一种O型口蹄疫病毒人工重组抗原及其制备与应用的制作方法

文档序号:11124277阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种O型口蹄疫病毒人工重组抗原,其氨基酸序列包含如Seq ID No.4所示的肽段。

2.根据权利要求1所述的O型口蹄疫病毒人工重组抗原,其氨基酸序列如Seq ID No.5所示。

3.编码权利要求1或2所述的O型口蹄疫病毒人工重组抗原的基因片段。

4.表达权利要求1或2所述的O型口蹄疫病毒人工重组抗原的重组表达载体,其特征在于,包含编码Seq ID No.4所示的肽段的核苷酸序列。

5.一种转化体,其特征在于,包含权利要求4所述的重组表达载体。

6.权利要求1或2所述的O型口蹄疫病毒人工重组抗原的制备方法,其特征在于,包括:

将权利要求4所述的重组表达载体转化宿主细胞获得工程菌,进行工程菌培养、诱导表达获得重组蛋白。

7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述重组表达载体为PGEX-20T-VPg1;

所述宿主细胞为大肠杆菌ER2566菌株;

所述培养指,用添加了100μg/mL AMP的LB培养液在37℃下振荡培养所述转化后的宿主细胞;

所述诱导表达指,在所述培养液OD450=0.6-0.8时,加入终浓度为1mmol/L的IPTG。

8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,还包括对工程菌的诱导表达产物进行如下纯化步骤:

(1)超声破碎

8000g离心所述工程菌10min,弃上清收集沉淀;所述沉淀用粗提缓冲液悬浮,用超声波破碎处理,16000g离心20min,取上清弃沉淀;

所述粗提缓冲液为0.05mol/L pH8.5Tris-HCl缓冲液;

(2)粗提层析

将所述上清以16ml/min流速穿过DEAE-FF柱;上样完毕后用粗提缓冲液冲洗上样峰至基准线;用粗提洗脱液冲洗柱子到出峰,收集洗脱峰;

所述DEAE-FF柱在使用前先用所述粗提缓冲液平衡10个柱床体积;

所述粗提洗脱液为0.02mol/L pH6.8磷酸盐缓冲液;

(3)精提层析

将上一步中收集的样品用精提缓冲液3倍稀释后以16ml/min流速穿过CM-FF柱;上样完毕后用精提缓冲液冲洗上样峰至基准线;用精提洗脱液冲洗柱子到出峰,收集洗脱峰;

所述精提缓冲液为0.05mol/L pH5.5醋酸盐缓冲液;

所述CM-FF柱在使用前先用所述精提缓冲液平衡15个柱床体积;

所述精提洗脱液为0.1mol/L氯化钠溶液;

(4)样品透析

精提层析中收集的样品用样品保存缓冲液以内外体积1:20的比例进行透析,每隔4h换透析液一次,共换透析液3次,然后用0.22μ的微孔滤膜除菌过滤,获得的所述重组抗原-20℃保存;

所述样品保存缓冲液为0.02mol/L pH8.0磷酸盐缓冲液。

9.用于检测O型口蹄疫病毒和/或鉴别O型口蹄疫病毒自然感染动物和疫苗免疫动物的试剂盒,其特征在于,包括:

权利要求1或2所述的O型口蹄疫病毒重组抗原;和/或

权利要求3所述的核苷酸序列;和/或

权利要求4所述的重组表达载体;和/或

权利要求5所述的转化体。

10.根据权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述O型口蹄疫病毒重组抗原的工作浓度为0.5μg/mL-5μg/mL。

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