稳定化的流感血凝素茎区三聚体及其用途的制作方法

本发明提供了新的基于血凝素(HA)蛋白的流感疫苗，其是易于制造的，有力的并且引发针对流感HA蛋白的茎区的广泛中和性流感抗体。特别地，本发明提供了融合前构象的修饰的流感HA茎区蛋白及其部分，其可用于诱导中和性抗体的产生。本发明还提供在其表面上表达流感HA蛋白的新型基于纳米颗粒(np)的疫苗。此类纳米颗粒包含融合蛋白，每个融合蛋白包含连接到来自流感HA蛋白的茎区的抗原性或免疫原性部分的铁蛋白的单体亚基。因为此类纳米颗粒在其表面上展示流感HA蛋白茎区，所以它们可以用于针对流感病毒对个体接种疫苗。

发明背景

通过针对流感病毒接种疫苗诱导的保护性免疫应答主要针对病毒HA蛋白，其是病毒表面上负责病毒与宿主细胞受体的相互作用的糖蛋白。病毒表面上的HA蛋白是HA蛋白单体的三聚体，其被酶促切割以产生氨基端末端HA1和羧基端末端HA2多肽。球状头部仅由HA1多肽的主要部分组成，而将HA蛋白锚定到病毒脂质包膜中的茎由HA2和HA1的部分组成。HA蛋白的球状头部包括两个结构域：受体结合结构域(RBD)，包括唾液酸结合位点的约148个氨基酸残基结构域，和退化酯酶结构域(vestigial esterase domain)，刚好低于RBD的较小的约75个氨基酸残基区域。球状头部牵涉几个包括免疫显性表位的抗原位点。实例包括Sa，Sb，Ca₁，Ca₂和Cb抗原位点(参见例如Caton AJ et al,1982,Cell 31,417-427)。RBD-A区包括Sa抗原位点和Sb抗原位点的部分。

针对流感的抗体通常靶向HA球状头中的可变抗原位点，其围绕保守的唾液酸结合位点，因此仅中和抗原紧密相关的病毒。HA头部的可变性是由于流感病毒的恒定抗原漂移所致，并且造成流感的季节性流行病。相比之下，HA茎是高度保守的，并且经历很少的抗原漂移。不幸的是，不同于免疫显性头部，保守的HA茎不是非常免疫原性的。此外，病毒基因组的基因区段可以在宿主物种中进行重配(抗原漂移)，创建具有改变的抗原性的能够变成大流行的新病毒[Salomon,R.et al.Cell 136,402-410(2009)]。直到现在，每年更新流感疫苗以反映即将到来的流行病毒的预测的HA和神经氨酸酶(NA)。

最近，分离了一类全新的针对流感病毒的广泛中和性抗体，其识别高度保守的HA茎[Corti,D.et al.J Clin Invest 120,1663-1673(2010)；Ekiert,D.C.et al.Science 324,246-251(2009)；Kashyap,A.K.et al.Proc Natl Acad Sci USA105,5986-5991(2008)；Okuno,Y.et al.J Virol 67,2552-2558(1993)；Sui,J.et al.Nat Struct Mol Biol 16,265-273(2009)；Ekiert,D.C.et al.Science 333,843-850(2011)；Corti,D.et al.Science 333,850-856(2011)]。与毒株特异性抗体不同，那些抗体能够中和多种抗原性独特的病毒，因此诱导此类抗体已成为下一代通用疫苗开发的焦点[Nabel,G.J.et al.Nat Med 16,1389-1391(2010)]。然而，通过疫苗接种用此类异源中和概况强力引发这些抗体是困难的[Steel,J.et al.MBio 1,e0018(2010)；Wang,T.T.et al.PLoS Pathog 6,e1000796(2010)；Wei,C.J.et al.Science 329,1060-1064(2010)]。通过遗传操作除去HA(其含有竞争性表位)的免疫显性头部区和稳定化所得茎结构域是改善这些广泛中和性茎抗体的引发的一种潜在方式。

目前用于流感的疫苗策略使用化学灭活或减毒活流感病毒。两种疫苗通常在含胚卵中产生，其由于耗时的方法和有限的生产能力而存在主要的制造限制。当前疫苗的另一个更关键的限制是其高度毒株特异性功效。在2009年H1N1大流行的出现期间，这些挑战变得显著，从而验证了能够克服这些限制的新疫苗平台的必要性。病毒样颗粒代表了这种替代方法之一，目前正在临床试验中进行评估[Roldao,A.et al.Expert Rev Vaccines 9,1149-1176(2010)；Sheridan,C.Nat Biotechnol 27,489-491(2009)]。代替含胚卵，通常包含HA，NA和基质蛋白1(M1)的VLP可以在哺乳动物或昆虫细胞表达系统中大规模生产[Haynes,J.R.Expert Rev Vaccines 8,435-445(2009)]。这种方法的优点是其颗粒，多价性质和正确折叠、三聚体HA刺突的真实展示，其忠实模拟感染性病毒体。相比之下，由于其组装的性质，有包膜的VLP含有小的但有限的宿主细胞组分，其可以在重复使用该平台后呈现潜在的安全性，免疫原性挑战[Wu,C.Y.et al.PLoS One 5,e9784(2010)]。此外，VLP诱导的免疫与当前疫苗基本相同，因此不可能显著改善疫苗诱导的保护性免疫的效力和广度。除了VLP外，重组HA蛋白也已经在人体中进行了评估[Treanor,J.J.et al.Vaccine 19,1732-1737(2001)；Treanor,J.J.JAMA 297,1577-1582(2007)]，尽管诱导保护性中和性抗体滴度的能力有限。在这些试验中使用的重组HA蛋白在昆虫细胞中产生并且可能不优先形成天然三聚体[Stevens,J.Science303,1866-1870(2004)]。

尽管常规流感疫苗有几种替代，但在过去几十年中生物技术的进步已经允许利用生物材料的工程化来产生新的疫苗平台。铁蛋白，几乎所有活生物体中发现的铁贮存蛋白，是已经广泛研究和工程化以用于许多潜在的生物化学/生物医学目的的实例[Iwahori,K.U.S.Patent 2009/0233377(2009)；Meldrum,F.C.et al.Science 257,522-523(1992)；Naitou,M.et al.U.S.Patent2011/0038025(2011)；Yamashita,I.Biochim Biophys Acta 1800,846-857(2010)]，包括用于展示外源表位肽的潜在疫苗平台[Carter,D.C.et al.U.S.Patent 2006/0251679(2006)；Li,C.Q.et al.Industrial Biotechnol 2,143-147(2006)]。其作为疫苗平台的用途是特别有趣的，这是由于其自身组装和抗原的多价呈递，这比单价形式诱导更强的B细胞应答以及诱导T细胞非依赖性抗体应答[Bachmann,M.F.et al.Annu Rev Immunol 15,235-270(1997)；Dintzis,H.M.et al.Proc Natl Acad Sci USA 73,3671-3675(1976)]。此外，铁蛋白的分子结构，其由组装成具有432对称的八面体笼的24个亚基组成，具有在其表面上展示多聚体抗原的潜力。

仍然需要提供强力的针对流感病毒的保护的有效的流感疫苗。特别地，仍然需要保护个体免受流感病毒异源株，包括进化中的未来的季节性和大流行性流感病毒株的流感疫苗。本发明通过提供新颖的基于纳米颗粒的疫苗来满足这种需要，所述疫苗由新的HA稳定化的茎(SS)组成，没有遗传上融合到纳米颗粒表面的可变免疫显性头部区(gen6HA-SS np)，从而产生流感疫苗，其是易于制造的，有力的，并且引发广泛异亚型保护性的抗体。

附图简述

图1a显示了HA头部的基于结构的除去允许保留茎免疫原抗原性。带状模型描绘了HA-SS设计途径，开始于融合到T4折叠物(foldon)三聚化结构域(在HA胞外域下方为绿色)的HA胞外域的模型。最后三个HA-SS设计(Gen4-6)遗传融合到铁蛋白纳米颗粒(下图)。每个HA三聚体的一个单体被遮蔽。用于创建Gen6的核心稳定化突变显示为球体。每种HA-SS免疫原设计下方显示了三聚化百分比(包括折叠物)和对规定mAb的抗原亲和常数(K_D，M)。ND，未确定；NA，不适用。图1b分别显示没有折叠物结构域的H1N1HA胞外域(PDB ID 1GBN)，Gen4HA-SS和Gen6HA-SS的HA部分的表面呈现，其通过与H5N1 2004VN的序列保守加阴影(深灰色，可变；白色，保守)。分别对于Gen4和Gen6HA-SS，无折叠物结构域的免疫原的HA茎百分比增加。*进一步评估此免疫原，并且在本公开的实施例部分中称为H1-SS-np。图1c显示了描绘在Gen6HA-SS中Glu103-Lys51盐桥替换为Leu103-Met51疏水对的横截面图的带状图。虚线(左)指示横截面的位置。图1d显示了以其可溶性和纳米颗粒形式呈现的Gen6HA-SS的抗原性。三个图显示了一个头(CH65)和三个茎特异性抗体(CR6261，CR9114，FI6v3)对Gen6’HA-SS(左图)，H1-SS-np(中图)和H1-SS-np’(右图)的ELISA结合。浓度范围为10-6.40×10^-4μg/mL的抗体的ELISA结合。图1e和图1f显示了H1-SS-np(图1e)和H1-SS-np’(图1f)与HA茎定向性bNAb结合的Octet传感图。将H1-SS-np固定在Octet探针上，并与不同浓度的抗体结合片段Fab或scFv茎定向性抗体温育，其在每个传感图的顶部指示。图1g显示通过抗IgM(＝总受体活性)，空np，HA-np(HA含有Y98F突变，以消除与唾液酸的非特异性结合)和H1-SS-np’的野生型IGHV1-69v-基因逆转的CR6261BCR(左图)对双重Ile53Ala/Phe54Ala CDRH2突变体BCR(右图)的刺激通过流式细胞术测量为Ca²⁺敏感染料FuraRed的Ca²⁺结合/未结合状态的比率。

图2a显示三聚体，而不是纳米颗粒茎免疫原，展示HA茎展开。左图描述了Gen3HA-SS(黑色和灰色)和mAb C179(标记)之间的复合物的晶体结构的带状图。图2a的中间图示出了在两个不同视图(侧面和底部)中比较晶体结构(光)与模型(暗)的展开的草图。图2a的右图显示了Gen3HA-SS/C179结合界面与1957H2N2HA/C179结合界面(PDB ID 4HLZ)的重叠。抗体CDR环对于重链用“H”标记，对于轻链用“L”标记。重链框架3环标记为FR3。RMSD，均方根偏差。图2b描绘了与图2a中相同的图格式，显示了Gen4HA-SS，并且在右图中，Gen4HA-SS/CR6261重链结合界面与1918H1N1HA/CR6261结合界面(PDB ID 3GBN)的重叠。图2c显示H1-SS-np冷冻电子显微术(cryo-electron microscopy)分析。前两个图分别显示了Gen4HA-SS晶体结构(剪切(cropped))和H1-SS-np模型，分别适合于一个H1-SS-np刺突的冷冻电子显微术图。图2c的接下来两个图显示了适合到H1-SS-np低温电子显微术图中的整个H1-SS-np模型的两个不同视图。图2d显示分别用Superdex 20010/300和Superose 610/300柱得到的HA，Gen4HA-SS和H1-SS-np’(左图)和HA np，Gen4HA-SS-np np和H1-SS-np’和H1-SS-np(右图)的大小排阻层析中流感病毒HA和HA-SS不溶性和纳米颗粒形式的表征。图2e是HA-np(左图)和Gen4HA-SS-np(中图)和H1-SS-np(右图)的负染色透射电子显微术图像。最初以67,000×放大率记录图像。图2f显示H1-SS-np场的低温EM图像。箭头描绘一些环样纳米颗粒；比例尺为20nm。图2g显示了通过纳米颗粒(插图)的全局圆形平均值的2D径向密度概况(曲线)对H1-SS-np的大小分析。该概况示出了两层结构，其具有以距离颗粒中心约为中心的基峰和跨越约至范围的第二峰。峰高度的差异对于以含有几个离散刺突的层为顶部的更连续的蛋白质层是一致的。图2h显示H1-SS-np的无参考的2D类平均值，没有施加对称。类别指示具有蛋白质壳和突出的刺突密度的颗粒的不同视图，并且视图与预期的八面体对称一致。图2i通过傅里叶壳关联(FSC)图的H1-SS-np 3D重建的分辨率评估。遵循如在RELION软件包中实施的金标准程序(gold-standard procedure)，使用FSC(0.143)作为截留值。

图3a显示免疫的小鼠和雪貂的免疫应答。左图显示针对多种多样的HA蛋白的抗体端点滴度，并且右图显示来自用SAS佐剂化(SAS-adjuvanted)的H1-SS-np免疫的小鼠(每组n＝10)的血清的中和滴度。图3b显示了用SAS-佐剂化的空np(n＝5)，H1-SS-np’(n＝6)，2006-07TIV(n＝6)或H5HA(2xDNA/1xMIV；n＝6)免疫的雪貂的免疫应答。图3b的左图显示了H1-SS-np’免疫血清对多种多样的HA蛋白的抗体端点滴度，并且右图显示了来自四种免疫方案的血清的HA茎反应性。图3c显示了用三种施用方案免疫的雪貂的血清的中和滴度。在加强后两周对每个个体动物显示抗体端点和IC₅₀滴度。虚线指示ELISA和假型化慢病毒报告物测定法两者的基线(1:25稀释)。误差棒表示平均值±s.d。使用双尾学生t检验(two-tailed student’s t-test)进行统计分析。

图4a显示了在小鼠和雪貂中针对致死性H5N1 2004VN流感病毒攻击赋予的免疫保护。在第0、8和11周，用SAS-佐剂化的空np或H1-SS-np对BALB/c小鼠(每组n＝10)接种疫苗三次，或保持未接种疫苗(未处理)。最后一次疫苗接种后四周，用高剂量(25LD50)的H5N1 2004VN病毒攻击小鼠，并监测体重减轻(左图)和存活(右图)达14天。图4b显示用SAS-佐剂化的空np(n＝5)，H1-SS-np’(n＝6)，2006-07TIV(n＝6)或H5HA(DNA/MIV；n＝6)，并在用1000TCID₅₀的H5N1 2004VN最后免疫后6周攻击。监测体重减轻(左图)和存活(右图)达14天。图4c显示在用高剂量(25LD₅₀)的H5N1 2004VN流感病毒攻击之前24小时用来自未处理或H1-SS-np-免疫动物的10mg Ig被动免疫(腹膜内)的BALB/c小鼠(每组n＝10)。监测体重减轻(左图)和存活(右图)达14天。在图4a，4b和4c的每一个中，黑色虚线(右图)指示50％存活。使用时序(Mantel-Cox)检验进行统计分析。图4d显示了未处理和H1-SS-np免疫Ig的表征。通过ELISA，未处理Ig(左)和H1-SS-np-免疫Ig(右)对空铁蛋白np和各种HA蛋白的结合。图4e显示在输注多克隆Ig后24小时的小鼠血清中Gen6HA-SS特异性Ig的估计浓度。

图5-24提供了用于产生本发明的肽构建体的质粒图谱和序列。如本公开表2中详细描述的，图5显示了包含SEQ ID NO:266的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图6显示了包含SEQ ID NO:273的Gen6_H1CA09_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图7显示包含SEQ ID NO:280的Gen6_H2Sing57_K394M/M445L/E446L/E448Q/R449W/D452L/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图8显示包含SEQ ID NO:287的Gen6_H5Ind05K394M/M445L/E446L/E448Q/R449W/D452L/Y437D/N438L/S49bW_N19Q的图谱。图9显示包含SEQ ID NO:294的Gen6_H1NC99_K394M/E446L_N19Q的图谱。图10显示包含SEQ ID NO:301的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图11显示包含SEQ ID NO:308的Gen6_H1NC99_K394I/E446I/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图12显示包含SEQ ID NO:315的Gen6H1NC99K394L/E446I/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图13显示包含SEQ ID NO:322的Gen6_H1NC99_K394L/E446L/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图14显示包含SEQ ID NO:329的Gen6_H1NC99_K394M/E446M/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图15显示包含SEQ ID NO:336的Gen6H1NC99K394Q/E446Q/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图16显示包含SEQ ID NO:343的Gen6H1NC99K394M/E446L/Y437D/N438L/H45N/V47T_N19Q的图谱。图17显示包含SEQ ID NO:350的Gen6H1NC99V36I/K394M/L445M/E446L/E448Q/R449F/D452L/Y437D/N438L N19Q的图谱。图18显示包含SEQ ID NO:357的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/S402aN/G402cT/S402dG/T402fA/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图19显示包含SEQ ID NO:364的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/S402bG/G402cN/S402eT/T402fA/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图20显示包含SEQ ID NO:371的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/S402eN/Y437D/N438L_N19Q的图谱。图21显示了包含SEQ ID NO:378的Gen6H1NC99K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/G402cN/G402eT/T402fA/Q370N/E372T/Y437D/N438L_S21T的图谱。图22显示了包含SEQ ID NO:386的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/E448Q/R449W/D452L/G402cN/G402eT/T402fA/Q370N/E372T/Y437D/N438L_S21T/Q69N的图。图23显示了包含SEQ ID NO:392的Gen6_H1NC99_K394M/E446L/Y437D/N438L/Δ172-174的图。图24显示了包含SEQ ID NO:399的Gen6_H1NC99_rpk3_Dloop2的图。

发明详述

本发明涉及用于流感病毒的新型疫苗。更具体地，本发明涉及新的基于流感HA蛋白的疫苗，其引发针对来自一大批流感病毒的HA蛋白的茎区的免疫应答。它还涉及自组装纳米颗粒，所述自组装纳米颗粒在其表面上展示来自流感HA蛋白的茎区的融合前构象的免疫原性部分。此类纳米颗粒可用于针对流感病毒对个体接种疫苗。因此，本发明还涉及用于产生此类纳米颗粒的蛋白质构建体和编码此类蛋白质的核酸分子。另外，本发明涉及生产本发明的纳米颗粒的方法，以及使用此类纳米颗粒对个体接种疫苗的方法。

在进一步描述本发明前，应当理解本发明不限于描述的具体实施方案，因此当然可以有所变化。还应当理解，本文中使用的术语仅为了描述具体的实施方案，而并不意图为限制性的，因为本发明的范围仅会以权利要求书为限。

应当注意到，如本文中及所附权利要求书中使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”包括复数提及物，除非上下文另有明确规定。例如，核酸分子指一种或多种核酸分子。因此，术语“一个”、“一种”、“一个/种或多个/种”和“至少一个/种”可以互换使用。类似地，术语“包含”、“包括”和“具有”可以互换使用。进一步注意到，权利要求书可以撰写为排除任何任选要素。因此，此陈述意图充当与权利要求要素的叙述结合使用排除术语，如“单独”、“仅”等，或者使用“负”限定的前置基础。

在上文外，除非另有明确定义，本文中公开的各个实施方案共同的下列术语和短语如下定义：

如本文中使用的，蛋白质构建体是由人工制备的蛋白质，其中两个或更多个氨基酸序列以自然界中未发现的方式共价连接。被连接的氨基酸序列可以是相关的或不相关的。如本文所使用的，如果通常没有发现多肽序列的氨基酸序列在其天然环境(例如细胞内)中通过共价键连接在一起，则它们是不相关的。例如，通常没有发现构成铁蛋白的单体亚基的氨基酸序列和流感HA蛋白的氨基酸序列通过共价键连接在一起。因此，此类序列被认为是不相关的。

蛋白质构建体还可以包含相关的氨基酸序列。例如，流感HA蛋白的结构使得头部区氨基酸序列在两端侧翼为茎区氨基酸序列。通过遗传手段，可以通过从头部区的中间除去氨基酸残基，同时保持侧翼为茎区序列的头部区的部分，来创建HA蛋白的缺失形式。虽然最终分子中序列的顺序保持相同，但氨基酸之间的空间关系将不同于天然蛋白。因此，此类分子将被认为是蛋白质构建体。根据本发明，蛋白质构建体也可以称为融合蛋白。

蛋白质构建体中的氨基酸序列可以彼此直接连接，或者它们可以使用接头序列连接。接头序列，肽或多肽是用于连接具有期望特征(例如，结构，表位，免疫原性，活性等)的两种蛋白质的短(例如，2-20)氨基酸序列。接头序列通常不具有其自身的活性，并且通常用于允许蛋白质构建体的其它部分呈现期望的构象。接头序列通常由小氨基酸残基和/或其运行(runs)，例如丝氨酸，丙氨酸和甘氨酸制备，尽管不排除使用其它氨基酸残基。

如本文中使用的，术语免疫原性是指特定蛋白质或其特定区域引发对特定蛋白质或包含与特定蛋白质具有高度同一性的氨基酸序列的蛋白质的免疫应答的能力。根据本发明，具有高同一性程度的两种蛋白质具有至少80％相同，至少85％相同，至少87％相同，至少90％相同，至少92％相同，至少93％相同，至少94％相同，至少95％相同，至少96％相同，至少97％相同，至少98％相同或至少99％相同的氨基酸序列。测定两个氨基酸或核酸序列之间的百分比同一性的方法是本领域已知的。

如本文中使用的，对本发明的疫苗或纳米颗粒的免疫应答是受试者中形成对疫苗中存在的HA蛋白的体液和/或细胞免疫应答。为了本发明的目的，“体液免疫应答”是指由抗体分子(包括分泌型(IgA)或IgG分子)介导的免疫应答，而“细胞免疫应答”是由T淋巴细胞和/或其它白血细胞介导的。细胞免疫的一个重要方面涉及溶细胞性T细胞(“CTL”)的抗原特异性应答。CTL对肽抗原具有特异性，所述肽抗原与由主要组织相容性复合物(MHC)编码并且在细胞表面上表达的蛋白质联合呈现。CTL有助于诱导和促进细胞内微生物的破坏或被此类微生物感染的细胞的溶解。细胞免疫的另一方面涉及辅助T细胞的抗原特异性应答。辅助T细胞作用为帮助刺激非特异性效应细胞针对细胞的功能，并且聚焦非特异性效应细胞针对细胞的活性，所述细胞在其表面上展示与MHC分子联合的肽抗原。细胞免疫应答还指由活化的T细胞和/或其它白细胞(包括源自CD4+和CD8+T细胞的那些)产生的细胞因子，趋化因子和其它此类分子的产生。

因此，免疫应答可以是刺激CTL和/或辅助T细胞的产生或激活的应答。也可以刺激趋化因子和/或细胞因子的产生。疫苗还可以引发抗体介导的免疫应答。因此，免疫应答可以包括一种或多种以下效应：由B细胞产生抗体(例如IgA或IgG)；和/或特异性针对存在于疫苗中的HA蛋白的抑制物(suppressor)，细胞毒性或辅助T细胞和/或T细胞的活化。这些应答可用来中和感染性(例如抗体依赖性保护)，和/或介导抗体-补体或抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)以向免疫的个体提供保护。此类反应可以使用本领域熟知的标准免疫测定法和中和测定法来测定。

如本文中使用的，术语抗原性的，抗原性等是指由抗体或一组抗体结合的蛋白质。类似地，蛋白质的抗原部分是被抗体或一组抗体识别的任何部分。根据本发明，通过抗体识别蛋白质是指抗体选择性地与蛋白质结合。如本文中使用的，短语选择性地结合，选择性结合等是指抗体与同HA无关的结合蛋白或样品或测定法中非蛋白质组分形成对比优先结合HA蛋白的能力。优先结合HA的抗体是结合HA但不显著结合可能存在于样品或测定法中的其它分子或组分的抗体。认为显著的结合是例如抗HA抗体与非HA分子的结合，其亲和力或亲合力大到足以干扰测定法检测和/或测定样品中抗流感抗体，或HA蛋白水平的能力。可存在于样品或测定法中的其它分子和化合物的实例包括但不限于非HA蛋白，如白蛋白，脂质和碳水化合物。根据本发明，非HA蛋白是具有与本文公开的流感HA蛋白的序列共享小于60％同一性的氨基酸序列的蛋白质。在一些实施方案中，一种或多种抗体提供广泛的异亚型保护。在一些实施方案中，一种或多种抗体是中和性的。

如本文中使用的，中和性抗体是防止流感病毒完成一轮复制的抗体。如本文所定义的，一轮复制指病毒的生命周期，从病毒附着到宿主细胞开始，并以从宿主细胞出芽新形成的病毒结束。该生命周期包括但不限于以下步骤：附着于细胞，进入细胞，HA蛋白的切割和重排，病毒膜与内体膜的融合，病毒核糖核蛋白向细胞质的释放，形成新病毒颗粒和自宿主细胞膜的病毒颗粒的出芽。根据本发明，中和性抗体是抑制一个或多个此类步骤的抗体。

如本文中使用的，广泛中和性抗体是中和流感病毒的多于一种类型，亚型和/或毒株的抗体。例如，针对来自A型流感病毒的HA蛋白引发的广泛中和性抗体可以中和B型或C型病毒。作为另一个实例，针对来自I型流感病毒的HA蛋白引发的广泛中和性抗体可以中和组2病毒。作为另一个实例，针对来自病毒的一种亚型或株的HA蛋白引发的广泛中和性抗体可以中和病毒的另一种亚型或株。例如，针对来自H1流感病毒的HA蛋白引发的广泛中和性抗体可以中和来自一种或多种选自下组的亚型的病毒：H2,H3,H4,H5,H6,H7,H8,H8,H10,H11,H12,H13,H14,H15,H16,H17或H18。

根据本发明，用于分类流感病毒的所有命名法是本领域技术人员通常使用的。因此，流感病毒的类型或组是指A型流感，B型流感或C型流感。本领域技术人员应当理解，病毒作为特定类型的命名涉及在各自的M1(基质)蛋白质或NP(核蛋白)中的序列差异。A型流感病毒进一步分为组1和组2。这些组进一步分为亚型，其指基于其HA蛋白的序列的病毒分类。目前普遍认可的亚型的实例是H1,H2,H3,H4,H5,H6,H7,H8,H8,H10,H11,H12,H13,H14,H15,H16,H17或H18。组1流感亚型是H1,H2,H5,H6,H8,H9,H11,H12,H13,H16,H17和H18。组2流感亚型是H3,H4,H7,H10,H14,和H15。最后，术语毒株是指亚型内彼此不同之处在于它们在其基因组中具有小的遗传变异的病毒。

如本文中使用的，流感血凝素蛋白或HA蛋白是指全长流感血凝素蛋白或其任何部分，其可用于产生本发明的蛋白质构建体和纳米颗粒或能够引发免疫应答。优选的HA蛋白是能够形成三聚体的那些。全长流感HA蛋白的表位是指此类蛋白质的部分，其可以引发针对同源流感病毒株，即衍生HA的菌株的抗体应答。在一些实施方案中，此类表位也可以引发针对异源流感病毒株，即具有与免疫原的HA不同的HA的毒株的抗体应答。在一些实施方案中，表位引发广泛异亚型保护性应答。在一些实施方案中，表位引发中和性抗体。

如本文中使用的，变体指在序列上与参照序列相似但不相同的蛋白质或核酸分子，其中变体蛋白质(或由变体核酸分子编码的蛋白质)的活性没有显著改变。这些序列变异可以是天然存在的变异或者它们可以经由使用本领域技术人员已知的遗传工程化技术来工程化改造。此类技术的例子可见Sambrook J,Fritsch E F,Maniatis T等,于Molecular Cloning--A Laboratory Manual,2nd Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989,pp.9.31-9.57)，或于Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6，这两篇的完整内容通过提及并入本文。

就变体而言，氨基酸或核酸序列的任何类型变化是可允许的，只要所得的变体蛋白质保留引发针对流感病毒的中和性或非中和性抗体的能力。此类变异的例子包括但不限于缺失、插入、取代及其组合。例如，就蛋白质而言，本领域技术人员公知的是，一个或多个(例如2,3,4,5,6,7,8,9或10)氨基酸经常可以从蛋白质的氨基和/或羧基端末端除去，而不显著影响所述蛋白质的活性。类似地，一个或多个(例如2,3,4,5,6,7,8,9或10)氨基酸经常可以插入蛋白质中，而不显著影响蛋白质的活性。在已经进行插入的变体中，插入的氨基酸可以通过参考其后进行插入的氨基酸残基来提及。例如，在氨基酸残基402之后插入四个氨基酸残基可以称为402a-402d。此外，如果那些插入的氨基酸之一随后被另一个氨基酸取代，则这种变化可以参考字母位置提及。例如，用苏氨酸取代插入的甘氨酸(在插入物的另一个位置中)可以称为S402dT。

如记录的，相对于本文中公开的流感HA蛋白，本发明的变体蛋白质可以含有氨基酸取代。任何氨基酸取代是可允许的，只要蛋白质的活性不受显著影响。在这点上，本领域中应当理解，氨基酸可以基于其物理特性而分成组。此类组的例子包括但不限于带电荷的氨基酸、不带电荷的氨基酸、极性不带电荷的氨基酸、和疏水性氨基酸。含有取代的优选变体是那些其中的氨基酸用来自相同组的氨基酸取代的变体。此类取代称为保守取代。

天然存在的残基可以基于共同的侧链特性而分成类：

1)疏水性：Met,Ala,Val,Leu,Ile；

2)中性亲水性：Cys,Ser,Thr；

3)酸性：Asp,Glu；

4)碱性：Asn,Gln,His,Lys,Arg；

5)影响链取向的残基：Gly,Pro；和

6)芳香基：Trp,Tyr,Phe。

例如，非保守取代可以牵涉用这些类别之一的成员替换来自另一类别的成员。

在进行氨基酸变化中，可以考虑氨基酸的亲水指数。基于每种氨基酸的疏水性和电荷性质，已给每种氨基酸的亲水指数赋值。亲水指数是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。本领域一般了解亲水氨基酸指数在赋予蛋白质相互作用性生物学功能中的重要性(Kyte等,1982,J.Mol.Biol.157:105-31)。已知可以用某些氨基酸替代其它具有相似亲水指数或分值的氨基酸，而仍然保留相似的生物学活性。在进行基于亲水指数的变化中，亲水指数在±2之内的氨基酸取代是优选的，在±1之内的那些氨基酸取代是特别优选的，且在±0.5之内的那些氨基酸取代是甚至更特别优选的。

本领域还了解可以基于疏水性有效地进行类似氨基酸的取代，特别是在意图将由此产生的生物功能等同性蛋白质或肽用于结合免疫学发明(本案就是如此)的情况中。蛋白质的最大局部平均亲水性(如由其相邻氨基酸的亲水性所决定的)与其免疫原性和抗原性，即与蛋白质的生物学特性相关联。已将下列亲水性数值(hydrophilicity value)赋予这些氨基酸残基：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；和色氨酸(-3.4)。在进行基于相似亲水性数值的变化时，亲水性数值在±2之内的氨基酸取代是优选的，在±1之内的那些氨基酸取代是特别优选的，且在±0.5之内的那些氨基酸取代是甚至更特别优选的。还可以基于亲水性鉴定来自一级氨基酸序列的表位。

在期望此类取代时，本领域技术人员可以确定期望的氨基酸取代(无论是保守的还是非保守的)。例如，可以使用氨基酸取代来鉴定HA蛋白的重要残基，或者提高或降低本文中描述的HA蛋白的免疫原性、溶解度或稳定性。下文在表I中显示了例示性的氨基酸取代。

表1

氨基酸取代

如本文中使用的，短语显著影响蛋白质活性指将蛋白质活性降低至少10％，至少20％，至少30％，至少40％或至少50％。就本发明而言，此类活性可以例如以蛋白质引发针对流感病毒的保护性抗体的能力测量。此类活性可以通过测量针对流感病毒的此类抗体的效价，此类抗体针对流感感染提供保护的能力或者通过测量由引发的抗体中和的类型、亚型或毒株的数目测量。测定抗体效价，实施保护测定法，和实施病毒中和测定法的方法是本领域技术人员已知的。在上文描述的活性外，可以测量的其它活性包括凝集红细胞的能力和蛋白质对细胞的结合亲和力。测量此类活性的方法是本领域技术人员已知的。

术语个体、受试者和患者是本领域中公知的，并且在本文中可互换使用，指对流感感染易感的任何人或其它动物。例子包括但不限于人和其它灵长类，包括非人灵长类，诸如黑猩猩及其它猿和猴物种；家畜，诸如牛、绵羊、猪、海豹、山羊和马；驯养哺乳动物，诸如犬和猫；实验室动物，包括啮齿类，诸如小鼠、大鼠和豚鼠；禽类，包括驯养禽类、野生禽类和猎禽，诸如鸡、火鸡和其它鸡形目(gallinaceous)禽类、鸭、鹅，等等。术语个体、受试者和患者单独不表示特定年龄、性别、人种，等等。因此，任何年龄的个体(无论雄性或雌性)意图为本公开内容覆盖，并且包括但不限于老年人、成人、儿童、婴孩(babies)、婴儿(infant)、和幼童(toddler)。同样地，本发明的方法可以适用于任何人种，包括例如高加索人(Caucasian)(白种人)、非洲裔美国人(African-American)(黑人)、美洲原住民(Native American)、夏威夷原住民(Native Hawaiian)、西班牙裔(Hispanic)、拉美裔(Latino)、亚裔(Asian)、和欧洲裔。感染的受试者是已知在其体内具有流感病毒的受试者。

如本文中使用的，接种疫苗的受试者是已经施用意图提供针对流感病毒的保护性效果的疫苗的受试者。

如本文中使用的，术语暴露指受试者已经与已知感染流感病毒的动物个体接触。

本文中讨论的出版物仅提供其在本申请的提交日前的公开内容。本文中的任何内容不应解释为承认凭借在先发明，本发明没有资格早于此类出版物。此外，提供的出版日期可以与实际出版日期不同，这可能需要独立确认。

除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以用于实施或测试本发明，现在描述优选的方法和材料。本文中提及的所有出版物通过提及收入本文以公开并描述与结合出版物引用的方法和/或材料。

应当领会，本发明的某些特征(为了清楚，其在不同实施方案的背景中描述)也可以在单一实施方案中组合提供。相反，本发明的各个特征(为了简洁，其在单一实施方案的背景中描述)也可以分开或在任何合适的亚组合中提供。实施方案的所有组合是本发明明确涵盖的，并且在本文中公开，就像每种组合单独且明确公开一样。另外，所有亚组合也是本发明明确涵盖的，并且在本文中公开，就像每种此类亚组合在本文中单独且明确公开一样。

本发明的一个实施方案是包含流感HA蛋白的蛋白质构建体，其中流感HA蛋白的头部区已被包含距HA蛋白头部区少于5个连续氨基酸残基的氨基酸序列替换。如本文中使用的，HA蛋白是指可用于产生本发明的蛋白质构建体和纳米颗粒的全长流感HA蛋白或其任何一个或多个部分和/或变体。因此，本发明涉及能够引发对流感HA蛋白的茎区的免疫应答的分子。在一些实施方案中，HA蛋白构建体的序列已经进一步改变(即突变)，以稳定蛋白的茎区，其形式可以呈递给免疫系统。此类HA蛋白的一些代表性实例和由其制备的蛋白质构建体示于下表2中。

表2

病毒表面上的三聚体HA蛋白包含球状头部区和茎或柄区域，其将HA蛋白锚定到病毒脂质包膜中。流感HA的头部区仅由HA1多肽的主要部分形成，而柄区由HA1和HA2的区段制成。根据本发明，头部区大致由对应于流感H1N1NC的全长HA蛋白(SEQ ID NO:8)的氨基酸59-291的HA蛋白的氨基酸组成。类似地，如本文所使用的，茎区大约由氨基酸1-58和对应于流感H1N1NC的全长HA蛋白(SEQ ID NO:8)的氨基酸328-564的HA蛋白的氨基酸组成。如本文中使用的，关于头部和茎区的术语大约是指上述序列在长度上可以改变几个氨基酸，而不影响本发明的性质。因此，例如，头部区可以由氨基酸50-291，氨基酸59-296或氨基酸59-285组成。通常，头部和茎区域将不会从上述位置改变超过十个氨基酸；然而，在一个实施方案中，头部区的羧基端末端可以延伸得远达对应于SEQ ID NO:8的氨基酸327的氨基酸。在一个实施方案中，头部区由在对应于流感A/新喀里多尼亚/20/1999(SEQ ID NO:8)的Cys59和Cys291的氨基酸残基之间的氨基酸序列组成，并且包括所述氨基酸残基。关于HA蛋白，本领域技术人员应当理解，来自不同流感病毒的HA蛋白可能由于蛋白质中的突变(插入，缺失)而具有不同的长度。因此，提及相应的区域是指与所比较的区域在序列、结构和/或功能上相同或几乎相同(例如，至少90％相同，至少95％相同，至少98％相同或至少99％相同)的另一种蛋白质的区域。例如，关于HA蛋白的茎区，另一HA蛋白中的相应区域可以不具有相同的残基数，但是将具有几乎相同的序列并且将执行相同的功能。作为实例，在上述实施方案中，来自A/新喀里多尼亚/20/1999的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的头部区在氨基酸C291处结束。A/加利福尼亚/4/2009(H1)(SEQ ID NO:11)中头部区末端的相应氨基酸是半胱氨酸292。为了更好地阐明病毒之间的序列比较，本领域技术人员使用编号系统，其将氨基酸位置与参考序列相关。因此，来自不同流感毒株的HA蛋白中的相应氨基酸残基相对于其与蛋白质的n-末端氨基酸的距离可能不具有相同的残基数。例如，使用H3编号系统，参考A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC，H1)中的残基100并不意味着它是距离N-末端氨基酸的第100个残基。相反，A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC，H1)的残基100与流感H3N2毒株的残基100对齐。本领域技术人员理解这种编号系统的使用。虽然H3编号系统可用于鉴定氨基酸的位置，除非另有说明，HA蛋白中氨基酸残基的位置将通过一般性参考来自本文公开的序列的相应氨基酸的位置来鉴定。

本发明人还发现，通过将流感病毒HA蛋白的特定序列与能够将HA蛋白呈递给免疫系统的不相关分子组合，可以引发对HA蛋白的靶向区域的免疫应答。本发明的一个实施方案是包含与单体亚基蛋白的至少部分连接的流感HA蛋白的蛋白质构建体，其中流感HA蛋白的头部区已被包含来自HA蛋白的头部区的少于5个连续氨基酸残基的氨基酸序列替换，并且其中所述蛋白质构建体能够形成纳米颗粒。

通过至少将流感HA蛋白的部分与单体亚基连接，本发明的蛋白质构建体能够组装成在其表面上表达HA的三聚体的纳米颗粒。应当理解，构成此类三聚体的HA蛋白是融合前形式，并且与单体亚基的连接和在纳米颗粒上的表达使融合前蛋白以其三聚体形式稳定化。这是重大的，因为HA蛋白以更天然的形式呈现，意味着茎多肽的某些表面不被暴露，从而降低茎多肽可能诱导不利抗体应答的风险。

在一个实施方案中，HA蛋白包含来自流感HA蛋白的茎区的至少一个免疫原性部分，其中所述蛋白引发针对流感病毒的保护性抗体。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自选自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒的病毒的HA蛋白的茎区的至少一个免疫原性部分，其中蛋白质引发针对流感病毒的保护性抗体。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自选自以下的HA蛋白的茎区的至少一个免疫原性部分：H1流感病毒HA蛋白，H2流感病毒HA蛋白，H3流感病毒HA蛋白，流感H4病毒HA蛋白，H5流感病毒HA蛋白，H6流感病毒HA蛋白，H7流感病毒HA蛋白，H8流感病毒HA蛋白，H9流感病毒HA蛋白，H10流感病毒HA蛋白HA蛋白，H11流感病毒HA蛋白，H12流感病毒HA蛋白，H13流感病毒HA蛋白，H14流感病毒HA蛋白，H15流感病毒HA蛋白，H16流感病毒HA蛋白，H17流感病毒HA蛋白和H18流感病毒HA蛋白。

在一个实施方案中，HA蛋白包含来自蛋白质的至少一个免疫原性部分，所述蛋白质包含与选自下组的序列至少80％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自蛋白质的至少一个免疫原性部分，所述蛋白质包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自蛋白质的至少一个免疫原性部分，所述蛋白质包含与选自下组的序列至少80％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自蛋白质的至少一个免疫原性部分，所述蛋白质包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一个实施方案中，包含HA蛋白的免疫原性部分的此类蛋白质引发针对流感病毒的广泛保护性抗体的产生。

蛋白质的免疫原性部分包含表位，其是被免疫系统识别的氨基酸残基的簇，从而引发免疫应答。此类表位可以由连续的氨基酸残基(即，在蛋白质中彼此相邻的氨基酸残基)组成，或者它们可以由非连续的氨基酸残基(即，蛋白质中彼此不相邻的氨基酸残基)，但在最终折叠的蛋白质中紧密空间接近。本领域技术人员完全理解，表位需要最少六个氨基酸残基，以便被免疫系统识别。因此，在一个实施方案中，来自流感HA蛋白的免疫原性部分包含至少一个表位。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自流感HA蛋白的茎区的至少6个氨基酸，至少10个氨基酸，至少25个氨基酸，至少50个氨基酸，至少75个氨基酸或至少100个氨基酸。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自HA蛋白的茎区的至少6个氨基酸，至少10个氨基酸，至少25个氨基酸，至少50个氨基酸，至少75个氨基酸或至少100个氨基酸，所述HA蛋白来自选自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒的病毒。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自HA蛋白的茎区的至少6个氨基酸，至少10个氨基酸，至少25个氨基酸，至少50个氨基酸，至少75个氨基酸或至少100个氨基酸，所述HA蛋白来自选自H1流感病毒HA蛋白，H2流感病毒HA蛋白，H3流感病毒HA蛋白，H4流感病毒HA蛋白，H5流感病毒HA蛋白，H6流感病毒HA蛋白，H7流感病毒病毒HA蛋白，H8流感病毒HA蛋白，H9流感病毒HA蛋白，H10流感病毒HA蛋白HA蛋白，H11流感病毒HA蛋白，H12流感病毒HA蛋白，H13流感病毒HA蛋白，H14流感病毒HA蛋白，H15流感病毒HA蛋白，H16流感病毒HA蛋白，H17流感病毒HA蛋白和H18流感病毒HA蛋白。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自HA蛋白的茎区的至少6个氨基酸，至少10个氨基酸，至少25个氨基酸，至少50个氨基酸，至少75个氨基酸或至少100个氨基酸，所述HA蛋白来自于选自下组的病毒株：流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亚/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo,H5),B/佛罗里达/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)及其变体。在一个实施方案中，氨基酸是来自HA蛋白的茎区的连续氨基酸。在一个实施方案中，包含来自HA蛋白的茎区的至少6个氨基酸，至少10个氨基酸，至少25个氨基酸，至少50个氨基酸，至少75个氨基酸或至少100个氨基酸的此类蛋白质引发针对流感病毒的广泛保护性抗体的产生。本发明的一个实施方案是包含蛋白质构建体，其包含来自HA蛋白的茎区的至少6个氨基酸，至少10个氨基酸，至少25个氨基酸，至少50个氨基酸，至少75个氨基酸或至少100个氨基酸，所述HA蛋白包含选自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17的氨基酸序列。本发明的一个实施方案是蛋白质构建体，其包含来自HA蛋白的茎区的至少6个氨基酸，至少10个氨基酸，至少25个氨基酸，至少50个氨基酸，至少75个氨基酸或至少100个氨基酸，所述HA蛋白包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:150,SEQ ID NO:152,SEQ ID NO:154,SEQ ID NO:156,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一个实施方案中，氨基酸是来自HA蛋白的茎区的连续氨基酸。在一个实施方案中，氨基酸是非连续的，但在最终蛋白质中紧密空间接近。

虽然本申请例示了来自几种示例性HA蛋白的茎区序列的使用，但是本发明也可以使用来自包含所公开的HA序列的变异的蛋白质的茎区来实施。因此，在一个实施方案中，HA蛋白来自选自下组的病毒：流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亚/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo,H5),B/佛罗里达/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)及其变体。在一个实施方案中，HA蛋白包含与HA蛋白的茎区至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的氨基酸序列，所述HA蛋白包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:17。在一个实施方案中，HA蛋白包含选自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:,SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:17的氨基酸序列。

在一个实施方案中，HA蛋白的头部区序列被接头序列替换。可以使用任何接头序列，只要茎区序列能够形成期望的结构。虽然任何氨基酸可用于制备接头序列，但优选使用缺少大的或带电荷的侧链的氨基酸。优选的氨基酸包括但不限于丝氨酸，甘氨酸和丙氨酸。在一个实施方案中，接头由丝氨酸和甘氨酸残基制成。接头序列的长度可以变化，但是优选的实施方案使用最短的可能序列，以允许茎序列形成期望的结构。在一个实施方案中，接头序列的长度小于10个氨基酸。在一个实施方案中，接头序列的长度小于5个氨基酸。在优选的实施方案中，接头序列缺乏来自HA蛋白的头部区的连续氨基酸序列。在一个实施方案中，接头序列包含来自HA蛋白头部区的少于5个连续氨基酸。

如上所述，HA序列与单体亚基蛋白的部分连接。如本文中使用的，单体亚基蛋白是指能够结合其它单体亚基蛋白的蛋白单体，使得单体亚基蛋白自组装成纳米颗粒。任何单体亚基蛋白可以用于产生本发明的蛋白质构建体，只要该蛋白质构建体能够形成在其表面上展示HA蛋白的多聚体结构。在一个实施方案中，单体亚基是铁蛋白。

铁蛋白是在所有动物，细菌和植物中发现的球状蛋白，其主要通过将水合铁离子和质子运输到矿化核心和从矿化核心运输来控制多核Fe(III)₂O₃形成的速率和位置起作用。铁蛋白的球状形式由单体亚基蛋白(也称为单体铁蛋白亚基)组成，其是具有约17-20kDa的分子量的多肽。一个此类单体铁蛋白亚基的序列的实例由SEQ ID NO:2表示。每个单体铁蛋白亚基具有螺旋束的拓扑结构，其包括四个反向平行螺旋基序，具有大致垂直于4螺旋束的长轴的第五较短螺旋(c-端螺旋)。根据惯例，螺旋分别从N-末端标记为“A，B，C和D&E”。N-末端序列位于纳米颗粒三折轴附近并延伸到表面，而E螺旋在四折叠轴上聚集在一起，C-末端延伸到颗粒核心中。这种包装的结果在纳米颗粒表面上创建两个孔。预期这些孔中的一个或两个代表水合铁扩散进入和离开纳米颗粒的点。产生后，这些单体铁蛋白亚基蛋白自组装成球状铁蛋白蛋白。因此，铁蛋白的球状形式包含24个单体，铁蛋白亚基蛋白，并具有432对称的壳体样结构。

根据本发明，本发明的单体铁蛋白亚基是铁蛋白蛋白的全长单一多肽或其任何部分，其能够指导单体铁蛋白亚基自组装成蛋白质的球状形式。此类蛋白质的实例包括但不限于SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5。来自任何已知的铁蛋白蛋白的单体铁蛋白亚基的氨基酸序列可以用于产生本发明的蛋白质构建体，只要单体铁蛋白亚基能够自组装成在其表面上展示HA的纳米颗粒。在一个实施方案中，单体亚基来自选自下组的铁蛋白蛋白：细菌铁蛋白蛋白，植物铁蛋白蛋白，藻铁蛋白蛋白，昆虫铁蛋白蛋白，真菌铁蛋白蛋白和哺乳动物铁蛋白蛋白。在一个实施方案中，所述铁蛋白蛋白来自幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)。

本发明的蛋白质构建体不需要包含铁蛋白蛋白的单体亚基多肽的全长序列。可以使用单体铁蛋白亚基蛋白的部分或区域，只要该部分包含指导单体铁蛋白亚基自组装成蛋白的球形形式的氨基酸序列。此类区域的一个实例位于幽门螺杆菌铁蛋白蛋白的氨基酸5和167之间。更具体的区域描述于Zhang,Y.Self-Assembly in the Ferritin Nano-Cage Protein Super Family.2011,Int.J.Mol.Sci.,12,5406-5421，其通过引用整体并入本文。

在一个实施方案中，HA蛋白与来自铁蛋白的至少50个，至少100个或至少150个氨基酸连接，其中所述蛋白质构建体能够形成纳米颗粒。在一个实施方案中，HA蛋白与来自SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5的至少50，至少100或至少150个氨基酸连接，其中所述蛋白质构建体能够形成纳米颗粒。在一个实施方案中，HA蛋白与蛋白质连接，所述蛋白质包含与铁蛋白序列至少85％，至少90％或至少95％相同的氨基酸序列，其中蛋白质构建体能够形成纳米颗粒。在一个实施方案中，HA蛋白与蛋白质连接，所述蛋白质包含与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5至少85％，至少90％，至少95％相同的氨基酸序列，其中所述蛋白质构建体形成纳米颗粒。

在一个实施方案中，单体亚基是2,4-二氧四氢蝶啶合成酶(lumazine synthase)。在一个实施方案中，HA蛋白与来自2,4-二氧四氢蝶啶合酶的至少50个，至少100个或至少150个氨基酸连接，其中所述蛋白质构建体能够形成纳米颗粒。因此，在一个实施方案中，HA蛋白与蛋白质连接，所述蛋白质与2,4-二氧四氢蝶啶合酶至少85％，至少90％，至少95％相同，其中蛋白质构建体能够形成纳米颗粒。

如本文中使用的，本发明的纳米颗粒是指通过本发明的蛋白质构建体(融合蛋白)的自组装形成的三维颗粒。本发明的纳米颗粒通常是球形形状的，尽管不排除其它形状，并且通常直径为约20nm至约100nm。本发明的纳米颗粒可以但不需要包含除了蛋白质构建体外的分子，如蛋白质，脂质，碳水化合物等，它们从所述蛋白质构建体中形成。

可以使用重组技术制备本发明的蛋白质构建体以将HA蛋白，接头和单体亚基的各部分连接在一起。以这种方式，可以产生仅包含产生纳米颗粒疫苗所必需的那些序列的蛋白质构建体。因此，本发明的一个实施方案是蛋白质构建体(也称为融合蛋白)，其包含来自流感病毒HA蛋白的茎区的第一氨基酸序列和来自流感病毒HA蛋白的茎区的第二氨基酸序列，所述第一和第二氨基酸序列通过接头序列共价连接，

其中所述第一氨基酸序列包含来自头部区序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20个连续氨基酸残基；

其中所述第二氨基酸序列包含来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少20个连续氨基酸残基；和，

其中所述第一或第二氨基酸序列与单体亚基结构域的至少部分连接，使得所述蛋白质构建体能够形成纳米颗粒。

在一个实施方案中，第一氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一个实施方案中，第一氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：H1流感病毒，H2流感病毒，流感H3病毒，流感H4病毒，流感H5病毒，流感H6病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒，H16流感病毒，H17流感病毒，和H18流感病毒。在一个实施方案中，第一氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC，H1)，A/加利福尼亚/04/2009(2009CA，H1)，A/新加坡/1/1957(1957Sing，H2)，A/香港/1/1968(1968HK，H3)，A/布里斯班/10/2007(2007Bris，H3)，A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo，H5)，B/佛罗里达/4/2006(2006Flo，B)，A/珀斯/16/2009(2009Per，H3)，A/布里斯班/59/2007(2007Bris，H1)，B/布里斯班/60/2008(2008Bris，B)。在一个实施方案中，第一氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白具有与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一个实施方案中，第一氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白包含选自下组的序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自蛋白质的至少一个免疫原性部分，所述蛋白质包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自蛋白质的至少一个免疫原性部分，所述蛋白质包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：H1流感病毒，H2流感病毒，流感H3病毒，流感H4病毒，流感H5病毒，流感H6病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒，H16流感病毒，H17流感病毒和H18流感病毒。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC，H1)，A/加利福尼亚/04/2009(2009CA，H1)，A/新加坡/1/1957(1957Sing，H2)，A/香港/1/1968(1968HK，H3)，A/布里斯班/10/2007(2007Bris，H3)，A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo，H5)，B/佛罗里达/4/2006(2006Flo，B)，A/珀斯/16/2009(2009Per，H3)，A/布里斯班/59/2007(2007Bris，H1)，B/布里斯班/60/2008(2008Bris，B)。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白具有与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白包含选自下组的序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自蛋白质的至少一个免疫原性部分，所述蛋白质包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一个实施方案中，HA蛋白包含来自蛋白质的至少一个免疫原性部分，所述蛋白质包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:86，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:197，SEQ ID NO:203，SEQ ID NO:209，SEQ ID NO:214，SEQ ID NO:217，SEQ ID NO:222，SEQ ID NO:224，SEQ ID NO:226，SEQ ID NO:228，SEQ ID NO:230，SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:240，SEQ ID NO:242，SEQ ID NO:244，SEQ ID NO:246，SEQ ID NO:248，SEQ ID NO:250，SEQ ID NO:252，SEQ ID NO:254，SEQ ID NO:256，SEQ ID NO:258，SEQ ID NO:261，SEQ ID NO:268，SEQ ID NO:275，SEQ ID NO:282，SEQ ID NO:289，SEQ ID NO:296，SEQ ID NO:303，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:317，SEQ ID NO:324，SEQ ID NO:331，SEQ ID NO:338，SEQ ID NO:345，SEQ ID NO:352，SEQ ID NO:359，SEQ ID NO:366，SEQ ID NO:373，SEQ ID NO:380，SEQ ID NO:387，SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。

如上所述，第一氨基酸序列包含来自头部区序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20个连续氨基酸残基。根据本发明，术语上游指与头部区的第一个氨基酸残基的氨基端末端连接的氨基酸序列的全部。在一个实施方案中，头部区的氨基端末端位于对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的Cys59的氨基酸残基。因此，在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含来自对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基1-58的HA蛋白区域的至少20个连续氨基酸残基。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含来自与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少20个连续氨基酸残基：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含来自选自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列的至少20个连续氨基酸残基。

在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含来自对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基1-58的HA蛋白的氨基酸区域的至少40个连续氨基酸残基。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少40个连续氨基酸残基：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含来自选自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列的至少40个连续氨基酸残基。

在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含选自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：H1流感病毒，H2流感病毒，H3流感病毒，H4流感病毒，H5流感病毒病毒，H6流感病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒病毒，H16流感病毒，H17流感病毒和H18流感病毒。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亚/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo,H5),B/佛罗里达/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白具有与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白包含选自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17的序列。

如上所述，第二氨基酸序列包含来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少20个连续氨基酸残基。根据本发明，术语下游指与头部区的羧基端末端氨基酸残基连接的整个氨基酸序列。在一个实施方案中，头部区的羧基端末端位于对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的Cys291的氨基酸位置。因此，在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基292-517的HA蛋白的氨基酸区域的至少20个连续氨基酸。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基328-517的HA蛋白的氨基酸区域的至少20个连续氨基酸。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少20个连续氨基酸残基：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自选自下组的序列的至少20个连续氨基酸残基：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少40个，至少60个，至少75个，至少100个或至少150个连续氨基酸。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自HA蛋白的氨基酸区的至少40个，至少60个，至少75个，至少100个或至少150个连续氨基酸，所述氨基酸区对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基292-517。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自HA蛋白的氨基酸区域的至少40个，至少60个，至少75个，至少100个或至少150个连续氨基酸，所述氨基酸区域对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基328-517。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自序列的至少40，至少60，至少75，至少100或至少150个连续氨基酸，所述序列与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自下组的至少40，至少60，至少75，至少100或至少150个连续氨基酸：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含选自下组的序列：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。

如上所述，蛋白质构建体的第一和第二氨基酸序列可以通过接头序列连接。可以使用任何接头序列，只要该接头序列具有距HA蛋白的头部区少于5个连续的氨基酸残基，并且只要第一和第二氨基酸能够形成期望的构象即可。在一个实施方案中，接头序列长度小于10个氨基酸，小于7个氨基酸或小于5个氨基酸。在一个实施方案中，接头序列包含甘氨酸和丝氨酸。在一个实施方案中，接头序列将第一氨基酸序列的羧基端末端连接到第二氨基酸序列的氨基端末端。在一个实施方案中，接头序列将第二氨基酸序列的羧基端末端连接到第一氨基酸序列的氨基端末端。

如上所述，蛋白质构建体的第一或第二氨基酸序列与单体亚基蛋白的至少部分连接，使得蛋白质构建体能够形成纳米颗粒。在一个实施方案中，单体亚基蛋白的至少部分连接到第二氨基酸序列。在优选的实施方案中，单体亚基蛋白的至少部分连接到第二氨基酸序列的羧基端末端。在一个实施方案中，所述部分包含来自单体亚基的至少50个，至少100个或至少150个氨基酸。在一个实施方案中，单体亚基是铁蛋白。在一个实施方案中，单体亚基是2,4-二氧四氢蝶啶合成酶。在一个实施方案中，所述部分包含来自SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:194的至少50，至少100或至少150个氨基酸。在一个实施方案中，单体亚基包含与SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:194具有至少85％相同，至少90％相同或至少95％相同的序列。在一个实施方案中，单体亚基包含选自SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:194的序列。

发明人已经发现，上述蛋白质构建体的流感HA序列的修饰导致蛋白质构建体的改进的稳定性。例如，本发明人已经发现，从对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的氨基酸N403-W435的氨基酸区的HA蛋白的缺失导致更稳定的蛋白质构建体。在该区域缺失时，该区域侧翼的氨基酸序列可以直接连接在一起，或者它们可以用接头序列如例如甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸连接。因此，在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸残基至少85％，至少90％或至少95％相同的多肽序列，其中所述多肽序列缺少对应于来自流感A/新喀里多尼亚1999的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的SEQ ID NO:133，SEQ ID NO:134，SEQ ID NO:135或SEQ ID NO:136的区域。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸残基，其中多肽序列缺乏对应于流感A/新喀里多尼亚1999的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的SEQ ID NO:133，SEQ ID NO:134，SEQ ID NO:135或SEQ ID NO:136的区域。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸残基至少85％，至少90％或至少95％相同的多肽序列，其中所述多肽序列缺少对应于流感A/加利福尼亚/4/2009的HA蛋白(SEQ ID NO:10)的SEQ ID NO:137，SEQ ID NO:138，SEQ ID NO:139或SEQ ID NO:140的区域。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸残基，其中多肽序列缺少对应于流感A/加利福尼亚/4/2009的HA蛋白(SEQ ID NO:10)的SEQ ID NO:137，SEQ ID NO:138，SEQ ID NO:139或SEQ ID NO:140的区域。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸残基至少85％，至少90％或至少95％相同的氨基酸序列，其中多肽序列缺少对应于流感A/新加坡/1957的HA蛋白(SEQ ID NO:12)的SEQ ID NO:141，SEQ ID NO:142，SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:144的区域。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸残基至少85％，至少90％或至少95％相同的氨基酸序列，其中多肽序列缺少对应于流感A/新加坡/1957的HA蛋白(SEQ ID NO:12)的SEQ ID NO:141，SEQ ID NO:142，SEQ ID NO:143或SEQ ID NO:144的区域。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸残基，其中多肽序列缺少对应于流感A/印度尼西亚/05/2005(H5)的HA蛋白(SEQ ID NO:16)的SEQ ID NO:145，SEQ ID NO:146，SEQ ID NO:147或SEQ ID NO:148的区域。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸残基，其中多肽序列缺少对应于流感A/印度尼西亚/05/2005(H5)的HA蛋白(SEQ ID NO:16)的SEQ ID NO:145，SEQ ID NO:146，SEQ ID NO:147或SEQ ID NO:148的区域。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:29的100个连续氨基酸至少85％，至少90％或至少95％相同的序列，其中所述100个连续氨基酸不包含选自SEQ ID NO:133，SEQ ID NO:134，SEQ ID NO:135和SEQ ID NO:136的序列。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:29的100个连续氨基酸，其中所述100个连续氨基酸不包含选自下组的序列：SEQ ID NO:133，SEQ ID NO:134，SEQ ID NO:135和SEQ ID NO:136。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:44的100个连续氨基酸至少85％，至少90％或至少95％相同的序列，其中所述100个连续氨基酸不包含选自SEQ ID NO:137，SEQ ID NO:138，SEQ ID NO:139和SEQ ID NO:140的序列。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:44的100个连续氨基酸，其中所述100个连续氨基酸不包含选自下组的序列：SEQ ID NO:137，SEQ ID NO:138，SEQ ID NO:139和SEQ ID NO:140。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与SEQ ID NO:53，SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:59的100个连续氨基酸至少85％，至少90％或至少95％相同的序列，其中所述100个连续氨基酸不包含选自SEQ ID NO:141，SEQ ID NO:142，SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:144的序列。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自SEQ ID NO:53，SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:59的100个连续氨基酸，其中所述100个连续氨基酸不包含选自下组的序列：SEQ ID NO:141，SEQ ID NO:142，SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:144。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:74的100个连续氨基酸至少85％，至少90％或至少95％相同的序列，其中所述100个连续氨基酸不包含选自SEQ ID NO:145，SEQ ID NO:146，SEQ ID NO:147和SEQ ID NO:148的序列。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:74的100个连续氨基酸，其中所述100个连续氨基酸不包含选自下组的序列：SEQ ID NO:145，SEQ ID NO:146，SEQ ID NO:147和SEQ ID NO:148。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含与来自选自下组的序列的100个连续氨基酸至少85％，至少90％或至少95％相同的序列：SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:77。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自选自下组的序列的至少100个连续氨基酸：SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:77。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含选自下组的序列：SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。

本发明人还发现了，HA茎区序列的序列改变导致更稳定的蛋白质构建体。例如，在折叠的HA蛋白中，对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的K394和E446(对应于SEQ ID NO:149的K1和E53)的氨基酸残基形成盐桥，有助于稳定折叠的蛋白质。本发明人已经发现，通过用合适的氨基酸取代赖氨酸和谷氨酸残基，可以加强两个氨基酸残基之间的相互作用，这改善了分子的稳定性并允许对其进行更广泛的操作。因此，本发明的一个实施方案是蛋白质构建体，其包含来自流感病毒HA蛋白的茎区的第一氨基酸序列和来自流感病毒HA蛋白的茎区的第二氨基酸序列，所述第一和第二氨基酸酸序列通过接头序列共价连接，

其中所述第一氨基酸序列包含来自头部区序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20个连续氨基酸性残基，

其中所述第二氨基酸序列包含来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少60个连续氨基酸，

其中所述60个连续氨基酸包含对应于来自A/新喀里多尼亚/20/1999的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，且

其中对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的所述多肽序列中的氨基酸残基被除赖氨酸以外的氨基酸取代，

并且对应于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的氨基酸残基被除谷氨酸之外的氨基酸残基取代，使得取代的氨基酸残基之间的相互作用的强度大于在野生型蛋白中的相互作用的强度。

如上所述，对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的K394和E446的氨基酸残基形成盐桥，其是一类键。本领域已知存在氨基酸之间的其它类型的键，其强度根据键的类型而变化。此类键的实例包括但不限于疏水键和氢键，二者通常比盐桥更强。因此，在一个实施方案中，对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽中的氨基酸残基和对应于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的多肽中的氨基酸残基被改变，使得它们在最终折叠的蛋白质中形成氢键。在一个实施方案中，对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽中的氨基酸残基和对应于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的多肽中的氨基酸残基被改变，使得它们在最终折叠的蛋白质中形成疏水键。

对应于SEQ ID NO:149的K1，SEQ ID NO:150的K1，SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的氨基酸可以被任何氨基酸残基取代，只要两个氨基酸之间的所得相互作用比未改变的蛋白质中的盐桥更强。增加对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的K394和E446(SEQ ID NO:149的K1和E53)的氨基酸之间的相互作用强度的取代的实例包括但不限于：

其中对应于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸残基被甲硫氨酸取代，并且对应于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸残基被亮氨酸取代；

其中对应于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸残基被甲硫氨酸取代，并且对应于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸残基被甲硫氨酸取代；

其中对应于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸残基被亮氨酸取代，并且对应于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸残基被亮氨酸取代；

其中对应于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸残基被异亮氨酸取代，并且对应于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸残基被异亮氨酸取代；

其中对应于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸残基被亮氨酸取代，并且对应于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸残基被异亮氨酸取代；

其中对应于SEQ ID NO:149的K1的多肽序列中的氨基酸残基被谷氨酰胺取代，并且对应于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸残基被谷氨酰胺取代。

在一个实施方案中，第一氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一个实施方案中，第一氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：H1流感病毒，H2流感病毒，流感H3病毒，流感H4病毒，流感H5病毒，流感H6病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒，H16流感病毒，H17流感病毒，和H18流感病毒。在一个实施方案中，第一氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC，H1)，A/加利福尼亚/04/2009(2009CA，H1)，A/新加坡/1/1957(1957Sing，H2)，A/香港/1/1968(1968HK，H3)，A/布里斯班/10/2007(2007Bris，H3)，A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo，H5)，B/佛罗里达/4/2006(2006Flo，B)，A/珀斯/16/2009(2009Per，H3)，A/布里斯班/59/2007(2007Bris，H1)，B/布里斯班/60/2008(2008Bris，B)。在一个实施方案中，第一氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白具有与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一个实施方案中，第一氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白包含选自下组的序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：H1流感病毒，H2流感病毒，流感H3病毒，流感H4病毒，流感H5病毒，流感H6病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒，H16流感病毒，H17流感病毒，和H18流感病毒。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC，H1)，A/加利福尼亚/04/2009(2009CA，H1)，A/新加坡/1/1957(1957Sing，H2)，A/香港/1/1968(1968HK，H3)，A/布里斯班/10/2007(2007Bris，H3)，A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo，H5)，B/佛罗里达/4/2006(2006Flo，B)，A/珀斯/16/2009(2009Per，H3)，A/布里斯班/59/2007(2007Bris，H1)，B/布里斯班/60/2008(2008Bris，B)。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白具有与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白包含选自下组的序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。

在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含来自对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基1-58的HA蛋白的区域的至少20个连续氨基酸残基。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少20个连续氨基酸残基：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含来自选自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列的至少20个连续氨基酸残基。

在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含来自HA蛋白的氨基酸区域的至少40个连续氨基酸残基，所述氨基酸区域对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基1-58。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少40个连续氨基酸残基：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含来自选自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列的至少40个连续氨基酸残基。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含与选自下组的序列至少85％，至少90％或至少95％相同的序列：SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65。在一个实施方案中，第一氨基酸序列包含选自SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:65的序列。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒的病毒的HA蛋白的茎区。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：H1流感病毒，H2流感病毒，H3流感病毒，H4流感病毒，H5流感病毒病毒，H6流感病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒病毒，H16流感病毒，H17流感病毒和H18流感病毒。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自选自下组的病毒的HA蛋白的茎区：流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亚/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo,H5),B/佛罗里达/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白具有与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。在一个实施方案中，第二氨基酸序列来自HA蛋白的茎区，所述HA蛋白包含选自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17的序列。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列的至少60个连续氨基酸来自HA蛋白的氨基酸区，所述氨基酸区对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基292-517。在一个实施方案中，第二氨基酸序列的至少60个连续氨基酸来自HA蛋白的氨基酸区，其对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基328-517。在一个实施方案中，第二氨基酸序列的至少60个连续氨基酸来自与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。在一个实施方案中，第二氨基酸序列的至少60个连续氨基酸来自选自下组的序列

SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。

在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少75个，至少100个，至少150个或至少200个连续氨基酸，其中至少75个，至少100个，至少150个或至少200个连续氨基酸包含对应于H1N1NC的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，并且其中对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸残基，和多肽序列中对应于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的氨基酸残基已经分别被除了赖氨酸和谷氨酸外的氨基酸取代，使得取代的氨基酸残基之间的相互作用的强度大于野生型蛋白质中的相互作用的强度。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自HA蛋白的氨基酸区域的至少75，至少100，至少150或至少200个连续氨基酸，所述HA蛋白对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基292-517，其中所述至少75个，至少100个，至少150个或至少200个连续氨基酸包含对应于H1N1NC的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，并且其中对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸残基，和对应于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的多肽序列中的氨基酸残基分别被除了赖氨酸和谷氨酸之外的氨基酸取代，使得取代的氨基酸残基之间的相互作用的强度大于强度的野生型蛋白中的相互作用。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自HA蛋白的氨基酸区域的至少75个，至少100个，至少150个或至少200个连续氨基酸，所述氨基酸区域对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)(SEQ ID NO:8)的氨基酸残基328-517，其中至少75，至少100，至少150或至少200个连续氨基酸包含对应于H1N1NC的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，并且其中对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸残基，和对应于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的多肽序列中的氨基酸残基分别被除了赖氨酸和谷氨酸之外的氨基酸取代，使得取代的氨基酸残基之间的相互作用的强度大于强度的野生型蛋白中的相互作用。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的序列的至少75，至少100，至少150或至少200个连续氨基酸：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77，其中所述至少75个，至少100个，至少150个或至少200个连续氨基酸包含对应于H1N1NC的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，和其中对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸残基和对应于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的多肽序列中的氨基酸残基分别被除了赖氨酸和谷氨酸之外的氨基酸取代，使得取代的氨基酸残基之间的相互作用的强度大于野生型蛋白质中相互作用的强度。在一个实施方案中，第二氨基酸序列包含来自下组的至少75，至少100，至少150或至少200个连续氨基酸：SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:29,SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:44,SEQ ID NO:47,SEQ ID NO:53,SEQ ID NO:56,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:71,SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:77。其中所述至少75个，至少100个，至少150个或至少200个连续氨基酸包含对应于H1N1NC的SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的序列的多肽序列，并且其中对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸残基，并且多肽序列中对应于SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的氨基酸残基已经分别被除了赖氨酸和谷氨酸之外的氨基酸取代，使得取代的氨基酸残基之间的相互作用的强度大于野生型蛋白质中的相互作用的强度。

含有规定位点特异性突变的蛋白质构建体可用于通过将本发明的纳米颗粒连接到单体亚基来制备本发明的纳米颗粒。因此，在一个实施方案中，将含有所公开的位点特异性突变(例如，SEQ ID NO:149或SEQ ID NO:150的K1和SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20)的蛋白质构建体连接到单体亚基蛋白的至少部分，其中所述单体亚基蛋白的所述部分能够指导蛋白质构建体的自组装。在一个实施方案中，单体亚基蛋白的至少部分连接到第二氨基酸序列。在优选的实施方案中，单体亚基蛋白的至少部分连接到第二氨基酸序列的羧基端末端。在一个实施方案中，所述部分包含来自单体亚基的至少50个，至少100个或至少150个氨基酸。在一个实施方案中，单体亚基是铁蛋白。在一个实施方案中，单体亚基是2,4-二氧四氢蝶啶合成酶。在一个实施方案中，单体亚基包含与SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:194至少85％相同，至少90％相同或至少95％相同的序列。在一个实施方案中，单体亚基包含选自SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:194的序列。

尽管对本文公开的HA蛋白进行的修饰已经描述为单独的实施方案，但是应当理解，所有此类修饰可以包含在单一蛋白质构建体中。例如，可以制备蛋白质构建体，其中第一氨基酸序列通过接头连接到第二氨基酸序列，其中第二氨基酸序列包含来自头部区的羧基端末端下游的区域的氨基酸序列，但是缺乏由SEQ ID NO:133-148表示的内部环序列，并且其中对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:50的K1和SEQ ID NO:149的E53或SEQ ID NO:150的E20的第二氨基酸序列中的氨基酸分别被除了赖氨酸和谷氨酸之外的氨基酸取代，以增加折叠蛋白中这些氨基酸残基之间的相互作用的强度。因此，本发明的一个实施方案是蛋白质构建体，其包含来自流感病毒HA蛋白的茎区的第一氨基酸序列和来自流感病毒HA蛋白的茎区的第二氨基酸序列，所述第一和第二氨基酸酸序列通过接头序列共价连接，

其中所述第一氨基酸序列包含来自头部区序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20个连续氨基酸残基；

其中所述第二氨基酸序列包含与来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸残基至少85％，至少90％或至少95％相同的多肽序列，

其中所述多肽序列包含对应于由SEQ ID NO:150代表的流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)中的序列，由SEQ ID NO:152代表的流感A加利福尼亚/2009(H1)中的序列，由SEQ ID NO:154表示的流感A新加坡/1957(H2)中的序列和由SEQ ID NO:156表示的流感A印度尼西亚/2005H5)中的序列和，

其中对应于SEQ ID NO:150的K1的多肽序列中的氨基酸残基已经被除了赖氨酸之外的氨基酸取代，并且对应于SEQ ID NO:150的E20的氨基酸残基已经被除了谷氨酸外的氨基酸取代。

在一个实施方案中，多肽包含来自头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸。在一个实施方案中，所述至少100个连续氨基酸包含SEQ ID NO:150。在一个实施方案中，所述至少100个连续氨基酸包含SEQ ID NO:152。在一个实施方案中，所述至少100个连续氨基酸序列包含SEQ ID NO:154。在一个实施方案中，所述至少100个连续氨基酸包含SEQ ID NO:156。应当理解，在上述构建体中，当除去内部环区时，剩余的HA蛋白的各个末端可以直接连接在一起。然而，在一些情况下，此类直接连接可能降低肽主链的柔性。因此，在一些情况下，用接头序列替代内部环区域可能是有益的。作为实例，如果六个氨基酸接头序列插入SEQ ID NO:150，则最终序列可表现如下：VNSVIEKMGSGGSGTYNAELLVLL。

因此，在一个实施方案中，蛋白质构建体的多肽序列包含SEQ ID NO:150，其中插入短接头序列。在一个实施方案中，蛋白质构建体的多肽序列包含SEQ ID NO:152，其中插入短接头序列。在一个实施方案中，蛋白质构建体的多肽序列包含SEQ ID NO:154，其中插入短接头序列。在一个实施方案中，蛋白质构建体的多肽序列包含SEQ ID NO:156，其中插入短接头序列。在一个实施方案中，接头由丝氨酸和甘氨酸残基制成。在一个实施方案中，接头的长度少于10个氨基酸。在一个实施方案中，接头的长度少于5个氨基酸。在一个实施方案中，接头的长度少于3个氨基酸。

尽管上文所述的蛋白质构建体可用于产生能够产生针对一种或多种流感病毒的免疫应答的纳米颗粒，但是在一些实施方案中，可能有用的是将进一步的突变工程化改造到本发明的蛋白质的氨基酸序列中。例如，可以有用的是改变单体亚基蛋白，三聚化结构域或接头序列中的位点，如酶识别位点或糖基化位点，以便对蛋白质给予有益的性质(例如溶解度，半衰期，免于免疫监视的蛋白质的掩蔽部分)。在这方面，已知铁蛋白的单体亚基不是天然糖基化的。然而，如果其在哺乳动物或酵母细胞中作为分泌性蛋白质表达，则其可以被糖基化。因此，在一个实施方案中，来自单体铁蛋白亚基的氨基酸序列中的潜在N连接的糖基化位点被突变，使得突变的铁蛋白亚基序列在突变位点不再被糖基化。突变的单体铁蛋白亚基的一个此类序列由SEQ ID NO:5表示。

也可以改变蛋白质构建体序列以包括其它有用的突变。例如，在一些情况下，可以期望阻断针对蛋白质构建体中的某些氨基酸序列的免疫应答的产生。这可以通过在待阻断的位点附近添加糖基化位点来完成，使得聚糖在空间上阻碍免疫系统到达阻断位点的能力。因此，在一个实施方案中，蛋白质构建体的序列已经改变为包括一个或多个糖基化位点。这样的位点的实例包括但不限于Asn-X-Ser，Asn-X-Thr和Asn-X-Cys。在一些情况下，可以将糖基化位点引入接头序列中。引入糖基化位点的有用位点的其它实例包括但不限于对应于来自流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的氨基酸45-47或氨基酸370-372的氨基酸。引入糖基化位点的方法是本领域技术人员已知的。

本文的公开内容证明在HA或单体亚基蛋白中的特定位置处的突变产生有用的蛋白质构建体，并因此产生本发明的纳米颗粒。引入突变的铁蛋白蛋白质中有用位置的实例包括对应于选自下组的氨基酸位置的氨基酸：SEQ ID NO:2的氨基酸位置18，氨基酸位置20和氨基酸位置68。引入突变的有用位置的实例包括HA蛋白中对应于选自下组的氨基酸位置的氨基酸：流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的氨基酸位置36，氨基酸位置45，氨基酸位置47，氨基酸位置49，氨基酸位置339，氨基酸位置340，氨基酸位置341，氨基酸位置342，氨基酸位置361，氨基酸位置372，氨基酸位置394，氨基酸位置402，氨基酸位置437，氨基酸位置438，氨基酸位置445，氨基酸位置446，氨基酸位置448，氨基酸449，氨基酸位置450和氨基酸位置452。表2中列出了此类突变的一些实例。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置36的位置处包含异亮氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基A。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置45的位置处包含天冬酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999的HA蛋白的氨基酸位置47的位置包含苏氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置49的位置处包含色氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置339的位置处包含谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置340的位置处包含精氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置341的位置包含谷氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置342的位置包含苏氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基(H1)。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置372的位置处包含苏氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基(H1)。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置394的位置包含甲硫氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置402的位置处包含天冬酰胺，苏氨酸，甘氨酸，天冬酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置437的位置包含天冬氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置438的位置包含亮氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置445的位置包含亮氨酸，甲硫氨酸或具有与其相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置446的位置包含异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置448的位置处包含谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置449的位置包含色氨酸，苯丙氨酸或具有与其相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置450的位置处包含丙氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置452的位置处包含亮氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分缺少对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸515-517的一个或多个氨基酸。

本发明的一个实施方案是蛋白质构建体，所述蛋白质构建体包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。

在一个实施方案中，对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的氨基酸残基的氨基酸残基被除了赖氨酸之外的氨基酸取代，并且对应于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸残基或SEQ ID NO:20的E20的氨基酸残基被谷氨酸以外的氨基酸取代，使得在折叠蛋白中取代的氨基酸之间的相互作用的强度增加。

本发明的一个实施方案是蛋白质构建体，所述蛋白质构建体包含选自下组的序列：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一个实施方案中，当与单体亚基蛋白连接时，蛋白构建体能够形成纳米颗粒，其中纳米颗粒能够引发针对流感病毒的免疫应答。

如前已经描述，由流感HA蛋白制成的蛋白质构建体可以用于通过将其连接到单体亚基来制备本发明的纳米颗粒。因此，在一个实施方案中，蛋白质构建体与单体亚基蛋白质的至少一部分连接，其中单体亚基蛋白质的部分能够指导蛋白质构建体的自组装。在一个实施方案中，单体亚基蛋白的至少一部分连接到第二氨基酸序列。在优选的实施方案中，单体亚基蛋白的至少一部分连接到第二氨基酸序列的羧基末端。在一个实施方案中，所述部分包含来自单体亚基的至少50个，至少100个或至少150个氨基酸。在一个实施方案中，单体亚基是铁蛋白。在一个实施方案中，单体亚基是2,4-二氧四氢蝶啶合成酶。在一个实施方案中，单体亚基包含与SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:194至少85％相同，至少90％相同或至少95％相同的序列。在一个实施方案中，单体亚基包含选自SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:194的序列。

本发明的一个实施方案是蛋白质构建体，其包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397。在一个实施方案中，对应于SEQ ID NO:149的K1或SEQ ID NO:150的K1的氨基酸残基被除了赖氨酸之外的氨基酸取代，并且对应于SEQ ID NO:149的E53的氨基酸残基或SEQ ID NO:20的E20被除了谷氨酸之外的氨基酸取代，使得在折叠蛋白中取代的氨基酸之间的相互作用的强度增加。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置36的位置包含异亮氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置45的位置处包含天冬酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置47的位置包含苏氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置49的位置处包含色氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置339的位置处包含谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置340的位置处包含精氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基(H1)。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/20的HA蛋白的氨基酸位置341的位置包含谷氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置342的位置包含苏氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置372的位置处包含苏氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置394的位置包含甲硫氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置402的位置处包含天冬酰胺，苏氨酸，甘氨酸，天冬酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置437的位置包含天冬氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置438的位置包含亮氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置445的位置包含亮氨酸，甲硫氨酸或具有与其相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置446的位置包含异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置448的位置处包含谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置449的位置包含色氨酸，苯丙氨酸或具有与其相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置450的位置处包含丙氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置452的位置处包含亮氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分缺少对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸515-517的一个或多个氨基酸。

本发明的一个实施方案是蛋白质构建体，所述蛋白质构建体包含选自下组的序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397。

本发明的一个实施方案是由核酸分子编码的蛋白质构建体，所述核酸分子包含与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同的核酸序列：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。本发明的一个实施方案是由核酸分子编码的蛋白质构建体，所述核酸分子包含选自下组的核酸序列：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。

本发明的蛋白质和蛋白质构建体由本发明的核酸分子编码。此外，它们由本发明的核酸构建体表达。如本文所使用的，核酸构建体是重组表达载体，即连接到编码蛋白质的核酸分子的载体，使得当将核酸构建体施用于，例如，受试者或器官，组织或细胞时，核酸分子可以实现蛋白质表达。载体还能够将核酸分子转运到环境内的细胞，例如但不限于生物体，组织或细胞培养物。本公开的核酸构建体通过人类干预产生。核酸构建体可以是DNA，RNA或其变体。载体可以是DNA质粒，病毒载体或其它载体。在一个实施方案中，载体可以是巨细胞病毒(CMV)，逆转录病毒，腺病毒，腺伴随病毒，疱疹病毒，牛痘病毒，脊髓灰质炎病毒，辛德毕斯病毒或任何其它DNA或RNA病毒载体。在一个实施方案中，载体可以是假型化的慢病毒或逆转录病毒载体。在一个实施方案中，载体可以是DNA质粒。在一个实施方案中，载体可以是包含能够进行核酸分子递送和表达的病毒组分和质粒组分的DNA质粒。构建本公开的核酸构建体的方法是公知的。参见，例如，Molecular Cloning:a Laboratory Manual,3^rd edition,Sambrook et al.2001Cold Spring Harbor Laboratory Press,以及Current Protocols in Molecular Biology,Ausubel et al.eds.,John Wiley&Sons,1994。在一个实施方案中，载体是DNA质粒，如CMV/R质粒，如CMV/R或CMV/R 8KB(本文也称为CMV/R 8kb)。本文提供了CMV/R和CMV/R 8kb的实例。CMV/R也在2006年8月22日授权的US 7,094,598B2中描述。

如本文中使用的，核酸分子包含编码本发明的蛋白质构建体的核酸序列。核酸分子可以重组地，合成地或通过重组和合成程序的组合产生。本公开的核酸分子可以具有野生型核酸序列或密码子修饰的核酸序列，以例如掺入由人翻译系统更好识别的密码子。在一个实施方案中，核酸分子可以被遗传工程化以引入或消除编码不同氨基酸的密码子，如引入编码N-连接的糖基化位点的密码子。产生本公开核酸分子的方法是本领域已知的，特别是一旦知道核酸序列。应当理解，核酸构建体可以包含一个核酸分子或多于一个核酸分子。还应当理解，核酸分子可以编码一种蛋白质或多于一种蛋白质。

一个实施方案是编码流感HA蛋白的核酸分子，所述流感HA蛋白包含与选自SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:156的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。一个实施方案是编码流感HA蛋白的核酸分子，所述流感HA蛋白包含选自SEQ ID NO:150，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:156的氨基酸序列。

在一个实施方案中，核酸分子编码流感HA蛋白，其包含与选自下组的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。在一个实施方案中，核酸分子编码流感HA蛋白，其包含选自下组的氨基酸：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400。

本发明的一个实施方案是核酸分子，所述核酸分子包含与选自下组的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的核酸序列：SEQ ID NO:79,SEQ ID NO:82,SEQ ID NO:85,SEQ ID NO:88,SEQ ID NO:91,SEQ ID NO:94,SEQ ID NO:97,SEQ ID NO:100,SEQ ID NO:103,SEQ ID NO:157,SEQ ID NO:163,SEQ ID NO:169,SEQ ID NO:175,SEQ ID NO:181,SEQ ID NO:187,SEQ ID NO:196,SEQ ID NO:202,SEQ ID NO:208,SEQ ID NO:216,SEQ ID NO:234,SEQ ID NO:260,SEQ ID NO:267,SEQ ID NO:274,SEQ ID NO:281,SEQ ID NO:288,SEQ ID NO:295,SEQ ID NO:302,SEQ ID NO:309,SEQ ID NO:316,SEQ ID NO:323,SEQ ID NO:330,SEQ ID NO:337,SEQ ID NO:344,SEQ ID NO:351,SEQ ID NO:358,SEQ ID NO:365,SEQ ID NO:372,SEQ ID NO:379,SEQ ID NO:386和SEQ ID NO:393。本发明的一个实施方案是核酸分子，其包含选自下组的核酸：SEQ ID NO:79,SEQ ID NO:82,SEQ ID NO:85,SEQ ID NO:88,SEQ ID NO:91,SEQ ID NO:94,SEQ ID NO:97,SEQ ID NO:100,SEQ ID NO:103,SEQ ID NO:157,SEQ ID NO:163,SEQ ID NO:169,SEQ ID NO:175,SEQ ID NO:181,SEQ ID NO:187,SEQ ID NO:196,SEQ ID NO:202,SEQ ID NO:208,SEQ ID NO:216,SEQ ID NO:234,SEQ ID NO:260,SEQ ID NO:267,SEQ ID NO:274,SEQ ID NO:281,SEQ ID NO:288,SEQ ID NO:295,SEQ ID NO:302,SEQ ID NO:309,SEQ ID NO:316,SEQ ID NO:323,SEQ ID NO:330,SEQ ID NO:337,SEQ ID NO:344,SEQ ID NO:351,SEQ ID NO:358,SEQ ID NO:365,SEQ ID NO:372,SEQ ID NO:379,SEQ ID NO:386和SEQ ID NO:393。

优选的核酸分子是编码单体亚基，HA蛋白和/或包含与流感HA蛋白连接的单体亚基蛋白的蛋白质构建体的那些。因此，本发明的一个实施方案是包含编码蛋白质的核酸序列的核酸分子，所述蛋白质包含与流感HA蛋白连接的铁蛋白蛋白的单体亚基。在一个实施方案中，单体亚基包含与选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％序列相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，单体亚基包含选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5的氨基酸序列。

本发明的一个实施方案是包含编码蛋白质的核酸序列的核酸分子，所述蛋白质包含与流感HA蛋白连接的2,4-二氧四氢蝶啶合酶单体亚基。在一个实施方案中，单体亚基包含与SEQ ID NO:194至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，单体亚基包含SEQ ID NO:194。

本发明的一个实施方案是编码蛋白质构建体的核酸分子，所述蛋白质构建体包含与选自下组的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397。本发明的一个实施方案是编码蛋白质构建体的核酸分子，所述蛋白质构建体包含选自下组的序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397。

本发明的一个实施方案是包含核酸序列的核酸分子，所述核酸序列与选自下组的序列至少80％，至少85％，至少90％，至少92％，至少94％，至少96％，至少98％或至少99％相同：SEQ ID NO:106,SEQ ID NO:109,SEQ ID NO:112,SEQ ID NO:115,SEQ ID NO:118,SEQ ID NO:121,SEQ ID NO:124,SEQ ID NO:127,SEQ ID NO:130,SEQ ID NO:160,SEQ ID NO:166,SEQ ID NO:172,SEQ ID NO:178,SEQ ID NO:184,SEQ ID NO:190,SEQ ID NO:199,SEQ ID NO:205,SEQ ID NO:211,SEQ ID NO:219,SEQ ID NO:237,SEQ ID NO:263,SEQ ID NO:270,SEQ ID NO:277,SEQ ID NO:284,SEQ ID NO:291,SEQ ID NO:298,SEQ ID NO:305,SEQ ID NO:312,SEQ ID NO:319,SEQ ID NO:326,SEQ ID NO:333,SEQ ID NO:340,SEQ ID NO:347,SEQ ID NO:354,SEQ ID NO:361,SEQ ID NO:368,SEQ ID NO:375,SEQ ID NO:382,SEQ ID NO:389和SEQ ID NO:396。本发明的一个实施方案是包含选自下组的核酸序列的核酸分子：SEQ ID NO:106,SEQ ID NO:109,SEQ ID NO:112,SEQ ID NO:115,SEQ ID NO:118,SEQ ID NO:121,SEQ ID NO:124,SEQ ID NO:127,SEQ ID NO:130,SEQ ID NO:160,SEQ ID NO:166,SEQ ID NO:172,SEQ ID NO:178,SEQ ID NO:184,SEQ ID NO:190,SEQ ID NO:199,SEQ ID NO:205,SEQ ID NO:211,SEQ ID NO:219,SEQ ID NO:237,SEQ ID NO:263,SEQ ID NO:270,SEQ ID NO:277,SEQ ID NO:284,SEQ ID NO:291,SEQ ID NO:298,SEQ ID NO:305,SEQ ID NO:312,SEQ ID NO:319,SEQ ID NO:326,SEQ ID NO:333,SEQ ID NO:340,SEQ ID NO:347,SEQ ID NO:354,SEQ ID NO:361,SEQ ID NO:368,SEQ ID NO:375,SEQ ID NO:382,SEQ ID NO:389和SEQ ID NO:396。

本发明还涵盖用于产生本发明的蛋白质构建体的表达系统。在一个实施方案中，本发明的核酸分子可操作地连接于启动子。如本文中使用的，操作连接是指当连接的启动子被激活时，可以表达由连接的核酸分子编码的蛋白质。用于实施本发明的启动子是本领域技术人员已知的。本发明的一个实施方案是包含核酸序列的核酸分子，所述核酸序列与选自下组的序列至少85％，至少90％，至少95％或至少97％相同：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。本发明的一个实施方案是包含选自下组的核酸序列的核酸分子：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。

本发明的一个实施方案是包含本发明的核酸分子的重组细胞。本发明的一个实施方案是包含本发明的核酸分子的重组病毒。

如上指示，本发明的蛋白质构建体的重组生产可以使用本领域目前已知的任何合适的常规重组技术来完成。例如，可以如下在大肠杆菌(E.coli)中进行编码融合蛋白的核酸分子的产生，即使用编码合适的单体亚基蛋白(如幽门螺杆菌铁蛋白单体亚基)的核酸分子，并且将其融合到编码本文公开的合适的流感蛋白的核酸分子。然后，可以将构建体转化成蛋白质表达细胞，培养至合适的大小，并诱导产生融合蛋白。

如已经描述的，因为本发明的蛋白质构建体包含单体亚基蛋白质，所以它们可以自组装。根据本发明，由此类自组装产生的超分子被称为HA表达性、基于单体亚基的纳米颗粒。为了便于讨论，将HA表达性、基于单体亚基的纳米颗粒简称为纳米颗粒(np)。本发明的纳米颗粒具有与制备它们的单体蛋白质的纳米颗粒相似的结构特征。例如，关于铁蛋白，基于铁蛋白的纳米颗粒含有24个亚基并且具有432对称性。在本发明的纳米颗粒的情况下，亚基是包含与流感HA蛋白连接的单体亚基(例如，铁蛋白，2,4-二氧四氢蝶啶合酶等)的蛋白质构建体。此类纳米颗粒在其表面上以HA三聚体展示HA蛋白的至少一部分。在此类构建中，HA三聚体对于免疫系统是可及的，并且因此可以引发免疫应答。因此，本发明的一个实施方案是包含本发明的蛋白构建体的纳米颗粒，其中所述蛋白构建体包含来自与单体亚基蛋白连接的HA蛋白的茎区的氨基酸。在一个实施方案中，纳米颗粒在其表面上以HA三聚体展示HA蛋白。在一个实施方案中，流感HA蛋白能够引发针对流感病毒的保护性抗体。

在本发明的一个实施方案中，纳米颗粒包含蛋白质构建体，其包含来自流感病毒HA蛋白的茎区的第一氨基酸序列和来自流感病毒HA蛋白的茎区的第二氨基酸序列，所述第一和第二氨基酸序列通过接头序列共价连接，

其中所述第一氨基酸序列包含来自头部区序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20个连续氨基酸残基；

其中所述第二氨基酸序列包含来自所述头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少20个连续氨基酸残基；且

其中所述第一或第二氨基酸序列与单体亚基结构域的至少一部分连接。

在本发明的一个实施方案中，纳米颗粒包含蛋白质构建体，其包含来自流感病毒HA蛋白的茎区的第一氨基酸序列和来自流感病毒HA蛋白的茎区的第二氨基酸序列，所述第一和第二氨基酸序列通过接头序列共价连接，

其中所述第一氨基酸序列包含来自头部区序列的氨基端末端上游的氨基酸序列的至少20个连续氨基酸残基；

其中所述第二氨基酸序列包含与头部区序列的羧基端末端下游的氨基酸序列的至少100个连续氨基酸残基至少85％，至少90％或至少95％相同的多肽序列，

其中所述多肽序列包含与由SEQ ID NO:150代表的流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)中的序列，由SEQ ID NO:150代表的流感A加利福尼亚/2009中的序列，由SEQ ID NO:154代表的流感A新加坡/1957(H2)中的序列和由SEQ ID NO:156代表的流感A印度尼西亚/2005H5中的序列对应的序列；和

其中所述第一或第二氨基酸序列与单体亚基蛋白连接。

在另一个实施方案中，多肽序列中对应于SEQ ID NO:150的K1的氨基酸残基已被除赖氨酸以外的氨基酸取代，并且对应于SEQ ID NO:150的E20的氨基酸残基已经被除谷氨酸以外的氨基酸取代。

在一个实施方案中，在构成纳米颗粒的蛋白质构建体的单体亚基部分和/或第一和/或第二氨基酸序列中进行了另外的突变。引入突变的铁蛋白蛋白质中有用位置的实例包括对应于选自下组的氨基酸位置的氨基酸：SEQ ID NO:2的氨基酸位置18，氨基酸位置20和氨基酸位置68。在一个实施方案中，蛋白质构建体包含在对应于选自下组的氨基酸位置的氨基酸位置处的突变：流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白(SEQ ID NO:8)的氨基酸位置36，氨基酸位置45，氨基酸位置47，氨基酸位置49，氨基酸位置339，氨基酸位置340，氨基酸位置341，氨基酸位置342，氨基酸位置361，氨基酸位置372，氨基酸位置394，氨基酸位置402，氨基酸位置437，氨基酸位置438，氨基酸位置445，氨基酸位置446，氨基酸位置448，氨基酸449，氨基酸位置450和氨基酸位置452。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置36的位置包含异亮氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置45的位置处包含天冬酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置47的位置包含苏氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置49的位置处包含色氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置339的位置处包含谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置340的位置处包含精氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置341的位置包含谷氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置342的位置包含苏氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基(H1)。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置372的位置处包含苏氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置394的位置包含甲硫氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置402的位置处包含天冬酰胺，苏氨酸，甘氨酸，天冬酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置437的位置包含天冬氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置438的位置包含亮氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置445的位置包含亮氨酸，甲硫氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置446的位置包含异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置448的位置处包含谷氨酰胺或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置449的位置包含色氨酸，苯丙氨酸或具有与其相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置450的位置处包含丙氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分在对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸位置452的位置处包含亮氨酸或与其具有相似性质的氨基酸残基(H1)。在一个实施方案中，蛋白质构建体的HA部分缺少对应于流感A新喀里多尼亚/20/1999(H1)的HA蛋白的氨基酸515-517的一个或多个氨基酸。

在一个实施方案中，本发明的纳米颗粒包含单体亚基蛋白，其包含来自2,4-二氧四氢蝶啶合酶的至少50个氨基酸，至少100个氨基酸或至少150个氨基酸。在一个实施方案中，单体亚基蛋白包含来自选自SEQ ID NO:194的氨基酸序列的至少50个氨基酸，至少100个氨基酸或至少150个氨基酸，和/或包含与SEQ ID NO:194至少85％，至少90％，至少95％，至少97％，至少99％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，单体亚基包含SEQ ID NO:194。

在一个实施方案中，单体亚基蛋白包含来自铁蛋白蛋白的至少50个氨基酸，至少100个氨基酸或至少150个氨基酸。在一个实施方案中，单体亚基蛋白包含来自选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5的氨基酸序列的至少50个氨基酸，至少100个氨基酸或至少150个氨基酸，和或包含与选自SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少85％，至少90％，至少95％，至少97％，至少99％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，单体铁蛋白亚基包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5。

在一个实施方案中，纳米颗粒包含蛋白质构建体，其包含与来自病毒的HA蛋白的至少一个免疫原性部分连接的本发明的单体蛋白质，所述病毒选自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。在一个实施方案中，蛋白质构建体包含与选自下组的HA蛋白的至少一个免疫原性部分连接的本发明的单体蛋白：H1流感病毒HA蛋白，H2流感病毒HA蛋白，H3流感病毒HA蛋白，H4流感病毒HA蛋白，H5流感病毒HA蛋白，H6流感病毒HA蛋白，H7流感病毒HA蛋白，H8流感病毒HA蛋白，H9流感病毒HA蛋白，H10流感病毒HA蛋白，H11流感病毒HA蛋白，H12流感病毒HA蛋白，H13流感病毒HA蛋白，H14流感病毒HA蛋白，H15流感病毒HA蛋白，H16流感病毒HA蛋白，H17流感病毒HA蛋白，和H18流感病毒HA蛋白。在一个实施方案中，免疫原性部分包含至少一个表位。

在一个实施方案中，纳米颗粒包含包含蛋白质构建体，所述蛋白质构建体包含与氨基酸序列连接的本发明的单体蛋白，所述氨基酸序列与选自下组的序列是至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％相同的：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400，其中蛋白质构建体能够选择性结合抗流感抗体。在一个实施方案中，纳米颗粒包含蛋白质构建体，所述蛋白质构建体包含与氨基酸序列连接的本发明的单体蛋白，所述氨基酸序列选自下组：SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:101,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:164,SEQ ID NO:170,SEQ ID NO:176,SEQ ID NO:182,SEQ ID NO:188,SEQ ID NO:197,SEQ ID NO:203,SEQ ID NO:209,SEQ ID NO:214,SEQ ID NO:217,SEQ ID NO:222,SEQ ID NO:224,SEQ ID NO:226,SEQ ID NO:228,SEQ ID NO:230,SEQ ID NO:232,SEQ ID NO:235,SEQ ID NO:240,SEQ ID NO:242,SEQ ID NO:244,SEQ ID NO:246,SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID NO:252,SEQ ID NO:254,SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:258,SEQ ID NO:261,SEQ ID NO:268,SEQ ID NO:275,SEQ ID NO:282,SEQ ID NO:289,SEQ ID NO:296,SEQ ID NO:303,SEQ ID NO:310,SEQ ID NO:317,SEQ ID NO:324,SEQ ID NO:331,SEQ ID NO:338,SEQ ID NO:345,SEQ ID NO:352,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:366,SEQ ID NO:373,SEQ ID NO:380,SEQ ID NO:387,SEQ ID NO:394和SEQ ID NO:400，其中蛋白质构建体能够选择性结合抗流感抗体。

在本发明的一个实施方案中，纳米颗粒包含蛋白质构建体，所述蛋白质构建体包含与选自下组的序列至少80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397，其中蛋白质构建体能够选择性结合抗流感抗体。在本发明的一个实施方案中，纳米颗粒包含蛋白质构建体，所述蛋白质构建体包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:113,SEQ ID NO:116,SEQ ID NO:119,SEQ ID NO:122,SEQ ID NO:125,SEQ ID NO:128,SEQ ID NO:131,SEQ ID NO:161,SEQ ID NO:167,SEQ ID NO:173,SEQ ID NO:179,SEQ ID NO:185,SEQ ID NO:191,SEQ ID NO:200,SEQ ID NO:206,SEQ ID NO:212,SEQ ID NO:215,SEQ ID NO:220,SEQ ID NO:223,SEQ ID NO:225,SEQ ID NO:227,SEQ ID NO:229,SEQ ID NO:231,SEQ ID NO:233,SEQ ID NO:238,SEQ ID NO:241,SEQ ID NO:243,SEQ ID NO:245,SEQ ID NO:247,SEQ ID NO:249,SEQ ID NO:251,SEQ ID NO:253,SEQ ID NO:255,SEQQ ID NO:257,SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:264,SEQ ID NO:271,SEQ ID NO:278,SEQ ID NO:285,SEQ ID NO:292,SEQ ID NO:299,SEQ ID NO:306,SEQ ID NO:313,SEQ ID NO:320,SEQ ID NO:327,SEQ ID NO:334,SEQ ID NO:341,SEQ ID NO:348,SEQ ID NO:355,SEQ ID NO:362,SEQ ID NO:369,SEQ ID NO:376,SEQ ID NO:383,SEQ ID NO:390和SEQ ID NO:397。

在一个实施方案中，本发明的纳米颗粒包含由核酸分子编码的蛋白质构建体，所述核酸分子包含与选自下组的序列至少85％,至少90％,至少95％or至少97％相同的核酸序列：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。在一个实施方案中，本发明的纳米颗粒包含由核酸分子编码的蛋白质构建体，所述核酸分子包含选自下组的核酸序列：SEQ ID NO:266,SEQ ID NO:273,SEQ ID NO:SEQ ID NO:280,SEQ ID NO:287,SEQ ID NO:294,SEQ ID NO:301,SEQ ID NO:308,SEQ ID NO:315,SEQ ID NO:322,SEQ ID NO:329,SEQ ID NO:336,SEQ ID NO:343,SEQ ID NO:350,SEQ ID NO:357,SEQ ID NO:364,SEQ ID NO:371,SEQ ID NO:378,SEQ ID NO:385SEQ ID NO:392和SEQ ID NO:399。

本发明的纳米颗粒可用于引发对流感病毒的免疫应答。一类免疫应答是B细胞应答，其导致产生针对引发免疫应答的抗原的抗体。因此，在一个实施方案中，纳米颗粒引发结合来自选自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒的病毒的流感HA蛋白的茎区的抗体。本发明的一个实施方案是纳米颗粒，其引发结合流感HA蛋白的茎区的抗体，所述流感HA蛋白选自H1流感病毒HA蛋白，H2流感病毒HA蛋白，H3流感病毒HA蛋白，H4流感病毒HA蛋白，H5流感病毒HA蛋白，H6流感病毒HA蛋白，H7流感病毒HA蛋白，H8流感病毒HA蛋白，H9流感病毒HA蛋白，H10流感病毒HA蛋白HA蛋白，H11流感病毒HA蛋白，H12流感病毒HA蛋白，H13流感病毒HA蛋白，H14流感病毒HA蛋白，H15流感病毒HA蛋白，H16流感病毒HA蛋白，H17流感病毒HA蛋白，和H18流感病毒HA蛋白。本发明的一个实施方案是纳米颗粒，其引发结合来自病毒株的流感HA蛋白的茎区的抗体，所述病毒株选自流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亚/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo,H5),B/佛罗里达/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)及其变体。

尽管所有抗体能够结合引发导致抗体产生的免疫应答的抗原，但优选的抗体是那些提供针对流感病毒的广泛的异亚型保护的抗体。因此，本发明的一个实施方案是引发保护性抗体的纳米颗粒，所述保护性抗体结合来自选自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒的病毒的流感HA蛋白的茎区。本发明的一个实施方案是引发与流感HA蛋白的茎区结合的保护性抗体的蛋白质，所述流感HA蛋白选自H1流感病毒HA蛋白，H2流感病毒HA蛋白，H3流感病毒HA蛋白，H4流感病毒HA蛋白，H5流感病毒HA蛋白，H6流感病毒HA蛋白，H7流感病毒HA蛋白，H8流感病毒HA蛋白，H9流感病毒HA蛋白，H10流感病毒HA蛋白HA蛋白，H11流感病毒HA蛋白，H12流感病毒HA蛋白，H13流感病毒HA蛋白，H14流感病毒HA蛋白，H15流感病毒HA蛋白，H16流感病毒HA蛋白，H17流感病毒HA蛋白，和H18流感病毒HA蛋白。本发明的一个实施方案是引发针对选自下组的病毒的抗体的纳米颗粒：流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亚/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo,H5),B/佛罗里达/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1)and B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)。本发明的一个实施方案是引发结合蛋白质的抗体的纳米颗粒，所述蛋白质包含与选自下组的序列至少80％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。本发明的一个实施方案是引发结合蛋白质的抗体的纳米颗粒，所述蛋白质包含选自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17的氨基酸序列。

由本发明的蛋白质引发的保护性抗体可通过影响病毒生命周期中的任何步骤来提供保护免受病毒感染。例如，保护性抗体可以防止流感病毒附着于细胞，进入细胞，将病毒核糖核蛋白释放到细胞质中，在受感染的细胞中形成新的病毒颗粒并从受感染的宿主细胞膜出芽新的病毒颗粒。在一个实施方案中，由本发明的蛋白质引发的保护性抗体防止流感病毒进入宿主细胞。在一个实施方案中，由本发明的蛋白质引发的保护性抗体防止病毒膜与内体膜的融合。在一个实施方案中，由本发明的蛋白质引发的保护性抗体防止核糖核蛋白释放到宿主细胞的细胞质中。在一个实施方案中，由本发明的蛋白质引发的保护性抗体防止新病毒在感染的宿主细胞中的装配。在一个实施方案中，由本发明的蛋白质引发的保护性抗体防止新形成的病毒从感染的宿主细胞释放。

因为流感病毒的茎区的氨基酸序列是高度保守的，所以由本发明的纳米颗粒引发的保护性抗体可以是广泛保护性的。也就是说，本发明的纳米颗粒引发的保护性抗体可以针对多于一种类型，亚型和/或毒株的流感病毒提供保护。因此，本发明的一个实施方案是引发结合流感HA蛋白茎区的广泛保护性抗体的蛋白质。一个实施方案是引发结合来自多于一种类型的流感病毒的HA蛋白的茎区的抗体的纳米颗粒，所述流感病毒选自A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。一个实施方案是引发结合来自多于一种亚型流感病毒的HA蛋白的茎区的抗体的纳米颗粒，所述流感病毒选自H1流感病毒，H2流感病毒，H3流感病毒，H4流感病毒，H5流感病毒，H6流感病毒，H7流感病毒，H8流感病毒，H9流感病毒，H10流感病毒，H11流感病毒，H12流感病毒，H13流感病毒，H14流感病毒，H15流感病毒，H16流感病毒，H17流感病毒和H18流感病毒。一个实施方案是引发结合来自超过流感病毒株的HA蛋白的茎区的抗体的纳米颗粒。本发明的一个实施方案是引发结合超过一种蛋白质的抗体的纳米颗粒，所述蛋白质包含与选自下组的序列至少80％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17。本发明的一个实施方案是引发结合多于一种蛋白质的抗体的纳米颗粒，所述蛋白质包含选自SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:17的氨基酸序列。

因为本发明的纳米颗粒可以引发对流感病毒的免疫应答，所以它们可用作保护个体免受流感病毒感染的疫苗。因此，本发明的一个实施方案是包含本发明的纳米颗粒的疫苗。本发明的疫苗还可以含有其它成分，如佐剂，缓冲液等。尽管可以使用任何佐剂，但优选的实施方案可以含有：化学佐剂，如磷酸铝，benzyalkonium chloride，乌苯美司(ubenimex)和QS21；遗传佐剂如IL-2基因或其片段，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因或其片段，IL-18基因或其片段，趋化因子(CC基序)配体21(CCL21)基因或其片段，IL-6基因或其片段，CpG，LPS，TLR激动剂和其它免疫刺激基因；蛋白质佐剂如IL-2或其片段，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)或其片段，IL-18或其片段，趋化因子(CC基序)配体21(CCL21)或其片段，IL-6或其片段，CpG，LPS，TLR激动剂和其它免疫刺激性细胞因子或其片段；脂质佐剂如阳离子脂质体，N3(阳离子脂质)，单磷酰脂质A(MPL1)；其它佐剂，包括霍乱毒素，肠毒素，Fms样酪氨酸激酶-3配体(Flt-3L)，布比卡因(bupivacaine)，丁哌卡因(marcaine)和左旋咪唑。

本发明的一个实施方案是包含多于一种流感HA蛋白的纳米颗粒疫苗。此类疫苗可以包括在单个纳米颗粒上或作为纳米颗粒混合物的不同流感HA蛋白的组合，其中至少两种具有独特的流感HA蛋白。多价疫苗可包含与必要一样多的流感HA蛋白，以便导致提供保护免于期望的病毒毒株宽度必需的免疫应答的产生。在一个实施方案中，疫苗包含来自至少两种不同流感株(二价)的HA蛋白。在一个实施方案中，疫苗包含来自至少三种不同流感株(三价)的HA蛋白。在一个实施方案中，疫苗包含来自至少四种不同流感株(四价)的HA蛋白。在一个实施方案中，疫苗包含来自至少五种不同流感株(五价)的HA蛋白。在一个实施方案中，疫苗包含来自至少六种不同流感病毒株(六价)的HA蛋白。在各种实施方案中，疫苗包含来自7、8、9或10种不同流感病毒株之每种的HA蛋白。此类组合的实例是包含流感A组1HA蛋白，流感A组2HA蛋白，和流感B HA蛋白的纳米颗粒疫苗。在一个实施方案中，流感HA蛋白是H1HA，H3HA和B HA。在一个实施方案中，流感HA蛋白是包括在2011-2012流感疫苗中的那些。多价疫苗的另一个实例是包含来自四种不同流感病毒的HA蛋白的纳米颗粒疫苗。在一个实施方案中，多价疫苗包含来自流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亚/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo,H5),B/佛罗里达/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1)和B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)的HA蛋白。

本发明的一个实施方案是针对流感病毒对个体接种疫苗的方法，所述方法包括向个体施用纳米颗粒，使得在个体中产生针对流感病毒的免疫应答，其中所述纳米颗粒包含连接到流感HA蛋白的单体亚基蛋白，并且其中所述纳米颗粒在其表面上展示所述流感HA。在一个实施方案中，纳米颗粒是单价纳米颗粒。在一个实施方案中，纳米颗粒是多价纳米颗粒。本发明的另一个实施方案是针对流感病毒感染对个体接种疫苗的方法，所述方法包括：

a)获得包含单体亚基的纳米颗粒，其中所述单体亚基与流感血凝素蛋白连接，并且其中所述纳米颗粒在其表面上展示流感HA；并且，

b)将纳米颗粒施用于个体，使得产生针对流感病毒的免疫应答。

本发明的一个实施方案是针对流感病毒对个体接种疫苗的方法，所述方法包括向个体施用实施方案的疫苗，使得在个体中产生针对流感病毒的免疫应答，其中所述疫苗包含至少一种纳米颗粒，其包含与流感HA蛋白连接的单体亚基，并且其中所述纳米颗粒在其表面上展示流感HA。在一个实施方案中，疫苗是单价疫苗。在一个实施方案中，疫苗是多价疫苗。本发明的另一个实施方案是针对流感病毒感染对个体接种疫苗的方法，所述方法包括：

a)获得包含至少一种包含本发明的蛋白质构建体的纳米颗粒的疫苗，其中所述蛋白质构建体包含与流感HA蛋白连接的单体亚基蛋白，并且其中所述纳米颗粒在其表面上展示流感HA；并且，

b)将所述疫苗施用于个体，使得产生针对流感病毒的免疫应答。

在一个实施方案中，纳米颗粒是单价纳米颗粒。在一个实施方案中，纳米颗粒是多价纳米颗粒。

在一个实施方案中，纳米颗粒具有八面体对称。在一个实施方案中，流感HA蛋白能够引发针对流感病毒的抗体。在一个实施方案中，流感HA蛋白能够广泛引发针对流感病毒的抗体。在优选的实施方案中，引发的抗体是保护性抗体。在优选的实施方案中，引发的抗体是广泛异亚型保护性的。

本发明的疫苗可用于使用初免/加强方案对个体接种疫苗。此类方案在美国专利公开号20110177122中描述，其通过引用整体并入本文。在此类方案中，可以向个体施用第一疫苗组合物(初次)，然后在一段时间后，可以向个体施用第二疫苗组合物(加强)。施用加强组合物通常是在施用引发组合物后数周或数月，优选约2-3周或4周，或8周，或16周，或20周，或24周，或28周，或32周。在一个实施方案中，配制加强组合物，用于在施用引发组合物后约1周，或2周，或3周，或4周，或5周，或6周，或7周，或8周，或9周，或16周，或20周，或24周，或28周，或32周施用。

第一和第二疫苗组合物可以是，但不需要是相同的组合物。因此，在本发明的一个实施方案中，施用疫苗的步骤包括施用第一疫苗组合物，然后在稍后时间施用第二疫苗组合物。在一个实施方案中，第一疫苗组合物包含本发明的纳米颗粒。在一个实施方案中，第一疫苗组合物包含纳米颗粒，其包含来自流感病毒的HA蛋白的氨基酸序列，所述流感病毒选自A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亚/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亚/05/2005(2005Indo,H5),B/佛罗里达/4/2006(2006Flo,B),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1),B/布里斯班/60/2008(2008Bris,B)。

在一个实施方案中，接种疫苗的个体已暴露于流感病毒。如本文所使用的，术语暴露的，暴露等指示受试者已经与已知感染流感病毒的动物对象接触。可以使用本领域技术人员熟知的技术来施用本发明的疫苗。用于配制和施用的技术可以在例如“Remington’s Pharmaceutical Sciences”,18^th ed.,1990,Mack Publishing Co.,Easton,PA中找到。疫苗可通过包括但不限于传统注射器，无针注射装置或微粒轰击基因枪的手段施用。合适的施用途径包括但不限于肠胃外递送，如肌内，皮内，皮下，髓内注射以及鞘内，直接心室内，静脉内，腹膜内，鼻内或眼内注射，仅举几个例子。对于注射，本发明的一个实施方案的化合物可以配制在水溶液中，优选在生理上相容的缓冲液如Hanks溶液，林格氏溶液或生理盐水缓冲液中配制。

在一个实施方案中，本发明的疫苗或纳米颗粒可用于保护个体免受异源流感病毒的感染。也就是说，使用来自流感病毒的一种毒株的HA蛋白制备的疫苗能够保护个体免受不同流感病毒株的感染。例如，使用来自流感A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1)的HA蛋白制备的疫苗可以用于保护个体免受流感病毒感染，所述流感病毒包括但不限于A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1),A/加利福尼亚/04/2009(2009CA,H1),A/新加坡/1/1957(1957Sing,H2),A/香港/1/1968(1968HK,H3),A/布里斯班/10/2007(2007Bris,H3),A/印度尼西亚/05/2005(2005indo,H5),A/珀斯/16/2009(2009Per,H3),和/或A/布里斯班/59/2007(2007Bris,H1)。

在一个实施方案中，本发明的疫苗或纳米颗粒可用于保护个体免于抗原性趋异的流感病毒的感染。抗原性趋异的是指流感病毒株随时间突变的趋势，从而改变展示给免疫系统的氨基酸。此类随时间的突变也称为抗原漂移。因此，例如，使用来自A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC,H1)流感病毒株的HA蛋白制备的疫苗能够保护个体免受早期的，抗原性趋异的新喀里多尼亚流感毒株的感染，和未来的进化(或趋异)流感毒株。

因为本发明的纳米颗粒展示与完整HA在抗原性上相似的HA蛋白，所以它们可用于检测针对流感病毒的抗体(抗流感抗体)的测定法中。

因此，本发明的一个实施方案是使用本发明的纳米颗粒检测抗流感病毒抗体的方法。本发明的检测方法通常可以通过以下步骤实现：

a.使测试抗流感抗体的存在的样品的至少部分与本发明的纳米颗粒接触；并且，

b.检测纳米颗粒/抗体复合物的存在；

其中纳米颗粒/抗体复合物的存在指示样品含有抗流感抗体。

在本发明的一个实施方案中，从待测试抗流感病毒抗体的存在的个体获得或收集样品。个体可以是或不是怀疑具有抗流感抗体或已经暴露于流感病毒的。样品是从个体获得的任何样本，其可用于测试抗流感病毒抗体的存在。优选的样品是可用于检测抗流感病毒抗体的存在的体液。可用于实施本发明方法的体液的实例包括但不限于血液，血浆，血清，泪液和唾液。本领域技术人员可以容易地鉴定适于实施所公开的方法的样品。

血液或血液衍生的液体如血浆，血清等特别适合作为样品。可以使用本领域已知的方法从个体收集和制备此类样品。样品可以在测定前冷藏或冷冻。

本发明的任何纳米颗粒可用于实施所公开的方法，只要纳米颗粒结合抗流感病毒抗体。有用的纳米颗粒及其制备方法已在本文中详细描述。在优选的实施方案中，纳米颗粒包含蛋白质构建体，其中蛋白质构建体包含连接到(融合到)来自流感HA蛋白的至少一个表位的来自单体亚基蛋白的至少25个，至少50个，至少75个，至少100个或至少150个连续氨基酸，使得纳米颗粒在其表面上包含流感病毒HA蛋白表位的三聚体，并且其中蛋白质构建体能够自组装成纳米颗粒。

如本文中使用的，术语接触是指将测试抗流感抗体存在的样品引入本发明的纳米颗粒，例如通过组合或混合样品和本发明的纳米颗粒，使得纳米颗粒能够与样品中的抗体(如果存在的话)物理接触。当抗流感病毒抗体存在于样品中时，然后形成抗体/纳米颗粒复合物。此类复合物形成是指抗流感病毒抗体选择性结合纳米颗粒中蛋白质构建体的HA部分以形成可检测的稳定复合物的能力。样品中抗流感病毒抗体与纳米颗粒的结合在适合形成复合物的条件下完成。此类条件(例如，适当的浓度，缓冲液，温度，反应时间)以及优化此类条件的方法是本领域技术人员已知的。结合可以使用本领域标准的多种方法测量，包括但不限于凝集测定法，沉淀测定法，酶免疫测定法(例如ELISA)，免疫沉淀测定法，免疫印迹测定法和其它免疫测定法，如例如记载于Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Labs Press,1989)和Harlow et al.,Antibodies,a Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Labs Press,1988)，两者均通过引用整体并入本文。这些参考文献还提供了复合物形成条件的实例。

如本文所使用的，短语选择性地结合HA，选择性结合HA等，是指与结合与HA无关的蛋白质，或样品或测定法中的非蛋白质组分形成对比，抗体优先结合HA蛋白的能力。选择性结合HA的抗体是结合HA但不显著结合可能存在于样品或测定法中的其它分子或组分的抗体。显著的结合被认为是例如抗HA抗体与非HA分子的结合，以大到足以干扰测定法检测和/或测定样品中的抗流感抗体的水平的能力的亲和力或亲合力。可存在于样品或测定法中的其它分子和化合物的实例包括但不限于非HA蛋白，例如白蛋白，脂质和碳水化合物。

在一个实施方案中，可以在溶液中形成抗流感病毒抗体/纳米颗粒复合物(本文中也称为抗体/纳米颗粒复合物)。在一个实施方案中，可以形成抗体/纳米颗粒复合物，其中纳米颗粒固定在(例如，涂覆到)基底上。固定化技术是本领域技术人员已知的。合适的基底材料包括但不限于塑料，玻璃，凝胶，赛璐珞(celluloid)，织物，纸和颗粒材料。基底材料的实例包括但不限于胶乳，聚苯乙烯，尼龙，硝化纤维素，琼脂糖，棉，PVDF(聚偏氟乙烯)和磁性树脂。用于基底材料的合适形状包括但不限于孔(例如，微量滴定盘孔)，微量滴定板，浸渍片，条，珠，侧流装置，膜，过滤器，管，盘，赛璐珞型基质，磁性颗粒和其它颗粒。特别优选的底物包括例如ELISA板，浸渍片，免疫斑点条，放射免疫测定板，琼脂糖珠，塑料珠，乳胶珠，棉线，塑料芯片，免疫印迹膜，免疫印迹纸和流通膜。在一个实施方案中，基底，如颗粒，可以包括可检测标记物。对于基底材料的实例的描述，参见例如Kemeny,D.M.(1991)APractical Guide to ELISA,Pergamon Press,Elmsford,NY pp 33-44,以及Price,C.and Newman,D.eds.Principles and Practice of Immunoassay,2nd edition(1997)Stockton Press,NY,NY，两者通过引用整体并入本文。

根据本发明，一旦形成，就检测抗流感病毒抗体/纳米颗粒复合物。检测可以是定性，定量或半定量的。如本文所使用的，短语检测复合物形成，检测复合物等是指鉴定与纳米颗粒复合的抗流感病毒抗体的存在。如果形成复合物，则可以但不需要量化形成的复合物的量。假定的抗流感病毒抗体和纳米颗粒之间的复合物形成或选择性结合可以使用本领域标准的多种方法测量(即检测，测定)(参见例如Sambrook等人，同上)，其实例在本文中公开。可以以多种方式检测复合物，包括但不限于使用一种或多种下列测定法：血凝抑制测定法，径向扩散测定法，酶联免疫测定法，竞争性酶联免疫测定法，放射免疫测定法，荧光免疫测定法，化学发光测定法，侧向流测定法，流通测定法，基于颗粒的测定法(例如，使用颗粒，如但不限于磁性颗粒或塑料聚合物，如胶乳或聚苯乙烯珠)，免疫沉淀测定法，BioCoreJ测定法(例如，使用胶体金)，免疫斑点测定法(例如，CMG＝s免疫印迹系统(s Immunodot System)，Friborg，Switzerland)和免疫印迹测定法(例如，western印迹)，磷光测定法，流通测定法，层析测定法，基于PAGe的测定，表面等离振子共振测定法，分光光度测定法和电子感觉测定。此类测定法是本领域技术人员公知的。

测定法可用于根据其使用方式给出定性或定量结果。可以通过目视(例如，通过眼或通过机器，如密度计或分光光度计)观察到一些测定法，如凝集，颗粒分离和沉淀测定法，而不需要可检测的标记物。

在其它测定法中，可检测标记物与纳米颗粒或与选择性结合纳米颗粒的试剂的缀合(即，附着)有助于检测复合物形成。可检测标记物可以在不干扰纳米颗粒结合抗流感病毒抗体的能力的位点与纳米颗粒或纳米颗粒结合试剂缀合。缀合方法是本领域技术人员已知的。可检测标记物的实例包括但不限于放射性标记物，荧光标记物，化学发光标记物，发色标记物，酶标记物，磷光标记物，电子标记物；金属溶胶标记物，有色珠，物理标记物或配体。配体是指与另一分子选择性结合的分子。优选的可检测标记物包括但不限于荧光素，放射性同位素，磷酸酶(例如碱性磷酸酶)，生物素，抗生物素蛋白，过氧化物酶(例如辣根过氧化物酶)，β-半乳糖苷酶和生物素相关化合物或抗生物素蛋白相关化合物(例如链霉抗生物素蛋白或ImmunoPure7NeutrAvidin)。

在一个实施方案中，可以通过使样品与结合抗流感抗体，铁蛋白或与抗体/纳米颗粒复合物的特异性化合物(如抗体)接触来检测抗体/纳米颗粒复合物，所述特异性化合物与可检测标记物缀合。可检测标记物可以以不阻断化合物结合所检测的复合物的能力的方式与特定化合物缀合。优选的可检测标记物包括但不限于荧光素，放射性同位素，磷酸酶(例如碱性磷酸酶)，生物素，抗生物素蛋白，过氧化物酶(例如辣根过氧化物酶)，β-半乳糖苷酶和生物素相关化合物或抗生物素蛋白相关化合物(例如链霉抗生物素蛋白或ImmunoPure7NeutrAvidin)。

在另一个实施方案中，通过使复合物与指示剂分子接触来检测复合物。合适的指示剂分子包括可以结合抗流感病毒抗体/纳米颗粒复合物，抗流感病毒抗体或纳米颗粒的分子。因此，指示剂分子可以包括例如结合抗流感病毒抗体的试剂，如识别免疫球蛋白的抗体。作为抗体的优选指示剂分子包括例如与来自其中产生抗流感病毒抗体的个体物种的抗体反应的抗体。指示剂分子本身可以附着到本发明的可检测标志物。例如，抗体可以与生物素，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶或荧光素缀合。

本发明还可以包含能够检测指示剂分子存在的二级分子或其它结合分子的一个或多个层和/或类型。例如，选择性结合指示剂分子的无标签的(即，不与可检测标志物缀合的)二抗可以与选择性结合二抗的有标签的(即，与可检测标志物缀合的)三抗结合。合适的二抗，三抗和其它二级或三级分子可以容易地由本领域技术人员选择。优选的三级分子也可以由本领域技术人员基于第二分子的特性来选择。相同的策略可以应用于后续层。

优选地，指示剂分子与可检测标志物缀合。如果需要的话，加入显影剂，并将底物送到检测装置进行分析。在一些方案中，在一个或两个复合物形成步骤之后加入清洗步骤以除去过量的试剂。如果使用这些步骤，则它们牵涉本领域技术人员已知的条件，使得除去过量的试剂，但保留复合物。

因为本发明的测定法可以检测样品(包括血液样品)中的抗流感病毒抗体，所以此类测定法可用于鉴定具有抗流感抗体的个体。因此，本发明的一个实施方案是鉴定具有抗流感病毒抗体的个体的方法，所述方法包括：

a.使来自测试抗流感抗体的个体的样品与本发明的纳米颗粒接触；和，

b.分析接触的样品的纳米颗粒/抗体复合物的存在，

其中纳米颗粒/抗体复合物的存在指示所述个体具有抗流感抗体。

任何公开的测定形式可用于进行所公开的方法。有用的测定形式的实例包括但不限于径向扩散测定法，酶联免疫测定法，竞争性酶联免疫测定法，放射免疫测定法，荧光免疫测定法，化学发光测定法，侧向流测定法，通过测定法，基于颗粒的测定法(例如，使用颗粒，如但不限于磁性颗粒或塑料聚合物，如胶乳或聚苯乙烯珠)，免疫沉淀测定法，BioCoreJ测定(例如，使用胶体金)，免疫印迹测定法(例如，CMG＝s免疫印迹系统，Fribourg，Switzerland)和免疫印迹测定法(例如，western印迹)，磷光测定法，流通测定法，层析测定法，基于PAGe的测定法，表面等离振子共振测定法，生物层干涉测定法，分光光度测定法和电子感觉测定法。

如果在样品中没有检测到抗流感抗体，则此类结果指示个体不具有抗流感病毒抗体。测试的个体可以是或不是怀疑具有针对流感病毒的抗体的。所公开的方法还可以用于确定个体是否已经暴露于流感病毒的一种或多种特定类型，组，亚组或毒株。为了进行此类测定，从个体获得样品，所述个体在其过去(例如，大于约1年，大于约2年，大于约3年，大于约4年，大于约5年等)的某个时候在针对流感病毒的一种或多种特定类型，组，亚组或毒株的抗体测试呈阴性(即，缺少抗体)。然后使用本发明的基于纳米颗粒的测定法测试样品的针对流感病毒的一种或多种类型，组，亚组或毒株的抗流感病毒抗体的存在。如果测定法指示存在此类抗体，则在鉴定它们为抗流感抗体阴性的测试后的某个时候将个体鉴定为已经暴露于流感病毒的一种或多种类型，组亚组或毒株。因此，本发明的一个实施方案是鉴定已暴露于流感病毒的个体的方法，所述方法包括：

a.使来自正在测试抗流感抗体的个体的样品的至少部分与本发明的纳米颗粒接触；和，

b.分析接触的样品的抗体/纳米颗粒复合物的存在或水平，其中抗体/纳米颗粒复合物的存在或水平指示最近的抗流感抗体的存在或水平；

c.将最近的抗流感抗体水平与过去的抗流感抗体水平进行比较；

其中最近的抗流感抗体水平相对于过去的抗流感抗体水平的增加指示个体在确定过去的抗流感抗体水平之后已经暴露于流感病毒。

本发明的方法还可用于确定个体对疫苗的响应。因此，一个实施方案是用于测量个体对流感疫苗的响应的方法，所述方法包括：

a.向个体施用流感病毒疫苗；

b.使来自所述个体的样品的至少部分与本发明的纳米颗粒接触；

c.分析接触的样品的抗体/纳米颗粒复合物的存在或水平，其中抗体/纳米颗粒复合物的存在或水平指示最近的抗流感抗体的存在或水平

其中所述样品中抗体的水平相对于所述个体中抗体的疫苗接种前水平的增加指示疫苗在所述个体中诱导免疫应答。

施用于个体的流感疫苗可以但不需要包含本发明的疫苗，只要纳米颗粒包含可以结合由施用的疫苗诱导的抗流感抗体的HA蛋白。施用流感疫苗的方法是本领域技术人员已知的。

可以使用任何公开的测定形式进行对从个体获得的样品的分析。在一个实施方案中，使用选自以下的测定形式进行样品的分析：径向扩散测定法，酶联免疫测定法，竞争性酶联免疫测定法，放射免疫测定法，荧光免疫测定法，化学发光测定法，侧向流测定法，流通测定法，基于颗粒的测定法(例如，使用颗粒，如但不限于磁性颗粒或塑料聚合物，如胶乳或聚苯乙烯珠)，免疫沉淀测定法，BioCoreJ测定法(例如，使用胶体金)，免疫斑点测定法(例如，CMG＝s免疫印迹系统，Fribourg，Switzerland)和免疫印迹测定法(例如，western印迹)，磷光测定法，流通测定法，层析测定法，基于PAGE的测定法，表面等离振子共振测定法，生物层干涉测定测定法，分光光度测定法和电子感觉测定法。

在一个实施方案中，所述方法包括在施用疫苗之前测定个体中存在的抗流感抗体的水平的步骤。然而，如果此类信息可用，则也可以从先前的医学记录确定个体中存在的抗流感抗体的水平。

虽然不必实施所公开的方法，但优选在施用疫苗的步骤和确定个体中抗流感抗体的水平的步骤之间等待一段时间。在一个实施方案中，对个体中存在的抗流感抗体的水平的测定在使用疫苗后的至少1天，至少2天，至少3天，至少4天，至少5天，至少6天，至少1周，至少2周，至少3周，至少4周，至少2个月，至少3个月或至少6个月实施。

本发明还包括适用于检测抗流感抗体的试剂盒。合适的检测手段包括利用本发明的纳米颗粒的本文公开的技术。试剂盒还可以包含可检测标志物，如选择性结合纳米颗粒的抗体或其它指示剂分子的抗体。试剂盒还可以包含相关联的组分，如但不限于缓冲液，标记物，容器，插页，管，小瓶，注射器等。

实施例

提出以下实施例以便向本领域普通技术人员提供如何制备和使用实施方案的完整公开和描述，并且不旨在限制发明人认为是其发明的范围，它们也不意图表示下面的实验是所进行的全部或唯一的实验。已经做出努力以确保关于使用的数字(例如量，温度等)的准确性，但是应该考虑一些实验误差和偏差。除非另有指示，份数是重量份，分子量是重量平均分子量，并且温度以摄氏度计。使用标准缩写。

实施例1：HA稳定化茎(HA-SS)构建体的基于结构的迭代设计

该实施例显示用于产生缺乏免疫显性头部结构域的HA稳定化茎(HA-SS)免疫原的基于结构的设计的六个迭代循环(Gen1-Gen6)。

流感A病毒包含18种HA亚型，其中两种H1和H3目前导致大多数人类感染。季节性流感疫苗针对循环H1和H3株提供了一些保护，但很少提供针对趋异的H5，H7和H9亚型的保护，其导致人类感染的偶然暴发，作为来自禽类和/或猪库的人畜共患病。本发明人假设聚焦于保守血凝素(HA)茎的免疫应答可能潜在地引发针对多种多样毒株的广泛的异亚型流感保护。因此，本发明人使用基于结构的迭代设计来开发缺乏免疫显性HA头部区的HA稳定化茎(HA-SS)糖蛋白(图1)。

A/新喀里多尼亚/20/1999(1999NC)HA的胞外域序列和A/南卡罗来纳/1/1918(1918SC)的晶体结构(PDB ID 1GBN)用作设计模板，并且对每代HA-SS变体评估作为可溶性三聚体的表达，以及基于与野生型(wt)HA三聚体相似的茎特异性单克隆抗体(mAb)反应性评估抗原性。

使用人优选密码子合成编码来自1999NC，1986SG，2009CA，H2 2005CAN，H5 2005IND和H5 2004VN的全长HA和神经氨酸酶(NA)的质粒。通过重叠PCR和定点诱变产生不同形式的HA-SS。在freestyle 293(293F；Life Technologies)细胞或293GnTI^-/-细胞(用于Gen4HA-SS结晶)中表达所有HA，HA-SS蛋白和mAb，并如前所述进行纯化(Wei,C.J.,et al.Elicitation of broadly neutralizing influenza antibodies in animals with previous influenza exposure.Sci.Transl.Med.4,147ra114(2012))。如所述(Kanekiyo,M.,et al.Nature 499,102-106(2013))进行HA-np和Gen1-Gen6HA-SS和Gen4-6HA-SS-np的构建，纯化和表征。

第一代设计(Gen1HA-SS)用GSG接头替换受体结合结构域(残基HA1 51-277，H3编号)(图1)。各自产生HA胞外域三聚体和所有三聚体HA-SS设计，C-末端跨膜和胞质残基HA2 175-220(H3编号)替换为短接头，T4折叠物，凝血酶切割位点和His标签。使HA1/HA2切割位点突变以防止切割。为了模拟HA-SS设计的结构，使用1918SC HA(PDB ID 1GBN)和噬菌体T4折叠物三聚体(PDB ID 1RFO)作为模板，使用LOOPY(Xiang,et.al.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,7432-7437(2002))设计环和连接，使用SCAP(Xiang,et al.,J.Mol.Biol.311,421-430(2001))突变侧链，并且使用LSQMAN(Kleywegt,et al.,in International Tables for Crystallography,Vol.F,353-367(Kluwer Academic Publishers,Dordrecht,The Netherlands,2001))实施结构重叠。使用Rosetta程序DDG_MONOMER(Kellogg,et al.,Proteins 79,830-838(2011))计算地评估特定突变的力能学(energetics)。使用Chimera(Pettersen,E.F.,et al.Journal of Computational Chemistry 25,1605-1612(2004))进行表面积计算。检查蛋白质数据库(PDB)中约700个三聚体结构，以找到合适的三聚化结构域，以进一步稳定化HA-SS免疫原。该搜索揭示了HIV-1gp41(PDB ID 1SZT)针对以下待被优化(i)其大小(每个单体小于70个氨基酸)，(ii)其热稳定性(T_m＝70℃)，(iii)容易移植，其中N-和C-末端位于三聚体的相同末端，和(iv)gp41的内部七价重复1(inner heptad repeat 1,HR1)螺旋的C-端末端与HA-SS三聚体的内部C螺旋之间的结构互补性。Gen1HA-SS不能表达为三聚体，尽管存在C末端折叠物三聚化结构域。

为了增加第二代中的三聚体稳定性，本发明人将HA-SS的膜远端区域处的HA2残基66-85替换为热稳定性HIV-1gp41三聚化结构域(参见Tan,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94,12303-12308(1997))，其中内部七价重复1(HR1)螺旋在结构上与HA茎的内部C螺旋互补。连接gp41和HA-SS必需循环排列gp41螺旋HR1和HR2，其顺序是颠倒的并用富含甘氨酸的接头重新连接(图1)。为了将HIV-1gp41的融合后形式的六螺旋束插入Gen2HA-SS中，将来自gp41的三个内部螺旋的残基28-32(残基573-577，HXBc2编号)叠加到HA内螺旋残基HA2 81-85(来自PDB ID 1RU7)上，对于15个Cα原子具有的均方根偏差(RMSD)。HA2残基66-85被gp41七价重复(HR)2螺旋(残基628-654，HXBc2编号)替换，随后是含有N-连接的糖基化位点的序列子的六残基富含甘氨酸的接头(NGTGGG)和gp41HR1螺旋(残基548-577)。HR1设计成与HA2的螺旋C符合读码框，以产生长的中心嵌合螺旋。通过加入盐桥，缩短环和降低其疏水性来稳定F’区的膜远端部分的努力没有改善Gen2HA-SS设计的三聚化或抗原性。Gen2HA-SS的表达导致29％的三聚化。

为了改善第三代中的三聚化，除去了具有不规则二级结构的HA1F’区的44个残基的部分，并且HA-SS的内部螺旋C被截短了6个残基，以在gp41和HA2之间具有更好的互补性。这导致具有77％三聚化的可溶性Gen3HA-SS，其被具有与可溶性HA三聚体(图1)的亲和力总体类似的亲和力的HA茎广泛中和性mAb(bNAb)识别。在Gen3中，用GWG接头替换F’区的HA-SS HA2残基43-50和278-313，并除去HA2残基60-65和86-92。为了使gp41与HA茎的下部区域重比对，将来自gp41的三个内部螺旋的残基30-34(575-579Hxbc2编号)叠加到HA内部螺旋残基HA2 90-94上，对于15Cα原子具有的RMSD。对于CR6261和70-5B03观察到更快的解离速率，这可能部分是由于可以与CR6261重链有限接触的HAF’区域的丧失。

为了在原子水平表征Gen3HA-SS，本发明人以分辨率测定了与鼠bNAb C179的抗原结合片段(Fab)复合的Gen3HA-SS的晶体结构(参见Okuno,Y.,et al.J.Virol.67,2552-2558(1993))(图2a，左图)；C179抗体是用异亚型中和发现的第一种广泛中和性HA茎定向抗体。

将从杂交瘤细胞收获的C179切割成Fab，如先前所述(Ofek,G.,et al.J.Virol.78,10724-10737(2004))，其中具有以下修改：LysC(Roche)与C179以1:20,000(w/w)比率使用，并且经由通过在50mM Tris pH 8.0中的巯基-乙基-吡啶柱(Pall Life Sciences)从消化溶液中除去可结晶片段(Fc)，并且用50mM NaAc pH 5.0洗脱C179Fab。

通过使1:1.25(Gen3HA-SS/C179摩尔比)混合物通过Superdex 200 26/60(GE Healthcare)凝胶过滤柱，并且收集在152.0mL洗脱的峰获得Gen3HA-SS(在293GnTI^-/-细胞中表达)与C179Fab的复合物。将复合物在150mM NaCl，10mM Tris HCl pH7.5中浓缩至10mg/ml，并且通过在15％(W/V)聚乙二醇1500，5％(V/V)2-甲基-2,4-戊二醇，200mM NH₄Cl和100mM Tris HCl pH8.5中的悬滴蒸汽扩散(hanging drop vapor diffusion)在20℃结晶，这来源于沉淀剂协同结晶筛选(Majeed,S.,et al.Structure 11,1061-1070(2003))。在没有任何另外的冷冻保护剂的情况下将晶体冷冻，并在数据收集之前贮存在液氮中。

在Advanced Photon Source(APS),阿贡国家实验室(Argonne National Laboratory)的东南地区协作访问团队(Southeast Regional Collaborative Access Team,SER-CAT)22-BM束线处，使用的波长，在100K的温度下收集X射线数据到分辨率用HKL2000在三角空间群H3中处理X射线数据，并且通过使用五个单独的搜索模型的分子替换来确定复合物的结构。使用PHASER(Mccoy,A.J.,et al.J.Appl.Crystallogr.40,658-674(2007))，与来自1934PR8结构的HA茎单体(PDB ID 1RU7，残基5-36，315-323HA1链A和残基514-559，590-660HA2链B)，HIV-1gp41单体(PDB ID 1SZT，残基3-29，42-67)，鼠抗体S25-2的重链可变域(PDB ID 1Q9K，残基1-111)，和鼠抗体MN16C13F4的轻链可变域(PDB ID 1UWX,残基3-108)一起搜索。使用MOLREP(Collaborative Computational Project.Acta Crystallogr.D Biol.Crystallogr.50,760-763(1994))来定位T4折叠物单体(PDB ID1RFO，链A)，其证实了手工进行的独立拟合。通过眼将C179Fab恒定结构域拟合入Fo-Fc密度中，之后使用上述Ab(PDB ID 1Q9K和1UWX)的恒定结构域作为模板精修。使用COOT(Emsley,P.&Cowtan,K.Coot:D Biol.Crystallogr.60,2126-2132(2004))和PHENIX(Adams,P.D.,et al.Acta Crystallogr.D Biol.Crystallogr.58,1948-1954(2002))及搭乘氢(riding hydrogen)实施模型建立和精修。除了HA切割环(残基48-52)，连接gp41螺旋的富含甘氨酸的环(残基139-144)，连接HA-SS到折叠物的接头(残基256-259)和折叠物域C端的凝血酶切割位点和His标签(残基286-302)外，将Gen3HA-SS的所有残基建模成电子密度。观察到糖并建立在Asn残基23、119和236上。C179结构包括重链残基1-213和轻链残基1-214。如由PHENIX测定的Ramachandran统计学揭示了有利区域中91.64％的残基，允许区域中的7.49％和作为异常值的0.86％。

共晶体结构揭示Gen3HA-SS的C179识别类似于在最近公布的C179与A/日本/305/1957(1957JP)HA的共晶结构中识别H2N2三聚体HA的识别(参见Dreyfus,et al.,J.Virol.87,7149-7154(2013))(图2a，右图)。虽然这些发现证实了Gen3HA-SS上的茎表位的保留；整体结构揭示了几个意想不到的差异(图2a，左图和中图)。首先，茎三聚体亚基在其C末端相对于HA分开约(图2a，中间图)。第二，C-末端折叠物三聚化结构域倒转并且在茎三聚体内部叠入到张开区域中(图2a，左图)。最后，HA茎的外部螺旋A与gp41六螺旋束的外部HR2螺旋形成连续螺旋，而不是形成由甘氨酸接头分开的两个单独的螺旋。

为了解决这些问题，创建了含有三个突变(图1中概述)的第四代HA-SS，以努力除去潜在的侧链碰撞并且破坏HA2的螺旋B与gp41HR2之间的连续螺旋(图2b)。

为了结晶Gen4HA-SS/CR6261复合物，通过与内切糖苷酶H(77U/μg Gen4HA-SS)温育4小时来使Gen4HA-SS(在293GnTI^-/-细胞中表达)去糖基化，随后通过刀豆蛋白A柱(Sigma)除去具有未切割的N-连接聚糖的蛋白质。通过使1:1.25(Gen4HA-SS/CR6261摩尔比)混合物通过Superdex 200 10/300(GE Healthcare)凝胶过滤柱并收集在12.5mL处洗脱的峰来获得与CR6261Fab的复合物。将复合物在150mM NaCl，10mM Tris HCl pH7.5中浓缩至11mg/ml，并通过在7％(w/v)聚乙二醇4000，4.5％(v/v)异丙醇，100mM咪唑pH6.5中的悬滴蒸汽扩散在20℃结晶。将晶体在包含另外的5％(v/v)2R,3R丁二醇(Sigma)的贮存溶液中在室温下浸泡6小时，然后简短30秒转移至含有15％2R,3R丁二醇的贮存溶液，之后快速冷却。

在APS的SER-CAT BM-22束线处使用的波长在100K的温度下收集X射线数据到分辨率。用空间群H3中的HKL2000(参考文献37)处理数据，并通过使用三个单独的搜索模型的分子置换来确定复合物的结构。使用PHASER来与来自1934PR8结构的HA茎单体，HIV-1gp41单体(与上述相同模型)以及CR6261(PDB ID 3GBM)的可变和恒定结构域一起搜索。分别使用COOT和PHENIX进行模型建立和精制。除了HA切割环(残基48-52)，连接gp41螺旋的富含甘氨酸的环(残基137-145)和C末端折叠物(残基256-259)，折叠结构域C端的凝血酶切割位点和His标签(残基286-302)外，将Gen4HA-SS的所有残基建模为电子密度。尽管在Gen3HA-SS结构中观察到的相同区域中的HA茎内部可见密度，但是它不足以唯一放置或稳定精制折叠物结构域。CR6261Fab结构包括重链残基1-213和轻链残基3-107和113-215。如由PHENIX测定的Ramachandran统计学揭示有利区域中93.19％的残基，允许区域中的6.09％和作为异常值的1.06％。

对于低温电子显微术分析，使用Vitrobot Mark IV(FEI Company,Hillsboro,OR)在多孔碳膜(Quantfoil,Germany)上将颗粒玻璃化。在Titan Krios电子显微镜(FEI公司，Hillsboro，OR)上收集颗粒的冷冻图像，在液氮温度下操作并在300kV下操作。在像素大小以范围为约2.8至约6μm的散焦值，并且以范围为约10至的剂量在4,096×4,096电荷耦合器件(CCD)照相机(Gatan Inc.，Warrendale，PA)上收集图像。使用ctffind3(Mindell,J.A.&Grigorieff,N.J Struct Biol 142,334-347(2003))拟合观察到的散焦值，并且将展示漂移或散光的图像从进一步分析中排除。从图像中手动挑选颗粒(13,464)。无参考2D分类指示在3D精修期间施加的八面体对称。使用平滑，无刺突的低通滤过的铁蛋白(PDB ID 2JD6)作为起始模型。在精化过程中除去重叠颗粒之后，从6,540个颗粒计算重建(3D图)。用Relion包(Scheres,S.H.W.J.Mol.Biol.415,406-418(2012))进行所有图像分析(2D和3D)。用Chimera进行模型坐标的可视化和分子停靠。

与C179复合的Gen3HA-SS和与CR6261复合的Gen4HA-SS复合物的原子坐标和结构因子分别保存在PDB代码4MKD和4MKE下。H1-SS-np的冷冻电子显微术图已经以EMDB代码EMD-6332保存。

与bNAb CR6261的Fab复合的Gen4HA-SS的分辨率的共晶体结构(参见Ekiert,D.C.,et al.Science 324,246-251(2009))揭示了相对于gp41的展开仍然存在，额外旋转约19°(图2b，中间图)。然而，在Gen4HA-SS中三聚化水平(83％)，茎表位构象的保持和HA茎bNAb结合(对四种bNAb为nM)接近最佳(图1a和2b)。

发明人关注免疫原性HIV-1gp41区域的牵连，因此寻求用短的富含甘氨酸的接头替换gp41(图1a)，因为这还将增加HA茎在免疫原表面上的百分比(图1b)。在两种情况，Gen5HA-SS(其保留Gen4稳定化茎区)和Gen6HA-SS(其中包含Lys51-Glu103(HA2，H3编号)的内部盐桥被替换为几乎等排的Met-Leu疏水对)(Gen6HA-SS，图1c)下进行gp41替换。

通过完全除去gp41三聚化结构域，将HA2残基58-93与GSGGSG环连接并引入HA2突变Y94D和N95L来创建Gen5HA-SS。

为了设计Gen6HA-SS，最初创建了五个突变以稳定化HA茎HA2的内部核心：K51M，E103L，E105Q，R106W和D109L(称为Gen6’HA-SS)。对所有三种免疫原保留通过HA茎抗体的三聚化和识别(图1a)。包含三个另外的内部稳定化突变的Gen6HA-SS的中间形式(称为Gen6’HA-SS)展示相似的抗原性(图1d)，但是最终观察到突变E105Q，R106W和D109L不是稳定化Gen6HA-SS和与铁蛋白融合需要的，并且不用于最终的H1-SS-np构建体(图1c)。

实施例2：自组装铁蛋白纳米颗粒的创建

该实施例描述了Gen4，Gen5，Gen6’和Gen6HA-SS通过它们各自的HA C末端与自组装铁蛋白纳米颗粒的融合。

在自组装纳米颗粒(HA-np)的背景下，HA的免疫原性显著增加(参见Kanekiyo,M.,et al.,Nature 499,102-106(2013))。此外，本发明人推测与纳米颗粒的C-末端融合可以降低茎的近膜区域的张开。因此，本发明人将Gen4，Gen5，Gen6’和Gen6HA-SS通过它们各自的HA C-末端(替换折叠物)遗传融合到幽门螺杆菌的自组装铁蛋白纳米颗粒以创建HA-SS-纳米颗粒(HA-SS-np)。

用SGG接头将Gen4-6HA-SS与幽门螺杆菌铁蛋白N-末端(残基5-167)融合以产生HA-SS铁蛋白纳米颗粒(Gen4HA-SS-np,H1-SS-np和H1-SS-np’)，如描述的(Kanekiyo,M.,et al.Nature 499,102-106(2013))。

使用fortéBio Octet Red384仪器测量HA和HA-SS分子对mAb CR6261，CR9114，F10scFv和70-5B03的结合动力学。所有测定法在30℃下进行，在补充有1％BSA的PBS中设定为1,000rpm的搅拌，以使非特异性相互作用最小化。所有溶液的最终体积为100μl/孔。在固体黑色96孔板(Geiger Bio-One)中在30℃进行测定。使用在10mM乙酸盐pH 5.0缓冲液中具有C-末端生物素化的Avi-Tag(25μg/ml)和HA-np或HA-SS-np的HA或HA-SS分别加载链霉抗生物素蛋白和胺反应性生物传感器探针达300s。典型的捕获水平在0.8和1nm之间，并且一排八个尖端内的变异性不超过0.1nm。将生物传感器尖端在PBS/1％BSA缓冲液中平衡300s，之后进行溶液中的Fab或F10scFv(0.01至0.5μM)的结合测量。加入抗体后，使结合进行300s；然后使结合解离300s。仅使用解离孔一次以防止污染。通过减去对于在PBS/1％BSA中温育的装载有HA或HA-SS分子的传感器记录的测量，进行平行校正以减去系统基线漂移。为了除去非特异性结合应答，将生物素化的gp120表面重修核心分子加载到链霉抗生物素蛋白探针上，并与抗茎抗体一起温育，并从HA和HA-SS响应数据中减去非特异性应答。使用Octet软件7.0版进行数据分析和曲线拟合。实验数据用描述1:1相互作用的结合方程拟合。假设结合是可逆的(完全解离)，使用非线性最小二乘法拟合进行完整数据集的全局分析，所述非线性最小二乘法拟合允许对于每个实验中使用的所有浓度同时获得单一组的结合参数。

如之前所述(Wei,C.J.,et al.Science 329:1060-1064(2010))进行ELISA，血凝抑制(HAI)测定法和假型中和测定法。如描述(Wei,C.J.,et al.Sci.Transl.Med.2,24ra21(2010))，产生表达萤光素酶报告基因的重组HA/NA慢病毒载体。所有流感病毒均获自疾病控制和预防中心(CDC；Atlanta，GA)。

Gen4，Gen6和Gen6’HA-SS-np各自表示为纳米颗粒，如通过透射电子显微镜分析和凝胶过滤证实的(图2)。然而，Gen5HA-SS-np未能表达。选择Gen6和Gen6’HA-SS-np进行进一步评估，并且在下文中在这些实施例中分别称为H1-SS-np和H1-SS-np’。以分辨率为实施的H1-SS-np的冷冻电子显微术(EM)分析揭示了对称的球形颗粒，每个颗粒具有从表面突出的八个刺突(图2c)。值得注意的是，Gen6HA-SS茎的膜近端区域比Gen4HA-SS更好地适合于电子密度，这表明扩展是减轻的或不再存在(图2c，左图)。此外，H1-SS-np和H1-SS-np’都具有期望的抗原性，在ELISA和生物层干涉测量法测量中被CR6261，CR9114，F10和70-5B03识别(参见Ekiert,D.C.,et al.Science 324,246-251(2009)；Sui,J.,et al.Nat.Struct.Mol.Biol.16,265-273(2009)；Dreyfus,C.,et al.Science 337,1343-1348(2012)；Wrammert,J.,et al.J.Exp.Med.208,181-193(2011))，表明在与铁蛋白融合后保留了真正的HA-SS结构(图1a，1e和1f)。

实施例3：评估疫苗功效

该实施例证明了与HA构建体融合的铁蛋白纳米颗粒的疫苗功效的各种测量的表征。

本发明人使用钙流量测定法评估了与全长HA-np相比H1-SS-np通过膜锚定的种系恢复的CR6261B细胞受体(BCR)触发信号传导的能力(Novak,et.al.Cytometry 17,135-141(1994))。

对于BCR活化测定法，通过轻链和膜锚定的IgM重链对Ramos B细胞系的表面IgM阴性克隆的慢病毒转染(FEEKW载体；Luo,X.M.,et al.Blood 113,1422-1431(2009))稳定表达种系CR6261BCR(野生型和双重I53A/F54A突变体)。然后通过流式细胞术(BD FACSAria；BD Biosciences)分选种系CR6261BCR阳性细胞并扩增。评估对于种系CR6261BCR(野生型或I53A/F54A突变体)表达>95％阳性的细胞的表面表达和正确的HA抗原性。对于信号传导，向表达种系CR6261BCR的1×10⁶个Ramos B细胞呈现2500nM的H1-SS-np，HA np(HA含有Y98F突变以消除与唾液酸的非特异性结合)或空np。通过流式细胞术测量响应于BCR刺激的钙流量的动力学，作为染料Fura Red的Ca²⁺结合/未结合状态的比率。Ca²⁺流量的此比率在暴露于配体后10秒呈现。在刺激之前获取30秒基线。对单个细胞的参比测量取平均值并通过动力学分析，FlowJo软件变平滑。在暴露于0.5μg/μl抗人IgM F(ab’)₂(Southern Biotech)后，通过Ca²⁺流量比较种系CR6261BCR对具有I53A/F54A突变的种系CR6261BCR之间的功能性。

与空铁蛋白颗粒相反，H1-SS-np通过野生型BCR诱导有效的信号传导，全长HA-np在较小程度上亦然，并且通过在第二个重链互补决定区(CDR H2)中的两个关键接触残基中突变的BCR没有观察到信号传导(图1g)。这一发现证实了H1-SS-np衔接CR6261的IGHV1-69种系前体并通过CDR H2依赖性识别刺激未免疫的B细胞的能力，在人中发现的广泛中和性茎定向抗体的特征。

为了评估H1-SS-np疫苗功效，本发明人使用Sigma佐剂系统(SAS)免疫小鼠和雪貂，这是因为已报道类似于MF59(另一种被批准用于人的基于角鲨烯的佐剂)，SAS诱导HA响应。

对于免疫研究，对于该研究进行总共三个动物实验，两个在小鼠中，一个在雪貂中。在第一次小鼠实验中，在第0周和第2周时用2μg H1-SS-np，2μg空白铁蛋白np，0.2μg H5 2005IND HA-np或TIV(HA摩尔当量)肌肉内免疫雌性BALB/c小鼠(6-8周龄，Jackson Laboratories)。在每次免疫后14天收集血液，并且分离血清。对于第二次小鼠免疫实验，在第0周、第8周和第12周用3μg的H1-SS-np或空铁蛋白np免疫雌性BALB/c小鼠三次。对于雪貂免疫，饲养使用6月龄雄性Fitch雪貂(Triple F Farms,Sayre,PA)(对于暴露于目前循环的大流行H1N1，季节性H1N1，H3N2和B流感毒株呈血清阴性)，并在BIOQUAL，Inc.(Rockville，MD)护理。这些设施由美国实验动物保护国际认可协会(American Association for the Accreditation of Laboratory Animal Care International)认可，并满足NIH标准，如“实验动物护理和使用指南(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)”中所述。在第0周和第4周，用在500μl PBS中的20μg H1-SS-np’或空铁蛋白np或TIV(相当于2.5μg H1HA)肌内免疫雪貂。用250μg表达H5 2005IND的质粒DNA，随后在第0周和第4周用H5N1 2005IND MIV的2.5μg HA免疫阳性对照组中的雪貂。通过肌内注射将疫苗施用到大腿上部肌肉中。Sigma佐剂系统(SAS，Sigma)用于所有蛋白质或基于np的免疫。每次免疫后14天收集血液，并且分离血清。动物实验完全符合所有相关联邦规定和NIH指南进行。

对于被动转移研究，在第0周和第4周首先用H1-SS-np蛋白(2μg/剂量，具有SAS)接种150只小鼠，以产生HA-SS免疫Ig，并在加强后第1周，第2周和第3周(末端)收集血清。使用制造商方案用蛋白G(Life Technologies)纯化来自免疫血清的Ig。攻击前24小时，两组BALB/c小鼠(n＝10/组，Taconic inc。)通过腹膜内途径接受未免疫的(Molecular innovations)或免疫的Ig。在被动转移后24小时从输注的动物收集血清用于血清学分析。

对于病毒攻击研究，从疾病控制和预防中心(Atlanta,GA)(CDC#2004706280,E1/E3(1/19/07)获得H5N1毒株A/越南/1203/04，并且在BIOQUAL Inc.在10天龄的胚胎鸡蛋(Charles River,North Franklin,CT)中扩充。攻击原液具有10¹⁰TCID₅₀/ml的感染滴度。对于血液收集，放血和攻击程序，用配制为对每只动物提供25mg/kg氯胺酮和0.001mg/kg右美托咪定剂量的氯胺酮/右美托咪定溶液麻醉动物。将小鼠用50μl病毒鼻内接种，每个鼻孔大约25μl，并且对雪貂鼻内接种500μl病毒，每个鼻孔约250μl。攻击剂量为小鼠中的25LD₅₀和雪貂中的1000TCID₅₀。根据以前的研究，这些攻击剂量预期分别导致未免疫的对照小鼠和雪貂中的100％致死率。对于雪貂，每天记录感染的临床体征，体重和温度两次。如下分配活动得分：0，警惕和嬉戏；1，警醒但只在受刺激时嬉戏(playful)；2，警惕，但刺激时不嬉戏；和3，既不警惕，在刺激时也不嬉戏。对显示严重疾病体征(延长的发烧，腹泻，干扰饮食，饮水或呼吸的流涕；严重嗜睡；或神经学体征)或体重减轻>20％的雪貂立即实施安乐死。

H1-SS-np和H1-SS-np’分别引发在小鼠和雪貂两者中针对组1HA亚型(季节性和大流行H1，H2，H5和H9)的广泛抗体响应(图3a，3b和3C)。此外，H1-SS-np在半数的小鼠中诱导出与H2和H5相当的实质性组2(H3和H7)应答(图3a，左图)。在小鼠和雪貂两者中，由H1-SS-np引发的对HA茎的抗体应答显著高于三价灭活的流感疫苗(TIV)的抗体应答(图3b，右图)。虽然也观察到对铁蛋白的相当大的应答(图3a和3b，左图)，但先前的研究已显示用细菌铁蛋白免疫不诱导小鼠中自体铁蛋白的免疫，它也不减轻对随后免疫的HA特异性抗体应答。使用高度灵敏的HA-NA慢病毒报告物测定法(Wei,C.J.,et al.Sci.Transl.Med.2,24ra21(2010))测量血清中和活性(NT)揭示了在小鼠和雪貂两者中针对趋异的H1N1毒株A/加利福尼亚/04/2009(2009CA)和A/新加坡/6/1986(1986SG)和同源1999NC株的看得出的活性。然而，针对异亚型H5N1A/越南/1203/2004(H5N1 2004VN)，人起源H2N2A/加拿大/720/2005(H2N2 2005CA)，H7N9A/安徽(Anhui)/1/2013(H7N9 2013AN)和H9N2A/香港/1074/1999(H9N2 1999HK)在小鼠和雪貂两者中都是低的或不可检测的(图3a和3c)。尽管强的异亚型抗体反应性，但观察到的最小异亚型中和可能是由于茎中和所需要的单个表位区域的精确靶向，使得其比在表面积上大20倍的HA茎的其它部分对次要结构差异更敏感。TIV免疫的动物在小鼠和雪貂两者中具有针对同源1999NC的最高NT，针对异源H1N1株的可检测NT，以及没有针对异亚型H5N1的NT(图3b)。如预期的，TIV免疫的动物具有显著的血凝抑制(HAI)滴度，并且由H1-SS-np和H1-SS-np’引发的NT活性与HAI无关。

为了评估保护，用高致死剂量的高致病性H5N1 2004VN病毒攻击经免疫的小鼠和雪貂。所有未免疫的小鼠和用空np免疫的小鼠死亡，并且显著地，所有用H1-SS-np免疫的小鼠存活(图4a)。用空铁蛋白纳米粒免疫的所有雪貂死于感染，并且用H5N1HA DNA/单价灭活疫苗(MIV)初免-加强免疫的所有雪貂存活(图4b)。与小鼠研究一致，六个基于H1N1的H1-SS-np’免疫的雪貂中的四个幸免于H5N1攻击。尽管六个TIV免疫的雪貂中的两个存活，但是两个存活者中的一个经历严重的体重减轻(图4a)，并且在具有最小体重减轻的另一只存活者中没有H5血清学应答的证据，提示没有发生感染。除了一个血清阴性动物之外，与空的铁蛋白-np对照相比，TIV免疫的组在体重减轻或发烧方面没有差异，并且如通过攻击后活动评分证明，比H1-SS-np’-免疫的雪貂显示更大的疾病。与空铁蛋白免疫的对照相比，基于H1-SS-np’-免疫的雪貂中的活动评分，第6天体重减轻，发热和疾病显著减少(图4)。在存活的雪貂中攻击后第14天存在的针对H5N1 2004VN的HAI滴度指示虽然H1-SS-np’能够预防疾病，但它不能防止感染。表3和4提供了小鼠和雪貂中的这些免疫研究的总结。

表3：在用H1-SS-np免疫的小鼠中针对H1N1 1999NC和H5N1 2004VN的攻击后血清HAI抗体滴度。

*此小鼠在攻击前1天死亡。

表4：用指定方案免疫的雪貂中针对同源H1N1 1999NC的攻击前HAI抗体滴度和针对攻击毒株H5N1 2004VN的攻击后HAI抗体滴度。

由H1-SS-np’引发的可忽略的H5N1NT活性(图3c)没有解释观察到的异亚型保护。然而，在HA-SS-np’免疫的白鼬中，HA抗体滴度和存活之间以及抗体滴度和体重之间存在相关性。为了进一步研究这种相关性，在用高致死剂量的H5N1 2004VN病毒攻击前24小时，发明人被动转移H1-SS-np免疫Ig至未免疫的小鼠(10mg/动物)。转移的Ig具有与组1HA亚型(H1，H2，H5和H9)的强反应性，与组2亚型(H3和H7)的较弱的结合和最小的NT活性(图4d和4e)。在表5中显示H1-SS-np免疫Ig对多种流感假病毒的IC50中和滴度。

表5：H1-SS-np免疫Ig的IC₅₀假病毒中和滴度。

虽然所有接受未免疫的Ig的小鼠都死于感染，但接受免疫Ig的10只小鼠中的8只完全被保护而免于致命的H5N1异亚型攻击。在免疫Ig组中死亡的两只小鼠中对同源H1 1999NC HA的低血清反应性指示它们可能尚未接受适当的Ig施用(图4c)。

这些数据一起显示，基于除中和之外的功能机制(如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)或抗体依赖性补体介导的裂解)的抗体介导的的保护负责由H1-SS-np和H1-SS-np’免疫引发的保护。报告了通过广泛中和性HA茎抗体在小鼠中的流感保护依赖于Fc相互作用(DiLillo,et.al.Nat Med 20,143-151(2014))，并且已经在人和猕猴血浆两者中报告了在不存在中和的情况下针对流感HA的交叉反应性ADCC(Jegaskanda,S.,et al.J Immunol 190,1837-1848(2013)；Jegaskanda,et al.J.Virol.87,5512-5522(2013)；Jegaskanda,et al.J Immunol 193,469-475(2014))。与这些报告一致，本文中呈现的结果提示基于HA茎的流感疫苗不需要必然聚焦于中和性表位以诱导广泛的保护。

使用基于结构的设计并避免对HA头部结构域的免疫显性应答，与纳米颗粒抗原展示平台组合，本发明人成功地产生了仅HA茎的纳米颗粒疫苗免疫原，其在雪貂中引发针对H5N1疾病的抗体介导的异亚型保护性免疫。这些结果证明，通过仅HA茎的纳米颗粒疫苗引发非中和性抗体可以提供针对严重疾病的广泛保护，并且应该用于开发通用流感疫苗。

序列表

<110> 美利坚合众国, 由健康及人类服务部部长代表

Mascola, John R.

Boyington, Jeffrey C.

Yassine, Hadi M.

Kwong, Peter D.

Graham, Barney S.

Kanekiyo, Masaru

<120> 稳定化的流感血凝素茎区三聚体及其用途

<130> 6137NIAID-36-PCT

<140> 尚未分配

<141> 2015-05-27

<150> 62/003,471

<151> 2014-05-27

<160> 401

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 504

<212> DNA

<213> 幽门螺杆菌

<400> 1

atgctgtccg acatcatcaa gctgctgaac gaacaggtga acaaggagat gcagagctcc 60

aacctgtaca tgagtatgtc tagttggtgt tatacacact cactggacgg cgctgggctg 120

ttcctgtttg atcacgcagc cgaggaatac gaacatgcaa agaaactgat cattttcctg 180

aatgagaaca atgtgcccgt ccagctgact tcaatcagcg cccctgaaca taagttcgag 240

ggcctgaccc agatctttca gaaagcttac gaacacgagc agcatatttc cgaatctatc 300

aacaatattg tggaccacgc cattaagagc aaagatcatg ctaccttcaa ctttctgcag 360

tggtacgtgg ccgagcagca cgaggaggag gtcctgttta aggacatcct ggataaaatc 420

gaactgattg gaaacgagaa tcatggcctg tacctggcag atcagtatgt gaagggcatt 480

gccaagtcca gaaaaagtgg gtca 504

<210> 2

<211> 168

<212> PRT

<213> 幽门螺杆菌

<400> 2

Met Leu Ser Asp Ile Ile Lys Leu Leu Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu

1 5 10 15

Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr

20 25 30

His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe Leu Phe Asp His Ala Ala Glu

35 40 45

Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn

50 55 60

Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser Ala Pro Glu His Lys Phe Glu

65 70 75 80

Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala Tyr Glu His Glu Gln His Ile

85 90 95

Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp His Ala Ile Lys Ser Lys Asp

100 105 110

His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp Tyr Val Ala Glu Gln His Glu

115 120 125

Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly

130 135 140

Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile

145 150 155 160

Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

165

<210> 3

<211> 504

<212> DNA

<213> 幽门螺杆菌

<400> 3

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

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ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcggaca gcat 504

<210> 4

<211> 492

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 4

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ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

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cagcttgatg at 492

<210> 7

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 7

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tgtatcggct accacgccaa caatagcacc gacaccgtgg atacagtgct ggagaagaac 120

gtgaccgtga cccactctgt gaacctgctg gaggacagcc acaatggcaa gctgtgtctg 180

ctgaaaggca ttgcccctct gcagctgggc aattgttctg tggccggatg gattctgggc 240

aaccccgagt gtgagctgct gatttctaag gagagctgga gctacatcgt ggagaccccc 300

aatcctgaga atggcacctg ctaccctggc tacttcgccg attacgagga gctgcgcgag 360

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Ala Asp Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe

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Leu Ser Lys Ser Tyr Val Asn Asn Lys Glu Lys Glu Val Leu Val Leu

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Leu Ser Arg Gly Phe Gly Ser Gly Ile Ile Thr Ser Asn Ala Pro Met

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Lys Tyr Val Arg Ser Ala Lys Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn

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Ile Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe

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Glu Arg Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu

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Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys

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<212> DNA

<213> A流感病毒

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<213> A流感病毒

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<213> A流感病毒

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Ala Met Glu Arg Asn Ala Gly Ser Gly Ile Ile Ile Ser Asp Thr Pro

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Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr

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Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn

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Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu

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Gly Ser Arg Ala Cys Ala Val Ser Gly Asn Pro Ser Phe Phe Arg Asn

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Met Val Trp Leu Thr Lys Lys Gly Ser Asn Tyr Pro Val Ala Lys Gly

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ggtagactcc ttatcggcgg catagccaga gccctgatca ttgctgtggt ggtagccgta 600

ccagccatcg accattccct gccatcctcc ctcgatgaat ccggcgatgg ctccaaacag 660

gcctctgctc tcgatctggg gcacgtttct cagtcctgtg gccagcacca gcttctcgct 720

cttcacatac ttagggcact cgccgatggt cagagggtgc acattgtgga agggcagggt 780

ggtattgatg gcgcccagag gtgtctggca cttggtctca caattctcca gggtgccctc 840

ggttttcatg atgccgctgc tgcctctctt gctgatcttg aagccgtact caggggcgat 900

cagattgccg gtgctctcaa agttgatggt gtcccacata tccagcaggg tccagctgaa 960

ctccattctt cctccctggc cgttcacctt gggtcttgtg gcaatctcgg gggtgcttct 1020

cttattcagg gtgctggtgc ccacagacac gtaggtgccc acattctggt acagggttct 1080

ctgctcggtc tcgtcattag ggtggtgcac tccccagatg atcagcatct gctcgccgct 1140

ggtattattg tagctgccct gggccacagg gtaattgctg cccttcttgg tcagccacac 1200

catattccgg aagaagctgg ggttgccaga cacggcgcag gctctgcttc ctcctgttgt 1260

tgtgtgctgg gtccatctgt ccttgggcag gatcttcacc ttctcgaagt gcttcacgct 1320

agacagcagg tgcttcagct cctcgtaatc gttgaagctg ccagggtaac acaggccgtc 1380

cctagggttc tccttctcca tgatgtagct ccactcaggc acagacagca gcctatcaca 1440

ctcggggttt cccagcagcc atccggcgat agaacaatcg cccagttcca gaggagggat 1500

gccgttcagc ttacacagct tgccgttgtg ggtcttttcc aggatgtcct tggcgtgggt 1560

cactgtcacg tttctctcca ggatggtgtc caccttctcg gtgctattgt tggcgtggta 1620

gccgatacag atctggtcgc ctctcacagc tgtaaacagc aggatcaggt agatgatggc 1680

cat 1683

<210> 16

<211> 1704

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 16

atggaaaaga tcgtgctgct gctggccatt gtgagcctgg tgaagagcga ccagatctgc 60

attggctacc acgccaacaa tagcacagag caggtggaca ccatcatgga aaaaaacgtg 120

accgtgaccc acgctcagga catcctggaa aagacccaca acggcaagct gtgtgatctg 180

gacggcgtga agcctctgat cctgagagat tgtagcgtgg ctggatggct gctgggcaac 240

cctatgtgcg acgagttcat caacgtgccc gagtggagct atatcgtgga gaaggccaac 300

cccaccaacg atctgtgtta ccccggcagc ttcaacgatt acgaggaact gaagcacctg 360

ctgtcccgga tcaaccactt cgagaagatc cagatcatcc ccaagtcctc ttggagcgat 420

cacgaagcct ctagcggagt gtctagcgcc tgtccttacc tgggcagccc cagcttcttc 480

agaaacgtgg tgtggctgat caagaagaac agcacctacc ccaccatcaa gaagagctac 540

aacaacacca accaggaaga tctgctggtc ctgtggggaa tccaccaccc taatgatgcc 600

gccgagcaga ccagactgta ccagaacccc accacctata tcagcatcgg caccagcacc 660

ctgaatcaga gactggtgcc caagatcgcc accagatcca aggtgaacgg ccagagcggc 720

aggatggaat tcttctggac catcctgaag cccaacgacg ccatcaactt cgagagcaac 780

ggcaacttta tcgcccctga gtacgcctac aagatcgtga agaagggcga cagcgccatc 840

atgaagagcg agctggaata cggcaactgc aacaccaagt gccagacacc tatgggcgcc 900

atcaacagca gcatgccctt ccacaacatc caccctctga ccatcggcga gtgccctaag 960

tacgtgaaga gcaacagact ggtgctggcc acaggcctga gaaatagccc ccagcgggag 1020

agcagaagaa agaagagggg cctgtttgga gccatcgccg gctttattga aggcggctgg 1080

cagggaatgg tggatggctg gtacggctac caccacagca atgagcaggg ctctggatat 1140

gccgccgaca aagagtctac ccagaaggcc atcgacggcg tcaccaacaa ggtgaacagc 1200

atcatcgaca agatgaacac ccagttcgag gctgtgggca gagagttcaa caacctggaa 1260

cggcggatcg agaacctgaa caagaaaatg gaagatggct tcctggatgt gtggacctac 1320

aatgccgaac tgctggtgct gatggaaaac gagcggaccc tggacttcca cgacagcaac 1380

gtgaagaacc tgtacgacaa agtgcggctg cagctgagag acaacgccaa agagctgggc 1440

aacggctgct tcgagttcta ccacaagtgc gacaacgagt gcatggaaag catccggaac 1500

ggcacctaca actaccctca gtacagcgag gaagccaggc tgaagaggga agagatcagc 1560

ggcgtgaaac tggaatccat cggcacctac cagatcctga gcatctacag cacagtggcc 1620

tcttctctgg ccctggccat tatgatggcc ggactgagcc tgtggatgtg cagcaatggc 1680

agcctgcagt gcaggatctg catc 1704

<210> 17

<211> 568

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 17

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser

1 5 10 15

Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val

20 25 30

Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile

35 40 45

Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys

50 55 60

Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn

65 70 75 80

Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val

85 90 95

Glu Lys Ala Asn Pro Thr Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Ser Phe Asn

100 105 110

Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu

115 120 125

Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asp His Glu Ala Ser

130 135 140

Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Leu Gly Ser Pro Ser Phe Phe

145 150 155 160

Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Thr Tyr Pro Thr Ile

165 170 175

Lys Lys Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp

180 185 190

Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gln

195 200 205

Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Ile Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg

210 215 220

Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly

225 230 235 240

Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn

245 250 255

Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile

260 265 270

Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly

275 280 285

Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser

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Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys

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Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser

325 330 335

Pro Gln Arg Glu Ser Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile

340 345 350

Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr

355 360 365

Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys

370 375 380

Glu Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser

385 390 395 400

Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe

405 410 415

Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp

420 425 430

Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met

435 440 445

Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu

450 455 460

Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly

465 470 475 480

Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu

485 490 495

Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala

500 505 510

Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly

515 520 525

Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala

530 535 540

Leu Ala Ile Met Met Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly

545 550 555 560

Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile

565

<210> 18

<211> 1704

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 18

gatgcagatc ctgcactgca ggctgccatt gctgcacatc cacaggctca gtccggccat 60

cataatggcc agggccagag aagaggccac tgtgctgtag atgctcagga tctggtaggt 120

gccgatggat tccagtttca cgccgctgat ctcttccctc ttcagcctgg cttcctcgct 180

gtactgaggg tagttgtagg tgccgttccg gatgctttcc atgcactcgt tgtcgcactt 240

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gtaccagcca tccaccattc cctgccagcc gccttcaata aagccggcga tggctccaaa 660

caggcccctc ttctttcttc tgctctcccg ctgggggcta tttctcaggc ctgtggccag 720

caccagtctg ttgctcttca cgtacttagg gcactcgccg atggtcagag ggtggatgtt 780

gtggaagggc atgctgctgt tgatggcgcc cataggtgtc tggcacttgg tgttgcagtt 840

gccgtattcc agctcgctct tcatgatggc gctgtcgccc ttcttcacga tcttgtaggc 900

gtactcaggg gcgataaagt tgccgttgct ctcgaagttg atggcgtcgt tgggcttcag 960

gatggtccag aagaattcca tcctgccgct ctggccgttc accttggatc tggtggcgat 1020

cttgggcacc agtctctgat tcagggtgct ggtgccgatg ctgatatagg tggtggggtt 1080

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cttgatcagc cacaccacgt ttctgaagaa gctggggctg cccaggtaag gacaggcgct 1260

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ctcgaagtgg ttgatccggg acagcaggtg cttcagttcc tcgtaatcgt tgaagctgcc 1380

ggggtaacac agatcgttgg tggggttggc cttctccacg atatagctcc actcgggcac 1440

gttgatgaac tcgtcgcaca tagggttgcc cagcagccat ccagccacgc tacaatctct 1500

caggatcaga ggcttcacgc cgtccagatc acacagcttg ccgttgtggg tcttttccag 1560

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cagcagcagc acgatctttt ccat 1704

<210> 19

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 19

atgaaggcca aactgctggt gctgctgtgt acctttaccg ccacctacgc cgacacaatc 60

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gtgaccgtga cccactctgt gaacctg 147

<210> 20

<211> 49

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 20

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu

<210> 21

<211> 147

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 21

caggttcaca gagtgggtca cggtcacgtt cttctccagc actgtatcca cggtgtcggt 60

gctattgttg gcgtggtagc cgatacagat tgtgtcggcg taggtggcgg taaaggtaca 120

cagcagcacc agcagtttgg ccttcat 147

<210> 22

<211> 678

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 22

gatgccaagt gccagacacc tcagggcgcc atcaatagca gcctgccctt ccagaatgtg 60

caccctgtga ccatcggcga gtgccccaag tatgtgagaa gcgccaagct gagaatggtg 120

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<210> 23

<211> 226

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 23

Asp Ala Lys Cys Gln Thr Pro Gln Gly Ala Ile Asn Ser Ser Leu Pro

1 5 10 15

Phe Gln Asn Val His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val

20 25 30

Arg Ser Ala Lys Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

35 40 45

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

50 55 60

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

65 70 75 80

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

85 90 95

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn

100 105 110

Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Lys Leu Glu Arg Arg

115 120 125

Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp

130 135 140

Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu

145 150 155 160

Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys Ser

165 170 175

Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe

180 185 190

Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr

195 200 205

Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Glu Lys

210 215 220

Ile Asp

225

<210> 24

<211> 678

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 24

atcgatcttc tcccggttca gcttgctctc ctcgctgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg ctctccatac actcgttgtt acacttgtgg tagaactcga agcagccgtt 120

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<210> 25

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 25

gatgccaagt gccagacacc tcagggcgcc atcaatagca gcctgccctt ccagaatgtg 60

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aagagccagc tgaagaacaa cgccaaggag atcggcaacg gctgcttcga gttctaccac 480

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<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 26

Asp Ala Lys Cys Gln Thr Pro Gln Gly Ala Ile Asn Ser Ser Leu Pro

1 5 10 15

Phe Gln Asn Val His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val

20 25 30

Arg Ser Ala Lys Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

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Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

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Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

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Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

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Ile Asn Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr

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Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp

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Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys Ser Gln

130 135 140

Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr

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His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr

165 170 175

Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Glu Lys Ile

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Asp

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 27

atcgatcttc tcccggttca gcttgctctc ctcgctgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

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gccgatctcc ttggcgttgt tcttcagctg gctcttcacc ttctcataca ggttcttcac 180

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attgatggcg ccctgaggtg tctggcactt ggcatc 576

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<212> DNA

<213> A流感病毒

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ctgagaatgg tgaccggcct gagaaacatc cctagcatcc agagcagagg actgtttgga 60

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<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 29

Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln Arg Glu Thr Ser

1 5 10 15

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

20 25 30

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

35 40 45

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

50 55 60

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn

65 70 75 80

Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Lys Leu Glu Arg Arg

85 90 95

Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp

100 105 110

Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu

115 120 125

Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys Ser

130 135 140

Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe

145 150 155 160

Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr

165 170 175

Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Glu Lys

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Ile Asp

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<213> A流感病毒

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ctccagcttg ttgaactcct tgcccacagc ggtaaactgg gtgttcatct tctcgatcac 360

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 31

ctgagaatgg tgaccggcct gagaaacatc cctagcatcc agagcagagg actgtttgga 60

gccatcgccg gattcatcga gggaggatgg acaggcatgg tggatggctg gtacggctac 120

caccaccaga atgagcaggg ctctggatat gccgccgatc agaagtctac ccagaacgcc 180

atcaacggca tcaccaacaa ggtgaacagc gtgatcgaga agatgtacaa tgccgaactc 240

ctggtcctcc tcgagaatga gaggaccctg gacttccacg acagcaacgt gaagaacctg 300

tatgagaagg tgaagagcca gctgaagaac aacgccaagg agatcggcaa cggctgcttc 360

gagttctacc acaagtgtaa caacgagtgt atggagagcg tgaagaacgg cacctacgac 420

taccctaagt acagcgagga gagcaagctg aaccgggaga agatcgat 468

<210> 32

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<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 32

Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln Arg Glu Thr Arg

1 5 10 15

Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly

20 25 30

Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser

35 40 45

Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asn Gly Ile

50 55 60

Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu

65 70 75 80

Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser

85 90 95

Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn

100 105 110

Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn

115 120 125

Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys

130 135 140

Tyr Ser Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

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<211> 468

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 33

atcgatcttc tcccggttca gcttgctctc ctcgctgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg ctctccatac actcgttgtt acacttgtgg tagaactcga agcagccgtt 120

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gttgctgtcg tggaagtcca gggtcctctc attctcgagg aggaccagga gttcggcatt 240

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 34

atgaaggcta ttttggtcgt gctcctgtac acctttgcca cagccaatgc cgataccctt 60

tgtattggct accatgcaaa caactctacc gatacggtcg acacggtgct cgaaaagaat 120

gttactgtca cccactctgt gaacttg 147

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<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 35

Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Ala Thr Ala Asn

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu

<210> 36

<211> 147

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 36

caagttcaca gagtgggtga cagtaacatt cttttcgagc accgtgtcga ccgtatcggt 60

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 37

acatgtcaga caccgaaggg cgccatcaac acgagcttgc cctttcagaa tatacatcca 60

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<212> PRT

<213> A流感病毒

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Thr Cys Gln Thr Pro Lys Gly Ala Ile Asn Thr Ser Leu Pro Phe Gln

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Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser

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Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser Ile Gln

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Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

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Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln

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Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp

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Glu Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln

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Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu

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Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr

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Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Tyr

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His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu

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Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 39

gtctatctcc tccctattga gtttggcctc ctcggagtat tttggataat cgtacgttcc 60

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<212> DNA

<213> A流感病毒

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acatgtcaga caccgaaggg cgccatcaac acgagcttgc cctttcagaa tatacatcca 60

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<212> PRT

<213> A流感病毒

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Thr Cys Gln Thr Pro Lys Gly Ala Ile Asn Thr Ser Leu Pro Phe Gln

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Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser

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Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser Ile Gln

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Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

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Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln

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Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp

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Glu Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn

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Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His

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Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys

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Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys

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Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu Asn Arg Glu Glu Ile Asp

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<211> 573

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 42

gtctatctcc tccctattga gtttggcctc ctcggagtat tttggataat cgtacgttcc 60

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 43

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<212> PRT

<213> A流感病毒

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Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser Ile Gln Ser Arg

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Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly

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Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser

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Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp Glu Ile

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Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr

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Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu

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Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala

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Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp

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Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn

130 135 140

Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys

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Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro

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Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu Asn Arg Glu Glu Ile Asp

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<212> DNA

<213> A流感病毒

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cttcacactc tccatgcagg tgttatcgca tttgtggtag aactcgaaac agccgttgcc 60

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 46

ctgagactcg ccaccggact caggaatatc ccaagcatcc agtcacgggg tctgttcggc 60

gctatcgccg gatttattga aggcggctgg acggggatgg tggacggttg gtacggctac 120

catcatcaaa atgagcaggg ctccggatac gccgctgacc tgaaatctac gcagaatgcc 180

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ctgcttgttc tgctggagaa cgaaagaacc cttgactacc acgattccaa cgtgaagaat 300

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<213> A流感病毒

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Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser Ile Gln Ser Arg

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Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly

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Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser

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Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp Glu Ile

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Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu

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Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser

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Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn

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Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp

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Asn Thr Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys

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Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu Asn Arg Glu Glu Ile Asp

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Met Ala Ile Ile Tyr Leu Ile Leu Leu Phe Thr Ala Val Arg Gly Asp

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Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Lys Val Asp

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Thr Ile Leu Glu Arg Asn Val Thr Val Thr His Ala Lys Asp Ile

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 51

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<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 52

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ctgagaaacg tgccccagat cgagagcaga ggcctgtttg gagccatcgc cggattcatc 180

gagggaggat ggcagggaat ggtcgatggc tggtacggct accaccacag caatgatcag 240

ggctctggct atgccgccga taaggagtct acccagaagg cctttgacgg catcaccaac 300

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<212> PRT

<213> A流感病毒

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Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Ala Ile Asn Thr Thr Leu Pro Phe His

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Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp

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Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln

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Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr

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Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe

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His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Met Gln Leu

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Tyr Pro Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Asn Glu Ile Lys

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<213> A流感病毒

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cttgatctcg ttccggttca gcttgctctc ctcctcgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

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<213> A流感病毒

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<213> A流感病毒

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Asn Val His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser

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Glu Lys Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu

35 40 45

Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

50 55 60

Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Asp Gln

65 70 75 80

Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp

85 90 95

Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn

100 105 110

Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His

115 120 125

Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Met Gln Leu Arg

130 135 140

Asp Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys

145 150 155 160

Cys Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr

165 170 175

Pro Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Asn Glu Ile Lys

180 185 190

<210> 57

<211> 573

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 57

cttgatctcg ttccggttca gcttgctctc ctcctcgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg gagttcatac actcgtcgtc acacttgtgg tagaactcga agcagccatt 120

gcccagttcc ttcacgttgt ccctcagctg catcctcact ttgtcgtaca ggttcttcac 180

gttgctgtcg tggaagtcca gggtccgctc attctccatc agcaccagca gttcggcatt 240

gtaggtcatc ttctcgatca cgctgttcac cttgttggtg atgccgtcaa aggccttctg 300

ggtagactcc ttatcggcgg catagccaga gccctgatca ttgctgtggt ggtagccgta 360

ccagccatcg accattccct gccatcctcc ctcgatgaat ccggcgatgg ctccaaacag 420

gcctctgctc tcgatctggg gcacgtttct cagtcctgtg gccagcacca gcttctcgct 480

cttcacatac ttagggcact cgccgatggt cagagggtgc acattgtgga agggcagggt 540

ggtattgatg gcgcccagag gtgtctggca ctt 573

<210> 58

<211> 570

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 58

ctggtgctgg ccacaggact gagaaacgtg ccccagatcg agagcagagg cctgtttgga 60

gccatcgccg gattcatcga gggaggatgg cagggaatgg tcgatggctg gtacggctac 120

caccacagca atgatcaggg ctctggctat gccgccgata aggagtctac ccagaaggcc 180

tttgacggca tcaccaacaa ggtgaacagc gtgatcgaga agatgaacac ccagtttgag 240

gctgtgggca aggagtttag caacctggag cggagactgg agaacctgaa caagaagatg 300

gaggacggct tcctggatgt gtggacctac aatgccgaac tgctggtgct gatggagaat 360

gagcggaccc tggacttcca cgacagcaac gtgaagaacc tgtacgacaa agtgaggatg 420

cagctgaggg acaacgtgaa ggaactgggc aatggctgct tcgagttcta ccacaagtgt 480

gacgacgagt gtatgaactc cgtgaagaac ggcacctacg actaccctaa gtacgaggag 540

gagagcaagc tgaaccggaa cgagatcaag 570

<210> 59

<211> 190

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 59

Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu Ser Arg

1 5 10 15

Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly

20 25 30

Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Asp Gln Gly Ser

35 40 45

Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp Gly Ile

50 55 60

Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu

65 70 75 80

Ala Val Gly Lys Glu Phe Ser Asn Leu Glu Arg Arg Leu Glu Asn Leu

85 90 95

Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala

100 105 110

Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp

115 120 125

Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Met Gln Leu Arg Asp

130 135 140

Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys

145 150 155 160

Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro

165 170 175

Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Asn Glu Ile Lys

180 185 190

<210> 60

<211> 570

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 60

cttgatctcg ttccggttca gcttgctctc ctcctcgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg gagttcatac actcgtcgtc acacttgtgg tagaactcga agcagccatt 120

gcccagttcc ttcacgttgt ccctcagctg catcctcact ttgtcgtaca ggttcttcac 180

gttgctgtcg tggaagtcca gggtccgctc attctccatc agcaccagca gttcggcatt 240

gtaggtccac acatccagga agccgtcctc catcttcttg ttcaggttct ccagtctccg 300

ctccaggttg ctaaactcct tgcccacagc ctcaaactgg gtgttcatct tctcgatcac 360

gctgttcacc ttgttggtga tgccgtcaaa ggccttctgg gtagactcct tatcggcggc 420

atagccagag ccctgatcat tgctgtggtg gtagccgtac cagccatcga ccattccctg 480

ccatcctccc tcgatgaatc cggcgatggc tccaaacagg cctctgctct cgatctgggg 540

cacgtttctc agtcctgtgg ccagcaccag 570

<210> 61

<211> 471

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 61

ctggtgctgg ccacaggact gagaaacgtg ccccagatcg agagcagagg cctgtttgga 60

gccatcgccg gattcatcga gggaggatgg cagggaatgg tcgatggctg gtacggctac 120

caccacagca atgatcaggg ctctggctat gccgccgata aggagtctac ccagaaggcc 180

tttgacggca tcaccaacaa ggtgaacagc gtgatcgaga agatgaccta caatgccgaa 240

ctgctggtgc tgatggagaa tgagcggacc ctggacttcc acgacagcaa cgtgaagaac 300

ctgtacgaca aagtgaggat gcagctgagg gacaacgtga aggaactggg caatggctgc 360

ttcgagttct accacaagtg tgacgacgag tgtatgaact ccgtgaagaa cggcacctac 420

gactacccta agtacgagga ggagagcaag ctgaaccgga acgagatcaa g 471

<210> 62

<211> 157

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 62

Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu Ser Arg

1 5 10 15

Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly

20 25 30

Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Asp Gln Gly Ser

35 40 45

Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp Gly Ile

50 55 60

Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu

65 70 75 80

Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser

85 90 95

Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Met Gln Leu Arg Asp Asn

100 105 110

Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp

115 120 125

Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys

130 135 140

Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn Arg Asn Glu Ile Lys

145 150 155

<210> 63

<211> 471

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 63

cttgatctcg ttccggttca gcttgctctc ctcctcgtac ttagggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg gagttcatac actcgtcgtc acacttgtgg tagaactcga agcagccatt 120

gcccagttcc ttcacgttgt ccctcagctg catcctcact ttgtcgtaca ggttcttcac 180

gttgctgtcg tggaagtcca gggtccgctc attctccatc agcaccagca gttcggcatt 240

gtaggtcatc ttctcgatca cgctgttcac cttgttggtg atgccgtcaa aggccttctg 300

ggtagactcc ttatcggcgg catagccaga gccctgatca ttgctgtggt ggtagccgta 360

ccagccatcg accattccct gccatcctcc ctcgatgaat ccggcgatgg ctccaaacag 420

gcctctgctc tcgatctggg gcacgtttct cagtcctgtg gccagcacca g 471

<210> 64

<211> 150

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 64

gccaccatgg aaaagatcgt gctgctgctg gccattgtga gcctggtgaa gagcgaccag 60

atctgcattg gctaccacgc caacaatagc acagagcagg tggacaccat catggaaaaa 120

aacgtgaccg tgacccacgc tcaggacatc 150

<210> 65

<211> 48

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 65

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser

1 5 10 15

Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val

20 25 30

Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile

35 40 45

<210> 66

<211> 150

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 66

gatgtcctga gcgtgggtca cggtcacgtt tttttccatg atggtgtcca cctgctctgt 60

gctattgttg gcgtggtagc caatgcagat ctggtcgctc ttcaccaggc tcacaatggc 120

cagcagcagc acgatctttt ccatggtggc 150

<210> 67

<211> 681

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 67

aagtgccaga cacctatggg cgccatcaac agcagcatgc ccttccacaa catccaccct 60

ctgaccatcg gcgagtgccc taagtacgtg aagagcaaca gactggtgct ggccacaggc 120

ctgagaaata gcccccagcg ggagagcaga agaaagaaga ggggcctgtt tggagccatc 180

gccggcttta ttgaaggcgg ctggcaggga atggtggatg gctggtacgg ctaccaccac 240

agcaatgagc agggctctgg atatgccgcc gacaaagagt ctacccagaa ggccatcgac 300

ggcgtcacca acaaggtgaa cagcatcatc gacaagatga acacccagtt cgaggctgtg 360

ggcagagagt tcaacaacct ggaacggcgg atcgagaacc tgaacaagaa aatggaagat 420

ggcttcctgg atgtgtggac ctacaatgcc gaactgctgg tgctgatgga aaacgagcgg 480

accctggact tccacgacag caacgtgaag aacctgtacg acaaagtgcg gctgcagctg 540

agagacaacg ccaaagagct gggcaacggc tgcttcgagt tctaccacaa gtgcgacaac 600

gagtgcatgg aaagcatccg gaacggcacc tacaactacc ctcagtacag cgaggaagcc 660

aggctgaaga gggaagagat c 681

<210> 68

<211> 227

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 68

Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe His

1 5 10 15

Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser

20 25 30

Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg Glu

35 40 45

Ser Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile

50 55 60

Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His

65 70 75 80

Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln

85 90 95

Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys

100 105 110

Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu

115 120 125

Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp

130 135 140

Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg

145 150 155 160

Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val

165 170 175

Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe

180 185 190

Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn

195 200 205

Gly Thr Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg

210 215 220

Glu Glu Ile

225

<210> 69

<211> 681

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 69

gatctcttcc ctcttcagcc tggcttcctc gctgtactga gggtagttgt aggtgccgtt 60

ccggatgctt tccatgcact cgttgtcgca cttgtggtag aactcgaagc agccgttgcc 120

cagctctttg gcgttgtctc tcagctgcag ccgcactttg tcgtacaggt tcttcacgtt 180

gctgtcgtgg aagtccaggg tccgctcgtt ttccatcagc accagcagtt cggcattgta 240

ggtccacaca tccaggaagc catcttccat tttcttgttc aggttctcga tccgccgttc 300

caggttgttg aactctctgc ccacagcctc gaactgggtg ttcatcttgt cgatgatgct 360

gttcaccttg ttggtgacgc cgtcgatggc cttctgggta gactctttgt cggcggcata 420

tccagagccc tgctcattgc tgtggtggta gccgtaccag ccatccacca ttccctgcca 480

gccgccttca ataaagccgg cgatggctcc aaacaggccc ctcttctttc ttctgctctc 540

ccgctggggg ctatttctca ggcctgtggc cagcaccagt ctgttgctct tcacgtactt 600

agggcactcg ccgatggtca gagggtggat gttgtggaag ggcatgctgc tgttgatggc 660

gcccataggt gtctggcact t 681

<210> 70

<211> 582

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 70

aagtgccaga cacctatggg cgccatcaac agcagcatgc ccttccacaa catccaccct 60

ctgaccatcg gcgagtgccc taagtacgtg aagagcaaca gactggtgct ggccacaggc 120

ctgagaaata gcccccagcg ggagagcaga agaaagaaga ggggcctgtt tggagccatc 180

gccggcttta ttgaaggcgg ctggcaggga atggtggatg gctggtacgg ctaccaccac 240

agcaatgagc agggctctgg atatgccgcc gacaaagagt ctacccagaa ggccatcgac 300

ggcgtcacca acaaggtgaa cagcatcatc gacaagatga cctacaatgc cgaactgctg 360

gtgctgatgg aaaacgagcg gaccctggac ttccacgaca gcaacgtgaa gaacctgtac 420

gacaaagtgc ggctgcagct gagagacaac gccaaagagc tgggcaacgg ctgcttcgag 480

ttctaccaca agtgcgacaa cgagtgcatg gaaagcatcc ggaacggcac ctacaactac 540

cctcagtaca gcgaggaagc caggctgaag agggaagaga tc 582

<210> 71

<211> 194

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 71

Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe His

1 5 10 15

Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser

20 25 30

Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg Glu

35 40 45

Ser Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile

50 55 60

Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His

65 70 75 80

Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln

85 90 95

Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys

100 105 110

Met Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr

115 120 125

Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg

130 135 140

Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu

145 150 155 160

Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Gly

165 170 175

Thr Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu

180 185 190

Glu Ile

<210> 72

<211> 582

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 72

gatctcttcc ctcttcagcc tggcttcctc gctgtactga gggtagttgt aggtgccgtt 60

ccggatgctt tccatgcact cgttgtcgca cttgtggtag aactcgaagc agccgttgcc 120

cagctctttg gcgttgtctc tcagctgcag ccgcactttg tcgtacaggt tcttcacgtt 180

gctgtcgtgg aagtccaggg tccgctcgtt ttccatcagc accagcagtt cggcattgta 240

ggtcatcttg tcgatgatgc tgttcacctt gttggtgacg ccgtcgatgg ccttctgggt 300

agactctttg tcggcggcat atccagagcc ctgctcattg ctgtggtggt agccgtacca 360

gccatccacc attccctgcc agccgccttc aataaagccg gcgatggctc caaacaggcc 420

cctcttcttt cttctgctct cccgctgggg gctatttctc aggcctgtgg ccagcaccag 480

tctgttgctc ttcacgtact tagggcactc gccgatggtc agagggtgga tgttgtggaa 540

gggcatgctg ctgttgatgg cgcccatagg tgtctggcac tt 582

<210> 73

<211> 579

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 73

ctggtgctgg ccacaggcct gagaaatagc ccccagcggg agagcagaag aaagaagagg 60

ggcctgtttg gagccatcgc cggctttatt gaaggcggct ggcagggaat ggtggatggc 120

tggtacggct accaccacag caatgagcag ggctctggat atgccgccga caaagagtct 180

acccagaagg ccatcgacgg cgtcaccaac aaggtgaaca gcatcatcga caagatgaac 240

acccagttcg aggctgtggg cagagagttc aacaacctgg aacggcggat cgagaacctg 300

aacaagaaaa tggaagatgg cttcctggat gtgtggacct acaatgccga actgctggtg 360

ctgatggaaa acgagcggac cctggacttc cacgacagca acgtgaagaa cctgtacgac 420

aaagtgcggc tgcagctgag agacaacgcc aaagagctgg gcaacggctg cttcgagttc 480

taccacaagt gcgacaacga gtgcatggaa agcatccgga acggcaccta caactaccct 540

cagtacagcg aggaagccag gctgaagagg gaagagatc 579

<210> 74

<211> 193

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 74

Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg Glu Ser Arg

1 5 10 15

Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

20 25 30

Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn

35 40 45

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala

50 55 60

Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Asn

65 70 75 80

Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg

85 90 95

Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp

100 105 110

Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu

115 120 125

Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu

130 135 140

Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe

145 150 155 160

Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr

165 170 175

Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu Glu

180 185 190

Ile

<210> 75

<211> 579

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 75

gatctcttcc ctcttcagcc tggcttcctc gctgtactga gggtagttgt aggtgccgtt 60

ccggatgctt tccatgcact cgttgtcgca cttgtggtag aactcgaagc agccgttgcc 120

cagctctttg gcgttgtctc tcagctgcag ccgcactttg tcgtacaggt tcttcacgtt 180

gctgtcgtgg aagtccaggg tccgctcgtt ttccatcagc accagcagtt cggcattgta 240

ggtccacaca tccaggaagc catcttccat tttcttgttc aggttctcga tccgccgttc 300

caggttgttg aactctctgc ccacagcctc gaactgggtg ttcatcttgt cgatgatgct 360

gttcaccttg ttggtgacgc cgtcgatggc cttctgggta gactctttgt cggcggcata 420

tccagagccc tgctcattgc tgtggtggta gccgtaccag ccatccacca ttccctgcca 480

gccgccttca ataaagccgg cgatggctcc aaacaggccc ctcttctttc ttctgctctc 540

ccgctggggg ctatttctca ggcctgtggc cagcaccag 579

<210> 76

<211> 480

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 76

ctggtgctgg ccacaggcct gagaaatagc ccccagcggg agagcagaag aaagaagagg 60

ggcctgtttg gagccatcgc cggctttatt gaaggcggct ggcagggaat ggtggatggc 120

tggtacggct accaccacag caatgagcag ggctctggat atgccgccga caaagagtct 180

acccagaagg ccatcgacgg cgtcaccaac aaggtgaaca gcatcatcga caagatgacc 240

tacaatgccg aactgctggt gctgatggaa aacgagcgga ccctggactt ccacgacagc 300

aacgtgaaga acctgtacga caaagtgcgg ctgcagctga gagacaacgc caaagagctg 360

ggcaacggct gcttcgagtt ctaccacaag tgcgacaacg agtgcatgga aagcatccgg 420

aacggcacct acaactaccc tcagtacagc gaggaagcca ggctgaagag ggaagagatc 480

<210> 77

<211> 160

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 77

Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg Glu Ser Arg

1 5 10 15

Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

20 25 30

Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn

35 40 45

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala

50 55 60

Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Thr

65 70 75 80

Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp

85 90 95

Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln

100 105 110

Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr

115 120 125

His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr

130 135 140

Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile

145 150 155 160

<210> 78

<211> 480

<212> DNA

<213> A流感病毒

<400> 78

gatctcttcc ctcttcagcc tggcttcctc gctgtactga gggtagttgt aggtgccgtt 60

ccggatgctt tccatgcact cgttgtcgca cttgtggtag aactcgaagc agccgttgcc 120

cagctctttg gcgttgtctc tcagctgcag ccgcactttg tcgtacaggt tcttcacgtt 180

gctgtcgtgg aagtccaggg tccgctcgtt ttccatcagc accagcagtt cggcattgta 240

ggtcatcttg tcgatgatgc tgttcacctt gttggtgacg ccgtcgatgg ccttctgggt 300

agactctttg tcggcggcat atccagagcc ctgctcattg ctgtggtggt agccgtacca 360

gccatccacc attccctgcc agccgccttc aataaagccg gcgatggctc caaacaggcc 420

cctcttcttt cttctgctct cccgctgggg gctatttctc aggcctgtgg ccagcaccag 480

<210> 79

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 79

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 80

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 80

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 81

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 81

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 82

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 82

atgaaggcaa tcctggtcgt cctgctgtat actttcgcta ccgctaacgc tgacaccctg 60

tgcatcggct atcacgctaa caactcaacc gacacagtgg atactgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactctgt gaatctgggc agtggactga ggctggcaac tggactgcga 180

aacatcccac agcgggaaac cagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaacga gcagggatca 300

ggctacgccg ctgacctgaa gagcacacag aatgcaatcg atgaaattac taacatggtg 360

aattccgtca tcgagaaaat gggcagcgga ggctccggaa ccgacctggc agaactgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gacactgctg taccacgata gtaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaagtcc gatcacagct gaagaacaat gctaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcgacaa cacctgtatg gagagcgtga aaaatggcac atacgattat 600

cccaagtatt ccgaggaagc caaactgaac agagaggaaa ttgac 645

<210> 83

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 83

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Glu Ile Asp

210 215

<210> 84

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 84

gtcaatttcc tctctgttca gtttggcttc ctcggaatac ttgggataat cgtatgtgcc 60

atttttcacg ctctccatac aggtgttgtc gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttagcattgt tcttcagctg tgatcggact ttctcataca gattcttcac 180

gttactatcg tggtacagca gtgtccactg gttcagcagc agcaccagca gttctgccag 240

gtcggttccg gagcctccgc tgcccatttt ctcgatgacg gaattcacca tgttagtaat 300

ttcatcgatt gcattctgtg tgctcttcag gtcagcggcg tagcctgatc cctgctcgtt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctctggtttc ccgctgtggg atgtttcgca gtccagttgc 480

cagcctcagt ccactgccca gattcacaga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

agtatccact gtgtcggttg agttgttagc gtgatagccg atgcacaggg tgtcagcgtt 600

agcggtagcg aaagtataca gcaggacgac caggattgcc ttcat 645

<210> 85

<211> 639

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 85

atggctatca tctacctgat cctgctgttc actgctgtgc ggggggacca gatttgcatc 60

ggctaccacg ctaataattc aactgagaag gtggatacta tcctggagcg gaacgtgacc 120

gtcacacacg ctaaagacat tggcagcgga ctggtgctgg caaccggact gaggaatgtc 180

ccacagatcg agtcccgcgg actgttcggc gctatcgcag ggtttattga aggcgggtgg 240

cagggaatga ttgatgggtg gtacggctac caccattcta acgaccaagg aagtggctac 300

gccgctgata aggagagtac tcagaaagcc ttcgatggca tcaccaacat ggtgaattca 360

gtcattgaga agatgggcag cggaggctcc ggaaccgacc tggcagaact gctggtgctg 420

ctgctgaatc agtggacact gctgtttcac gactctaacg tgaagaatct gtatgataaa 480

gtccggatgc agctgagaga caacgtgaag gagctgggga atggatgctt cgaattttac 540

cataagtgcg acgatgagtg tatgaacagt gtcaaaaatg gcacatacga ttatcccaag 600

tatgaggaag agtcaaaact gaaccgaaat gaaatcaag 639

<210> 86

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 86

Met Ala Ile Ile Tyr Leu Ile Leu Leu Phe Thr Ala Val Arg Gly Asp

1 5 10 15

Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Lys Val Asp

20 25 30

Thr Ile Leu Glu Arg Asn Val Thr Val Thr His Ala Lys Asp Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu

50 55 60

Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

65 70 75 80

Gln Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Asp Gln

85 90 95

Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp

100 105 110

Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu Asn Gln

130 135 140

Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys

145 150 155 160

Val Arg Met Gln Leu Arg Asp Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys

165 170 175

Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys

180 185 190

Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn

195 200 205

Arg Asn Glu Ile Lys

210

<210> 87

<211> 639

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 87

cttgatttca tttcggttca gttttgactc ttcctcatac ttgggataat cgtatgtgcc 60

atttttgaca ctgttcatac actcatcgtc gcacttatgg taaaattcga agcatccatt 120

ccccagctcc ttcacgttgt ctctcagctg catccggact ttatcataca gattcttcac 180

gttagagtcg tgaaacagca gtgtccactg attcagcagc agcaccagca gttctgccag 240

gtcggttccg gagcctccgc tgcccatctt ctcaatgact gaattcacca tgttggtgat 300

gccatcgaag gctttctgag tactctcctt atcagcggcg tagccacttc cttggtcgtt 360

agaatggtgg tagccgtacc acccatcaat cattccctgc cacccgcctt caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc cgcgggactc gatctgtggg acattcctca gtccggttgc 480

cagcaccagt ccgctgccaa tgtctttagc gtgtgtgacg gtcacgttcc gctccaggat 540

agtatccacc ttctcagttg aattattagc gtggtagccg atgcaaatct ggtccccccg 600

cacagcagtg aacagcagga tcaggtagat gatagccat 639

<210> 88

<211> 651

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 88

atggaaaaaa tcgtgctgct gctggctatc gtgtccctgg tgaagtccga ccagatctgt 60

attgggtatc atgctaacaa ctccacagaa caggtggata ctatcatgga gaagaacgtg 120

accgtcacac acgctcagga cattggatgg ggactggtcc tggcaaccgg actgagaaat 180

tcaccacaga gggaaagccg gagaaagaaa cgcggactgt tcggcgctat cgcagggttt 240

attgagggcg ggtggcaggg aatggtggat gggtggtacg gctaccacca ttccaacgaa 300

cagggatctg gctacgccgc tgataaggag tctactcaga aagctatcga cggcgtgacc 360

aacatggtca atagtatcat tgataagatg ggctctggag gcagtggaac cgacctggca 420

gagctgctgg tgctgctgct gaaccagtgg acactgctgt tccacgactc taacgtgaag 480

aatctgtatg ataaagtccg actgcagctg cgggacaacg ccaaggaact ggggaatgga 540

tgcttcgagt tctaccataa gtgcgataac gaatgtatgg agagcatccg aaacggcaca 600

tacaattatc cccagtattc cgaggaagct aggctgaaac gcgaggaaat t 651

<210> 89

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 89

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser

1 5 10 15

Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val

20 25 30

Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile

35 40 45

Gly Trp Gly Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg

50 55 60

Glu Ser Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe

65 70 75 80

Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His

85 90 95

His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr

100 105 110

Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Met Val Asn Ser Ile Ile Asp

115 120 125

Lys Met Gly Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val

130 135 140

Leu Leu Leu Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys

145 150 155 160

Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu

165 170 175

Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys

180 185 190

Met Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu

195 200 205

Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile

210 215

<210> 90

<211> 651

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 90

aatttcctcg cgtttcagcc tagcttcctc ggaatactgg ggataattgt atgtgccgtt 60

tcggatgctc tccatacatt cgttatcgca cttatggtag aactcgaagc atccattccc 120

cagttccttg gcgttgtccc gcagctgcag tcggacttta tcatacagat tcttcacgtt 180

agagtcgtgg aacagcagtg tccactggtt cagcagcagc accagcagct ctgccaggtc 240

ggttccactg cctccagagc ccatcttatc aatgatacta ttgaccatgt tggtcacgcc 300

gtcgatagct ttctgagtag actccttatc agcggcgtag ccagatccct gttcgttgga 360

atggtggtag ccgtaccacc catccaccat tccctgccac ccgccctcaa taaaccctgc 420

gatagcgccg aacagtccgc gtttctttct ccggctttcc ctctgtggtg aatttctcag 480

tccggttgcc aggaccagtc cccatccaat gtcctgagcg tgtgtgacgg tcacgttctt 540

ctccatgata gtatccacct gttctgtgga gttgttagca tgatacccaa tacagatctg 600

gtcggacttc accagggaca cgatagccag cagcagcacg attttttcca t 651

<210> 91

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 91

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 92

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 92

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 93

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 93

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 94

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 94

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccattct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgatgc tgaaccagtt cactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 95

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 95

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Leu

130 135 140

Asn Gln Phe Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 96

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 96

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtgaactg gttcagcatc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccagaat 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 97

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 97

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcaatgga acaggcggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 98

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 98

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Asn Gly Thr Gly Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 99

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 99

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtcagctccg cctgttccat tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 100

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 100

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 101

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 101

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 102

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 102

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtcagctcca gtgccatttc cgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 103

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 103

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggcaacggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 104

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 104

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Asn Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 105

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 105

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg ttgcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 106

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 106

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

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tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 107

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 107

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 108

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 108

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 109

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 109

atgaaggcaa tcctggtcgt cctgctgtat actttcgcta ccgctaacgc tgacaccctg 60

tgcatcggct atcacgctaa caactcaacc gacacagtgg atactgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactctgt gaatctgggc agtggactga ggctggcaac tggactgcga 180

aacatcccac agcgggaaac cagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaacga gcagggatca 300

ggctacgccg ctgacctgaa gagcacacag aatgcaatcg atgaaattac taacatggtg 360

aattccgtca tcgagaaaat gggcagcgga ggctccggaa ccgacctggc agaactgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gacactgctg taccacgata gtaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaagtcc gatcacagct gaagaacaat gctaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcgacaa cacctgtatg gagagcgtga aaaatggcac atacgattat 600

cccaagtatt ccgaggaagc caaactgaac agagaggaaa ttgactctgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtcaacaag gagatgcaga gctccaatct gtacatgtcc 720

atgtctagtt ggtgttatac ccactctctg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaacga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacatcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gactcagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagtaaaga tcatgctacc ttcaattttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gagccggaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 110

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 110

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 111

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 111

tgacccactt ttccggctct tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaaattgaag gtagcatgat ctttactctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgagtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgatgtcag 300

ctggacgggc acattgttct cgttcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agagagtggg tataacacca 420

actagacatg gacatgtaca gattggagct ctgcatctcc ttgttgacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cagagtcaat ttcctctctg ttcagtttgg cttcctcgga 540

atacttggga taatcgtatg tgccattttt cacgctctcc atacaggtgt tgtcgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttagca ttgttcttca gctgtgatcg 660

gactttctca tacagattct tcacgttact atcgtggtac agcagtgtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagttctg ccaggtcggt tccggagcct ccgctgccca ttttctcgat 780

gacggaattc accatgttag taatttcatc gattgcattc tgtgtgctct tcaggtcagc 840

ggcgtagcct gatccctgct cgttctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctctgg tttcccgctg 960

tgggatgttt cgcagtccag ttgccagcct cagtccactg cccagattca cagagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacagtatc cactgtgtcg gttgagttgt tagcgtgata 1080

gccgatgcac agggtgtcag cgttagcggt agcgaaagta tacagcagga cgaccaggat 1140

tgccttcat 1149

<210> 112

<211> 1143

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 112

atggctatca tctacctgat cctgctgttc actgctgtgc ggggggacca gatttgcatc 60

ggctaccacg ctaataattc aactgagaag gtggatacta tcctggagcg gaacgtgacc 120

gtcacacacg ctaaagacat tggcagcgga ctggtgctgg caaccggact gaggaatgtc 180

ccacagatcg agtcccgcgg actgttcggc gctatcgcag ggtttattga aggcgggtgg 240

cagggaatga ttgatgggtg gtacggctac caccattcta acgaccaagg aagtggctac 300

gccgctgata aggagagtac tcagaaagcc ttcgatggca tcaccaacat ggtgaattca 360

gtcattgaga agatgggcag cggaggctcc ggaaccgacc tggcagaact gctggtgctg 420

ctgctgaatc agtggacact gctgtttcac gactctaacg tgaagaatct gtatgataaa 480

gtccggatgc agctgagaga caacgtgaag gagctgggga atggatgctt cgaattttac 540

cataagtgcg acgatgagtg tatgaacagt gtcaaaaatg gcacatacga ttatcccaag 600

tatgaggaag agtcaaaact gaaccgaaat gaaatcaaga gcgggggcga catcatcaag 660

ctgctgaacg agcaagtgaa taaggaaatg cagagctcca acctgtacat gtccatgtct 720

agttggtgtt atactcactc tctggatggc gccgggctgt tcctgtttga ccacgcagcc 780

gaagagtacg agcatgctaa gaaactgatc attttcctga acgaaaacaa cgtgcccgtc 840

cagctgacat caatcagcgc acctgagcat aagttcgaag gcctgactca gatctttcag 900

aaagcttacg agcacgaaca gcatatttcc gagtctatca acaatattgt ggaccacgcc 960

atcaagagca aagatcatgc taccttcaac tttctgcagt ggtacgtggc cgagcagcac 1020

gaagaggaag tcctgtttaa ggacatcctg gataaaatcg agctgattgg aaacgaaaat 1080

catggcctgt acctggcaga ccagtatgtg aagggcattg ccaagtccag aaaaagtggg 1140

tca 1143

<210> 113

<211> 381

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 113

Met Ala Ile Ile Tyr Leu Ile Leu Leu Phe Thr Ala Val Arg Gly Asp

1 5 10 15

Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Lys Val Asp

20 25 30

Thr Ile Leu Glu Arg Asn Val Thr Val Thr His Ala Lys Asp Ile Gly

35 40 45

Ser Gly Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu

50 55 60

Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

65 70 75 80

Gln Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Ser Asn Asp Gln

85 90 95

Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln Lys Ala Phe Asp

100 105 110

Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu Asn Gln

130 135 140

Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys

145 150 155 160

Val Arg Met Gln Leu Arg Asp Asn Val Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys

165 170 175

Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asp Glu Cys Met Asn Ser Val Lys

180 185 190

Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Glu Glu Glu Ser Lys Leu Asn

195 200 205

Arg Asn Glu Ile Lys Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu Asn Glu

210 215 220

Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser

225 230 235 240

Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe Leu Phe

245 250 255

Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile Ile Phe

260 265 270

Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser Ala Pro

275 280 285

Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala Tyr Glu

290 295 300

His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp His Ala

305 310 315 320

Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp Tyr Val

325 330 335

Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu Asp Lys

340 345 350

Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp Gln

355 360 365

Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 114

<211> 1143

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 114

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tggtctgcca ggtacaggcc 60

atgattttcg tttccaatca gctcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacttcctc 120

ttcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

gatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ctcggaaata tgctgttcgt gctcgtaagc 240

tttctgaaag atctgagtca ggccttcgaa cttatgctca ggtgcgctga ttgatgtcag 300

ctggacgggc acgttgtttt cgttcaggaa aatgatcagt ttcttagcat gctcgtactc 360

ttcggctgcg tggtcaaaca ggaacagccc ggcgccatcc agagagtgag tataacacca 420

actagacatg gacatgtaca ggttggagct ctgcatttcc ttattcactt gctcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cgctcttgat ttcatttcgg ttcagttttg actcttcctc 540

atacttggga taatcgtatg tgccattttt gacactgttc atacactcat cgtcgcactt 600

atggtaaaat tcgaagcatc cattccccag ctccttcacg ttgtctctca gctgcatccg 660

gactttatca tacagattct tcacgttaga gtcgtgaaac agcagtgtcc actgattcag 720

cagcagcacc agcagttctg ccaggtcggt tccggagcct ccgctgccca tcttctcaat 780

gactgaattc accatgttgg tgatgccatc gaaggctttc tgagtactct ccttatcagc 840

ggcgtagcca cttccttggt cgttagaatg gtggtagccg taccacccat caatcattcc 900

ctgccacccg ccttcaataa accctgcgat agcgccgaac agtccgcggg actcgatctg 960

tgggacattc ctcagtccgg ttgccagcac cagtccgctg ccaatgtctt tagcgtgtgt 1020

gacggtcacg ttccgctcca ggatagtatc caccttctca gttgaattat tagcgtggta 1080

gccgatgcaa atctggtccc cccgcacagc agtgaacagc aggatcaggt agatgatagc 1140

cat 1143

<210> 115

<211> 1158

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 115

atggaaaaaa tcgtgctgct gctggctatc gtgtccctgg tgaagtccga ccagatctgt 60

attgggtatc atgctaacaa ctccacagaa caggtggata ctatcatgga gaagaacgtg 120

accgtcacac acgctcagga cattggatgg ggactggtcc tggcaaccgg actgagaaat 180

tcaccacaga gggaaagccg gagaaagaaa cgcggactgt tcggcgctat cgcagggttt 240

attgagggcg ggtggcaggg aatggtggat gggtggtacg gctaccacca ttccaacgaa 300

cagggatctg gctacgccgc tgataaggag tctactcaga aagctatcga cggcgtgacc 360

aacatggtca atagtatcat tgataagatg ggctctggag gcagtggaac cgacctggca 420

gagctgctgg tgctgctgct gaaccagtgg acactgctgt tccacgactc taacgtgaag 480

aatctgtatg ataaagtccg actgcagctg cgggacaacg ccaaggaact ggggaatgga 540

tgcttcgagt tctaccataa gtgcgataac gaatgtatgg agagcatccg aaacggcaca 600

tacaattatc cccagtattc cgaggaagct aggctgaaac gcgaggaaat tagctccggg 660

ggagacatca ttaagctgct gaacgaacag gtgaacaagg agatgcagtc tagtaacctg 720

tacatgagta tgtcaagctg gtgttatact cactcactgg atggcgccgg gctgttcctg 780

tttgaccacg cagccgagga atacgaacat gctaagaaac tgatcatttt cctgaatgag 840

aacaatgtgc ccgtccagct gacatccatc tctgcacctg aacataagtt cgagggcctg 900

actcagatct ttcagaaagc ctacgaacac gagcagcata ttagtgagtc aatcaacaat 960

attgtggacc acgccatcaa gagcaaagat catgctacct tcaattttct gcagtggtac 1020

gtggccgagc agcacgagga agaggtcctg tttaaggaca tcctggataa aatcgaactg 1080

attggaaacg agaatcatgg cctgtacctg gcagaccagt atgtgaaggg cattgccaag 1140

tccaggaaaa gcgggtcc 1158

<210> 116

<211> 386

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 116

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser

1 5 10 15

Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val

20 25 30

Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile

35 40 45

Gly Trp Gly Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg

50 55 60

Glu Ser Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe

65 70 75 80

Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His

85 90 95

His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr

100 105 110

Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Met Val Asn Ser Ile Ile Asp

115 120 125

Lys Met Gly Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val

130 135 140

Leu Leu Leu Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys

145 150 155 160

Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu

165 170 175

Leu Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys

180 185 190

Met Glu Ser Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asn Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu

195 200 205

Glu Ala Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Ser Gly Gly Asp Ile Ile

210 215 220

Lys Leu Leu Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu

225 230 235 240

Tyr Met Ser Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala

245 250 255

Gly Leu Phe Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys

260 265 270

Lys Leu Ile Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr

275 280 285

Ser Ile Ser Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe

290 295 300

Gln Lys Ala Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn

305 310 315 320

Ile Val Asp His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe

325 330 335

Leu Gln Trp Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys

340 345 350

Asp Ile Leu Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu

355 360 365

Tyr Leu Ala Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser

370 375 380

Gly Ser

385

<210> 117

<211> 1158

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 117

ggacccgctt ttcctggact tggcaatgcc cttcacatac tggtctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcttc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaaattgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

gatggcgtgg tccacaatat tgttgattga ctcactaata tgctgctcgt gttcgtaggc 240

tttctgaaag atctgagtca ggccctcgaa cttatgttca ggtgcagaga tggatgtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttcttagcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tggtcaaaca ggaacagccc ggcgccatcc agtgagtgag tataacacca 420

gcttgacata ctcatgtaca ggttactaga ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttaatg atgtctcccc cggagctaat ttcctcgcgt ttcagcctag cttcctcgga 540

atactgggga taattgtatg tgccgtttcg gatgctctcc atacattcgt tatcgcactt 600

atggtagaac tcgaagcatc cattccccag ttccttggcg ttgtcccgca gctgcagtcg 660

gactttatca tacagattct tcacgttaga gtcgtggaac agcagtgtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctctg ccaggtcggt tccactgcct ccagagccca tcttatcaat 780

gatactattg accatgttgg tcacgccgtc gatagctttc tgagtagact ccttatcagc 840

ggcgtagcca gatccctgtt cgttggaatg gtggtagccg taccacccat ccaccattcc 900

ctgccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtccgcgtt tctttctccg 960

gctttccctc tgtggtgaat ttctcagtcc ggttgccagg accagtcccc atccaatgtc 1020

ctgagcgtgt gtgacggtca cgttcttctc catgatagta tccacctgtt ctgtggagtt 1080

gttagcatga tacccaatac agatctggtc ggacttcacc agggacacga tagccagcag 1140

cagcacgatt ttttccat 1158

<210> 118

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 118

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 119

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 119

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 120

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 120

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaaa tccagagtcc gctcgttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 121

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 121

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccattct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgatgc tgaaccagtt cactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 122

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 122

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Leu

130 135 140

Asn Gln Phe Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 123

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 123

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtga actggttcag 720

catcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca gaatggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 124

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 124

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcaatgga acaggcggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 125

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 125

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Asn Gly Thr Gly Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 126

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 126

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtcagc tccgcctgtt ccattgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 127

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 127

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 128

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 128

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 129

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 129

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtcagc tccagtgcca tttccgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 130

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 130

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggcaacggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 131

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 131

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Asn Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 132

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 132

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccgttgcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 133

<211> 33

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 133

Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn Lys Leu Glu Arg

1 5 10 15

Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile

20 25 30

Trp

<210> 134

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 134

Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn

1 5 10

<210> 135

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 135

Asn Lys Leu Glu Arg Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys

1 5 10

<210> 136

<211> 11

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 136

Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp

1 5 10

<210> 137

<211> 33

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 137

Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys

1 5 10 15

Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile

20 25 30

Trp

<210> 138

<211> 11

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 138

Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe

1 5 10

<210> 139

<211> 11

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 139

Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu

1 5 10

<210> 140

<211> 13

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 140

Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp

1 5 10

<210> 141

<211> 33

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 141

Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe Ser Asn Leu Glu Arg

1 5 10 15

Arg Leu Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val

20 25 30

Trp

<210> 142

<211> 11

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 142

Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Lys Glu Phe

1 5 10

<210> 143

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 143

Phe Ser Asn Leu Glu Arg Arg Leu Glu Asn Leu Asn

1 5 10

<210> 144

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 144

Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp

1 5 10

<210> 145

<211> 33

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 145

Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg

1 5 10 15

Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val

20 25 30

Trp

<210> 146

<211> 11

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 146

Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe

1 5 10

<210> 147

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 147

Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn

1 5 10

<210> 148

<211> 12

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 148

Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp

1 5 10

<210> 149

<211> 53

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 149

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val

1 5 10 15

Gly Lys Glu Phe Asn Lys Leu Glu Arg Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys

20 25 30

Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu

35 40 45

Leu Val Leu Leu Glu

50

<210> 150

<211> 20

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 150

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu

1 5 10 15

Val Leu Leu Glu

20

<210> 151

<211> 53

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 151

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val

1 5 10 15

Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys

20 25 30

Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu

35 40 45

Leu Val Leu Leu Glu

50

<210> 152

<211> 20

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 152

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu

1 5 10 15

Val Leu Leu Glu

20

<210> 153

<211> 53

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 153

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val

1 5 10 15

Gly Lys Glu Phe Ser Asn Leu Glu Arg Arg Leu Glu Asn Leu Asn Lys

20 25 30

Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu

35 40 45

Leu Val Leu Met Glu

50

<210> 154

<211> 20

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 154

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu

1 5 10 15

Val Leu Met Glu

20

<210> 155

<211> 53

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 155

Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val

1 5 10 15

Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys

20 25 30

Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu

35 40 45

Leu Val Leu Met Glu

50

<210> 156

<211> 20

<212> PRT

<213> A流感病毒

<400> 156

Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys Met Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu

1 5 10 15

Val Leu Met Glu

20

<210> 157

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 157

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 158

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 158

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Met

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 159

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 159

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttcatcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 160

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 160

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 161

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 161

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Met

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 162

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 162

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaaa tccagagtcc gctcgttcat 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 163

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 163

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatcgtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tcaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 164

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 164

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Ile Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Ile

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 165

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 165

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttgatcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacga tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 166

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 166

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatcgtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tcaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 167

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 167

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Ile Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Ile

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 168

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 168

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaaa tccagagtcc gctcgttgat 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc acgatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 169

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 169

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacctggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tcaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 170

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 170

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Leu Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Ile

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 171

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 171

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttgatcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca ggttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 172

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 172

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacctggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctga tcaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 173

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 173

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Leu Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Ile

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 174

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 174

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

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gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaaa tccagagtcc gctcgttgat 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accaggttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

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gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 175

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 175

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacctggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 176

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 176

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Leu Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 177

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 177

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaaatcca gagtccgctc gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca ggttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 178

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 178

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacctggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 179

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 179

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Leu Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 180

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 180

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaaa tccagagtcc gctcgttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtctgt tccggagcct ccgctgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accaggttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctgct cattctgatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 181

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 181

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc ataacaatac ccagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 182

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 182

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Asn Asn

85 90 95

Thr Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 183

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 183

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtcagctcca gtgccatttc cgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgggtatt 360

gttatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 184

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 184

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc ataacaatac ccagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgaaca gcaccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 185

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 185

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Asn Asn

85 90 95

Thr Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Asn Ser Thr Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 186

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 186

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

ctggacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggtgct gttcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtcagc tccagtgcca tttccgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctggg tattgttatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 187

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 187

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc ataacaatac ccagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 188

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 188

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Asn Asn

85 90 95

Thr Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 189

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 189

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtcagctcca gtgccatttc cgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgggtatt 360

gttatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 190

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 190

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc ataacaatac ccagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcggaaat ggcactggag ctgacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgaaca gcaccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtcaacc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 191

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 191

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Asn Asn

85 90 95

Thr Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Asn Ser Thr Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Asn Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 192

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 192

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

gttgacgggc acattgttct cattcaggaa aatgatcagt ttctttgcat gttcgtattc 360

ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggtgct gttcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

gaccttctca tacagattct tcacgttgct atcgtggaac agcagagtcc actggttcag 720

cagcagcacc agcagctcag ccaggtcagc tccagtgcca tttccgccca ttttttcgat 780

gacagaattc accatgttag taatgccatt gattgcgttc tgtgtagact tctgatcagc 840

ggcgtagccg ctgccctggg tattgttatg gtggtagccg taccacccgt ccaccattcc 900

tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctcttg tttcccgctg 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

gacagtcacg ttcttctcca ggacggtatc cactgtgtcg gtggagttgt ttgcgtgata 1080

gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 193

<211> 465

<212> DNA

<213> Aquifex aeolicus

<400> 193

atgcaaattt acgaagggaa actaaccgct gaagggctga ggttcggtat agtggcttcc 60

aggttcaacc acgcactcgt ggatagacta gttgagggag ctatagactg catagtaaga 120

cacgggggaa gggaagaaga cataacgctc gttagagtgc cgggctcctg ggaaattccc 180

gtggctgcgg gagagcttgc gagaaaagag gacatagacg ctgtgatagc gataggagtt 240

ctaataaggg gggctactcc ccactttgat tacatagcct ctgaagtgtc aaaagggctt 300

gcgaaccttt ccttagaact gagaaaaccc ataaccttcg gtgttataac tgcggacacc 360

ttggagcagg cgatagaaag ggcgggaaca aagcacggga ataagggctg ggaagctgca 420

ctttccgcaa tagaaatggc aaacttattt aagagtctga gatga 465

<210> 194

<211> 154

<212> PRT

<213> Aquifex aeolicus

<400> 194

Met Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr Ala Glu Gly Leu Arg Phe Gly

1 5 10 15

Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala Leu Val Asp Arg Leu Val Glu

20 25 30

Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His Gly Gly Arg Glu Glu Asp Ile

35 40 45

Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp Glu Ile Pro Val Ala Ala Gly

50 55 60

Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp Ala Val Ile Ala Ile Gly Val

65 70 75 80

Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe Asp Tyr Ile Ala Ser Glu Val

85 90 95

Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu Glu Leu Arg Lys Pro Ile Thr

100 105 110

Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu Glu Gln Ala Ile Glu Arg Ala

115 120 125

Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp Glu Ala Ala Leu Ser Ala Ile

130 135 140

Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu Arg

145 150

<210> 195

<211> 465

<212> DNA

<213> Aquifex aeolicus

<400> 195

tcatctcaga ctcttaaata agtttgccat ttctattgcg gaaagtgcag cttcccagcc 60

cttattcccg tgctttgttc ccgccctttc tatcgcctgc tccaaggtgt ccgcagttat 120

aacaccgaag gttatgggtt ttctcagttc taaggaaagg ttcgcaagcc cttttgacac 180

ttcagaggct atgtaatcaa agtggggagt agcccccctt attagaactc ctatcgctat 240

cacagcgtct atgtcctctt ttctcgcaag ctctcccgca gccacgggaa tttcccagga 300

gcccggcact ctaacgagcg ttatgtcttc ttcccttccc ccgtgtctta ctatgcagtc 360

tatagctccc tcaactagtc tatccacgag tgcgtggttg aacctggaag ccactatacc 420

gaacctcagc ccttcagcgg ttagtttccc ttcgtaaatt tgcat 465

<210> 196

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 196

atgaaggcca agctgctggt gctcctgtgc accttcaccg ccacctacgc cgacaccatc 60

tgcatcggct accacgccaa caacagcacc gacaccgtgg ataccgtgct ggaaaagaac 120

gtgaccgtga cccacagcgt gaacctgggc agcggcctgc ggatggtgac aggcctgcgg 180

aacatccccc agagagagac acggggcctg ttcggcgcca ttgccggctt tatcgagggc 240

ggctggaccg gcatggtgga cgggtggtac ggctaccacc accagaacga gcagggcagc 300

ggctacgccg ccgaccagaa gtccacccag aacgccatca acggcatcac caacatggtg 360

aacagcgtga tcgagaagat gggctccggc ggcagcggca ccgatctggc tgaactgctg 420

gtcctgctgc tgaacgagcg gaccctggac ttccacgaca gcaacgtgaa gaacctgtac 480

gagaaagtga agtcccagct gaagaacaac gccaaagaga tcggcaacgg ctgcttcgag 540

ttctaccaca agtgcaacaa cgagtgcatg gaaagcgtga agaacggcac ctacgactac 600

cccaagtaca gcgaggaaag caagctgaac cgcgagggag gc 642

<210> 197

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 197

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Gly

210

<210> 198

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 198

gcctccctcg cggttcagct tgctttcctc gctgtacttg gggtagtcgt aggtgccgtt 60

cttcacgctt tccatgcact cgttgttgca cttgtggtag aactcgaagc agccgttgcc 120

gatctctttg gcgttgttct tcagctggga cttcactttc tcgtacaggt tcttcacgtt 180

gctgtcgtgg aagtccaggg tccgctcgtt cagcagcagg accagcagtt cagccagatc 240

ggtgccgctg ccgccggagc ccatcttctc gatcacgctg ttcaccatgt tggtgatgcc 300

gttgatggcg ttctgggtgg acttctggtc ggcggcgtag ccgctgccct gctcgttctg 360

gtggtggtag ccgtaccacc cgtccaccat gccggtccag ccgccctcga taaagccggc 420

aatggcgccg aacaggcccc gtgtctctct ctgggggatg ttccgcaggc ctgtcaccat 480

ccgcaggccg ctgcccaggt tcacgctgtg ggtcacggtc acgttctttt ccagcacggt 540

atccacggtg tcggtgctgt tgttggcgtg gtagccgatg cagatggtgt cggcgtaggt 600

ggcggtgaag gtgcacagga gcaccagcag cttggccttc at 642

<210> 199

<211> 1104

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 199

atgaaggcca agctgctggt gctcctgtgc accttcaccg ccacctacgc cgacaccatc 60

tgcatcggct accacgccaa caacagcacc gacaccgtgg ataccgtgct ggaaaagaac 120

gtgaccgtga cccacagcgt gaacctgggc agcggcctgc ggatggtgac aggcctgcgg 180

aacatccccc agagagagac acggggcctg ttcggcgcca ttgccggctt tatcgagggc 240

ggctggaccg gcatggtgga cgggtggtac ggctaccacc accagaacga gcagggcagc 300

ggctacgccg ccgaccagaa gtccacccag aacgccatca acggcatcac caacatggtg 360

aacagcgtga tcgagaagat gggctccggc ggcagcggca ccgatctggc tgaactgctg 420

gtcctgctgc tgaacgagcg gaccctggac ttccacgaca gcaacgtgaa gaacctgtac 480

gagaaagtga agtcccagct gaagaacaac gccaaagaga tcggcaacgg ctgcttcgag 540

ttctaccaca agtgcaacaa cgagtgcatg gaaagcgtga agaacggcac ctacgactac 600

cccaagtaca gcgaggaaag caagctgaac cgcgagggag gcatgcaaat ctacgagggc 660

aagctgacag ccgagggcct gagattcggc atcgtggcca gccggttcaa ccacgccctg 720

gtggacagac tggtggaagg cgccatcgac tgcatcgtgc ggcacggcgg cagagaagag 780

gacatcaccc tggtccgcgt gcccggcagc tgggaaattc ctgtggctgc cggcgagctg 840

gcccggaaag aggatatcga cgccgtcatc gccatcggcg tgctgatcag aggcgccacc 900

ccccacttcg actatatcgc cagcgaggtg tccaagggcc tggccaacct gagcctggaa 960

ctgcggaagc ccatcacctt cggagtgatc accgccgaca ccctggaaca ggccatcgag 1020

agagccggca ccaagcacgg caacaaggga tgggaagccg ccctgagcgc catcgagatg 1080

gccaatctgt tcaagagcct gcgc 1104

<210> 200

<211> 368

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 200

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Gly Met Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr Ala

210 215 220

Glu Gly Leu Arg Phe Gly Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala Leu

225 230 235 240

Val Asp Arg Leu Val Glu Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His Gly

245 250 255

Gly Arg Glu Glu Asp Ile Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp Glu

260 265 270

Ile Pro Val Ala Ala Gly Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp Ala

275 280 285

Val Ile Ala Ile Gly Val Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe Asp

290 295 300

Tyr Ile Ala Ser Glu Val Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu Glu

305 310 315 320

Leu Arg Lys Pro Ile Thr Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu Glu

325 330 335

Gln Ala Ile Glu Arg Ala Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp Glu

340 345 350

Ala Ala Leu Ser Ala Ile Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu Arg

355 360 365

<210> 201

<211> 1104

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 201

gcgcaggctc ttgaacagat tggccatctc gatggcgctc agggcggctt cccatccctt 60

gttgccgtgc ttggtgccgg ctctctcgat ggcctgttcc agggtgtcgg cggtgatcac 120

tccgaaggtg atgggcttcc gcagttccag gctcaggttg gccaggccct tggacacctc 180

gctggcgata tagtcgaagt ggggggtggc gcctctgatc agcacgccga tggcgatgac 240

ggcgtcgata tcctctttcc gggccagctc gccggcagcc acaggaattt cccagctgcc 300

gggcacgcgg accagggtga tgtcctcttc tctgccgccg tgccgcacga tgcagtcgat 360

ggcgccttcc accagtctgt ccaccagggc gtggttgaac cggctggcca cgatgccgaa 420

tctcaggccc tcggctgtca gcttgccctc gtagatttgc atgcctccct cgcggttcag 480

cttgctttcc tcgctgtact tggggtagtc gtaggtgccg ttcttcacgc tttccatgca 540

ctcgttgttg cacttgtggt agaactcgaa gcagccgttg ccgatctctt tggcgttgtt 600

cttcagctgg gacttcactt tctcgtacag gttcttcacg ttgctgtcgt ggaagtccag 660

ggtccgctcg ttcagcagca ggaccagcag ttcagccaga tcggtgccgc tgccgccgga 720

gcccatcttc tcgatcacgc tgttcaccat gttggtgatg ccgttgatgg cgttctgggt 780

ggacttctgg tcggcggcgt agccgctgcc ctgctcgttc tggtggtggt agccgtacca 840

cccgtccacc atgccggtcc agccgccctc gataaagccg gcaatggcgc cgaacaggcc 900

ccgtgtctct ctctggggga tgttccgcag gcctgtcacc atccgcaggc cgctgcccag 960

gttcacgctg tgggtcacgg tcacgttctt ttccagcacg gtatccacgg tgtcggtgct 1020

gttgttggcg tggtagccga tgcagatggt gtcggcgtag gtggcggtga aggtgcacag 1080

gagcaccagc agcttggcct tcat 1104

<210> 202

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 202

atgaaggcca agctgctggt gctcctgtgc accttcaccg ccacctacgc cgacaccatc 60

tgcatcggct accacgccaa caacagcacc gacaccgtgg ataccgtgct ggaaaagaac 120

gtgaccgtga cccacagcgt gaacctgggc agcggcctgc ggatggtgac aggcctgcgg 180

aacatccccc agagagagac acggggcctg ttcggcgcca ttgccggctt tatcgagggc 240

ggctggaccg gcatggtgga cgggtggtac ggctaccacc accagaacga gcagggcagc 300

ggctacgccg ccgaccagaa gtccacccag aacgccatca acggcatcac caacatggtg 360

aacagcgtga tcgagaagat gggctccggc ggcagcggca ccgatctggc tgaactgctg 420

gtcctgctgc tgaacgagcg gaccctggac ttccacgaca gcaacgtgaa gaacctgtac 480

gagaaagtga agtcccagct gaagaacaac gccaaagaga tcggcaacgg ctgcttcgag 540

ttctaccaca agtgcaacaa cgagtgcatg gaaagcgtga agaacggcac ctacgactac 600

cccaagtaca gcgaggaaag caagctgaac cgcgagggaa gcggc 645

<210> 203

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 203

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Ser Gly

210 215

<210> 204

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 204

gccgcttccc tcgcggttca gcttgctttc ctcgctgtac ttggggtagt cgtaggtgcc 60

gttcttcacg ctttccatgc actcgttgtt gcacttgtgg tagaactcga agcagccgtt 120

gccgatctct ttggcgttgt tcttcagctg ggacttcact ttctcgtaca ggttcttcac 180

gttgctgtcg tggaagtcca gggtccgctc gttcagcagc aggaccagca gttcagccag 240

atcggtgccg ctgccgccgg agcccatctt ctcgatcacg ctgttcacca tgttggtgat 300

gccgttgatg gcgttctggg tggacttctg gtcggcggcg tagccgctgc cctgctcgtt 360

ctggtggtgg tagccgtacc acccgtccac catgccggtc cagccgccct cgataaagcc 420

ggcaatggcg ccgaacaggc cccgtgtctc tctctggggg atgttccgca ggcctgtcac 480

catccgcagg ccgctgccca ggttcacgct gtgggtcacg gtcacgttct tttccagcac 540

ggtatccacg gtgtcggtgc tgttgttggc gtggtagccg atgcagatgg tgtcggcgta 600

ggtggcggtg aaggtgcaca ggagcaccag cagcttggcc ttcat 645

<210> 205

<211> 1107

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 205

atgaaggcca agctgctggt gctcctgtgc accttcaccg ccacctacgc cgacaccatc 60

tgcatcggct accacgccaa caacagcacc gacaccgtgg ataccgtgct ggaaaagaac 120

gtgaccgtga cccacagcgt gaacctgggc agcggcctgc ggatggtgac aggcctgcgg 180

aacatccccc agagagagac acggggcctg ttcggcgcca ttgccggctt tatcgagggc 240

ggctggaccg gcatggtgga cgggtggtac ggctaccacc accagaacga gcagggcagc 300

ggctacgccg ccgaccagaa gtccacccag aacgccatca acggcatcac caacatggtg 360

aacagcgtga tcgagaagat gggctccggc ggcagcggca ccgatctggc tgaactgctg 420

gtcctgctgc tgaacgagcg gaccctggac ttccacgaca gcaacgtgaa gaacctgtac 480

gagaaagtga agtcccagct gaagaacaac gccaaagaga tcggcaacgg ctgcttcgag 540

ttctaccaca agtgcaacaa cgagtgcatg gaaagcgtga agaacggcac ctacgactac 600

cccaagtaca gcgaggaaag caagctgaac cgcgagggaa gcggcatgca aatctacgag 660

ggcaagctga cagccgaggg cctgagattc ggcatcgtgg ccagccggtt caaccacgcc 720

ctggtggaca gactggtgga aggcgccatc gactgcatcg tgcggcacgg cggcagagaa 780

gaggacatca ccctggtccg cgtgcccggc agctgggaaa ttcctgtggc tgccggcgag 840

ctggcccgga aagaggatat cgacgccgtc atcgccatcg gcgtgctgat cagaggcgcc 900

accccccact tcgactatat cgccagcgag gtgtccaagg gcctggccaa cctgagcctg 960

gaactgcgga agcccatcac cttcggagtg atcaccgccg acaccctgga acaggccatc 1020

gagagagccg gcaccaagca cggcaacaag ggatgggaag ccgccctgag cgccatcgag 1080

atggccaatc tgttcaagag cctgcgc 1107

<210> 206

<211> 369

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 206

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Gly Ser Gly Met Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr

210 215 220

Ala Glu Gly Leu Arg Phe Gly Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala

225 230 235 240

Leu Val Asp Arg Leu Val Glu Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His

245 250 255

Gly Gly Arg Glu Glu Asp Ile Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp

260 265 270

Glu Ile Pro Val Ala Ala Gly Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp

275 280 285

Ala Val Ile Ala Ile Gly Val Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe

290 295 300

Asp Tyr Ile Ala Ser Glu Val Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu

305 310 315 320

Glu Leu Arg Lys Pro Ile Thr Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu

325 330 335

Glu Gln Ala Ile Glu Arg Ala Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp

340 345 350

Glu Ala Ala Leu Ser Ala Ile Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu

355 360 365

Arg

<210> 207

<211> 1107

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 207

gcgcaggctc ttgaacagat tggccatctc gatggcgctc agggcggctt cccatccctt 60

gttgccgtgc ttggtgccgg ctctctcgat ggcctgttcc agggtgtcgg cggtgatcac 120

tccgaaggtg atgggcttcc gcagttccag gctcaggttg gccaggccct tggacacctc 180

gctggcgata tagtcgaagt ggggggtggc gcctctgatc agcacgccga tggcgatgac 240

ggcgtcgata tcctctttcc gggccagctc gccggcagcc acaggaattt cccagctgcc 300

gggcacgcgg accagggtga tgtcctcttc tctgccgccg tgccgcacga tgcagtcgat 360

ggcgccttcc accagtctgt ccaccagggc gtggttgaac cggctggcca cgatgccgaa 420

tctcaggccc tcggctgtca gcttgccctc gtagatttgc atgccgcttc cctcgcggtt 480

cagcttgctt tcctcgctgt acttggggta gtcgtaggtg ccgttcttca cgctttccat 540

gcactcgttg ttgcacttgt ggtagaactc gaagcagccg ttgccgatct ctttggcgtt 600

gttcttcagc tgggacttca ctttctcgta caggttcttc acgttgctgt cgtggaagtc 660

cagggtccgc tcgttcagca gcaggaccag cagttcagcc agatcggtgc cgctgccgcc 720

ggagcccatc ttctcgatca cgctgttcac catgttggtg atgccgttga tggcgttctg 780

ggtggacttc tggtcggcgg cgtagccgct gccctgctcg ttctggtggt ggtagccgta 840

ccacccgtcc accatgccgg tccagccgcc ctcgataaag ccggcaatgg cgccgaacag 900

gccccgtgtc tctctctggg ggatgttccg caggcctgtc accatccgca ggccgctgcc 960

caggttcacg ctgtgggtca cggtcacgtt cttttccagc acggtatcca cggtgtcggt 1020

gctgttgttg gcgtggtagc cgatgcagat ggtgtcggcg taggtggcgg tgaaggtgca 1080

caggagcacc agcagcttgg ccttcat 1107

<210> 208

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 208

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccaa gcatccagag cagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 209

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 209

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 210

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 210

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

gccattgatt gcgttctgtg tagacttctg atcagcggcg tagccgctgc cctgctcatt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctctgctctg gatgcttggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 211

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 211

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccaa gcatccagag cagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaaccagtg gactctgctg ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 212

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 212

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 213

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 213

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

aatggcgtgg tccacaatat tgttgataga ttcggaaata tgctgctcgt gttcgtaagc 240

tttctgaaag atctgggtca ggccctcgaa cttatgttca ggggcgctga ttgaagtcag 300

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ctcggctgcg tgatcaaaca ggaacagccc agcgccgtcc agtgagtgtg tataacacca 420

actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

atggtaaaac tcgaagcatc cattcccgat ttctttggca ttgttcttca gctgggattt 660

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tgtccacccg ccctcaataa accctgcgat agcgccgaac agtcctctgc tctggatgct 960

tgggatgttg cgcagtccgg tgaccatcct cagtccgctg cccagattca ctgagtgggt 1020

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gccgatgcag atagtgtcag cgtaggttgc ggtaaaagta cacagcagga ccagcagttt 1140

ggccttcat 1149

<210> 214

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 214

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 215

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 215

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

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Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

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His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 216

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 216

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

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gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 217

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 217

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 218

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 218

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

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catcctcagt ccgctgccca gattcactga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

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<210> 219

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 219

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca cccactcagt gaatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

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ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa catacaacgc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

atcaagctgc tgaacgaaca ggtgaacaag gagatgcaga gctccaacct gtacatgagt 720

atgtctagtt ggtgttatac acactcactg gacggcgctg ggctgttcct gtttgatcac 780

gcagccgagg aatacgaaca tgcaaagaaa ctgatcattt tcctgaatga gaacaatgtg 840

cccgtccagc tgacttcaat cagcgcccct gaacataagt tcgagggcct gacccagatc 900

tttcagaaag cttacgaaca cgagcagcat atttccgaat ctatcaacaa tattgtggac 960

cacgccatta agagcaaaga tcatgctacc ttcaactttc tgcagtggta cgtggccgag 1020

cagcacgagg aggaggtcct gtttaaggac atcctggata aaatcgaact gattggaaac 1080

gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 220

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 220

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 221

<211> 1151

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 221

rctgacccac tttttctgga cttggcaatg cccttcacat actgatctgc caggtacagg 60

ccatgattct cgtttccaat cagttcgatt ttatccagga tgtccttaaa caggacctcc 120

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ttaatggcgt ggtccacaat attgttgata gattcggaaa tatgctgctc gtgttcgtaa 240

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caactagaca tactcatgta caggttggag ctctgcatct ccttgttcac ctgttcgttc 480

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atgacagaat tcaccatgtt agtaatgcca ttgattgcgt tctgtgtaga cttctgatca 840

gcggcgtagc cgctgccctg ctcattctga tggtggtagc cgtaccaccc gtccaccatt 900

cctgtccacc cgccctcaat aaaccctgcg atagcgccga acagtcctct tgtttcccgc 960

tgtgggatgt tgcgcagtcc ggtgaccatc ctcagtccgc tgcccagatt cactgagtgg 1020

gtgacagtca cgttcttctc caggacggta tccactgtgt cggtggagtt gtttgcgtga 1080

tagccgatgc agatagtgtc agcgtaggtt gcggtaaaag tacacagcag gaccagcagt 1140

ttggccttca t 1151

<210> 222

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 222

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

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gtgactgtca ccaactcaac taatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

gggtggacag gaatggtgga cgggtggtac ggctaccacc atcagaatga gcagggcagc 300

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aattctgtca tcgaaaaaat gggcagcgga ggctccggaa cagacctggc tgagctgctg 420

gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgac 645

<210> 235

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 235

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr Asn Ser Thr Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 236

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 236

gtcaattttc tctcgattca gcttactctc ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc 60

gttcttcaca gactccatac attcattgtt gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg ggatttgacc ttctcataca gattcttcac 180

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gtctgttccg gagcctccgc tgcccatttt ttcgatgaca gaattcacca tgttagtaat 300

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tgcgatagcg ccgaacagtc ctcttgtttc ccgctgtggg atgttgcgca gtccggtgac 480

catcctcagt ccgctgccca gattagttga gttggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta 600

ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 237

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 237

atgaaggcca aactgctggt cctgctgtgt acttttaccg caacctacgc tgacactatc 60

tgcatcggct atcacgcaaa caactccacc gacacagtgg ataccgtcct ggagaagaac 120

gtgactgtca ccaactcaac taatctgggc agcggactga ggatggtcac cggactgcgc 180

aacatcccac agcgggaaac aagaggactg ttcggcgcta tcgcagggtt tattgagggc 240

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ggctacgccg ctgatcagaa gtctacacag aacgcaatca atggcattac taacatggtg 360

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gtgctgctgc tgaacgagcg gactctggat ttccacgata gcaacgtgaa gaatctgtat 480

gagaaggtca aatcccagct gaagaacaat gccaaagaaa tcgggaatgg atgcttcgag 540

ttttaccata agtgcaacaa tgaatgtatg gagtctgtga agaacggcac ttacgactat 600

cccaaatatt ctgaagagag taagctgaat cgagagaaaa ttgacagtgg gggcgacatc 660

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gagaatcatg gcctgtacct ggcagatcag tatgtgaagg gcattgccaa gtccagaaaa 1140

agtgggtca 1149

<210> 238

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 238

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr Asn Ser Thr Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

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Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 239

<211> 1149

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 239

tgacccactt tttctggact tggcaatgcc cttcacatac tgatctgcca ggtacaggcc 60

atgattctcg tttccaatca gttcgatttt atccaggatg tccttaaaca ggacctcctc 120

ctcgtgctgc tcggccacgt accactgcag aaagttgaag gtagcatgat ctttgctctt 180

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actagacata ctcatgtaca ggttggagct ctgcatctcc ttgttcacct gttcgttcag 480

cagcttgatg atgtcgcccc cactgtcaat tttctctcga ttcagcttac tctcttcaga 540

atatttggga tagtcgtaag tgccgttctt cacagactcc atacattcat tgttgcactt 600

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ggccttcat 1149

<210> 240

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 240

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

50 55 60

Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

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Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Leu

130 135 140

Asn Gln Phe Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

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Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

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Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 241

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 241

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

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Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Leu

130 135 140

Asn Gln Phe Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

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Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

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Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

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His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

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Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

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<210> 242

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 242

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

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Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

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Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

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Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

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Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 243

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 243

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

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Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

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Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

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Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

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Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

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Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Asn Gly Thr Gly Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

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Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

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Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

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Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

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275 280 285

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Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

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Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

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<210> 244

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 244

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

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Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Gly Asn Gly Thr Gly Ala Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

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Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

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Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

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Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 245

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 245

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

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Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

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Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

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Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

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275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

305 310 315 320

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 246

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 246

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

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Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

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Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

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Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

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100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

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Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 247

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 247

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

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Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Ser

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Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

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Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

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Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Asn Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

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<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 248

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210 215

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<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 249

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<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 250

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210 215

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<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

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370 375 380

<210> 252

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 252

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210

<210> 253

<211> 368

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 253

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<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 254

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210 215

<210> 255

<211> 369

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 255

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Arg

<210> 256

<211> 211

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 256

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

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210

<210> 257

<211> 364

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 257

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Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

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275 280 285

Gly Val Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe Asp Tyr Ile Ala Ser

290 295 300

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Ile Thr Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu Glu Gln Ala Ile Glu

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<210> 258

<211> 212

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 258

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145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

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Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

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210

<210> 259

<211> 365

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 259

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

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Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

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Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

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Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

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Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Gly Ser Gly Gln Ile Tyr Glu Gly Lys Leu Thr Ala Glu Gly Leu

210 215 220

Arg Phe Gly Ile Val Ala Ser Arg Phe Asn His Ala Leu Val Asp Arg

225 230 235 240

Leu Val Glu Gly Ala Ile Asp Cys Ile Val Arg His Gly Gly Arg Glu

245 250 255

Glu Asp Ile Thr Leu Val Arg Val Pro Gly Ser Trp Glu Ile Pro Val

260 265 270

Ala Ala Gly Glu Leu Ala Arg Lys Glu Asp Ile Asp Ala Val Ile Ala

275 280 285

Ile Gly Val Leu Ile Arg Gly Ala Thr Pro His Phe Asp Tyr Ile Ala

290 295 300

Ser Glu Val Ser Lys Gly Leu Ala Asn Leu Ser Leu Glu Leu Arg Lys

305 310 315 320

Pro Ile Thr Phe Gly Val Ile Thr Ala Asp Thr Leu Glu Gln Ala Ile

325 330 335

Glu Arg Ala Gly Thr Lys His Gly Asn Lys Gly Trp Glu Ala Ala Leu

340 345 350

Ser Ala Ile Glu Met Ala Asn Leu Phe Lys Ser Leu Arg

355 360 365

<210> 260

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(645)

<400> 260

atg aag gcc aaa ctg ctg gtc ctg ctg tgt act ttt acc gca acc tac 48

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

gct gac act atc tgc atc ggc tat cac gca aac aac tcc acc gac aca 96

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

gtg gat acc gtc ctg gag aag aac gtg act gtc acc cac tca gtg aat 144

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

ctg ggc agc gga ctg agg atg gtc acc gga ctg cgc aac atc cca cag 192

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

cgg gaa aca aga gga ctg ttc ggc gct atc gca ggg ttt att gag ggc 240

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

ggg tgg aca gga atg gtg gac ggg tgg tac ggc tac cac cat cag aat 288

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

gag cag ggc agc ggc tac gcc gct gat cag aag tct aca cag aac gca 336

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

atc aat ggc att act aac atg gtg aat tct gtc atc gaa aaa atg ggc 384

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

agc gga ggc tcc gga aca gac ctg gct gag ctg ctg gtg ctg ctg ctg 432

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

aac cag tgg act ctg ctg ttc cac gat agc aac gtg aag aat ctg tat 480

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

gag aag gtc aaa tcc cag ctg aag aac aat gcc aaa gaa atc ggg aat 528

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

gga tgc ttc gag ttt tac cat aag tgc aac aat gaa tgt atg gag tct 576

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

gtg aag aac ggc act tac gac tat ccc aaa tat tct gaa gag agt aag 624

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

ctg aat cga gag aaa att gac 645

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 261

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 261

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp

210 215

<210> 262

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 262

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gttgctatcg tggaacagca gagtccactg gttcagcagc agcaccagca gctcagccag 240

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ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag cagtttggcc ttcat 645

<210> 263

<211> 1155

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1155)

<400> 263

atg aag gcc aaa ctg ctg gtc ctg ctg tgt act ttt acc gca acc tac 48

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

gct gac act atc tgc atc ggc tat cac gca aac aac tcc acc gac aca 96

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

gtg gat acc gtc ctg gag aag aac gtg act gtc acc cac tca gtg aat 144

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

ctg ggc agc gga ctg agg atg gtc acc gga ctg cgc aac atc cca cag 192

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Met Val Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

cgg gaa aca aga gga ctg ttc ggc gct atc gca ggg ttt att gag ggc 240

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

ggg tgg aca gga atg gtg gac ggg tgg tac ggc tac cac cat cag aat 288

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

gag cag ggc agc ggc tac gcc gct gat cag aag tct aca cag aac gca 336

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

atc aat ggc att act aac atg gtg aat tct gtc atc gaa aaa atg ggc 384

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

agc gga ggc tcc gga aca gac ctg gct gag ctg ctg gtg ctg ctg ctg 432

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130 135 140

aac cag tgg act ctg ctg ttc cac gat agc aac gtg aag aat ctg tat 480

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145 150 155 160

gag aag gtc aaa tcc cag ctg aag aac aat gcc aaa gaa atc ggg aat 528

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

gga tgc ttc gag ttt tac cat aag tgc aac aat gaa tgt atg gag tct 576

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

gtg aag aac ggc act tac gac tat ccc aaa tat tct gaa gag agt aag 624

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

ctg aat cga gag aaa att gac agt ggg ggc gac atc atc aag ctg ctg 672

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

aac gaa cag gtg aac aag gag atg cag agc tcc aac ctg tac atg agt 720

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

225 230 235 240

atg tct agt tgg tgt tat aca cac tca ctg gac ggc gct ggg ctg ttc 768

Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

ctg ttt gat cac gca gcc gag gaa tac gaa cat gca aag aaa ctg atc 816

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

att ttc ctg aat gag aac aat gtg ccc gtc cag ctg act tca atc agc 864

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

gcc cct gaa cat aag ttc gag ggc ctg acc cag atc ttt cag aaa gct 912

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

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tac gaa cac gag cag cat att tcc gaa tct atc aac aat att gtg gac 960

Tyr Glu His Glu Gln His Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp

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cac gcc att aag agc aaa gat cat gct acc ttc aac ttt ctg cag tgg 1008

His Ala Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp

325 330 335

tac gtg gcc gag cag cac gag gag gag gtc ctg ttt aag gac atc ctg 1056

Tyr Val Ala Glu Gln His Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu

340 345 350

gat aaa atc gaa ctg att gga aac gag aat cat ggc ctg tac ctg gca 1104

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

gat cag tat gtg aag ggc att gcc aag tcc aga aaa agt ggg tca tga 1152

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

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tga 1155

<210> 264

<211> 383

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 264

Met Lys Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Cys Thr Phe Thr Ala Thr Tyr

1 5 10 15

Ala Asp Thr Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

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Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

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Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

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Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asn Gly Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

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Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

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Asn Gln Trp Thr Leu Leu Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

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Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asn Asn Glu Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ser Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Ser Gly Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu

210 215 220

Asn Glu Gln Val Asn Lys Glu Met Gln Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser

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Met Ser Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe

245 250 255

Leu Phe Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile

260 265 270

Ile Phe Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser

275 280 285

Ala Pro Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala

290 295 300

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325 330 335

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340 345 350

Asp Lys Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala

355 360 365

Asp Gln Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser Gly Ser

370 375 380

<210> 265

<211> 1155

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 265

tcatcatgac ccactttttc tggacttggc aatgcccttc acatactgat ctgccaggta 60

caggccatga ttctcgtttc caatcagttc gattttatcc aggatgtcct taaacaggac 120

ctcctcctcg tgctgctcgg ccacgtacca ctgcagaaag ttgaaggtag catgatcttt 180

gctcttaatg gcgtggtcca caatattgtt gatagattcg gaaatatgct gctcgtgttc 240

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gtattcctcg gctgcgtgat caaacaggaa cagcccagcg ccgtccagtg agtgtgtata 420

acaccaacta gacatactca tgtacaggtt ggagctctgc atctccttgt tcacctgttc 480

gttcagcagc ttgatgatgt cgcccccact gtcaattttc tctcgattca gcttactctc 540

ttcagaatat ttgggatagt cgtaagtgcc gttcttcaca gactccatac attcattgtt 600

gcacttatgg taaaactcga agcatccatt cccgatttct ttggcattgt tcttcagctg 660

ggatttgacc ttctcataca gattcttcac gttgctatcg tggaacagca gagtccactg 720

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gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac ggtatccact gtgtcggtgg agttgtttgc 1080

gtgatagccg atgcagatag tgtcagcgta ggttgcggta aaagtacaca gcaggaccag 1140

cagtttggcc ttcat 1155

<210> 266

<211> 5579

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 266

tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60

cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120

ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180

accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcagattgg 240

ctattggcca ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg 300

tccaacatta ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac 360

ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg 420

cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc 480

catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac 540

tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa 600

tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac 660

ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta 720

catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga 780

cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa 840

ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag 900

agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca 960

tagaagacac cgggaccgat ccagcctcca tcggctcgca tctctccttc acgcgcccgc 1020

cgccctacct gaggccgcca tccacgccgg ttgagtcgcg ttctgccgcc tcccgcctgt 1080

ggtgcctcct gaactgcgtc cgccgtctag gtaagtttaa agctcaggtc gagaccgggc 1140

ctttgtccgg cgctcccttg gagcctacct agactcagcc ggctctccac gctttgcctg 1200

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ggtcttttct gcagtcaccg tcgtcgacac gtgtgatcag atatcgcggc cgctctagag 1380

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ctgacactat ctgcatcggc tatcacgcaa acaactccac cgacacagtg gataccgtcc 1500

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ctaacatggt gaattctgtc atcgaaaaaa tgggcagcgg aggctccgga acagacctgg 1800

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agaatctgta tgagaaggtc aaatcccagc tgaagaacaa tgccaaagaa atcgggaatg 1920

gatgcttcga gttttaccat aagtgcaaca atgaatgtat ggagtctgtg aagaacggca 1980

cttacgacta tcccaaatat tctgaagaga gtaagctgaa tcgagagaaa attgacagtg 2040

ggggcgacat catcaagctg ctgaacgaac aggtgaacaa ggagatgcag agctccaacc 2100

tgtacatgag tatgtctagt tggtgttata cacactcact ggacggcgct gggctgttcc 2160

tgtttgatca cgcagccgag gaatacgaac atgcaaagaa actgatcatt ttcctgaatg 2220

agaacaatgt gcccgtccag ctgacttcaa tcagcgcccc tgaacataag ttcgagggcc 2280

tgacccagat ctttcagaaa gcttacgaac acgagcagca tatttccgaa tctatcaaca 2340

atattgtgga ccacgccatt aagagcaaag atcatgctac cttcaacttt ctgcagtggt 2400

acgtggccga gcagcacgag gaggaggtcc tgtttaagga catcctggat aaaatcgaac 2460

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tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg aggattggga agacaatagc 2760

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tcctcctggg ccagaaagaa gcaggcacat ccccttctct gtgacacacc ctgtccacgc 2880

ccctggttct tagttccagc cccactcata ggacactcat agctcaggag ggctccgcct 2940

tcaatcccac ccgctaaagt acttggagcg gtctctccct ccctcatcag cccaccaaac 3000

caaacctagc ctccaagagt gggaagaaat taaagcaaga taggctatta agtgcagagg 3060

gagagaaaat gcctccaaca tgtgaggaag taatgagaga aatcatagaa ttttaaggcc 3120

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cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca 3240

cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga 3300

accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc 3360

acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg 3420

cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat 3480

acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt 3540

atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc 3600

agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg 3660

acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg 3720

gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg 3780

gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg 3840

gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca 3900

gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga 3960

acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga 4020

tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt 4080

ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt 4140

catccatagt tgcctgactc gggggggggg ggcgctgagg tctgcctcgt gaagaaggtg 4200

ttgctgactc ataccaggcc tgaatcgccc catcatccag ccagaaagtg agggagccac 4260

ggttgatgag agctttgttg taggtggacc agttggtgat tttgaacttt tgctttgcca 4320

cggaacggtc tgcgttgtcg ggaagatgcg tgatctgatc cttcaactca gcaaaagttc 4380

gatttattca acaaagccgc cgtcccgtca agtcagcgta atgctctgcc agtgttacaa 4440

ccaattaacc aattctgatt agaaaaactc atcgagcatc aaatgaaact gcaatttatt 4500

catatcagga ttatcaatac catatttttg aaaaagccgt ttctgtaatg aaggagaaaa 4560

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atcaccatga gtgacgactg aatccggtga gaatggcaaa agcttatgca tttctttcca 4740

gacttgttca acaggccagc cattacgctc gtcatcaaaa tcactcgcat caaccaaacc 4800

gttattcatt cgtgattgcg cctgagcgag acgaaatacg cgatcgctgt taaaaggaca 4860

attacaaaca ggaatcgaat gcaaccggcg caggaacact gccagcgcat caacaatatt 4920

ttcacctgaa tcaggatatt cttctaatac ctggaatgct gttttcccgg ggatcgcagt 4980

ggtgagtaac catgcatcat caggagtacg gataaaatgc ttgatggtcg gaagaggcat 5040

aaattccgtc agccagttta gtctgaccat ctcatctgta acatcattgg caacgctacc 5100

tttgccatgt ttcagaaaca actctggcgc atcgggcttc ccatacaatc gatagattgt 5160

cgcacctgat tgcccgacat tatcgcgagc ccatttatac ccatataaat cagcatccat 5220

gttggaattt aatcgcggcc tcgagcaaga cgtttcccgt tgaatatggc tcataacacc 5280

ccttgtatta ctgtttatgt aagcagacag ttttattgtt catgatgata tatttttatc 5340

ttgtgcaatg taacatcaga gattttgaga cacaacgtgg ctttcccccc ccccccatta 5400

ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa 5460

aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga 5520

aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtc 5579

<210> 267

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(645)

<400> 267

atg aag gca atc ctg gtc gtc ctg ctg tat act ttc gct acc gct aac 48

Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Ala Thr Ala Asn

1 5 10 15

gct gac acc ctg tgc atc ggc tat cac gct aac aac tca acc gac aca 96

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

gtg gat act gtc ctg gag aag aac gtg act gtc acc cac tct gtg aat 144

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

ctg ggc agt gga ctg agg ctg gca act gga ctg cga aac atc cca cag 192

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

cgg gaa acc aga gga ctg ttc ggc gct atc gca ggg ttt att gag ggc 240

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

ggg tgg aca gga atg gtg gac ggg tgg tac ggc tac cac cat cag aac 288

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

gag cag gga tca ggc tac gcc gct gac ctg aag agc aca cag aat gca 336

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

atc gat gaa att act aac atg gtg aat tcc gtc atc gag aaa atg ggc 384

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

agc gga ggc tcc gga acc gac ctg gca gaa ctg ctg gtg ctg ctg ctg 432

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

aac cag tgg aca ctg ctg tac cac gat agt aac gtg aag aat ctg tat 480

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

gag aaa gtc cga tca cag ctg aag aac aat gct aaa gaa atc ggg aat 528

Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

gga tgc ttc gag ttt tac cat aag tgc gac aac acc tgt atg gag agc 576

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser

180 185 190

gtg aaa aat ggc aca tac gat tat ccc aag tat tcc gag gaa gcc aaa 624

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys

195 200 205

ctg aac aga gag gaa att gac 645

Leu Asn Arg Glu Glu Ile Asp

210 215

<210> 268

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 268

Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Ala Thr Ala Asn

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Ser Gly Thr Asp Leu Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Leu

130 135 140

Asn Gln Trp Thr Leu Leu Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr

145 150 155 160

Glu Lys Val Arg Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn

165 170 175

Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser

180 185 190

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys

195 200 205

Leu Asn Arg Glu Glu Ile Asp

210 215

<210> 269

<211> 645

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 269

gtcaatttcc tctctgttca gtttggcttc ctcggaatac ttgggataat cgtatgtgcc 60

atttttcacg ctctccatac aggtgttgtc gcacttatgg taaaactcga agcatccatt 120

cccgatttct ttagcattgt tcttcagctg tgatcggact ttctcataca gattcttcac 180

gttactatcg tggtacagca gtgtccactg gttcagcagc agcaccagca gttctgccag 240

gtcggttccg gagcctccgc tgcccatttt ctcgatgacg gaattcacca tgttagtaat 300

ttcatcgatt gcattctgtg tgctcttcag gtcagcggcg tagcctgatc cctgctcgtt 360

ctgatggtgg tagccgtacc acccgtccac cattcctgtc cacccgccct caataaaccc 420

tgcgatagcg ccgaacagtc ctctggtttc ccgctgtggg atgtttcgca gtccagttgc 480

cagcctcagt ccactgccca gattcacaga gtgggtgaca gtcacgttct tctccaggac 540

agtatccact gtgtcggttg agttgttagc gtgatagccg atgcacaggg tgtcagcgtt 600

agcggtagcg aaagtataca gcaggacgac caggattgcc ttcat 645

<210> 270

<211> 1155

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1155)

<400> 270

atg aag gca atc ctg gtc gtc ctg ctg tat act ttc gct acc gct aac 48

Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Ala Thr Ala Asn

1 5 10 15

gct gac acc ctg tgc atc ggc tat cac gct aac aac tca acc gac aca 96

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

gtg gat act gtc ctg gag aag aac gtg act gtc acc cac tct gtg aat 144

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

ctg ggc agt gga ctg agg ctg gca act gga ctg cga aac atc cca cag 192

Leu Gly Ser Gly Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ile Pro Gln

50 55 60

cgg gaa acc aga gga ctg ttc ggc gct atc gca ggg ttt att gag ggc 240

Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly

65 70 75 80

ggg tgg aca gga atg gtg gac ggg tgg tac ggc tac cac cat cag aac 288

Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn

85 90 95

gag cag gga tca ggc tac gcc gct gac ctg aag agc aca cag aat gca 336

Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala

100 105 110

atc gat gaa att act aac atg gtg aat tcc gtc atc gag aaa atg ggc 384

Ile Asp Glu Ile Thr Asn Met Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Gly

115 120 125

agc gga ggc tcc gga acc gac ctg gca gaa ctg ctg gtg ctg ctg ctg 432