一种人单个核细胞重编程为诱导多能干细胞的方法与流程

文档序号:12457223阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于人单个核细胞重编程为诱导多能干细胞的基质胶,其特征在于:它是羊膜间充质干细胞的裂解物。

2.根据权利要求1所述的基质胶,其特征在于:所述基质胶按照如下方法制备:

(1)取羊膜间充质干细胞,培养至汇合度大于90%时,裂解;

(2)加入固定液固定,然后去除固定液,晾干,即可。

3.根据权利要求2所述的基质胶,其特征在于:步骤(1)中,裂解前后用PBS洗涤;和/或,裂解采用的裂解液是RIPA裂解液。

4.根据权利要求3所述的基质胶,其特征在于:裂解液是浓度为1~10%(v/v)的RIPA裂解液,优选裂解液是浓度为5~10%(v/v)的RIPA裂解液;和/或裂解的时间为5-6min。

5.根据权利要求2所述的基质胶,其特征在于:步骤(1)中,所述羊膜间充质干细胞为人羊膜间充质干细胞。

6.根据权利要求2所述的基质胶,其特征在于:步骤(2)中,所述固定液是浓度为80%(v/v)的甲醇;和/或,固定的时间为10min。

7.一种将人单个核细胞诱导重编程为诱导多能干细胞的方法,其特征在于:它是以权利要求1~6任意一项所述的基质胶为基质胶诱导的。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:步骤如下:

a、取人单个核细胞,采用红系培养基培养,转染Episomal质粒;所述红系培养基是以H3000培养基为基础培养基,添加了终浓度为100ng/ml的SCF、终浓度为10ng/ml的IL-3、终浓度为2U/ml的EPO、终浓度为40ng/ml的IGF-1、终浓度为1uM的Hydrocortisone;

b、将转染后的细胞转入权利要求1~6任意一项所述的基质胶中,加入培养基,诱导培养,即可。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:步骤a中,所述人单个核细胞是脐带血单个核细胞或者外周血单个核细胞;采用红系培养基培养8~12天。

10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:步骤b中,诱导培养时,先添加红系培养基培养,第2天每孔补加红系培养基1ml,第3天每孔补加ReproTeSR培养基1ml,第7天更换ReproTeSR培养基,此后每天换液;所述红系培养基是以H3000培养基为基础培养基,添加了终浓度为100ng/ml的SCF、终浓度为10ng/ml的IL-3、终浓度为2U/ml的EPO、终浓度为40ng/ml的IGF-1、终浓度为1uM的Hydrocortisone;

和/或,步骤b中,诱导培养的时间为14-20天。

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