一种肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法
【专利摘要】本发明公开了一种肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法，属于肝素钠纯化【技术领域】，其包括以下步骤：（1）将肝素钠溶解在醋酸钠溶液中；（2）使用醋酸将步骤（1）中所得到的溶液pH调节至酸性；（3）将步骤（2）中所得溶液加热至60℃，然后在溶液中加入溶液重量的0.7～1.0倍的乙醇，加入乙醇的同时进行搅拌，所得溶液在60℃条件下保持1h后停止搅拌；（4）采用梯度降温的方法将步骤（3）中得到的溶液混合物降温，直至温度降低至室温；（5）步骤（4）中的梯度降温程结束后，去除含废乙醇的上清液后，将下层的沉淀固体进行脱水烘干，得到纯化后的肝素钠。通过本发明处理过的肝素钠，能够有效的去除颜色并降低肝素钠中硫酸皮肤素的含量。
【专利说明】一种肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法，能有效的去除肝素钠的颜色以及降低肝素钠中硫酸皮肤素的含量，属于肝素钠的纯化方法【技术领域】。
【背景技术】
[0002]肝素钠是目前临床上使用最多、最广泛的抗凝剂，在生物体内与蛋白的复合物形式出现。这种复合物没有抗凝血活性，只有将其单独分离出来才能表现出抗凝血活性。肝素钠在生物界分布广泛，存在于高等哺乳动物中，如猪、牛、羊等的肺部组织、肠组织中。肝素钠常见的分离方式有酶解或盐解、醇沉、氧化等，由于肝素的来源以及提取方式，肝素中必然含有大量的核酸蛋白杂质、硫酸皮肤素，同时肝素的颜色也较深。
[0003]目前在生产精品肝素钠的过程中，国内绝大数厂家都要使用高锰酸钾或者过氧化氢对肝素粗品进行氧化，以降低肝素钠的颜色，根据粗品肝素钠的颜色深浅，高锰酸钾或者过氧化氢的用量也有差别。不论哪种氧化形式，都会对肝素钠的结构造成一定的破坏，从而降低了肝素钠的生物活性，影响了产品的品质和收率。
[0004]另外，肝素钠在精制过程中都需要以分次沉淀的方式，去除粗品肝素钠中含有的硫酸皮肤素杂质，每次沉淀在去除硫酸皮肤素的同时，也会去除一部分的肝素钠，造成了肝素钠的产品收率降低。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种能减少对肝素钠生物活性破坏、质量稳定、收率提高的肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法，以解决现有技术的肝素钠在后续精制过程中影响产品的品质和收率的技术问题。
[0006]为实现上述目的，本发明采用的技术方案为:一种肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法，其包括以下步骤:(I)将肝素钠溶解在醋酸钠溶液中；(2)使用醋酸将步骤Cl)中所得到的溶液PH调节至酸性；(3)将步骤(2)中所得溶液加热至60°C，然后在溶液中加入溶液重量的0.7-1.0倍的乙醇，加入乙醇的同时进行搅拌，所得溶液在60°C条件下保持Ih后停止搅拌；(4)采用梯度降温的方法将步骤(3)中得到的溶液混合物降温，直至温度降低至室温，本步骤得到上层含乙醇清液、下层含肝素钠沉淀固体的混合物；(5)步骤
(4)中的梯度降温程结束后，去除含废乙醇的上清液后，将下层的沉淀固体进行脱水烘干，得到纯化后的肝素钠。
[0007]步骤(I)中，用于溶解粗品肝素钠的醋酸钠溶液重量浓度为5°/『10%。
[0008]步骤(2)中，使用醋酸将溶液pH最终调节至3.5-5.0。
[0009]步骤(4)中，梯度降温过程中控制每小时温度降低4~6°C。
[0010]本发明的有益效果是:本发明使用醋酸钠溶解肝素钠溶液，使用醋酸调节pH，在溶液中形成了一个缓冲体系，能够确保溶液在升温和后续逐步降温沉淀的过程中PH的稳定，溶液始终维持一个偏酸性的环境体系，有利于肝素钠的分离。同时，使用先升温然后逐步梯度降温的过程，能够确保肝素钠逐步稳定的从溶液中析出并且沉淀，最大程度的保障肝素钠与硫酸皮肤素的分离效果。通过本发明的方法处理过的肝素钠，能够有效的去除颜色并降低肝素钠中硫酸皮肤素的含量，当这种肝素钠作为原料进行精制时，能够大大减少氧化去色过程中高锰酸钾或者过氧化氢的用量，降低氧化剂的用量，减少氧化剂对肝素钠生物活性的破坏，提高了产品品质，同时减少了分次沉淀的次数，提高了产品收率。
【具体实施方式】
[0011]下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
[0012]实施例1:
本实施例肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法按照以下步骤进行:
(I)取10g粗品肝素钠溶解于重量浓度为5%的100ml的醋酸钠溶液中，观察溶解现象，确保粗品肝素钠溶解完全。
[0013](2)使用醋酸溶液调节步骤(I)中所得到溶液的pH，一边搅拌一边加入醋酸溶液，直至所得溶液的PH=3.5，停止调酸。
[0014]使用醋酸调节pH，在溶液中形成了一个缓冲体系，能够确后续步骤中pH的稳定，溶液始终维持一个偏酸性的环境体系，有利于肝素钠的分离。
[0015](3)将步骤(2)中所得溶液加热至60°C，然后加入溶液重量的0.7倍的乙醇，加入乙醇的同时进行搅拌，在60°C维持Ih，同时关闭搅拌。
[0016](4)严格控制步骤(3)得到的溶液混合物的温度，采用梯度降温的方法将步骤(3)中得到的溶液混合物降温，本实施例控制每小时温度降低5°C，经过7h的降温，直至温度降低至室温25°C，最终本步骤得到上层含乙醇清液、下层含肝素钠沉淀固体的混合物。
[0017]使用先升温然后逐步梯度降温的过程，能够确保肝素钠逐步稳定的从溶液中析出并且沉淀，最大程度的保障肝素钠与硫酸皮肤素的分离效果。
[0018](5)待步骤(4)中的梯度降温过程结束后，将步骤(4)所得混合物中的废乙醇上清倾倒去除，再加入乙醇对沉淀得到的下层固体进行脱水，逐步将湿固体碾碎，脱水完成以后，静置0.5h，倾倒除去脱水用的废乙醇，再次加入乙醇进行脱水，完成两次脱水以后，对所得固体烘干得到产品。
[0019]经检测得到的产品的主要指标如下:
经过紫外分光光度计检测0D400nm的数值，通过此项指标显示颜色去除率，检测得本次试验颜色去除率为55%。
[0020]通过HPLC检测产品的皮肤素含量，本次试验中，皮肤素含量由22.5%降至7.2%，硫酸皮肤素的去除率为68.0%。
[0021]实施例2:
(I)取10g粗品肝素钠溶解于重量浓度为10%的100ml醋酸钠溶液，观察溶解现象，确保粗品肝素钠溶解完全。
[0022](2)使用醋酸溶液调节步骤(I)中所得到溶液的pH，一边搅拌一边加入醋酸溶液，直至pH=5.0，停止调酸。
[0023]使用醋酸调节pH，在溶液中形成了一个缓冲体系，能够确后续步骤中pH的稳定，溶液始终维持一个偏酸性的环境体系，有利于肝素钠的分离。
[0024](3)将步骤(2)中所得溶液加热至60°C，然后加入溶液重量的1.0倍的乙醇，加入乙醇的同时进行搅拌，在60°C维持Ih，同时关闭搅拌。
[0025](4)严格控制步骤(3)得到的溶液混合物的温度，采用梯度降温的方法将步骤(3)中得到的溶液混合物降温，本实施例控制每小时温度降低4°C，经过8h的降温，直至温度降低至室温22°C，最终本步骤得到上层含乙醇清液、下层含肝素钠沉淀固体的混合物。
[0026]使用先升温然后逐步梯度降温的过程，能够确保肝素钠逐步稳定的从溶液中析出并且沉淀，最大程度的保障肝素钠与硫酸皮肤素的分离效果。
[0027](5)待步骤(4)中的梯度降温过程结束后，将步骤(4)所得混合物中的废乙醇上清液倾倒去除，再加入乙醇对沉淀得到的下层沉淀固体进行脱水，逐步将湿固体碾碎，脱水完成以后，静置0.5h，倾倒除去脱水用的废乙醇，再次加入乙醇进行脱水，完成两次脱水以后，对所得固体烘干得到产品。
[0028]经检测得到的产品的主要指标如下:
经过紫外分光光度计检测0D400nm的数值，通过此项指标显示颜色去除率，检测得本次试验颜色去除率为48%。
[0029]通过HPLC检测产品的皮肤素含量，本次试验中，皮肤素含量由22.5%降至8.5%，硫酸皮肤素的去除率为62.2%。
[0030]有以上具体实施例可知，通过本发明处理过的肝素钠，能够有效的去除颜色并降低肝素钠中硫酸皮肤素的含量。当这种肝素钠在后续的精制过程中，能够大大减少氧化去色过程中高锰酸钾或者过氧化氢的用量，降低氧化剂的用量，减少氧化剂对肝素钠生物活性的破坏，提高了产品品质，同时减少了分次沉淀的次数，提高了产品收率。
[0031 ] 在本发明的其它实施例中，步骤(I)中，用于溶解粗品肝素钠的醋酸钠溶液重量浓度可以是5110%之间的一个合适数值。
[0032]在本发明的其它实施例中，步骤(2)中，可以最终将溶液pH调节至3.5~5.0之间的一个合适值。
[0033]在本发明的其它实施例中，步骤(4)中，可以根据操作时的室温，可以将梯度降温过程中每小时温度降低的值控制在4~6°C之间。
【权利要求】
1.一种肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法，其特征在于，其包括以下步骤:(1)将肝素钠溶解在醋酸钠溶液中；(2)使用醋酸将步骤(1)中所得到的溶液pH调节至酸性；(3)将步骤(2)中所得溶液加热至60°C，然后在溶液中加入溶液重量的0.7-1.0倍的乙醇，加入乙醇的同时进行搅拌，所得溶液在60°C条件下保持lh后停止搅拌；(4)采用梯度降温的方法将步骤(3)中得到的溶液混合物降温，直至温度降低至室温，本步骤得到上层含乙醇清液、下层含肝素钠沉淀固体的混合物；(5)步骤(4)中的梯度降温程结束后，去除含废乙醇的上清液后，将下层的沉淀固体进行脱水烘干，得到纯化后的肝素钠。
2.根据权利要求1所述的肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法，其特征在于:步骤(1)中，用于溶解粗品肝素钠的醋酸钠溶液重量浓度为5°/『10%。
3.根据权利要求1所述的肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法，其特征在于:步骤(2)中，使用醋酸将溶液pH最终调节至3.5-5.0。
4.根据权利要求1所述的肝素钠的去色与降低硫酸皮肤素含量的方法，其特征在于:步骤(4)中，梯度降温过程中控制每小时温度降低4~6°C。
【文档编号】C08B37/10GK104448044SQ201410812877
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月24日 优先权日:2014年12月24日
【发明者】唐咏群, 黄锡伟, 王春华, 高原, 董晗 申请人:南京健友生化制药股份有限公司