专利名称：低血球溶解性的抗微生物肽、药物组合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明系关于一种多肽，特别是关于一种抗微生物肽。
背景技术：
由于对传统抗生素产生抗药性菌株的出现，促使了新治疗试剂的研究，包括许多动物性来源的抗菌肽。目前这些抗菌肽已被发现在一些宿主与生俱来的防御机制中扮演着相当重要的角色。包括植物、昆虫、两生类和哺乳动物中，可能都具有抗菌肽，该抗菌肽的抗生素特性可去对抗细菌、真菌，甚至一些病毒。此类抗菌肽会与脂质结合(大于百分之九十五)，可迅速地分离脂双层而破坏了膜的完整性。另一方面，也能够在细菌平行的脂双层上增加小而短暂的传导，使得细胞质膜部分去极化而破坏原本的电位梯度。此类抗菌肽在宿主防御的保护功用，在果蝇实验已被证实；当果蝇被微生物感染后，若抗菌肽的表现量减少，则会大大降低其存活率。而在哺乳动物中，肺囊胞性纤维症病人和小鼠的缺陷性细菌致死(defective bacterial killing)也可证实此类抗菌胜肽在宿主防御的保护功能。在哺乳动物中所发现的抗菌胜肽可被分类为富含半胱氨酸的防御素(α、β防御素)和多样的卡色力西丁(cathelicidin)类。卡色力西丁类含有一段高度保留的讯号序列和前区域卡色林(cathelin)，及位于C端区块具变异性的抗菌序列。许多卡色力西丁在带负电的卡色林区块和带正电的C端区块之间含有独特的弹性蛋白酵素切割作用位；此作用位的蛋白质水解反应在牛或猪的嗜中性淋巴球中都已被观察到且为抗菌活性所必须。根据氨基酸成分及构造，卡色力西丁家族可再分类为三群第一群具有亲水脂的α-螺旋胜肽， 比如 LL-37、CRAMP、SMAP-29、PMAP-37,、BMAP-27 和 BMAP-28 ；第二类则是富含精氨酸 / 脯氨酸或色氨酸胜肽，如Bac5，Bac7，PR-39和吲哚力西丁(indolicidin)；第三群则为含半胱氨酸胜肽，如波地金(protegrins)。虽然这些抗菌胜肽皆具有广泛的抗菌效力，然而却对红血球有不同的溶血活性，因此大幅限制其治疗的潜力。因此，本发明提供一种低血球溶解性的抗微生物肽，该抗微生物肽不但具有良好的抗菌活性，同时兼具有低血球溶解性的特点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题因为抗菌肽通常具有低分子量(< 5kDa)、具有广泛的活性及为宿主的防御系统中对抗微生物感染重要的一环等特性，因此可作为设计低分子量抗菌复合物的起始点。再者也因其兼具有疏水性和带电性区域，使其具有可折迭成亲水脂结构的潜力，此特性也关乎其水解细胞质膜的能力。不过，虽然都具有广泛的抗菌效力，这些抗菌肽对于红血球却有不同的溶血活性，因此限制其治疗的潜力。因此，本发明的目的之一是提供一种低血球溶解性的抗微生物肽；本发明的另一目的是提供一种包含上述抗微生物肽的药物组合物；本发明的又一目的是提供一种利用上述抗微生物肽用于抗微生物的用途。
本发明为解决现有技术的问题所采用的技术手段为一种低血球溶解性的抗微生物肽，具有如下所示的氨基酸序列=(P1)m(A1X1)Qn(P2)x ；其中，P1为碱性氨基酸，包括选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)的一种或多种A1为芳香族氨基酸或丙氨酸，包括选自色氨酸 (Trp)、苯丙氨酸(Phe)、丙氨酸(Ala)的一种或多种A1为碱性氨基酸或非极性氨基酸，包括选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、丙氨酸(Ala)、异亮氨酸 (Ile)的一种或多种成系为碱性氨基酸或非极性氨基酸，包括选自精氨酸(Arg)、赖氨酸 (Lys)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、丙氨酸(Ala)、异亮氨酸(Ile)中的一种或多种-,P2M 为碱性氨基酸，包括选自由精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)的一种或两种，且Μ、X分别为0 2 ;N的数目为2 4;当N> 2时，其中A1可为丙氨酸(Ala)，该丙氨酸(Ala)的数目不超过(N-幻个。根据对初级及二级结构的修饰，设计出具有抗临床上重要菌株活性的肽，并了解此类肽构造上的一些重要特征，改善天然抗菌肽的活性或是毒性。此类抗菌肽是用途广泛的新型抗菌肽，富含色氨酸序列，可应用于抗生素的制作，兼具抗菌活性和低溶血的特性， 是为广泛性地抗革兰氏阳性、阴性菌、原生动物、真菌和具封套的人类自体免疫缺失病毒而设计的抗菌肽。在优选实施例中，本发明的抗微生物选自由SEQ ID NO :1-7所组成的群组，该抗微生物肽的构形为直链状或环状，并可进一步包括乙酰化、酰胺化、甲酰化、羟基化、脂质修饰、甲基化或磷酸化的修饰。经由本发明所采用的技术手段，以本发明的抗微生物肽，可改善天然抗菌肽的活性或是毒性。未来可应用于制作抗生素、医药组成物或其它临床上的抗菌用途，并且兼具抗菌活性和低溶血的特性，未来可进一步地、广泛性地用于抵抗革兰氏阳性、阴性菌、原生动物、真菌及病毒等微生物。本发明的抗微生物肽和药学上可接受载体可制作一种抗微生物的药物组合物，该载体为赋形剂、稀释剂、增稠剂、填充剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、油脂或非油脂的基剂、界面活性剂、悬浮剂、胶凝剂、辅助剂、防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、着色剂或香料，该药物组合物的剂型为包埋物、浸泡液、口服液、贴片、粉末、锭剂、注射液、悬浮液、外用液、滴剂、擦剂、 涂齐 、吸齐 、乳霜、油膏、软膏、糊状剂或凝胶，可透过口服、经皮吸收、注射或吸入的方式施用于哺乳动物。
图1是显示以人类红血球细胞测试毒蜂肽(Melittin)、Pem_2252L及Pem_2254L 的血球溶解性的结果。
具体实施例方式下面结合具体实施例以及附图来进一步说明本发明。实施例1 多肽的设计、合成、纯化及特性本发明的抗微生物肽及其命名如下列表1所示，各个氨基酸皆由三个字母来替代表不。表权利要求
1.一种抗微生物肽，具有如下所示的氨基酸序列(PI)M(A1X1X2)N(P2)X其中P1为碱性氨基酸所组成的群组，A1为芳香族氨基酸或丙氨酸所组成的群组，X1为碱性氨基酸或非极性氨基酸所组成的群组，X2为碱性氨基酸或非极性氨基酸所组成的群组，P2为碱性氨基酸所组成的群组，且Μ、X分别为0 2，N的数目为2 4。
2.如权利要求1所述的抗微生物肽，当N> 2时，其中A1为丙氨酸，所述丙氨酸的数目不超过N-2个。
3.如权利要求1所述的抗微生物肽，其中所述的抗微生物肽选自氨基酸序列为SEQID NO 1-7的一种或多种。
4.如权利要求1所述的抗微生物肽，其中所述的抗微生物肽为直链状多肽。
5.如权利要求1所述的抗微生物肽，其中所述的抗微生物肽为环状多肽。
6.如权利要求1所述的抗微生物肽，其中所述的抗微生物肽进一步包含乙酰化、酰胺化、甲酰化、羟基化、脂质修饰、甲基化或磷酸化的修饰。
7.—种如权利要求1所述的抗微生物肽的抗微生物的应用，其中，抗微生物肽施用于一个体。
8.如权利要求7所述的应用，其中所述抗微生物肽对于所述个体的红血球具有低血球溶解性。
9.如权利要求7所述的应用，其中所述的微生物为革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、原生动物、真菌或病毒。
10.如权利要求7所述的应用，其中所述的个体为哺乳动物。
11.如权利要求7所述的应用，其中通过口服、经皮吸收、注射或吸入的方式施用于所述的个体。
12.—种抗微生物的药物组合物，包括如权利要求1所述的抗微生物肽以及药学上可接受载体。
13.如权利要求12所述的药物组合物，其中所述的载体为赋形剂、稀释剂、增稠剂、填充齐 、结合剂、崩解剂、润滑剂、油脂或非油脂的基齐 、界面活性齐 、悬浮齐 、胶凝齐 、辅助齐U、 防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、着色剂或香料。
14.如权利要求12所述的药物组合物，其中所述的药物组合物的剂型为包埋物、浸泡液、口服液、贴片、粉末、锭剂、注射液、悬浮液、外用液、滴剂、擦剂、涂剂、吸剂、乳霜、油膏、 软膏、糊状剂或凝胶。
全文摘要
本发明公开了一种低血球溶解性的抗微生物肽、药物组合物及其用途，该低血球溶解性的抗微生物肽具有如下所示的氨基酸序列(P1)M(A1X1X2)N(P2)X；其中P1为碱性氨基酸；A1为芳香族氨基酸或丙氨酸；X1为碱性氨基酸或非极性氨基酸；X2为碱性氨基酸或非极性氨基酸；P2为碱性氨基酸；且M、X分别为0～2；N的数目为2～4；当N＞2时，其中A1可为丙氨酸(Ala)，该丙氨酸(Ala)的数目不超过(N-2)个。该抗微生物肽不但具有良好的抗菌活性，同时兼具有低血球溶解性的特点。
文档编号C07K7/06GK102206250SQ20101013443
公开日2011年10月5日 申请日期2010年3月29日 优先权日2010年3月29日
发明者游辉元, 程家维, 郑锡聪, 黄国群 申请人:翔升科技股份有限公司