本发明涉及IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽及其应用，具体涉及具有促进IL-2诱导的T细胞激酶活性，治疗恶性肿瘤的多肽。
背景技术：
IL-2诱导的T细胞激酶（Itk）是非受体性酪氨酸激酶Tec激酶家族中的一员，它主要表达于人的T细胞，在T细胞受体(TCR)及趋化因子受体信号转导通路中起着重要作用。Itk通过调节磷脂酶C-(PLC-7)活化、钙动员、转录因子表达及肌钙蛋白重组等分子机制，Itk影响着T细胞，尤其Th2细胞的发育、分化及功能。研究发现，Itk缺陷T 细胞表现出多种发育及功能的缺陷，包括胸腺细胞的阳性选择受损，CD4 T／CD8 T细胞比率失衡及IL-2产物下降，细胞增殖成熟障碍等，最终导致Ihk缺陷T细胞死亡。可见，IL-2诱导的T细胞激酶（Itk）可以促进T细胞增殖。
T细胞受体(TCR)增殖和活化可以促进肿瘤免疫，调节细胞因子产生，细胞存活，增殖和分化，从而达到肿瘤免疫治疗的作用。由此可见，促进IL-2诱导的T细胞激酶可以增强T细胞受体(TCR)的免疫功能，从而提供对肿瘤细胞的免疫作用。因此，IL-2诱导的T细胞激酶可以成为抗肿瘤的靶点。
本发明中的IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽已证明在结肠癌病中有效，具有在其他肿瘤模型中开发的前景。
目前，没有成熟开发的淋巴细胞蛋白酪氨酸激酶激动剂多肽问世，用于治疗恶性肿瘤。
技术实现要素：
发明目的
本发明提供全新的序列，该序列为IL-2诱导的T细胞激酶激动剂，对恶性肿瘤具有很好的疗效。
技术方案
IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽，其特征在于其序列为SEQ ID NO：1。
IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽在治疗恶性肿瘤，如结肠癌和胰腺癌药物中的应用。
有益效果
利用固相合成法化学合成IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可体外促进IL-2诱导的T细胞激酶活性，治疗恶性肿瘤，如结肠癌。我们发现的IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽可以抑制结肠癌细胞和胰腺癌细胞增殖活力，同时可以抑制血管内皮细胞的迁移。在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。
具体实施方式
实施例1
IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽对体外培养人结肠癌细胞的生长和存活IC50。
采用 MTT 比色法。将对数生长的人结肠癌细胞，以 1.0×105加入 96 孔培养板中，培养 24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽(上海生工合成)和阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h后，每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶标仪 620nm 处测定吸光度 A 值，按公式人结肠癌细胞生长抑制率＝（1-实验组吸光值/对照组吸光值）×100％。计算出实验药物的 IC50 为5.43μM。
实施例2
IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽对体外培养人胰腺癌细胞的生长和存活IC50。
采用 MTT 比色法。将对数生长的人胰腺癌细胞，以 1.0×105加入 96 孔培养板中，培养 24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽(上海生工合成)和阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h后，每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶标仪 620nm 处测定吸光度 A 值，按公式人胰腺癌细胞生长抑制率＝（1-实验组吸光值/对照组吸光值）×100％。计算出实验药物的 IC50 为10.54μM。
实施例3
IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽对人血管内皮细胞的作用。
采用划痕实验。先用marker笔在24孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔穿过3条线；将成对数生长的血管内皮细胞，以 1.0×105加入24孔培养板中，培养 24h。第二天用10μl枪头比着直尺，垂直于背后的横线划痕，以划痕和背后横线的交叉点为固定观察位点；实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂，每孔设五个复孔；放入37℃、5%CO2培养箱，培养。按0，36小时，拍照；测量0， 36h划痕宽度。以不同的时间点，记录每孔三个固定位置处划痕宽度的变化，即为细胞迁移距离。按照公式计算迁移率（migration rate，MR）：迁移率（MR）＝（实验第n小时的划痕宽度－实验第0小时的划痕）宽度×100%/实验第0小时的划痕宽度。结果：2μM/mL阳性药的迁移率为32%，2，4，8，μM/mL多肽分别迁移率为62%，42%，27%。
随IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽浓度增加，迁移抑制率逐渐下降，说明IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽能够抑制人血管内皮细胞迁移。
实施例4
用肿瘤模型检测IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽的体内活力。
建立结肠癌肿瘤模型，阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂， 实验组多肽(上海生工合成)设3个剂量：5、10、20 mg/Kg。21天后，观察裸鼠存活数量，计算存活率。结果显示，IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽可有效地保护荷瘤裸鼠，提高小鼠的生存率，生存率达到76.1%。
SEQUENCE LISTING
<110> 苏州普罗达生物科技有限公司
<120> IL-2诱导的T细胞激酶激动剂多肽及其应用
<130>
<160> 1
<170> Patent In version 3.3
<210> 1
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Lys Leu Leu Leu Asp Thr Gly Lys Glu Gly Ala Phe Met Val Arg Asp
1 5 10 15
Ser Arg Thr Ala Gly Thr Tyr Thr Val Ser Val Phe Thr Lys Ala Val
20 25 30
Val Ser Glu Asn Asn Pro Cys Ile
35 40