1.一种合成DNA的方法,其特征在于,所述合成DNA的方法的步骤包括:
提供寡核苷酸池,所述寡核苷酸池中含有至少两种寡核苷酸;
采用PCR方法,从寡核苷酸池中取出所需寡核苷酸序列组,并将所取出的寡核苷酸序列生成双链DNA;
将双链DNA进行酶切,在所述双链DNA末端形成互补的粘性末端;
将切割后的DNA片段进行连接;
高通量DNA测序,筛选出正确的DNA序列。
2.根据权利要求1所述的DNA的方法,其特征在于,所述合成DNA的方法的步骤包括:
提供寡核苷酸,所述寡核苷酸两端分别连接有标签DNA序列,得到寡核苷酸池;其中,所述寡核苷酸序列结构如下:
TagF-E1-S-E2-TagR
其中,TagF和TagR分别为两端的标签DNA序列,其特异性标记靶标DNA;E1和E2为酶切位点,S为靶标DNA序列;
利用TagF和TagR,通过PCR方法,从寡核苷酸池中取出所需寡核苷酸序列组,并将所取出的寡核苷酸序列生成双链DNA;
将双链DNA进行E1和E2酶切,在所述双链DNA末端形成互补的粘性末端;将切割后的DNA片段进行连接;
高通量DNA测序,筛选出正确的DNA序列。
3.根据权利要求2所述的DNA的方法,其特征在于,所述合成DNA的方法的步骤包括:
提供寡核苷酸,所述寡核苷酸两端分别连接有标签DNA序列,得到寡核苷酸池;其中,所述寡核苷酸序列结构如下:
TagF-E1-S-E2-TagR
其中,TagF和TagR分别为两端的标签DNA序列,其特异性标记靶标DNA;E1和E2为酶切位点,S为靶标DNA序列;
通过PCR方法,从寡核苷酸池中取出所需寡核苷酸序列组,并将所取出的寡核苷酸序列生成双链DNA;其中,每组寡核苷酸序列中,有至少两条序列结构如 下:
TagF-E1x-S-E2x-TagR
TagF-E1y-S-E2y-TagR
将双链DNA进行E1和E2酶切,在所述双链DNA末端形成互补的粘性末端;保留TagF-E1x-S和S-E2y-TagR
将切割后的DNA片段进行连接;
并通过PCR方法在连接后的DNA片段两端引入一段末端核苷酸序列;
高通量DNA测序,筛选出正确的DNA序列。
4.根据权利要求2所述的DNA的方法,其特征在于,所述合成DNA的方法的步骤包括:
提供寡核苷酸,所述寡核苷酸两端分别连接有标签DNA序列,得到寡核苷酸池;其中,所述寡核苷酸序列结构如下:
TagF-E1-S-E2-TagR
其中,TagF和TagR分别为两端的标签DNA序列,其特异性标记靶标DNA;E1和E2为酶切位点,S为靶标DNA序列;
通过PCR方法,从寡核苷酸池中取出所需寡核苷酸序列组,并将所取出的寡核苷酸序列生成双链DNA;
将双链DNA进行E1和E2酶切,在所述双链DNA末端形成互补的粘性末端;将切割后的DNA片段进行连接;
并通过DNA连接方法在连接后的DNA片段两端引入一段接头序列,其中接头序列含有一段末端核苷酸序列和酶切位点E;
高通量DNA测序,筛选出正确的DNA序列。
5.根据权利要求3或4所述的合成DNA的方法,其特征在于,所述合成DNA的方法的步骤还包括:
筛选出正确的DNA序列后,采用根据所述末端核苷酸序列设计的引物,对所筛选出的正确的DNA序列进行PCR扩增,并将扩增产物进行E2x和E1y酶切或E酶切,得到目标序列。
6.根据权利要求1-4中任意一项所述的合成DNA的方法,其特征在于,所述酶切使用双链DNA限制性内切酶进行实施。
7.根据权利要求6所述的合成DNA的方法,其特征在于,所述双链DNA限制性内切酶的识别位点在切割位点之外,并产生非回文性粘性末端。
8.根据权利要求2-4中任意一项所述的合成DNA的方法,其特征在于,E1、E2、E1x、E2x、E1y、E2y和E分别独立地选自Type I、Type II、Type III型酶切位点中的任意一种或几种。
9.根据权利要求8所述的合成DNA的方法,其特征在于,E1、E2、E1x、E2x、E1y、E2y和E分别独立地选自Type IIS酶切位点中的任意一种或几种。
10.根据权利要求9所述的合成DNA的方法,其特征在于,所述Type IIS酶切位点分别选自AlwI、BbsI、BbvI、BfuAI、BsaI、BsmBI、BspMI、BspQI、FokI、HgaI、MmeI、SapI、SfaNI中的任意一种或几种。
11.根据权利要求3或4所述的合成DNA的方法,其特征在于,所述末端核苷酸序列长度为5-50nt。
12.根据权利要求11所述的合成DNA的方法,其特征在于,所述末端核苷酸序列至少包括PCR引物序列。
13.根据权利要求1所述的合成DNA的方法,其特征在于,所述寡核苷酸序列长度为≤500nt。
14.根据权利要求1所述的合成DNA的方法,其特征在于,所述寡核苷酸池中的寡核苷酸序列由芯片合成技术制备。
15.一种权利要求1中所述合成DNA方法的应用,其特征在于,所述应用选自:制备自然界中已经存在DNA序列;
人工设计或人工预测的、自然界中不存在的DNA序列。
16.根据权利要求15所述的应用,其特征在于,所述应用选自:
在基因修饰中的应用;
制备基因突变株中的应用;
制备克隆抗体和/或重组抗体中的应用;
制备cDNA中的应用;
制备核酸疫苗中的应用;
制备核酸药物中的应用;
制备基因改造生物中的应用;
制备蛋白和/或重组蛋白中的应用;
制备抗体药中的应用。