专利名称：一种刺果紫玉盘素a的制备方法
一种刺果紫玉盘素A的制备方法技术领域
本发明属于中药提取分离技术领域，涉及一种从刺果紫玉盘根中分离制备刺果紫玉盘素A的方法。
背景技术：
刺果紫玉盘素A，无色片状结晶，mp. 96 98°C，来源于番荔枝科植物刺果紫玉盘 Uvaria calami strata Hance的根。刺果紫玉盘分布在越南以及中国大陆的广西、广东等地,多生长于山地林中以及山谷水沟旁灌木丛中。
刺果紫玉盘根主要有效成分为乙酰精宁类化合物，以刺果紫玉盘素A含量最高。 刺果紫玉盘素A具有细胞毒活性，有显著的选择性细胞毒活性，对KB、A2780和HCT-8三种人型癌细胞株呈显著的细胞毒活性，IC5tl(UgAiL)相应为2. 0、1. 4和0.37。目前，番荔枝科植物次生代谢物番蒸枝乙酰精宁类(annonanceous acetogenins,AAGs)化合物被视为新的抗肿瘤药物的潜在资源，AAGs能抑制人卵巢瘤IA9细胞复制、诱导癌细胞凋亡，是强效的复合物I抑制剂，抗肿瘤药物的候选药物。
目前，尚未见高含量刺果紫玉盘素A的制备方法相关专利报道。发明内容
本发明的目的是提供一种刺果紫玉盘素A的制备方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的(1)取刺果紫玉盘根，经粉碎处理，加5-12倍60-90%乙醇溶液在20-45°C的温度下进行连续逆流超声提取30-100min，过滤，得到提取液；(2)提取液通过截留分子量为1000-3000的超滤膜超滤和截留分子量为100-500的纳滤膜浓缩，操作压力为0. 5-2. 8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺果紫玉盘素A，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集刺果紫玉盘素A组分；(4)将刺果紫玉盘素A组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得刺果紫玉盘素A。
所述步骤(I)中超声频率为35-60KHZ。
所述步骤(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为 5-7:2-4:4-7:1-3。
本方法积极效果是(1)本方法采用连续逆流超声提取，实现了超声提取和连续逆流提取同时进行，提取效果好，同时实现连续作业；(2)本方法采用膜分离技术，能有效去除多种杂质，且不会破坏有效成分的生物活性， 而且与连续逆流超声提取相结合，实现提取浓缩连续作业；(3)本方法采用高速逆流色谱法，收率高、制备量大、制备周期短，解决了柱层析效率低而且污染严重的技术缺陷；(4)本方法工艺步骤操作较简单，易操作，所得产品纯度高。
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例I :取刺果紫玉盘根，经粉碎处理，称取1kg，加5倍90%乙醇溶液在45°C的温度下进行连续逆流超声提取30min，超声频率为60KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为 3000的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压力为0. 8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺果紫玉盘素A，以体积比 5:4:6:1石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测， 收集刺果紫玉盘素A组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得刺果紫玉盘素A，含量96. 5%。
实施例2:取刺果紫玉盘根，经粉碎处理，称取1kg，加12倍60%乙醇溶液在20°C的温度下进行连续逆流超声提取lOOmin，超声频率为35KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为 1000的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压力为I. 8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺果紫玉盘素A，以体积比 7:3: 7:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测， 收集刺果紫玉盘素A组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得刺果紫玉盘素A，含量97. 4%。
实施例3:取刺果紫玉盘根，经粉碎处理，称取2kg，加10倍70%乙醇溶液在35°C的温度下进行连续逆流超声提取60min，超声频率为40KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为 1000的超滤膜超滤和截留分子量为200的纳滤膜浓缩，操作压力为2. 8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺果紫玉盘素A，以体积比 6:4:7:3石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测， 收集刺果紫玉盘素A组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得刺果紫玉盘素A，含量96. 2%。
实施例4:取刺果紫玉盘根，经粉碎处理，称取5kg，加8倍70%乙醇溶液在40°C的温度下进行连续逆流超声提取60min，超声频率为50KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为 3000的超滤膜超滤和截留分子量为300的纳滤膜浓缩，操作压力为0. 5MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺果紫玉盘素A，以体积比5:2:4:1石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测， 收集刺果紫玉盘素A组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得刺果紫玉盘素A，含量98. 6%。
实施例5:取刺果紫玉盘根，经粉碎处理，称取10kg，加12倍90%乙醇溶液在45°C的温度下进行连续逆流超声提取40min，超声频率为50KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为 1000的超滤膜超滤和截留分子量为100的纳滤膜浓缩，操作压力为2. 8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺果紫玉盘素A，以体积比 7:2:7:3石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测， 收集刺果紫玉盘素A组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得刺果紫玉盘素A，含量98. 9%。
权利要求
1.I、一种刺果紫玉盘素A的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)取刺果紫玉盘根，经粉碎处理，加5-12倍60-90%乙醇溶液在20-45°C的温度下进行连续逆流超声提取30-100min，过滤，得到提取液；(2)提取液通过截留分子量为1000-3000的超滤膜超滤和截留分子量为100-500的纳滤膜浓缩，操作压力为0. 5-2. 8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺果紫玉盘素A，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集刺果紫玉盘素A组分；(4)将刺果紫玉盘素A组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得刺果紫玉盘素A。
2.2、根据权利要求I所述的一种刺果紫玉盘素A的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中超声频率为35-60KHz。
3.3、根据权利要求I所述的一种刺果紫玉盘素A的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-7:2-4:4-7:1-3。
全文摘要
本发明涉及一种操作简单、污染少的刺果紫玉盘素A的制备方法，工艺步骤为(1)取刺果紫玉盘根，经粉碎处理，用醇类溶液进行连续逆流超声提取，过滤得到提取液；(2)提取液通过膜分离系统，浓缩干燥得粗提物；(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺果紫玉盘素A，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相为固定相，下相为流动相，收集刺果紫玉盘素A组分；(4)将刺果紫玉盘素A组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶。本发明制备刺果紫玉盘素A，产品纯度高，易于实现产业化放大。
文档编号C07D307/58GK102532069SQ20111042903
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月20日 优先权日2011年12月20日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司