专利名称：阿司匹林触发的脂质介体的制作方法
阿司匹林触发的脂质介体本申请是中国专利申请200610100310.6， “阿司匹林触发的脂质介体”的分案
申请°
背景技术：
过去的25年中，各种报道称用亚麻籽、加拿大低酸油菜籽油或鱼油通过饮 食补充ω-3聚不饱和脂肪酸(w-3 PUFA)对患者和实验室动物有益(l.De Caterian, R.，S.Endres, S.D.Kristensen 和 E.B.Schmidt 编的 1993 年的 n_3 脂肪酸和血管疾病， Springer-Verlag，London； ^P 2.Lands, W.E.M.,编的 1987 年的有关聚不饱和脂肪酸和 类花生酸的 AOCS 短期会议的记录汇编。American Oil Chemists，Society, Champaign, IL)。这些报道中对其潜在的抗血栓、免疫调节、和在动脉硬化、关节炎和哮喘中的 抗炎反应，以及抗肿瘤和抗转移等作用有生动的论述(Ref.l和Iigo，M.T.Nakagawa, C.Ishikawa，Y.Iwahori, M.Asamoto, K.Yazawa，Ε.Araki 禾口 H.Tsuda，1997, 二十二碳 六烯酸抑制结肠癌26向肺部转移的作用。英国癌症杂志，75 : 650-655)。最近发现， 主要的饮食ω-3 PUFA, 二十碳五烯酸(C20:5 ω-3 ； EPA)和二十二碳六烯酸(C22:6 ω-3； DHA)对于局部缺血引起的心室纤维性颤动具有显著效果，而且对狗具有预防心 脏病突发性死亡的作用，他们对于心血管病的预防作用因而受到广泛关注(IBillman， G.E.等，1999，纯ω-3聚不饱和脂肪酸预防狗心脏病突发性死亡的作用。循环， 99:2452-2547)。由于发现补充ω-3 PUFA对于婴儿营养、心血管疾病和神经健康 可能具有预防和/或治疗作用，所以希望能由某国际专门小组制定出建议饮食摄入量 (5.Simopoulus, A.P.等，1999，有关ω-6和ω-3脂肪酸的必要性及其建议饮食摄入量的 研讨会记录，J.Am.Coll.Nutr.，18:487-489)。此外，GrappoltalianoperloStudiodella Sopravvivensenell，Infarto Mocardio(GISSI)Prevenzione 试验评价了补充 ω-3 PUFA-每日 摄入 Ig -3 1^八-对> 11,300曾经心肌梗塞患者的作用，同时推荐了包括阿司匹林的 预防治疗，并报道了对于降低心血管病死亡率的显著功效(6.Marchi0l0i，R.，1999，心肌 梗塞后饮食补充n-3聚不饱和脂肪酸和维生素E : GlSSI-Prevenzione试验的结果。Gruppo Italianoper Io Studio della Sopravvivense nell' Infarto Mocardio，柳叶刀，354 447-455), 然而，迄今为止，包括对神经组织(Parkinson，s病和Alzheimer，s病，以及其他已知的 脑部炎症)在内的所有研究中，对于饮食ω-3保护作用的细胞和分子机制都未作出充分 的解释。据信，鱼油中的主要脂质C20:5的作用是基于(a)阻止花生四烯酸(C20:4 ω-6； AA)转化为促炎性类花生酸(即前列腺素[PGs]和白三烯[LTS) ； (b)作为另一种 底物，生成较弱的5-系列LTS;和/或(C)由环氧合酶(COX)转化为3-系列前列腺素类 激素(即PGI3)，它们具有与其4-系列PG相当的抗血栓作用(参考文献1，3和4)。包 括以上所述的各种解释都没有被普遍接受，因为没有体内分子证据，而体外推定的“有 益作用”需要高浓度的ω-3 PUFA(参考文献1-5)。虽然普遍认同LT和PG具有促炎作用，但有新证据表明衍生自花生四烯酸酯的其他类花生酸，即脂氧素(LXs)，及其内源性类似物，即阿司匹林触发的15-差 向异构体LXs (ATLs)是PMN-药物损伤和急性炎症的强反调节剂(counterregulator) (7.Weissmann, G.，1991，阿司匹林，Sci.Am.，264 84-90; 8.Marcus, A.J., 1999， 血小板其在止血、血栓和炎症中的作用，炎症基础原理和临床关联，J.I.Gallin和 R.Snyderman 编，Lippincott Williams & Wilkins， Philadelphia, 77-9 ； 9.Claria, J.禾口 C.N.Serhan, 1995，阿司匹林通过人内皮细胞-白细胞相互作用激发了从前描述过的生 物活性类花生酸，美国科学院院报，92: 9475-9479 ； lO.Serhan, C.N.，J.F.Maddox, N.A.Petasis，I.Akritopoulou-Zanze，A.Papayianni, H.R.Brady, S.RColgan 禾口 J.L.Madara， 1995。可阻止人嗜中性粒细胞迁移和粘附的脂氧素A4稳定类似物，生物化学，34: 14609-14615 ；禾Π 11.Chiang，N., K.Gronert, C.B.Clish, J.A.O' Brien, M.W.Freeman 和CN.Serhan，1999，用白三烯B4受体转基因小鼠新发现了脂氧素和阿司匹林激发的脂 氧素在再灌注中的保护作用，临床研究杂志，104:309-316)。已发现，COX的至少两 种异构体，非甾体类消炎药(NSAIDs)的典型作用位点在人体中似乎具有不同的生理和 病理作用(12.HerSChman，H.R., 1998，前列腺素合成的细胞与分子生物学的最新进展， 心脏病医学动态，8: 145-150)。每个COX异构体各自具有双加氧酶和过氧合酶两种 酶活性。抑制COX-2是当前许多制药公司的研发重点，因为选择性地抑制COX-2而 不抑制COX-1能够降低传统NSAID的不良副作用(13.Needleman，P.和RC.Isakson， 1997，COX-2的发现及其功能，类风湿学杂志，24(增刊49): 6-8) 0在这方面，用传 统NSAID阿司匹林(ASA)对COX-2乙酰化可阻止前列腺素类激素的形成，但乙酰化后 的该酶仍能由C20:4原位产生15R-羟基二十碳四烯酸(15R-HETE)，由活化炎性细胞释 放并转化为 15-差向异构体LX(14.Chiang，N., Τ.Takano, C.B.Clish, N.A.Petasis, H.-H. Tai和C.N.Serhan，1998，阿司匹林触发的由人白细胞和鼠腹膜炎渗出物产生15-表-脂 氧素(15-epi-lipoxin) A4ATL) 一种特异性15-表-LXA4 ELISA，药物实验治疗学杂 志，287 779-790 禾Π 15.Xiao, G.，A.-L.Tsai，G.Palmer, W.C.Boyar, P.J.Marshall 和 RJ.Kulmacz, 1997，关于过氧合氢诱导的经阿司匹林处理过的人前列腺素H合成酶_2的 酪氨酰基和脂氧合酶活性，生物化学，36: 1836-1845-1845)。这些天然局部介体的合 成类似物具有更长的生物学半衰期，表现出强抗炎性，表明细胞-细胞相互作用能够 通过调节对宿主防御机制具有重要意义的信号过程使AA (和/或其他脂质和PUFA，见
图1)转化为抗炎性介体(参考文献11和16，Clish, C.B.，J.A.O’ Brein, K.Gronert, G丄.Stahl，N.A.Petasis和C.N.Serhan，1999，稳定的阿司匹林触发的脂氧素的局部和全身 性给药抑制体内嗜中性粒细胞的聚集，美国科学院院报，96: 8347-8252)。发明概述阿司匹林能抑制前列腺素的生物合成，但不直接作用于脂氧合酶，而是通过对 环氧合酶2(COX_2)乙酰化形成碳15位上差向异构的生物活性脂氧素(LX) (15-表-LX， 又称阿司匹林触发的LX[ATL])。本发明发现，经ω-3聚不饱和脂肪酸和阿司匹林 (ASA)处理的小鼠的炎性渗出物可产生一系列新的生物活性脂质信号。ASA处理COX-2 上调的人内皮细胞可将C20:5 ω-3转化为18R-羟基二十碳五烯酸(HEPE)和15R-HEPE。 两者都被多形核白细胞用来生成不同的三羟基类介体，其中包括5-系列的15R-LX和5， 12，18R-LX-triHEPE。已证明，这些新的化合物在体内是人多形核白细胞经内皮迁移和浸润的强抑制剂(ATL类似物> 5，12，18R-LX-triHEPE > 18R-HEPE)。对乙酰氨基酚 和吲哚美辛也能由重组COX-2以及ω-5和ω-9形成18R-HEPE和15R-HEPE，并能发 生其他新的聚不饱和脂肪酸(例如C18:3，C22:6)的氧合，并作用于血管、脑、炎性细胞 和血细胞。以上发现确立了产生生物活性脂质介体作用于微观炎性反应的的新的跨细胞 路径COX-2-非甾体消炎药-依赖性氧合作用和细胞_细胞相互作用。这些介体及相 关化合物的产生为饮食补充ω-3的医疗效用提供了新的机制，这对于炎症、肿瘤和血管 疾病具有重要意义。内皮细胞(EC)内P450对C20:4的氧合作用也会最终形成抑制EC活化的11， 12-环氧二十碳四烯酸，同时，EPA的非酶氧合则下调EC粘附分子(17.Node，K., Y.Huo, X.Ruan, B.Yang, Μ.Spiecker, K丄ey，D.C.Zeldin 和 J.K丄iao，1999，细胞色 素P450环氧合酶衍生的类花生酸的抗炎特性，科学，285 1276-1279和18.Sethi，S., A.Y.Eastman和J.W.Eaton，1996，氧合脂肪酸对吞噬细胞-内皮细胞相互作用的抑制一 种天然抗炎机制？，实验室临床医学杂志，128: 27-38)。PMN-血管相互作用对聚集和 PNM-依赖性组织损伤至关重要，所以，参与它们“交叉对话”的局部信号具有重要意 义。本发明发现，被阿司匹林乙酰化的COX-2仍具有产生特异性ATL的体内活性，ATL 可以作为已知抗炎反应的效应剂，这些提供了 ASA有益效果不仅缘于抑制前列腺素类激 素的机制(参考文献8，12，14)。ASA及相关NSAID的新治疗用途仍在不断涌现。但 是，它们一般都要求分子水平的定义以形成理论。这包括报道的ASA预防结肠直肠癌 和降低二次心肌梗塞发生率的作用(19丄evy，G.N.，1997，前列腺素H合成酶，非甾体 类消炎药，和结肠癌，FASEB I，11: 234-247)。基于以上归于饮食ω-3 PUFA对人类 疾病的相互交迭的有益作用(参考文献1-6)，本发明是关于产生脂质信号的新路径，他 们提供了以上有益作用的分子基础，也可作为其标记(marker)。本发明涉及一种治疗或预防哺乳动物炎症的方法，即给予聚不饱和脂肪酸 (PUFA)与阿司匹林的组合物，所述聚不饱和脂肪酸包括C18:3，C20:4和C22:6。实施 方式之一中，ω脂肪酸，例如C18:3或C22:6，和阿司匹林分两个不同时刻给予。本发 明还涉及治疗哺乳动物动脉炎、关节炎、牛皮癣、荨麻疹、脉管炎、哮喘、眼科炎症， 肺炎、肺纤维变性、脂溢性皮炎、脓疱性皮肤病，或心血管疾病的方法，即给予ω-脂 肪酸和阿司匹林的组合物。另一实施方式中，本发明治疗或预防哺乳动物炎症的方法是给予以下结构式之 一所示ASA-触发的天然脂质(ω-3)介体及其立体异构体，例如其对映体、非对映体或 外消旋混合物
权利要求
1.-种具有以下结构式的化合物，或其药用盐或酯其中，R是氢原子，P是氢原子或保护基。
2.如权利要求1所述的化合物，P是氢原子。
3.如权利要求1所述的化合物，R是氢原子。
4.如权利要求2所述的化合物，R是氢原子。
5.一种药物组合物，包含药用载体和具有以下结构式的化合物其中，R是氢原子，或其药用盐或酯，P各自是氢原子或保护基。
6.如权利要求5所述的药物组合物，各P都是氢原子。
7.如权利要求5所述的药物组合物，R是氢原子。
8.如权利要求6所述的药物组合物，R是氢原子。
9.如权利要求5所述的药物组合物，所述化合物具有以下结构
10.具有以下结构式的化合物或其药用盐或酯用于制造治疗或预防炎症的药物的用途
11.如权利要求10所述的用途，所述炎症是Crohn' s病，溃疡性结肠炎，末端直 肠炎，类风湿脊椎炎，关节炎(包括类风湿关节炎、骨关节炎和痛风性关节炎)，牛皮 癣、皮炎(包括湿疹性皮炎、特应性皮炎和脂溢性皮炎、过敏性或刺激性接触性皮炎、 干性湿疹、光敏性皮炎、光毒性皮炎、植物性光毒性皮炎、放射性皮炎和停滞性皮炎)， 动脉炎，冠状动脉梗死性损伤，再狭窄，葡萄膜炎(包括虹膜炎)，结膜炎，成人呼吸窘 迫综合征，支气管炎，或囊性纤维变性，或与致痉性病症相关病症(例如哮喘(包括原发 性支气管哮喘)，动脉平滑肌收缩，例如冠状动脉痉挛、心肌梗塞、缺血性心肌损伤、脑 痉挛或中风，肠炎、结肠痉挛和粘液性结肠炎)，变应性病症(例如哮喘、局部或全身性 皮肤过敏(例如湿疹)、过敏性肠病(包括腹腔疾病)、过敏性眼病(例如枯草热)、过 敏性鼻咽和过敏性结膜炎)，或血小板凝集相关性病症(例如全身性或局部血栓引起的中风、冠状动脉血栓、静脉炎和静脉血栓形成)。
12.具有以下结构式的化合物或其药用盐或酯用于制造治疗或预防心血管疾病的药物 的用途
13.具有以下结构式的化合物用于制造治疗或预防心COX酶相关临床症状的药物的用途或
14.如权利要求10-13中任一项所述的用途，其中，各P都是氢原子。
15.如权利要求10-13中任一项所述的用途，其中，R是氢原子。
16.如权利要求14所述的用途，其中，R是氢原子。
17.如权利要求10-13中任一项所述的用途，所述化合物具有以下结构
18.如权利要求17所述的用途，其中，各P都是氢原子。
19.如权利要求17所述的用途，其中，R是氢原子。
20.如权利要求18所述的用途，其中，R是氢原子。
全文摘要
本发明公开了阿司匹林触发的脂质介体(ATLM)，它们可用于治疗或预防与包括缺血在内多种疾病相关的炎症。
文档编号C07C59/58GK102010324SQ201010507698
公开日2011年4月13日 申请日期2001年2月16日 优先权日2000年2月16日
发明者C·B·克利希, C·N·瑟汉 申请人:布里格姆及妇女医院股份有限公司