度的存在于自然杀伤细胞(NK)、正常的胸腺细胞、血小板及肥大细胞，并且可在T、B细胞中诱导产生。JAK3特异性地与带有γ链的受体如IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13、IL-15及IL-21受体相偶联，并可被它们活化。由于JAK3包含于T细胞的活化、增殖及功能维持过程中，所以选择JAK3为靶点将有助于治疗T细胞诱发的病理性疾病(Cetkovic-Cvrlje1等，CurrentPharmaceutical Design，2004，101767-1784)。
大量研究表明，JAK3在正常淋巴细胞的发育及功能维持方面起着重要的作用，JAK3的过度表达与急性淋巴细胞白血病有直接关系，如在儿童急性淋巴细胞白血病细胞中发现大量表达的JAK3。有文献报道，JAK3是人类白血病细胞中重要的靶点(Cetkovic-Cvrlje1等，Current Pharmaceutical Design，2004，101767-1784；Cetkovic-Cvrlje1等Arch Immunol Ther Exp，2004，5269-82)。


发明内容
本发明的目的在于提供一种以JAK3为靶点的抗白血病化合物。
本发明的另一目的是提供上述化合物的制备方法。
本发明还一目的是提供制备上述以JAK3为靶点的抗白血病化合物的具有抗白血病活性的中间体。
本发明的又一个目的是提供上述中间体化合物的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现上述目的 一种具有抗白血病活性的化合物，其化学结构如式I
其中，R1为H、OCOCH3或OCOAr1，式中Ar1为苯基、苯丙烯基、4-甲基苯丙烯基、4-氟苯丙烯基、4-氯苯丙烯基、3-氯苯丙烯基、2-氯苯丙烯基、3-氟-4-甲氧基苯丙烯基或呋喃丙烯基；R2为H、OCH3、CH3CONH或Ar2CONH，式中Ar2为苯基或苯丙烯基；R3为H、OCH3、CH3CONH、Ar3CONH，式中Ar3为苯基、苯丙烯基、4-氟苯丙烯基或呋喃丙烯基。符合式I结构通式的化合物在本发明中被称为4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯酚酯类化合物。
本发明式I所示的4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯酚酯类化合物的制备方法，其步骤为 将6位或7位或6位和7位被H、OCH3、CH3CONH或Ar2CONH取代的4-(4’-羟基苯基)-氨基喹唑啉在四氢呋喃和三乙胺的混合液中溶解，式中Ar2为苯基或苯丙烯基，冰浴冷却下加入乙酰氯，取代苯胺基喹唑啉乙酰氯摩尔比为1∶3，保持0℃反应1～24h，然后倒入饱和NaHCO3水溶液中，用乙酸乙酯提取，经干燥、过滤、减压除去溶剂即得。
所述四氢呋喃是溶剂。
所述三乙胺是催化剂。
上述反应以6位或7位或6位和7位被H、OCH3、CH3CONH或Ar2CONH取代的4-(4’-羟基苯基)-氨基喹唑啉制得目标化合物，实际上是以取代的苯甲酸甲酯或乙酯为起始原料，经涅门托夫斯基反应(Niementowski)、氯代、烃化及中和反应，再通过酯化得到目标化合物。
上述制备式I类化合物的方法举例如下 例1
其中，R6为H、OCH3、CH3CONH或Ar1CONH，式中Ar1为苯基、苯丙烯基、4-甲基苯丙烯基、4-氟苯丙烯基、4-氯苯丙烯基、3-氯苯丙烯基、2-氯苯丙烯基、3-氟-4-甲氧基苯丙烯基或呋喃丙烯基。
例2

其中，R7为H、OCH3、CH3CONH或Ar2CONH，式中Ar2为苯基或苯丙烯基、4-氟苯丙烯基或呋喃丙烯基。
在合成式I所述化合物的过程中，得到一种具有抗白血病活性的中间体化合物B，其结构通式如式II
其中，R4为NH2或NO2；R5为4-氟苯基、4-氯苯基、2-氯苯基、3-氟-4-甲氧基苯基或α-呋喃基。符合式II结构通式的化合物在本发明中被称为N-[4-(苯基氨基)喹唑啉-7-基]酰胺类化合物。
本发明式II的N-[4-(苯基氨基)喹唑啉-7-基]酰胺类化合物制备方法步骤如下 将4-氟苯基或4-氯苯基或2-氯苯基或3-氟-4-甲氧基苯基或α-呋喃基7-氨基喹唑啉溶解于适量四氢呋喃中，然后加入NaHCO3水溶液，取代苯胺基喹唑啉∶NaHCO3的摩尔比1∶5，冰浴冷却下滴加乙酰氯，取代苯胺基喹唑啉∶乙酰氯摩尔比为1∶5，保持0-5℃反应1～24h，倒入冰水中，过滤，即得。
上述反应是用4-氟苯基、或4-氯苯基或2-氯苯基或3-氟-4-甲氧基苯基或α-呋喃基7-氨基喹唑啉制得目标化合物，实际上是以取代的苯甲醛为起始原料，经克脑文格尔缩合反应(Knoevenagel)、酯化、还原反应得到目标化合物。
举例说明说下
其中，R8为H、OCH3、CH3CONH或Ar3CONH，式中Ar3为苯基、苯丙烯基、4-甲基苯丙烯基、4-氟苯丙烯基、4-氯苯丙烯基、3-氯苯丙烯基、2-氯苯丙烯基、3-氟-4-甲氧基苯丙烯基或呋喃丙烯基。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果 本发明的优点在于使用市场易得的原料取代的苯甲酸甲酯或者取代的苯甲酸，经过五步反应得到目标化合物，为进一步以酪氨酸激酶JAK3为靶点进行抗肿瘤药物的研究奠定了基础。
本发明的另一个优点在于操作简单，生产成本低，不仅适用于实验室小规模制备，也适用于工业化大规模生产。

具体实施例方式 以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案。
实施例1 4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯基乙酸酯(Z1) 称取4-(4’-羟基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉1.19g(0.004mol)(注4-(4’-羟基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉的制备如文献报道)放入50ml带温度计和滴液漏斗的三口瓶中，加入20ml四氢呋喃及2ml三乙胺，磁子搅拌，冰浴冷至0℃。用滴液漏斗滴加乙酰氯0.852ml(0.012mol)，保持0℃反应6h，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)。待反应完毕，搅拌下倒入饱和NaHCO3溶液中。乙酸乙酯(20ml/次)提取三次，水洗至水层为中性，无水MgSO4干燥。过滤，减压除去溶剂，得类白色粉末0.58g，产率43.1％。m.p.268.8～269.9℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)89.49(s，1H，NH)，8.45(s，1H，2-H)，7.84(s，1H，5-H)，7.80(d，2H，2’，6’-H，J＝8.8Hz)，7.19(s，1H，8-H)，7.15(d，2H，3’，5’-H，J＝8.8Hz)，3.96(s，3H，OCH3)，3.93(s，3H，OCH3)，2.28(s，1H，CH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3268(vNH)，3078(v＝CH)，2837(vOCH3)，1746(vC＝O)，1625(vC＝N)，1580(vC＝C)，1506(vC＝C)。
C18H17N3O4计算的元素分析值为C63.17，H5.05，N12.38。实测值C63.43，H5.12，N12.18。
实施例2 4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯基苯甲酸酯(Z2) 称取4-(4’-羟基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉0.594g(0.002mol)放入50ml带温度计和滴液漏斗的三口瓶中，加入20ml四氢呋喃及2ml三乙胺，磁子搅拌，冰浴冷至0℃。用滴液漏斗滴加苯甲酰氯1.16ml(0.01mol)，保持0℃反应4h，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)。待反应完毕，搅拌下倒入饱和NaHCO3中，析出大量鲜黄色固体，抽滤。滤饼用20ml乙酸乙酯溶解，滤出不溶的部分，红外烘箱干燥，得类白色粉末0.545g，产率67.9％。m.p.226.5～229.2℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ9.57(s，1H，NH)，8.48(s，1H，2-H)，8.16(m，2H，ArH)，7.88(d，2H，J＝8.9Hz)，7.86(s，1H，5-H)，7.77(t，1H，J＝7.4Hz)，7.63(t，2H，J＝7.8Hz)，7.33(d，2H，J＝8.9Hz)，7.21(s，1H，8-H)，3.98(s，3H，OCH3)，3.94(s，3H，OCH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3607(vNH)，3065(v＝CH)，2835(vOCH3)，1735(vC＝O)，1625(vC＝N)，1581(vC＝C)，1506(vC＝C)。
C23H19N3O4计算的元素分析值为C68.82，H4.77，N10.47。实测值C68.82，H4.48，N10.47。
实施例3 (E)-4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯基-3-苯基丙烯酸酯盐酸盐(Z3) 称取(E)-3-苯基-4-氨基苯基丙烯酸酯1.195g(0.005mol)置于250ml带有回流冷凝管的茄形瓶中，加入50ml异丙醇及50ml丙酮，磁子搅拌，待完全溶解后加入1.118g(0.005mol)4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，加热回流，逐渐有固体生成，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)，4h反应完全。停止反应，室温冷却，抽滤，干燥，得浅黄色固体1.982g，产率85.7％。m.p.285.9～287.2℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ11.3(s，1H，NH)，8.82(s，1H，2-H)，8.29(s，1H，5-H)，7.48(d，1H，J＝16Hz)，7.82(m，2H，ArH)，7.72(d，2H，J＝8.6Hz)，7.84(m，3H，ArH)，7.35(d，2H，J＝7.6Hz)，7.34(s，1H，8-H)，6.91(d，1H，J＝16Hz)，3.98(s，3H，OCH3)，3.97(s，3H，OCH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3433(vNH)，3032(v＝CH)，3001(v＝CH)，2838(vOCH3)，1726(vC＝O)，1632(vC＝N)，1574(vC＝C)，1507(vC＝C)。
C25H22ClN3O4·HCl计算的元素分析值为C64.72，H4.78，N9.06。实测值C64.59，H4.86，N8.97。
(E)-4-氨基苯基-3-苯基丙烯酸酯的获得 称取(E)-4-硝基苯基-3-苯基丙烯酸酯2.15g(0.008mol)放入250ml带温度计、回流冷凝管及机械搅拌的三口瓶中，加入120ml丙酮、40ml水、2.24g(0.04mol)还原铁粉及0.01ml浓盐酸，油浴加热，搅拌。薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)，5h反应完全，停止反应，趁热过滤，用饱和NaHCO3调节pH＝7，生成亮黄色固体，抽滤得粗品。干燥后用丙酮重结晶得浅黄色粉末1.57g，产率82.6％。
(E)-4-硝基苯基-3-苯基丙烯酸酯的获得 称取苯丙烯酸2.96g(0.02mol)置于100ml带温度计及机械搅拌的三口瓶中，加入8ml吡啶，室温搅拌，待固体全溶后冰浴冷至0℃，用滴液漏斗滴加苯磺酰氯2.54ml(0.02mol)，滴加完毕后撤去冰浴，缓慢升至室温搅拌15min，冰浴冷至0℃，将4-硝基苯酚2.78g(0.02mol)溶于15ml吡啶并滴入反应液，滴加完毕后加入1.2g DMAP，缓慢升至室温搅拌，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)，1.5h反应完全。停止反应，将反应液倒入200ml碎冰水中，产生大量白色固体，抽滤，干燥，乙醇-水重结晶后得白色粉末1.93g，产率34.7％。
实施例4 (E)-4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯基-3-(4-氟苯基)丙烯酸酯盐酸盐(Z4) 称取(E)-4-氨基苯基-3-(4-氯苯基)丙烯酸酯1.028g(0.004mol)置于100ml带有回流冷凝管的茄形瓶中，加入40ml异丙醇及40ml丙酮，磁子搅拌，待完全溶解后加入0.894g(0.004mol)4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，加热回流，逐渐有固体生成，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)，4.5h反应完全。停止反应，室温冷却，抽滤，干燥，得浅黄色固体1.81g，产率94.2％。m.p.210.4～211.8℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ11.1(s，1H，NH)，8.80(s，1H，2-H)，8.17(s，1H，5-H)，7.91(d，1H，J＝16Hz)，7.90(m，2H，ArH)，7.75(d，2H，J＝8.8Hz)，7.35(d，2H，J＝8.8Hz)，7.34(m，2H，ArH)，7.30(s，1H，8-H)，6.89(d，1H，J＝16Hz)，4.01(s，3H，OCH3)，4.00(s，3H，OCH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3033(v＝CH)，3000(v＝CH)，2839(vOCH3)，1727(vC＝O)，1628(vC＝N)，1573(vC＝C)，1501(vC＝C)。
C25H21ClFN3O4·HCl计算的元素分析值为C62.31，H4.39，N8.72。实测值C62.14，H4.35，N8.67。
(E)-4-氨基苯基-3-(4-氟苯基)丙烯酸酯的获得 称取(E)-4-硝基苯基-3-(4-氟苯基)丙烯酸酯1.72g(0.006mol)放入250ml带温度计、回流冷凝管及机械搅拌的三口瓶中，加入90ml丙酮、30ml水、1.18g(0.06mol)还原铁粉及0.1ml浓盐酸，油浴加热，搅拌。薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)，5h反应完全，停止反应，趁热过滤，用饱和NaHCO3调节PH＝7，生成亮黄色固体，抽滤得粗品。干燥后用丙酮重结晶得浅黄色粉末1.18g，产率76.5％。m.p.145.1～147.0℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)7.84(m，2H，ArH)，7.89(d，1H，J＝16Hz))，7.27(t，2H，ArH，J＝8.5Hz))，6.82(d，2H，ArH，J＝8.5Hz)，6.75(d，1H，J＝16Hz)，6.57(d，2H，ArH，J＝8.5Hz)，4.98(s，2H，NH2)。
(E)-4-硝基苯基-3-(4-氯苯基)丙烯酸酯的制备方法同实施例1。
实施例5 (E)-4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯基-3-(4-甲基苯基)丙烯酸酯盐酸盐(Z5) 称取(E)-4-氨基苯基-3-(4-甲基苯基)丙烯酸酯1.265g(0.005mol)置于100ml带有回流冷凝管的茄形瓶中，加入40ml异丙醇及40ml丙酮，磁子搅拌，待完全溶解后加入1.118g(0.005mol)4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，加热回流，逐渐有固体生成，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)，4.5h反应完全。停止反应，室温冷却，抽滤，干燥，得浅黄色固体2.06g，产率86.5％。m.p.251.3～252.9℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ11.1(s，1H，NH)，8.80(s，1H，2-H)，8.17(s，1H，5-H)，7.85(d，1H，J＝16Hz)，7.71(m，4H，ArH)，7.33(m，2H，ArH)，7.29(s，2H，ArH)，7.27(s，1H，8-H)，6.82(d，1H，J＝16Hz)，4.01(s，3H，OCH3)，3.99(s，3H，OCH3)，2.36(s，3H，CH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3361(vNH)，3028(v＝CH)，3005(v＝CH)，1731(vC＝O)，1632(vC＝N)，1573(vC＝C)，1505(vC＝C)。
C26H24ClN3O4·HCl计算的元素分析值为C65.34，H5.06，N8.79。实测值C65.17，H4.90，N8.55。
(E)-4-氨基苯基-3-(4-甲基苯基)丙烯酸酯的获得 称取(E)-4-硝基苯基-3-(4-甲基苯基)丙烯酸酯1.70g(0.006mol)放入250ml带温度计、回流冷凝管及机械搅拌的三口瓶中，加入105ml丙酮、35ml水、1.18g(0.03mol)还原铁粉及0.1ml浓盐酸，油浴加热，搅拌。薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)，5h反应完全，停止反应，趁热过滤，用饱和NaHCO3调节pH＝7，生成亮黄色固体，抽滤得粗品。干燥后用丙酮重结晶得浅黄色粉末1.31g，产率86.3％。m.p.138.9-141.1℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)7.75(d，1H，J＝16Hz)，7.02(d，2H，J＝3.5Hz，ArH)，7.25(d，2H，J＝3.5Hz，ArH)，6.81(m，2H，ArH)，6.72(d，1H，J＝16Hz)，6.57(m，2H，ArH)，4.99(s，2H，NH2)，2.49(s，3H，CH3)。
(E)-4-硝基苯基-3-(4-甲基苯基)丙烯酸酯的制备方法同实施例1。
实施例6 (E)-4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯基-3-(4-氯苯基)丙烯酸酯盐酸盐(Z6) 称取(E)-4-氨基苯基-3-(4-氯苯基)丙烯酸酯1.37g(0.005mol)置于100ml带有回流冷凝管的茄形瓶中，加入40ml异丙醇及40ml丙酮，磁子搅拌，待完全溶解后加入1.118g(0.005mol)4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，加热回流，逐渐有固体生成，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)，5.5h反应完全。停止反应，室温冷却，抽滤，干燥，得浅黄色固体2.28g，产率91.7％。m.p.234.5～237.1℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ11.4(s，1H，NH)，8.83(s，1H，2-H)，8.31(s，1H，5-H)，7.89(d，1H，J＝16Hz)，7.86(d，2H，J＝8.4Hz)，7.77(d，2H，J＝8.8Hz)，7.54(d，2H，J＝8.4Hz)，7.35(m，2H，ArH)，7.32(s，1H，8-H)，6.92(d，1H，J＝16Hz)，4.02(s，3H，OCH3)，4.00(s，3H，OCH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3422(vNH)，3025(v＝CH)，2933(v＝CH)，2834(vOCH3)，1733(vC＝O)，1633(vC＝N)，1572(vC＝C)，1508(vC＝C)。
C25H21Cl2N3O4·HCl计算的元素分析值为C60.25，H4.25，N8.43。实测值C59.96，H4.21，N8.22。
(E)-4-氨基苯基-3-(4-氯苯基)丙烯酸酯的获得 称取(E)-4-硝基苯基-3-(4-氯苯基)丙烯酸酯1.82g(0.006mol)放入250ml带温度计、回流冷凝管及机械搅拌的三口瓶中，加入130ml丙酮、42ml水、1.18g(0.06mol)还原铁粉及0.1ml浓盐酸，油浴加热，搅拌。薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)，5h反应完全，停止反应，趁热过滤，用饱和NaHCO3调节pH＝7，生成亮黄色固体，抽滤得粗品。干燥后用丙酮重结晶得浅黄色粉末1.41g，产率85.9％。m.p.148.8～149.5℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)7.79(s，2H，ArH)，7.79(d，1H，J＝16Hz)，7.49(s，2H，ArH)，6.81(s，1H，ArH)，6.81(d，1H，J＝16Hz)，6.58(s，2H，ArH)，4.99(s，2H，NH2)。
(E)-4-硝基苯基-3-(4-氯苯基)丙烯酸酯的制备方法同实施例1。
实施例7 (E)-4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯基-3-(3-氯苯基)丙烯酸酯盐酸盐(Z7) 称取(E)-4-氨基苯基-3-(3-氯苯基)丙烯酸酯0.447g(0.002mol)置于100ml带有回流冷凝管的茄形瓶中，加入30ml异丙醇及3ml丙酮，磁子搅拌，待完全溶解后加入0.547g(0.002mol)4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，加热回流，逐渐有固体生成，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)，5.5h反应完全。停止反应，室温冷却，抽滤，干燥，得浅黄色固体0.886g，产率88.9％。m.p.210.3-212.5℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ11.3(s，1H，NH)，8.83(s，1H，2-H)，8.30(s，1H，5-H)，7.95(s，1H，ArH)，7.87(d，1H，J＝16Hz)，7.76(m，3H，ArH)，7.52(m，2H，ArH)，7.35(m，2H，ArH)，7.33(s，1H，8-H)，7.01(d，1H，J＝16Hz)，4.02(s，3H，OCH3)，4.00(s，3H，OCH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3372(vNH)，3032(v＝CH)，2937(v＝CH)，2833(vOCH3)，1735(vC＝O)，1633(vC＝N)，1574(vC＝C)，1514(vC＝C)。
C25H21Cl2N3O4·HCl计算的元素分析值为C60.25，H4.25，N8.43。实测值C59.98，H4.33，N8.48。
(E)-4-氨基苯基-3-(3-氯苯基)丙烯酸酯的制备方法同实施例1。
实施例8 (E)-4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯基-3-(2-氯苯基)丙烯酸酯盐酸盐(Z8) 称取(E)-4-氨基苯基-3-(2-氯苯基)丙烯酸酯1.37g(0.005mol)置于100ml带有回流冷凝管的茄形瓶中，加入50ml异丙醇及50ml丙酮，磁子搅拌，待完全溶解后加入1.118g(0.005mol)4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，加热回流，逐渐有固体生成，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)，5h反应完全。停止反应，室温冷却，抽滤，干燥，得浅黄色固体2.04g，产率82.1％。m.p.219.5～222.1℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ11.5(s，1H，NH)，8.82(s，1H，2-H)，8.39(s，1H，5-H)，8.13(d，1H，J＝16Hz)，8.07(dd，1H，J＝7.6，1.6Hz)，7.79(d，2H，J＝7Hz)，7.59-7.46(m，3H，ArH)，7.38(s，1H，8-H)，7.38(d，2H，J＝6.8Hz)，6.99(d，1H，J＝16Hz)，4.03(s，3H，OCH3)，4.00(s，3H，OCH3。
IR(KBr，v/cm-1)3410(vNH)，3008(v＝CH，1737(vC＝O)，1631(vC＝N)，1573(vC＝C)，1506(vC＝C)。
C25H21Cl2N3O4·HCl计算的元素分析值为C60.25，H4.25，N8.43。实测值C60.02，H4.19，N8.30。
(E)-4-氨基苯基-3-(2-氯苯基)丙烯酸酯的获得同实施例1。
(E)-4-硝基苯基3-(2-氯苯基)丙烯酸酯的获得 称取(E)-3-(2-氯苯基)丙烯酸5.11g(0.028mol)置于100ml带温度计及机械搅拌的三口瓶中，加入40ml吡啶，室温搅拌，待固体全溶后冰浴冷至0℃，用滴液漏斗滴加苯磺酰氯3.56ml(0.028mol)，滴加完毕后撤去冰浴，缓慢升至室温搅拌15min，冰浴冷至0℃，将4-硝基苯酚3.90g(0.028mol)溶于15ml吡啶并滴入反应液，滴加完毕后加入1.68g DMAP，缓慢升至室温搅拌，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)，1.5h反应完全。停止反应，将反应液倒入200ml碎冰水中，产生大量白色固体，抽滤，干燥，乙醇-水重结晶后得白色粉末2.09g，产率24.6％。m.p.138.5～139.0℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)8.33(m，2H，ArH)，8.15(d，1H，J＝16Hz)，8.07(dd，1H，ArH J＝1.5，8.0Hz)，7.60(dd，1H，ArH，J＝1.5，8.0Hz)，7.55(m，2H，ArH)，7.50(td，1H，ArH，J＝1.5，8.0Hz)，7.46(m，1H，ArH)，7.01(d，1H，J＝16Hz)。
实施例9 (E)-4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酸酯盐酸盐(Z9) 称取(E)-4-氨基苯基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酸酯1.435g(0.005mol)置于100ml带有回流冷凝管的茄形瓶中，加入40ml异丙醇及40ml丙酮，磁子搅拌，待完全溶解后加入1.118g(0.005mol)4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，加热回流，逐渐有固体生成，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)，5h反应完全。停止反应，室温冷却，抽滤，干燥，得浅黄色固体2.24g，产率87.4％。m.p.226.4～227.7℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ11.6(s，1H，NH)，8.82(s，1H，2-H)，8.43(s，1H，5-H)，7.84(d，1H，J＝16Hz)，7.88(m，3H，ArH)，7.61(d，1H，J＝8.4Hz)，7.40(s，1H，8-H)，7.32(d，2H，J＝8.8Hz)，7.32(m，1H，ArH)，6.82(d，1H，J＝16Hz)，4.00(s，3H，OCH3)，3.99(s，3H，OCH3)，3.91(s，3H，OCH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3423(vNH)，3025(v＝CH)，2938(v＝CH)，2839(vOCH3)，1736(vC＝O)，1633(vC＝N)，1574(vC＝C)，1514(vC＝C)。
C26H23Cl2FN3O5·HCl计算的元素分析值为C61.00，H4.53，N8.21。实测值C60.88，H4.47，N8.04。
(E)-4-氨基苯基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酸酯的获得 称取(E)-4-硝基苯基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酸酯1.91g(0.006mol)放入250ml带温度计、回流冷凝管及机械搅拌的三口瓶中，加入130ml丙酮、42ml水、3.64g(0.06mol)还原铁粉及0.3ml浓盐酸，油浴加热，搅拌。薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)，5h反应完全，停止反应，趁热过滤，用饱和NaHCO3调节pH＝7，生成亮黄色固体，抽滤得粗品。干燥后用丙酮重结晶得浅黄色粉末1.47g，产率85.3％。m.p.112.5～114.2℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)7.74(m，1H，ArH)，7.72(d，1H，J＝16Hz)，7.55(d，1H，J＝9.0Hz，ArH)，7.21(t，1H，J＝9.0Hz，ArH)，6.81(m，2H，ArH)，6.71(d，1H，J＝16Hz)，6.58(m，2H，ArH)，4.98(s，2H，NH2)，3.90(s，3H，OCH3)。
(E)-4-硝基苯基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酸酯的制备方法同实施例1。
实施例10 (E)-4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯基-3-(α-呋喃基)丙烯酸酯盐酸盐(Z10) 称取(E)-4-氨基苯基-3-(α-呋喃基)丙烯酸酯1.145g(0.005mol)置于100ml带有回流冷凝管的茄形瓶中，加入40ml异丙醇及40ml丙酮，磁子搅拌，待完全溶解后加入1.118g(0.005mol)4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉，加热回流，逐渐有固体生成，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝4∶1)，5h反应完全。停止反应，室温冷却，抽滤，干燥，得浅黄色固体1.81g，产率80.0％。m.p.211.3～213.6℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ11.3(s，1H，NH)，8.81(s，1H，2-H)，8.26(s，1H，5-H)，7.92(d，1H，α-H，J＝1.6Hz)，7.75(d，2H，J＝8.8Hz)，7.71(d，1H，J＝16Hz)，7.33(d，2H，J＝8.8Hz)，7.32(s，1H，8-H)，7.09(d，1H，β-H，J＝3.2Hz)，6.69(m，1H，β-H)，6.46(d，1H，J＝16Hz)，4.02(s，3H，OCH3)，4.00(s，3H，OCH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3446(vNH)，3052(v＝CH)，2999(v＝CH)，2839(vOCH3)，1733(vC＝O)，1630(vC＝N)，1575(vC＝C)，1509(vC＝C)。
C23H20ClN3O5·HCl计算的元素分析值为C60.86，H4.44，N9.26。实测值C60.62，H4.48，N9.16。
(E)-4-氨基苯基-3-(α-呋喃基)丙烯酸酯的获得 称取(E)-4-硝基苯基-3--(α-呋喃基)丙烯酸酯1.82g(0.007mol)放入250ml带温度计、回流冷凝管及机械搅拌的三口瓶中，加入150ml丙酮、50ml水、1.96g(0.035mol)还原铁粉及0.3ml浓盐酸，油浴加热，搅拌。薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)，5h反应完全，停止反应，趁热过滤，用饱和NaHCO3调节pH＝7，生成亮黄色固体，抽滤得粗品。干燥后用丙酮重结晶得浅黄色粉末1.26g，产率77.7％。m.p.111.4～112.7℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)7.88(s，1H，α-H)，7.59(d，1H，J＝16Hz)，7.02(d，2H，β-H，J＝3.5Hz)，6.81(d，2H，ArH，J＝8.5Hz)，6.66(m，1H，β-H)，6.56(d，2H，ArH，J＝8.5Hz)，6.37(d，1H，J＝16Hz)，4.99(s，2H，NH2)。
(E)-4-硝基苯基-3-(α-呋喃基)丙烯酸酯的制备方法同实施例1。
实施例11 N-[4-(苯基氨基)喹唑啉-7-基]乙酰胺(Y1) 在带温度计、滴液漏斗的50ml三口瓶中加入4-苯基氨基-7-氨基喹唑啉0.472g(0.002mol)及20ml THF，室温搅拌至全溶，加入NaHCO30.84g(0.01mol)，冰浴冷却至0℃，滴加5ml THF稀释的乙酰氯0.71ml(0.01mol)，滴加完毕后控制在0～5℃继续反应3h，薄层层析监测反应终点(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)，待反应完全后将反应液倒入冰水中，析出白色絮状固体，抽滤，红外烘箱干燥。得类白色粉末0.21g，产率37.8％。m.p.245.3～247.9℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ10.34(s，1H，NH)，9.65(s，1H，NH)，8.52(s，1H，2-H)，8.46(d，1H，5-H，J＝9.0Hz)，8.12(d，1H，8-H，J＝1.9Hz)，7.84(d，2H，J＝7.8Hz)，7.71(dd，1H，6-H，J＝2.0，9.0Hz)，7.38(m，2H，ArH)，7.12(t，1H，J＝7.4Hz)，2.14(s，3H，CH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3364(vNH)，3289(vNH)，3032(v＝CH)，2853(vCH3)，1685(vC＝O)，1610(vC＝N)，1560(vC＝C)，1500(vC＝C)。
C16H14N4O计算的元素分析值为C69.05，H5.07，N20.13。实测值C69.08，H5.18，N20.34。
4-苯基氨基-7-氨基喹唑啉的制备如文献报道，其中7-硝基喹唑啉-4-酮按如下方法制得。
7-硝基喹唑啉-4-酮的获得 向装有回流冷凝管的50ml圆底烧瓶中加入0.91g(5mmol)2-氨基-4-硝基苯甲酸和2.2ml(50mmol)的甲酰胺，置于微波反应器中，在微波功率为70W下反应7min，将反应液倾入50ml冰水中，抽滤，干燥得黄色粉末0.81g，产率85.2％。m.p.274.4～275.6℃。
实施例12 N-[4-(苯基氨基)喹唑啉-6-基]乙酰胺(Y2) 在带温度计、滴液漏斗的50ml三口瓶中加入4-苯基氨基-6-氨基喹唑啉0.472g(0.002mol)及20ml THF，室温搅拌至全溶，加入NaHCO30.84g(0.01mol)，冰浴冷却至0℃，滴加5ml THF稀释的乙酰氯0.71ml(0.01mol)，滴加完毕后控制在0-5℃继续反应3h，薄层层析监测反应终点(CH2Cl2∶CH3OH＝15∶1)，待反应完全后将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯提取(20ml/次)三次，合并乙酸乙酯层，无水硫酸镁干燥。滤出硫酸镁，减压除去乙酸乙酯，得浅黄色固体0.251g，产率45.0％。m.p.226.6～228.7℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ10.2(s，1H，NH)，9.76(s，1H，NH)，8.64(s，1H，2-H)，8.49(s，1H，5-H)，7.76(m，4H，ArH)，7.37(s，2H，ArH)，7.10(s，1H，ArH)，2.12(s，3H，CH3)。
IR(KBr，v/cm-1)3145(vNH)，2926(vCH3)，1681(vC＝O)，1610(vC＝N)，1548(vC＝C)，1498(vC＝C)。
C16H14N4O计算的元素分析值为C69.05，H5.07，N20.13。实测值C68.99，H5.22，N20.26。
4-苯基氨基-6-氨基喹唑啉的获得如文献报道，其中6-硝基喹唑啉-4-酮也可按如下方法获得。
6-硝基喹唑啉-4-酮的获得 向装有回流冷凝管的50ml圆底烧瓶中加入0.91g(5mmol)2-氨基-5-硝基苯甲酸和2.6ml(70mmol)的甲酰胺，置于微波反应器中，在微波功率为70W下反应11min，将反应液倾入50ml冰水中，抽滤，干燥得黄色粉末0.80g，产率84.2％。
实施例13 N-[4-(苯基氨基)喹唑啉-7-基]苯甲酰胺(Y3) 在带温度计、滴液漏斗的50ml三口瓶中加入4-苯基氨基-7-氨基喹唑啉0.236g(0.001mol)及10ml THF，室温搅拌至全溶，加入NaHCO30.42g(0.005mol)，冰浴冷却至0℃，滴加2.5ml THF稀释的苯甲酰氯0.58ml(0.005mol)，滴加完毕后控制在0-5℃继续反应6h，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝3∶1)，待反应完全后将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯提取(20ml/次)三次，合并乙酸乙酯层，无水硫酸镁干燥。滤出硫酸镁，减压除去乙酸乙酯，得浅黄色固体0.113g，产率33.1％。m.p.250.0～251.7℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ11.5(s，1H，NH)，11.1(s，1H，NH)，8.87(s，1H，2-H)，8.86(d，1H，5-H，J＝6.8Hz)，8.46(s，1H，8-H)，8.15(d，1H，6-H，J＝6.8Hz)，8.06(d，2H，J＝6.0Hz)，7.73(d，2H，J＝6.0Hz)，7.66(t，1H，J＝6.0Hz)，7.59(t，2H，J＝6.0Hz)，7.49(t，2H，J＝6.4Hz)，7.33(t，1H，J＝6.0Hz)。
IR(KBr，v/cm-1)3419(vNH)，3226(vNH)，3054(v＝CH)，1617(vC＝O)，1635(vC＝N)，1568(vC＝C)，1495(vC＝C)。
C21H16N4O计算的元素分析值为C74.10，H4.74，N16.46。实测值C73.98，H4.78，N16.66。
实施例14 N-[4-(苯基氨基)喹唑啉-6-基]苯甲酰胺(Y4) 在带温度计、滴液漏斗的50ml三口瓶中加入4-苯基氨基-6-氨基喹唑啉0.472g(0.002mol)及20ml THF，室温搅拌至全溶，加入NaHCO30.84g(0.01mol)，冰浴冷却至0℃，滴加5ml THF稀释的苯甲酰氯0.71ml(0.01mol)，滴加完毕后控制在0-5℃继续反应3h，薄层层析监测反应终点(CH2Cl2∶CH3OH＝20∶1)，待反应完全后将反应液倒入冰水-乙酸乙酯中，产生黄色固体，抽滤。得浅黄色固体0.15g，产率22.1％。m.p.265.7～268.1℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ10.6(s，1H，NH)，9.78(s，1H，NH)，8.89(d，1H，5-H，J＝1.5Hz)，8.56(s，1H，2-H)，8.28(d，1H，7-H，J＝1.5Hz)，8.06(m，2H，ArH)，8.02(dd，1H，7-H，J＝2.5，9Hz)，7.83(m，2H，ArH)，7.81(d，1H，8-H)，7.59(m，3H，ArH)，7.39(t，2H，ArH J＝7.0Hz)，7.12(t，1H，ArH，J＝7.5Hz)。
IR(KBr，v/cm-1)3470(vNH)，3402(vNH)，3057(v＝CH)，1658(vC＝O)，1605(vC＝N)，1535(vC＝C)，1497(vC＝C)。
C21H16N4O计算的元素分析值为C74.10，H4.74，N16.46。实测值C73.98，H4.48，N16.16。
实施例15 (E)-3-苯基-N-[4-(苯基氨基)喹唑啉-7-基]丙烯酰胺(Y5) 在装有机械搅拌、温度计及滴液漏斗的50ml三口瓶中加入苯丙烯酸0.148g(0.001mol)和5ml吡啶，室温搅拌至全溶。冰浴冷却至0℃，滴加苯磺酰氯0.127ml(0.001mol)，控制温度在0℃，滴毕，撤去冰浴，缓慢升至室温搅拌15min，待反应液变粘稠后再用冰浴冷至0℃，滴加5ml吡啶溶解的4-苯基氨基-7-氨基喹唑啉0.236g(0.001mol)，加入0.06g DMAP，撤去冰浴，缓慢升至室温搅拌，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)，1.5h反应完全。停止反应，搅拌下将反应液倒入碎冰水中，得微黄色悬浊液，抽滤，水洗至中性，干燥后用甲醇-乙醇重结晶，得类白色粉末0.125g，产率34.1％。m.p.266.8～269.9℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ10.7(s，1H，NH)，9.82(s，1H，NH)，8.57(s，1H，2-H)，8.53(d，1H，5-H，J＝6.8Hz)，8.28(d，1H，8-H，J＝1.6Hz)，7.84(m，3H，ArH)，7.69(d，1H，J＝16Hz)，7.67-7.45(m，5H，ArH)，7.41(m，2H，ArH)，7.15(m，1H，ArH)，6.91(d，1H，J＝16Hz)。
IR(KBr，v/cm-1)3453(vNH)，3366(vNH)，3029(v＝CH)，2926(v＝CH)，1668(vC＝O)，1629(vC＝N)，1553(vC＝C)，1498(vC＝C)。
C23H18N4O计算的元素分析值为C75.39，H4.95，N15.29。实测值C74.89，H5.00，N15.20。
实施例16 (E)-3-苯基-N-[4-(苯基氨基)喹唑啉-6-基]丙烯酰胺(Y6) 在装有机械搅拌、温度计及滴液漏斗的50ml三口瓶中加入苯丙烯酸0.74g(0.005mol)和10ml吡啶，室温搅拌至全溶。冰浴冷却至0℃，滴加苯磺酰氯0.635ml(0.005mol)，控制温度在0℃，滴毕，撤去冰浴，缓慢升至室温搅拌15min，待反应液变粘稠后再用冰浴冷至0℃，滴加20ml吡啶溶解的4-苯基氨基-6-氨基喹唑啉1.18g(0.005mol)，加入0.06g DMAP，撤去冰浴，绶慢升至室温搅拌，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)，1.5h反应完全。停止反应，搅拌下将反应液倒入碎冰水中，得微黄色悬浊液，抽滤，水洗至中性，干燥后用甲醇-丙酮重结晶，得灰白色粉末0.312g。产率16.9％。m.p.262.1～264.9℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ10.5(s，1H，NH)，9.81(s，1H，NH)，8.80(d，1H，5-H，J＝2.0Hz)，8.52(s，1H，2-H)，7.96(dd，1H，7-H，J＝2.1，8.9Hz)，7.83(d，2H，ArH，J＝7.7Hz)，7.79(d，1H，8-H，J＝8.9Hz)，7.67(d，1H，J＝16Hz)，7.49-7.37(m，5H，ArH)，7.12(t，1H，ArH，J＝7.3Hz)，6.93(d，1H，J＝16Hz)。
IR(KBr，v/cm-1)3309(vNH)，3263(vNH)，3062(v＝CH)，3029(v＝CH)，1660(vC＝O)，1628(vC＝N)，1573(vC＝C)，1522(vC＝C)。
C23H18N4O计算的元素分析值为C75.39，H4.95，N15.29。实测值C74.79，H4.90，N15.20。
实施例17 (E)-3-(4-氟苯基)-N-[4-(苯基胺基)喹唑啉-7-基]丙烯酰胺(Y7) 在装有机械搅拌、温度计及滴液漏斗的50ml三口瓶中加入4-氟苯基丙烯酸0.332g(0.002mol)和2ml吡啶，室温搅拌至全溶。冰浴冷却至0℃，滴加苯磺酰氯0.254ml(0.002mol)，控制温度在0℃，滴毕，撤去冰浴，缓慢升至室温搅拌15min，待反应液变粘稠后再用冰浴冷至0℃，滴加8ml吡啶溶解的4-苯基氨基-7-氨基喹唑啉0.472g(0.002mol)，加入0.12g DMAP，撤去冰浴，缓慢升至室温搅拌，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)，1.5h反应完全。停止反应，搅拌下将反应液倒入碎冰水中，得鲜黄色悬浊液，抽滤，水洗至中性，干燥后用甲醇-丙酮重结晶，得白色粉末0.145g，产率18.9％。m.p.276.9～279.0℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ10.6(s，1H，NH)，9.67(s，1H，NH)，8.54(s，1H，2-H)，8.51(d，1H，5-H，J＝9.2Hz)，8.25(d，1H，8-H，J＝2.0Hz)，7.87(m，2H，ArH)，7.81(dd，1H，6-H，J＝2.1，9.0Hz)，7.74(m，2H，ArH)，7.69(d，1H，J＝16Hz)，7.41-7.11(m，5H，ArH)，6.83(d，1H，J＝16Hz)。
IR(KBr，v/cm-1)3351(vNH)，3281(vNH)，3105(v＝CH)，3058(v＝CH)，1664(vC＝O)，1627(vC＝N)，1525(vC＝C)，1497(vC＝C)。
C23H17FN4O计算的元素分析值为C71.86，H4.46，N14.57。实测值C71.70，H4.46，N14.41。
实施例18 (E)-3-(α-呋喃基)-N-[4-(苯基胺基)喹唑啉-7-基]丙烯酰胺(Y8) 在装有机械搅拌、温度计及滴液漏斗的50ml三口瓶中加入α-呋喃基丙烯酸0.69g(0.005mol)和4ml吡啶，室温搅拌至全溶。冰浴冷却至0℃，滴加苯磺酰氯0.635ml(0.005mol)，控制温度在0℃，滴毕，撤去冰浴，缓慢升至室温搅拌15min，待反应液变粘稠后再用冰浴冷至0℃，滴加10ml吡啶溶解的4-苯基氨基-7-氨基喹唑啉1.18g(0.005mol)，加入0.3g DMAP，撤去冰浴，缓慢升至室温搅拌，薄层层析监测反应终点(乙酸乙酯∶石油醚＝3∶1)，1.5h反应完全。停止反应，搅拌下将反应液倒入碎冰水中，得褐色悬浊液，抽滤，水洗至中性，干燥后用甲醇-丙酮重结晶，得鲜黄色粉末0.145g，产率18.9％。m.p.281.9～283.1℃。
1H-NMR(DMSO-d6，ppm)δ10.6(s，1H，NH)，9.69(s，1H，NH)，8.54(s，1H，2-H)，8.50(d，1H，5-H，J＝9.2Hz)，8.24(d，1H，8-H，J＝2.0Hz)，7.86(m，3H，ArH)，7.80(dd，1H，6-H，J＝2.0，9.0Hz)，7.49(d，1H，J＝16Hz)，7.41-7.11(m，3H，ArH)，6.91(d，1H，β-H，J＝3.2Hz)，6.69(d，1H，J＝16Hz)，6.65(q，1H，β-H，J＝1.6Hz)。
IR(KBr，v/cm-1)3374(vNH)，3007(v＝CH)，1684(vC＝O)，1627(vC＝N)，1577(vC＝C)1499(vC＝C)。
C21H16N4O2计算的元素分析值为C70.77，H4.53，N15.72。实测值C70.47，H4.46，N15.59。
实施例19抗白血病活性测定 实验原理 四氮唑[MTT，3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyl-tetrazolium bromide]是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的formazon，而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。
结果评定 肿瘤细胞生长抑制率(％)＝(OD对照-OD实验)/(OD对照-OD空白)X 100％ 实验方法 MTT比色试验，将培养的人慢性粒细胞急性白血病细胞系K562细胞株用含10％胎牛血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，以每孔2×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积100μL。将培养板放入CO2孵箱，在37℃、5％CO2及饱和湿度条件下培养24h。将上述实施例1-18的化合物依次倍比稀释为10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol·L-1浓度，加入96孔板中，每个浓度分别设5个平行孔。同时各板都设溶剂对照组，阳性对照药为紫杉醇。人慢性粒细胞急性白血病细胞系K562细胞株继续培养3d。培养3d后，每孔加入MTT溶液(1mg/mL)50μL，37℃继续孵育4h，终止培养。用平板离心机离心(1000rpm，10min)，然后弃去孔内液体，每孔加入150μL DMSO，振荡3min，选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。
细胞株人慢性粒细胞急性白血病细胞系K562细胞株 实验结果 其中，实施例13和15的化合物在10-5mol/L的浓度下对人慢性粒细胞急性白血病细胞系K562细胞株的抑制率超过50％，进一步MTT法实验，实施例15的化合物IC50为3.4×10-7mol·L-1。其他实施例的化合物在10-5mol/L的浓度下对人慢性粒细胞急性白血病细胞系K562细胞株的抑制率未达到50％，结果见表1。
表1 10-5mol/L的浓度下化合物的抑制率

权利要求
1.一种具有抗白血病活性的化合物，其化学结构如式I
其中，R1为H、OCOCH3或OCOAr1，式中Ar1为苯基、苯丙烯基、4-甲基苯丙烯基、4-氟苯丙烯基、4-氯苯丙烯基、3-氯苯丙烯基、2-氯苯丙烯基、3-氟-4-甲氧基苯丙烯基或呋喃丙烯基；R2为H、OCH3、CH3CONH或Ar2CONH，式中Ar2为苯基或苯丙烯基；R3为H、OCH3、CH3CONH或Ar3CONH，式中Ar3为苯基、苯丙烯基、4-氟苯丙烯基或呋喃丙烯基。
2.权利要求1所述化合物的制备方法，步骤如下
将6位或7位或6位和7位被H、OCH3、CH3CONH或Ar2CONH取代的4-(4’-羟基苯基)-氨基喹唑啉在四氢呋喃和三乙胺的混合液中溶解，式中Ar2为苯基或苯丙烯基，冰浴下加入乙酰氯，0℃反应1～24h，然后倒入饱和NaHCO3水溶液中，用乙酸乙酯提取，经干燥、过滤、除去溶剂即得。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于取代苯胺基喹唑啉∶乙酰氯的摩尔比为1∶3。
4.一种制备权利要求1所述化合物的具有抗白血病活性的中间体化合物，其结构如式II
其中R4为NH2或NO2；R5为4-氟苯基、4-氯苯基、2-氯苯基、3-氟-4-甲氧基苯基或α-呋喃基。
5.权利要求4所述化合物的制备方法，步骤如下
将4-氟苯基或4-氯苯基或2-氯苯基或3-氟-4-甲氧基苯基或α-呋喃基7-氨基喹唑啉溶解于适量四氢呋喃中，然后加入NaHCO3水溶液，冰浴冷却下滴加乙酰氯，取代苯胺基喹唑啉∶乙酰氯摩尔比为1∶5，保持0-5℃反应1～24h，倒入冰水中，过滤，即得。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述取代苯胺基喹唑啉∶NaHCO3的摩尔比1∶5。
全文摘要
本发明公开了一种以JAK3为靶点的抗白血病的化合物4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氨基苯酚酯类化合物，还公开了制备上述化合物的具有抗白血病活性的中间体化合物N-[4-(苯基氨基)喹唑啉-7-基]酰胺类化合物，本发明还提供了上述两种化合物的制备方法。本发明为抗白血病药物的研制提供了新的途径。
文档编号C07D239/94GK101402611SQ200810219079
公开日2009年4月8日 申请日期2008年11月14日 优先权日2008年11月14日
发明者马玉卓, 洋 张, 朱玉香, 刘鹰翔 申请人:广东药学院