一种高纯度低分子肝素的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种低分子肝素的提纯制备方法，属于生物工程领域。主要包括阴离子交换树脂，疏水层析树脂。此工艺操作简单，安全可控，成本较低。
【专利说明】一种高纯度低分子肝素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生物药用原料的制备方法，属于生物工程领域，具体是一种低分子肝素钠的生产工艺。
技术背景
[0002]依诺肝素钠属于低分子肝素，主要特征为分子中有一个4 一烯吡喃糖醛酸结构。本品抗血栓作用强、出血危险性小，是目前抗凝血、抗血栓形成的主要治疗药物之一，2006年的全球销售额达24.3ML欧元。法国Aventis公司曾研发，并于1993年申请过制备工艺的专利。但该专利未涉及生产过程中酯化率、成环率及产物纯化等关键工艺。采用该专利方法生产的样品无法达到欧洲药典4.0版规定的标准。本工艺究通过控制上述反应条件，得到适于工业生产的工艺，所得依诺肝素钠成品均符合欧洲药典。
【发明内容】
[0003]本发明在于解决上述问题，提供一种纯度高，安全性好的依诺肝素钠的制备方法。
[0004]本发明的技术方案为:
(O将粗品一诺肝素钠溶于质量百分浓度1.0-1.6%氯化钠溶液中，得到低分子肝素的溶液，向滤液中加碱液直至产生沉淀，静置，过滤去除不溶物，得到滤液；
(2)将步骤(I)中滤液用盐酸调pH到7.1-7.6，上疏水层析柱，收集洗脱液；
(3)将步骤(2)中收集的洗脱液用纯化水稀释，将稀释的洗脱液上样到阴离子交换柱，上样结束后，分别用0.005mol/l—0.02mol/l的和0.2mol/l—0.5mol/l的氯化钠溶液洗涤柱体直至钡盐检测无白色浑浊，最后以lm0l/l--3m0l/l的氯化钠溶液洗涤，收集洗脱液；
(4)将步骤(3)中的洗脱液用纳滤膜孔径<1000的纳滤脱盐浓缩，直至浓缩液中肝素钠的浓度为10wt%—25wt% ；
(5)将步骤(4)中得到的浓缩液沉淀，干燥即得到依诺肝素钠成品。
【具体实施方式】
实施例
[0005]将50g依诺肝素钠溶于质量百分浓度1.6%氯化钠溶液中，得到低分子肝素的溶液，向滤液中加碱液直至产生沉淀，静置，过滤去除不溶物，得到滤液；将滤液用盐酸调PH到7.2，上疏水层析柱，收集洗脱液；将收集的洗脱液用纯化水稀释，将稀释的洗脱液上样到阴离子交换柱，上样结束后，分别用0.0lmol/Ι的和0.3mol/l的氯化钠溶液洗涤柱体直至钡盐检测无白色浑浊，最后以2mol/l的氯化钠溶液洗涤，收集洗脱液；洗脱液用纳滤膜孔径彡1000的纳滤脱盐浓缩，直至浓缩液中肝素钠的浓度为10wt%--25wt%;将得到的浓缩液沉淀，干燥即得到依诺肝素钠成品。最终得到的依诺肝素钠各项指标符合《欧洲药典7.0》。
【权利要求】
1.一种高纯度低分子肝素的制备方法，其特征在于其工艺步骤如下: 将粗品低分子肝素钠溶于氯化钠溶液中，得到低分子肝素的溶液，向滤液中加碱液直至产生沉淀，静置，过滤去除不溶物，得到滤液； 将步骤(I)中滤液用盐酸调pH到7.1-7.6，上疏水层析柱，收集洗脱液； 将步骤(2)中收集的洗脱液用纯化水稀释，将稀释的洗脱液上样到阴离子交换柱，上样结束后，分别用0.005mol/l—0.02mol/l氯化钠和0.2mol/l—0.5mol/l的氯化钠溶液洗涤柱体直至钡盐检测无白色浑浊，最后以lm0l/l--3m0l/l的氯化钠溶液洗涤，收集洗脱液； 将步骤(3)中的洗脱液进行纳滤脱盐浓缩，直至浓缩液中肝素钠的浓度为10wt%—25wt% ； 将步骤(4)中得到的浓缩液沉淀，干燥即得到低分子肝素钠成品。
2.根据权利要求1所述的低分子肝素钠的制备方法，其特征在于:步骤(I)中的氯化钠溶液的质量百分浓度为1.0—1.6%。
3.根据权利要求1所述的低分子肝素钠的制备方法，其特征在于:步骤(4)中所述的纳滤采用的纳滤膜孔径截留分子量< 1000。
【文档编号】C08B37/10GK104448045SQ201410813448
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月24日 优先权日:2014年12月24日
【发明者】刘冠男, 魏伟, 夏衬来 申请人:青岛九龙生物医药有限公司