专利名称：一种抗三聚氰胺单克隆抗体及检测三聚氰胺的试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及抗三聚氰胺单克隆抗体及其应用。
背景技术：
三聚氰胺(Melamine)简称三胺，又叫2，4，6_三氨基-1，3，5_三嗪、1，3，5_三嗪-2，4，6-三胺、2，4，6_三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺或氰脲三酰胺，分子式C3N6H6或 C3N3(NH2)3。三聚氰胺是一种重要的化工原料，广泛运用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业。
权利要求
1.一种产生抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCCNo. 4303，分类命名为三聚氰胺特异性淋巴细胞杂交瘤株B-4B5-F10-B11。
2.一种制备权利要求1所述产生抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法，其特征在于包括如下步骤(1)制备6碳三聚氰胺-载体蛋白藕联物，所述载体蛋白为钥孔嘁血蓝蛋白、牛血清蛋白或卵清蛋白，所述6碳三聚氰胺的结构如下
3.一种由权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌的抗三聚氰胺单克隆抗体。
4.一种权利要求3所述杂交瘤细胞株分泌的抗三聚氰胺单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤(1)腹水的制备将所述杂交瘤细胞株注入baleb/c雌性小鼠腹腔，5-7后天产生腹水； 取腹水上清；(2)抗三聚氰胺单克隆抗体的纯化初步纯化所述腹水上清经饱和硫酸胺沉淀，取沉淀溶解后透析，获得抗三聚氰胺单克隆抗体粗品；Protein G亲和层析纯化将抗三聚氰胺单克隆抗体粗品经ftOtein G亲和层析柱进行纯化，收集吸收峰，即为抗三聚氰胺单克隆抗体。
5.一种权利要求3所述抗三聚氰胺单克隆抗体应用于三聚氰胺的定性或定量检测。
6.一种利用权利要求3所述抗三聚氰胺单克隆抗体检测三聚氰胺的试剂盒，其特征在于该试剂盒的组成如下(1)用6碳三聚氰胺-OVA藕联物的碳酸盐缓冲液包被过的酶标板；(2)HRP标记的抗三聚氰胺单克隆抗体溶液；(3)TMB显色剂TMB浓度是0. 3g/L ；(4)终止液浓度为2M的H2SO4；(5)三聚氰胺标准液浓度分别为0,0.5，1. 5,4. 5，13. 5，40· 5μ g/L的三聚氰胺标准液；(6)20倍浓缩洗液浓度为0. 2M，pH为7. 4的PBST。
全文摘要
本发明提供一种抗三聚氰胺单克隆抗体的制备方法及检测三聚氰胺的试剂盒。将三聚氰胺特异性淋巴细胞杂交瘤细胞株注入小鼠腹腔，取腹水，经饱和硫酸胺获沉淀，沉淀溶解后透析，最后经Protein G亲和层析纯化，收集吸收峰而得抗三聚氰胺单克隆抗体。本方法制得的抗三聚氰胺单克隆抗体能够用于建立快速检测食品中三聚氰胺残留的竞争法酶联免疫试剂盒与胶体金试纸条，满足大批量样品的快速检测需要。
文档编号C07K16/18GK102168071SQ20101059588
公开日2011年8月31日 申请日期2010年12月20日 优先权日2010年12月20日
发明者刘秀梵, 吴艳涛, 张小荣, 张睿, 李旭辉, 蒋原, 薛峰, 赵红霞, 陶宏锦, 高海岗 申请人:扬州大学, 江苏中测检测服务有限公司, 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心, 苏州艾瑞德生物科技有限公司