本发明涉及环糊精加工领域，特别涉及一种麦芽糖-β环糊精的纯化方法。
（二）
背景技术：
环糊精是由环糊精糖基转移酶作用淀粉产生的α-1,4糖苷键连接而成的环状低聚糖。环糊精具有独特空腔结构，使其可以与很多客体分子通过分子间相互作用发生包合，例如有机分子、无机化合物以及稀有气体等，从而形成了主客体的复合物。环糊精可以形成主客体复合物的性质，可以广泛地应用于制药、化工、食品等行业。含有6、7和8个葡萄糖残基的环糊精分别称之为α-，β-和γ-环糊精。β-环糊精因其包合能力强，生产工艺简单，成本低廉，是目前工业上唯一大量生产并广泛应用的产品。但是β-环糊精一般溶解性较小（25℃，1.8g/100mL H2O），这就大大限制了其应用范围。
麦芽糖-β环糊精是环糊精的衍生物，在β环糊精分子第6位碳原子的羟基上偶联1个麦芽糖残基的分支环糊精，其水溶性（25℃，151g/100mL H2O）大大高于其对应的β-环糊精100多倍，并可溶解许多油类物质；同时生物安全性和利用度高。因此，麦芽糖基β-环糊精应用范围更广，更具有应用前途，前景广阔。麦芽糖-β环糊精合成主要采用普鲁兰酶法合成。在酶反应体系中，主要的原料为麦芽糖与β环糊精，通过普鲁兰酶的反向合成，反应体系最终含有麦芽糖、β环糊精及麦芽糖-β环糊精，反应体系呈高粘度、半固态，此外麦芽糖-β环糊精与β环糊精结构相似，分子量相近，导致麦芽糖-β环糊精的纯化十分困难。
（三）
技术实现要素：
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种步骤简单、产品纯度高的麦芽糖-β环糊精的纯化方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种麦芽糖-β环糊精的纯化方法，以普鲁兰酶的逆向合成麦芽糖-β环糊精的反应溶液为原料，包括如下步骤：
（1）将反应溶液稀释；
（2）将稀释后的溶液进行纳滤处理，之后加纯水，继续纳滤处理，得到纳滤后的浓缩液；
（3）以纳滤后浓缩液为原料，进行模拟移动床纯化，模拟移动床色谱的固定相采用葡聚糖凝胶G-15，流动相采用乙醇与水的混合溶液；模拟移动床色谱系统的操作温度为10-20℃，进样液流速为10-40mL/min，洗脱液流速为20-80mL/min，萃余液流速为10-40mL/min，萃取液流速为20-80mL/min，切换时间为15-45min，麦芽糖-β环糊精在萃余液中，收集萃余液；
（4）对萃余液进行浓缩、干燥，得到产品。
本发明通过构建纳滤-模拟移动床分离纯化系统，可以有效地去除反应体系当中的麦芽糖与β-环糊精，提供了一种工业化纯化麦芽糖-β环糊精的方法。
本发明的更优技术方案为：
步骤（1）中，将反应溶液稀释至固形物含量为10-20%。
步骤（2）中，将稀释的反应溶液在40-60℃、压力1.5-2.0MPa、纳滤膜为300-500的条件下，进行纳滤处理，当浓缩液体积为原液体积的1/4-1/6时，向浓缩液中加入与滤过液体积相同的纯水，继续进行纳滤处理，如此循环2-3次。
步骤（3）中，乙醇与水的体积比为10-20:80-90，模拟移动床由8-16跟色谱柱组成，色谱柱分四个区域，每区由2-4支相同的色谱柱串联。
步骤（4）中，在40-60℃、压力0.8-1.0MPa、纳滤膜为300-500的条件下，对萃余液进行纳滤浓缩去除水，将其体积浓缩至原液体积的1/4-1/6，此时结束操作；将浓缩的萃余液进行冷冻干燥，冻干产品中麦芽糖-β环糊精纯度超过98%。
本发明提供的麦芽糖-β环糊精纯化方法，采用了纳滤-模拟移动床-纳滤的处理组合，适合工业化分离纯化麦芽糖-β环糊精；通过控制纳滤膜分子量、操作温度、循环次数等，有效地去除了反应溶液中的麦芽糖；通过控制模拟移动床的操作温度、洗脱液的乙醇含量，有效地降低了β-环糊精的溶解度，加快了其在模拟移动床中的移动速度，提高了分离效率，缩短了操作时间。通过上述发明方法，最终使得产品中麦芽糖-β环糊精的含量超过98%。
本发明提供的麦芽糖-β环糊精纯化方法具有产品纯度高、分离效率高，适合工业化生产等优点。
（四）具体实施方式
实施例1：
本发明提供麦芽糖-β环糊精纯化方法，按照下列流程进行，具体操作流程包括以下步骤：
（1）反应溶液的稀释：将含有麦芽糖、β环糊精及麦芽糖-β环糊精的普鲁兰酶的逆向合成反应溶液稀释至固形物含量为20%。
（2）纳滤处理：将稀释的反应溶液在60℃，压力为2.0Mpa，纳滤膜为500的条件下，进行纳滤处理去除麦芽糖，当浓缩液体积为原液体积的1/6时，向浓缩液中加入与滤过液体积相同的纯水，继续进行纳滤处理，如此循环3次。
（3）模拟移动床纯化：将纳滤处理的浓缩液为原料，进行模拟移动床纯化，模拟移动床色谱的固定相采用Sephadex G15，流动相采用乙醇与水的混合溶液，乙醇与水的体积为20：80。模拟移动床由12根色谱柱组成，色谱柱分四个区域，每区由3支相同的色谱柱串联。模拟移动床色谱系统的操作温度为20℃。进样液流速为40mL/min；洗脱液流速为80mL/min；萃余液流速为40mL/min；萃取液流速为80mL/min；切换时间为45min。麦芽糖-β环糊精存在于萃余液中，收集萃余液。
（4）浓缩：采用纳滤进行浓缩，将收集的萃余液在60℃，压力为1.0Mpa，纳滤膜为500的条件下，进行纳滤处理去除水，当浓缩液体积为原液体积的1/6时结束操作。
（5）干燥：将纳滤浓缩进行冷冻干燥。
本方法有效的提高了麦芽糖-β环糊精产品的纯度，最终产品纯度达到99%。
实施例2：
本发明提供麦芽糖-β环糊精纯化方法，按照下列流程进行，具体操作流程包括以下步骤：
（1）反应溶液的稀释：将含有麦芽糖、β环糊精及麦芽糖-β环糊精的普鲁兰酶的逆向合成反应溶液稀释至固形物含量为10%。
（2）纳滤处理：将稀释的反应溶液在40℃，压力为1.5Mpa，纳滤膜为300的条件下，进行纳滤处理去除麦芽糖，当浓缩液体积为原液体积的1/4时，向浓缩液中加入与滤过液体积相同的纯水，继续进行纳滤处理，如此循环2次。
（3）模拟移动床纯化：将纳滤处理的浓缩液为原料，进行模拟移动床纯化，模拟移动床色谱的固定相采用Sephadex G15，流动相采用乙醇与水的混合溶液，乙醇与水的体积为10：90。模拟移动床由8根色谱柱组成，色谱柱分四个区域，每区由2支相同的色谱柱串联。模拟移动床色谱系统的操作温度为10℃。进样液流速为10mL/min；洗脱液流速为20mL/min；萃余液流速为10mL/min；萃取液流速为20mL/min；切换时间为15min。麦芽糖-β环糊精存在于萃余液中，收集萃余液。
（4）浓缩：采用纳滤进行浓缩，将收集的萃余液在40℃，压力为0.8Mpa，纳滤膜为300的条件下，进行纳滤处理去除水，当浓缩液体积为原液体积的1/4时结束操作。
（5）干燥：将纳滤浓缩进行冷冻干燥。
本方法有效的提高了麦芽糖-β环糊精产品的纯度，最终产品纯度达到98%。
实施例3：
本发明提供麦芽糖-β环糊精纯化方法，按照下列流程进行，具体操作流程包括以下步骤：
（1）反应溶液的稀释：将含有麦芽糖、β环糊精及麦芽糖-β环糊精的普鲁兰酶的逆向合成反应溶液稀释至固形物含量为15%。
（2）纳滤处理：将稀释的反应溶液在50℃，压力为1.7Mpa，纳滤膜为400的条件下，进行纳滤处理去除麦芽糖，当浓缩液体积为原液体积的1/5时，向浓缩液中加入与滤过液体积相同的纯水，继续进行纳滤处理，如此循环2次。
（3）模拟移动床纯化：将纳滤处理的浓缩液为原料，进行模拟移动床纯化，模拟移动床色谱的固定相采用Sephadex G15，流动相采用乙醇与水的混合溶液，乙醇与水的体积为15：85。模拟移动床由16根色谱柱组成，色谱柱分四个区域，每区由4支相同的色谱柱串联。模拟移动床色谱系统的操作温度为15℃。进样液流速为20mL/min；洗脱液流速为50mL/min；萃余液流速为20mL/min；萃取液流速为50mL/min；切换时间为30min。麦芽糖-β环糊精存在于萃余液中，收集萃余液。
（4）浓缩：采用纳滤进行浓缩，将收集的萃余液在50℃，压力为0.9Mpa，纳滤膜为400的条件下，进行纳滤处理去除水，当浓缩液体积为原液体积的1/5时结束操作。
（5）干燥：将纳滤浓缩进行冷冻干燥。
本方法有效的提高了麦芽糖-β环糊精产品的纯度，最终产品纯度达到98%。