相关申请的交叉引用
本申请要求2015年6月24日提交的印度临时专利申请1880/del/15的益处，将其全部内容并入本申请。
本发明大体上涉及用作激酶抑制剂包括调节irak-4的经杂芳基取代的氨基吡啶化合物。本申请提供经杂芳基取代的氨基吡啶化合物、包含所述化合物的组合物及其使用方法。本发明还涉及包含至少一种本发明化合物的药物组合物，其用于治疗与激酶调节相关的病症和抑制哺乳动物中的激酶包括irak-4的活性的方法。
背景技术：
toll/il-1受体家族成员是炎症和宿主抗性的重要调节者。toll样受体(tlr)家族识别衍生自传染性有机体的分子特征，包括细菌、真菌、寄生虫和病毒等(在kawai,t.等人,natureimmunol.,11:373-384(2010)中评述)。配体结合至受体诱导接合体分子的二聚并募集至受体中被称为toll/il-1受体(tir)结构域的保守的细胞质基序(motif)。除tlr3以外，所有tlr募集结合体分子myd88。该il-1受体家族还包含细胞质的tir基序，且募集配体结合的myd88(sims,j.e.等人,naturerev.immunol.,10:89-102(2010)中评述)。
丝氨酸/苏氨酸激酶的irak家族的成员通过与myd88的相互作用被募集至该受体。该家族由四个成员构成。许多证据表明，irak4在通过myd88依赖的tlrs和il-1r家族成员激发信号过程中起着关键和必要的作用。结构数据证实，irak4直接与myd88相互作用，随后，irak4募集irak1或irak2至受体复合物以促进下游信号传导(lin,s.等人,nature,465:885-890(2010))。irak4直接磷酸化irak1以促进下游信号至e3泛素连接酶traf6，导致丝氨酸/苏氨酸激酶tak1的活化，随后活化nfκb通路和mapk级联通路(flannery,s.等人,biochem.pharmacol.,80:1981-1991(2010))。一组人类患者经鉴定缺乏irak4表达(picard,c.等人,science,299:2076-2079(2003))。这些患者的细胞对除了tlr3之外的所有tlr激动剂和il-1家族(包括il-1β和il-18)的成员都不能响应(ku,c.等人,j.exp.med.,204:2407-2422(2007))。小鼠中irak4的缺失导致il-1、il-18和所有除了tlr3以外的tlr的依赖性响应的严重堵塞(suzuki,n.等人,nature,416:750-754(2002))。相反地，缺失irak1(thomas,j.a.等人,j.immunol.,163:978-984(1999)；swantek,j.l.等人,j.immunol.,164:4301-4306(2000))或irak2(wan,y.等人,j.biol.chem.,284:10367-10375(2009))导致信号部分缺失。此外，irak4是显示其激酶活性需要信号激发的irak家族中的唯一成员。激酶无活性突变体(kdki)对小鼠基因组中的野生型irak4的替代，通过所有myd88依赖型受体(包括il-1、il-18和所有除了tlr3以外的tlr)来削弱信号(koziczak-holbro,m.等人,j.biol.chem.,282:13552-13560(2007)；kawagoe,t.等人,j.exp.med.,204:1013-1024(2007)；及fraczek,j.等人,j.biol.chem.,283:31697-31705(2008))。
相比于野生型动物，irak4kdki小鼠表现出患病严重程度地急剧降低：在患有多发性硬化症(staschke,k.a.等人,j.immunol.,183:568-577(2009))、类风湿性关节炎(koziczak-holbro,m.等人,arthritisrheum.,60:1661-1671(2009))、动脉粥样硬化(kim,t.w.等人,j.immunol.,186:2871-2880(2011)及rekhter,m.等人,biochem.biophys.res.comm.,367:642-648(2008))及心肌梗塞(maekawa,y.等人,circulation,120:1401-1414(2009))的小鼠模型中都是这样。如上所述，irak4抑制剂会阻断所有myd88依赖性信号。myd88依赖性tlr是多发性硬化症、类风湿性关节炎、心血管疾病、代谢综合征、败血症、系统性红斑狼疮、炎性肠病包括克罗恩病和溃疡性结肠炎、自身免疫性葡萄膜炎、哮喘、过敏症、i型糖尿病和同种异体移植物排斥的致病机制(keogh,b.等人,trendspharmacol.sci.,32:435-442(2011)；mann,d.l.,circ.res.,108:1133-1145(2011)；horton,c.g.等人,mediatorsinflamm.,articleid498980(2010),doi:10.1155/2010/498980；goldstein,d.r.等人,j.heartlungtransplant.,24:1721-1729(2005)；及cario,e.,inflamm.boweldis.,16:1583-1597(2010))。在弥漫性大b细胞淋巴瘤中的致癌活性myd88突变被确定为对irak4抑制敏感(ngo,v.n.等人,nature,470:115-121(2011))。整个基因序列也认为myd88中的突变与慢性淋巴性白血病相关，这表明irak4抑制剂可能用于治疗白血病(puente,x.s.等人,nature,475:101-105(2011))。
除了阻断tlr信号，irak4抑制剂还会通过il-1家族成员阻断信号。il-1的中和作用已被证明在多种疾病中是有效的，所述疾病包括痛风；痛风性关节炎；ii型糖尿病；自身炎性疾病，包括冷吡啉相关的周期性综合征(caps)、tnf受体相关的周期性综合征(traps)、家族性地中海热(fmf)、成人斯蒂尔病；全身性幼年特发性关节炎；中风；移植物抗宿主病(gvhd)；郁积型多发性骨髓瘤、复发性心包炎、骨关节炎、气肿(dinarello,c.a.,eur.j.immunol.,41:1203-1217(2011)及couillin,i.等人,j.immunol.,183:8195-8202(2009))。在阿尔茨海默氏病的小鼠模型中，il-1受体的阻断改善了认知缺陷、减弱的tau蛋白病理和减少淀粉样β蛋白的低聚形式(kitazawa,m.等人,j.immunol.,187:6539-6549(2011))。il-1还显示出与继承免疫性，驱动th17效应子t细胞亚群的分化的关键联系(chung,y.等人,immunity,30:576-587(2009))。因此，irak4抑制剂预计在th17相关疾病中有效，所述疾病包括多发性硬化症、银屑病、炎性肠疾病、自身免疫性葡萄膜炎和类风湿性关节炎(wilke,c.m.等人,trendsimmunol.,32:603-661(2011))。
wo2013/106612、wo2013/106614、wo2013/106641、wo2014/074657及wo2014/074675公开了用作激酶抑制剂包括调节irak4的经取代的吡啶基化合物。
鉴于可通过调节蛋白激酶的治疗受益的病症，显而易见的是，能够调节蛋白激酶(如irak-4)的化合物和使用这些化合物的方法，可向广泛的患者提供实质的治疗益处。
本发明涉及一种新类别的经杂芳基取代的氨基吡啶化合物，发现其为包括irak-4的蛋白激酶的有效抑制剂。本申请提供这些化合物以用作具有理想的稳定性、生物利用度、治疗指数及对可药性(drugability)而言重要的毒性值的药物。
技术实现要素：
本发明提供式(i)化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂化物或前药，其用作irak-4的抑制剂，且可用于治疗增殖性疾病、变应性疾病、自身免疫疾病及炎性疾病。
本发明还提供药物组合物，其包含药用载体及至少一种本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂化物或前药。
本发明还提供抑制irak-4的方法，包括向需要所述治疗的宿主给予治疗有效量的至少一种本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂化物或前药。
本发明还提供用于治疗增殖性疾病、代谢疾病、变应性疾病、自身免疫疾病及炎性疾病的方法，包括向需要所述治疗的宿主给予治疗有效量的至少一种本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂化物或前药。
一个实施方案提供用于治疗炎性疾病及自身免疫疾病的方法，其中更优选治疗炎性疾病。具体地，炎性疾病及自身免疫疾病包括(但不限于)克罗恩病、溃疡性结肠炎、哮喘、移植物抗宿主病、同种异体移植物排斥、慢性阻塞性肺病、格雷夫斯病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、皮肤狼疮、银屑病、冷吡啉相关的周期性综合征(caps)、tnf受体相关的周期性综合征(traps)、家族性地中海热(fmf)、成人斯蒂尔病、全身性幼年特发性关节炎、多发性硬化、神经性疼痛、痛风及痛风性关节炎。
一个实施方案提供治疗痛风及痛风性关节炎的方法。
一个替代的优选实施方案为用于治疗代谢疾病包括ii型糖尿病及动脉粥样硬化的方法。
一个实施方案提供用于治疗癌症的方法，包括向需要所述治疗的宿主给予治疗有效量的至少一种本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂化物或前药。
本发明还提供本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂化物或前药，其用于疗法中。
本发明还提供本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂化物或前药在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
本发明还提供用于制备本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂化物或前药的方法及中间体。
本发明的这些及其他特征将随本发明的继续而展开阐述。
具体实施方式
本发明的第一方面提供至少一种式(i)化合物或其盐：
其中：
het为选自咪唑并[1,2-b]哒嗪基及吡唑并[1,5-a]嘧啶基的杂芳基，其中所述杂芳基通过所述杂芳基中的碳环原子连接于该式(i)化合物中的吡啶基，且其中所述杂芳基经0至2个rb取代；
a为吡唑基、咪唑基或三唑基，其各自经0或1个ra取代；
r3为：
(i)-ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2chf2、-ch(ch3)ch2oh、环丙基、氧杂环丁烷基或四氢吡喃基；或
(ii)经0至2个独立地选自以下的取代基取代的吡唑基：c1-3烷基、羟基c1-3烷基、氟c1-3烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基及四氢吡喃基；
ra为：
(i)f、cl、-oh、-cn、c1-6烷基、氟c1-4烷基、氰基c1-4烷基或羟基c1-6烷基；或
(ii)c3-6环烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吡咯基、吡咯烷酮基、吗啉基、吡咯烷基、苯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基或嘧啶基，其各自经0至4个独立地选自以下的取代基取代：f、-cn、-oh、-nryry、c1-3烷基、氟c1-3烷基、-ch(苯基)2、-o(c1-4烷基)、-c(o)(c1-4烷基)、-c(o)(c1-4氘代烷基)、-c(o)(c3-6环烷基)、-c(o)o(c1-4烷基)、-c(o)nryry、-c(o)(苯基)、-c(o)(吡啶基)、-c(o)ch2(c3-6环烷基)、-nhc(o)ch3、-nhc(o)och3、-nhc(o)oc(ch3)3、-s(o)2(c1-3烷基)及-os(o)2(c1-3烷基)；
各rb独立地选自f、cl、-cn、-nh2、-ch3、-och3及环丙基；
且各ry独立地为h或c1-3烷基。
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中het为选自咪唑并[1,2-b]哒嗪基及吡唑并[1,5-a]嘧啶基的杂芳基，其中所述杂芳基通过所述杂芳基中的碳环原子连接于该式(i)化合物中的吡啶基，且其中所述杂芳基经0至1个rb取代；a为吡唑基或三唑基，其各自经0或1个ra取代；r3为-ch(ch3)2、环丙基或2,2-二氟乙基吡唑基；ra为-ch2ch2ch3、-ch2cf3、-c(ch3)2oh、-ch2c(ch3)2oh、-ch2ch2c(ch3)2oh、四氢吡喃基、乙酰基氮杂环丁烷基或
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中a为经0或1个ra取代的吡唑基；且het、ra及r3如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中a为
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中a为经0或1个ra取代的吡唑基或咪唑基；且het、ra及r3如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中a为
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中a为经0或1个ra取代的咪唑基；且het、ra及r3如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中a为
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中a为三唑基；且het、ra及r3如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中a为
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中a为吡唑基或三唑基；且het、ra及r3如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中a为
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中het为
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中het为咪唑并[1,2-b]哒嗪基，其中所述咪唑并[1,2-b]哒嗪基通过所述咪唑并[1,2-b]哒嗪基中的碳环原子连接于该式(i)化合物中的吡啶基，且其中所述咪唑并[1,2-b]哒嗪基经0至2个rb取代；且a、rb及r3如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中het为
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中het为吡唑并[1,5-a]嘧啶基，其中所述吡唑并[1,5-a]嘧啶基通过所述吡唑并[1,5-a]嘧啶基中的碳环原子连接于该式(i)化合物中的吡啶基，且其中所述吡唑并[1,5-a]嘧啶基经0至2个rb取代；且a、rb及r3如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中het为
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r3为-ch(ch3)2、环丙基或2,2-二氟乙基吡唑基；且het及a如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中r3为-ch(ch3)2或环丙基。还包括如下化合物，其中r3为-ch(ch3)2。
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中ra为f、cl、-oh、-cn、c1-6烷基、氟c1-4烷基、氰基c1-4烷基或羟基c1-6烷基；且het、a及r3如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中ra为c2-4烷基、氟c2-4烷基、氰基c1-3烷基或羟基c2-6烷基。该实施方案中还包括如下化合物，其中ra为-ch2ch2ch3、-ch2cf3或-c(ch3)2oh、-ch2c(ch3)2oh或-ch2ch2c(ch3)2oh。
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中ra为c3-6环烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吡咯基、吡咯烷酮基、吗啉基、吡咯烷基、苯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基或嘧啶基，其各自经0至4个独立地选自以下的取代基取代：f、-cn、-oh、-nryry、c1-3烷基、氟c1-3烷基、-ch(苯基)2、-o(c1-4烷基)、-c(o)(c1-4烷基)、-c(o)(c1-4氘代烷基)、-c(o)(c3-6环烷基)、-c(o)o(c1-4烷基)、-c(o)nryry、-c(o)(苯基)、-c(o)(吡啶基)、-c(o)ch2(c3-6环烷基)、-nhc(o)ch3、-nhc(o)och3、-nhc(o)oc(ch3)3、-s(o)2(c1-3烷基)及-os(o)2(c1-3烷基)；且het、a及r3如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中ra为氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基或哌嗪基，其各自经0至4个独立地选自以下的取代基取代：f、-cn、-oh、-nryry、c1-3烷基、c1-2氟烷基、-o(c1-2烷基)、-c(o)(c1-2烷基)、-c(o)(c1-2氘代烷基)、-c(o)(c3-6环烷基)、-c(o)o(c1-4烷基)、-c(o)nryry、-c(o)o(c1-4烷基)、-nhc(o)ch3、-nhc(o)och3、-s(o)2(c1-2烷基)及-os(o)2(c1-2烷基)。该实施方案中还包括如下化合物，其中ra为四氢吡喃基、乙酰基氮杂环丁烷基
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中各rb独立地选自f、cl、-cn、-nh2、-ch3及环丙基；且het、a及r3如第一方面中所定义。该实施方案中包括如下化合物，其中各rb独立地选自f、cl、-cn、-nh2及-ch3。还包括如下化合物，其中各rb独立地选自cl及-cn。
一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中所述化合物选自：3-(5-(4-(2-羟基丙-2-基)-1h-吡唑-1-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(1)；2-(7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-n-异丙基-5-(4-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-1-基)吡啶-4-胺(2)；3-(4-(异丙基氨基)-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(3)；1-(4-(6-(7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(4)；3-(5-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(5)；3-(4-(异丙基氨基)-5-(1-丙基-1h-吡唑-4-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(6)；2-(7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-n-异丙基-5-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1h-吡唑-4-基)吡啶-4-胺(7)；3-(4-(异丙基氨基)-5-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1h-吡唑-4-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(8)；2-(7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-n-(1-(2,2-二氟乙基)-1h-吡唑-4-基)-5-(1-丙基-1h-吡唑-4-基)吡啶-4-胺(9)；3-(4-((1-(2,2-二氟乙基)-1h-吡唑-4-基)氨基)-5-(1-丙基-1h-吡唑-4-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(10)；2-(6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-n-异丙基-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-4-胺(11)；3-(4-(异丙基氨基)-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(12)；4-(1-(6-(6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基丁-2-醇(13)；4-(1-(6-(6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-4-(氧杂环丁烷-3-基氨基)吡啶-3-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基丁-2-醇(14)；3-(4-(异丙基氨基)-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(15)；3-(4-(异丙基氨基)-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(16)；3-(5-(1-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(17)；3-(4-(环丙基氨基)-5-(1-丙基-1h-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(18)；2-(7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-n-环丙基-5-(1-丙基-1h-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-胺(19)；2-(7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-n-异丙基-5-(1-丙基-1h-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-胺(20)；(3r)-4-(4-(6-(7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-4-(环丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-3-羟基-3-甲基哌啶-1-羧酸甲酯(21)；3-(5-(4-(3-羟基-3-甲基丁基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(22)；4-(1-(6-(6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-4-((四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)吡啶-3-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基丁-2-醇(23)；3-(4-((3,3-二氟环丁基)氨基)-5-(4-(3-羟基-3-甲基丁基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(24)；3-(4-(((1s,3s)-3-氟环戊基)氨基)-5-(4-(3-羟基-3-甲基丁基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(25)；3-(5-(4-(3-羟基-3-甲基丁基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-4-(氧杂环丁烷-3-基氨基)吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(26)；3-(5-(1-(3-羟基-3-甲基丁基)-1h-吡唑-4-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(27)；3-(4-(异丙基氨基)-5-(5-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-3-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(28)；及3-(5-(5-(3-羟基-3-甲基丁基)-1h-吡唑-3-基)-4-((四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(29)。
一个实施方案提供irak4ic50值≤0.6μm的式(i)化合物。
一个实施方案提供irak4ic50值≤0.1μm的式(i)化合物。
一个实施方案提供irak4ic50值≤0.05μm的式(i)化合物。
一个实施方案提供irak4ic50值≤0.025μm的式(i)化合物。
一个实施方案提供irak4ic50值≤0.015μm的式(i)化合物。
一个实施方案提供irak4ic50值≤0.01μm的式(i)化合物。
定义
本领域技术人员在阅读以下详细描述后可更容易地理解本发明的特征及优势。应了解，在单独实施方案的情形下，为清楚起见上文及下文所描述的本发明的某些特征还可组合形成单一实施方案。相反地，为简洁起见描述于单一实施方案的情形下的本发明的各种特征还可组合形成其亚组合。本申请中鉴别为例示性或优选的实施方案意在示例说明性的且不具限制性。
除非本申请中另有具体陈述，否则以单数形式提及还可包括复数形式。举例而言，“一个(a)”及“一种(an)”可指一个，或一个或多个。
如本申请所用，短语“化合物”是指至少一种化合物。举例而言，式(i)化合物包括式(i)化合物及两种或多种式(i)化合物。
除非另外指示，否则任何具有不饱和价数的杂原子被认为具有足以满足这种价数的氢原子。
本申请所阐述的定义优先于以引用方式并入本申请中的任何专利、专利申请和/或专利申请公开中所阐述的定义。
用于描述本发明的各种术语的定义列于下文中。当术语在整篇说明书(除非其在特定情况下另外限制)中个别地或作为较大团体的一部分使用时，这些定义均适用于这种术语。
在整篇说明书中，基团和其取代基可由本领域技术人员选择以提供稳定的部分和化合物。
根据本领域中使用的惯例，
术语“氰基”是指基团-cn。
术语“氨基”是指基团-nh2。
术语“氧代”是指基团＝o。
如本申请使用的术语“烷基”是指含有例如1至12个碳原子、1至6个碳原子及1至4个碳原子的支链与直链饱和脂族烃基。烷基的实例包括但不限于甲基(me)、乙基(et)、丙基(例如正丙基及异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、仲丁基及叔丁基)及戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)、正己基、2-甲基戊基、2-乙基丁基、3-甲基戊基及4-甲基戊基。当数字在符号“c”后以下标形式出现时，所述下标更特定地定义特定基团可含有的碳原子数目。举例而言，“c1-6烷基”是指具有一至六个碳原子的直链及支链烷基。
如本申请使用的术语“氟烷基”意在包括经一个或多个氟原子取代的支链与直链饱和脂族烃基。举例而言，“氟c1-4烷基”意在包括经一个或多个氟原子取代的c1、c2、c3及c4烷基。氟烷基的代表性实例包括(但不限于)-cf3及-ch2cf3。
术语“氰基烷基”包括经一个或多个氰基取代的支链与直链饱和烷基。举例而言，“氰基烷基”包括-ch2cn、-ch2ch2cn及氰基c1-4烷基。
术语“羟基烷基”包括经一个或多个羟基取代的支链与直链饱和烷基。举例而言，“羟基烷基”包括-ch2oh、-ch2ch2oh及羟基c1-4烷基。
如本申请使用的术语“环烷基”是指通过由饱和环碳原子移去一个氢原子而衍生自非芳族单环或多环烃分子的基团。环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环戊基及环己基。当数字在符号“c”后以下标形式出现时，所述下标更特定地定义特定环烷基可含有的碳原子数目。举例而言，“c3-6环烷基”指示具有三至六个碳原子的环烷基。
短语“药学上可接受的”在本申请中用于指在正确医学判断范畴内适用于与人类和动物组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症且与合理效益/风险比率相称的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
式(i)化合物可以无定形固体或结晶固体形式提供。可使用冻干来提供呈固体状的式(i)化合物。
还应当理解式(i)化合物的溶剂化物(例如，水合物)也在本发明的范围内。术语“溶剂化物”意指式(i)化合物与一个或多个溶剂分子(无论是有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键合。在一些情况中，该溶剂化物能够分离，例如当一个或多个溶剂分子掺入至结晶固体的晶格中时。“溶剂化物”涵盖溶液相溶剂化物和可分离的溶剂化物。示例性溶剂化物包括水合物、乙醇合物、甲醇合物、异丙醇合物、乙腈溶剂化物和乙酸乙酯溶剂化物。溶剂化的方法是本领域已知的。
前药的各种形式为此项技术中熟知且描述于以下中：
a)thepracticeofmedicinalchemistry,camilleg.wermuth等人,第31章,(academicpress,1996)；
b)designofprodrugs,h.bundgaard编辑(elsevier,1985)；
c)atextbookofdrugdesignanddevelopment,p.krogsgaard-larson及h.bundgaard等人,第5章,第113-191页(harwoodacademicpublishers,1991)；及
d)hydrolysisindrugandprodrugmetabolism,bernardtesta及joachimm.mayer,(wiley-vch,2003)。
另外，式(i)化合物在制备之后可被分离和纯化，以获得含有等于或大于99重量％的量的式(i)化合物(“基本上纯”)的组合物，接着如本申请所述使用或配制。这种“基本上纯”的式(i)化合物在本申请中也涵盖作为本发明的一部分。
“稳定化合物”和“稳定结构”意指足够稳固而能够由反应混合物中分离出达适用纯度且能够配制成有效治疗剂的化合物。本发明意欲包含稳定化合物。
“治疗有效量”意在包括有效用作irak4抑制剂或有效治疗或预防自身免疫和/或炎性疾病状态，诸如多发性硬化及类风湿性关节炎或有效治疗癌症的单独本发明化合物的量或所主张的化合物的组合的量或与其他活性成分组合的本发明化合物的量。
本申请所用的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”涵盖治疗哺乳动物(尤其人类)的疾病状态，且包括：(a)预防哺乳动物出现疾病状态，尤其在所述哺乳动物易患所述疾病状态但尚未诊断为患有所述疾病状态时；(b)抑制疾病状态，也即阻止其发展；和/或(c)减轻疾病状态，也即使疾病状态消退。
本发明化合物意欲包括本发明化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括原子序数相同但质量数不同的那些原子。作为一般实例且非限制性地，氢的同位素包括氘(d)和氚(t)。碳的同位素包括13c和14c。通常，同位素标记的本发明化合物可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于本申请所述的方法的方法，使用适当的同位素标记试剂替代否则使用的未经标记的试剂来制备。举例而言，甲基(-ch3)还包括氘代甲基，诸如-cd3。
效用
本发明化合物调节激酶活性，包括调节irak-4。其他类型的激酶活性可通过本发明化合物来调节，该化合物包括但不限于，pelle/irak家族及其突变体。
因此，式(i)化合物在以下方面具有实用性：治疗与调节激酶活性相关的病症，以及尤其是对irak-4活性的选择性抑制，或对irak及其他pelle家族激酶的抑制。这些病症包括与tlr/il-1家族受体相关的疾病，其中细胞因子水平作为胞内信号传导的结果进行调节。此外，式(i)化合物对irak-4的活性具有有力的选择性，优选至少20倍至超过1,000倍更具有选择性。
本文所用的术语“治疗”包括对哺乳动物(特别是人)的疾病状态的治疗，并且包括：(a)预防或延迟在哺乳动物中疾状的发生，特别是当这些哺乳动物易感染于所述病状，但尚未诊断为患有该疾病的时候；(b)抑制病状，即阻止其发展；和/或(c)实现病症或症状的完全或部分减少，和/或缓解、改善、减轻或治愈疾病或障碍和/或其症状。
鉴于它们作为选择性抑制剂irak-4的活性，式(i)化合物可用于治疗与tlr/il-1家族受体相关的疾病，但不限于炎性疾病，例如克罗恩病和溃疡性结肠炎、哮喘、移植物抗宿主病、同种异体移植排斥、慢性阻塞性肺病；自身免疫性疾病，例如格雷夫斯病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、银屑病；自身炎性疾病，其包括caps、traps、fmf、成人史迪尔氏症候群、系统性幼年特发性关节炎、痛风、痛风性关节炎；代谢性疾病，其包括2型糖尿病、动脉粥样硬化、心肌梗塞；破坏性骨疾病，如骨重吸收疾病、骨关节炎、骨质疏松症、多发性骨髓瘤相关骨疾病；增生性疾病，如急性骨髓性白血病、慢性髓细胞性白血病；血管原生障碍，如包括实体瘤、眼部新血管形成和婴儿血管瘤；感染性疾病，如败血病、感染性休克和志贺菌病；神经变性疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病、由创伤性损伤引起的脑缺血或神经变性疾病；肿瘤疾病和病毒疾病，分别如转移性黑素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤，和hiv感染及cmv视网膜炎、aids。
更具体地，本发明化合物可治疗的具体病症或疾病包括但不限于胰腺炎(急性或慢性)、哮喘、变态反应、成人呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺病、肾小球肾炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯病、自身免疫性胃炎、糖尿病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性中性粒细胞减少症、血小板减少症、特应性皮炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、多发性硬化、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、银屑病、移植物抗宿主病(graftvs.hostdisease)、内毒素诱发的炎性反应、肺结核、动脉粥样硬化、肌肉变性、恶病质、牛皮癣关节炎、莱特尔综合征(reiter’ssyndrome)、痛风、外伤性关节炎、风疹性关节炎、急性滑膜炎、胰腺β细胞疾病；以大量中性粒细胞浸润为特征的疾病；类风湿性脊椎炎、痛风性关节炎和其它关节炎病症、脑型疟、慢性肺部炎性疾病、矽肺、肺结节病、骨重吸收疾病、同种异体移植物排斥、由感染引起的发热和肌痛、继发于感染的恶病质、meloidformation、瘢痕组织形成、溃疡性结肠炎、发热、流行性感冒、骨质疏松症、骨关节炎、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、转移性黑素瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、败血病、感染性休克和志贺菌病；阿尔茨海默病、帕金森病、由创伤性损伤引起的脑缺血或神经变性疾病；血管原生疾病，包括实体瘤、眼部新血管形成和婴儿血管瘤；病毒疾病，包括急性肝炎感染(包括甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎)、hiv感染和cmv视网膜炎、aids、arc或恶性肿瘤和疱疹；中风、心肌缺血、心脏病发作中的缺血、器官机能减退、血管增生、心脏和肾脏再灌注损伤、血栓形成、心脏肥大、凝血酶诱发的血小板聚集、内毒素血症和/或中毒性休克综合征、与前列腺素内过氧化酶合酶-2相关的病症和寻常型天疱疮。优选的治疗方法是治疗选自以下病症的方法：克罗恩病和溃疡性结肠炎、同种异体移植物排斥、类风湿性关节炎、银屑病、强直性脊椎炎、牛皮癣关节炎和寻常型天疱疮。可选地，优选的治疗方法是治疗选自以下病症的那些方法：缺血再灌注损伤，包括由中风引起的脑缺血再灌注损伤和由心肌梗塞引起的心脏缺血再灌注损伤。另一种优选的治疗方法是其中病症为多发性骨髓瘤的治疗方法。
在一个实施方案中，式(i)化合物用于治疗癌症，包括瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(wm)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、皮肤弥漫性大b细胞淋巴瘤及原发性cns淋巴瘤。
此外，本发明的激酶抑制剂抑制可诱导促炎性蛋白的表达，所述可诱导促炎蛋白如前列腺素内过氧化物合酶-2(pghs-2)，其也称为环氧合酶-2(cox-2)、il-1、il-6、il-18、炎症趋化因子。因此，其它与irak-4相关的病症包括水肿、痛觉缺失(analgesia)、发热和疼痛，如神经肌肉疼痛、头痛、由癌症引起的疼痛、牙痛和关节炎疼痛。本发明化合物还可用于治疗兽医学病毒感染，如慢病毒属感染，包括但不限于马传染性贫血症病毒；或逆转录病毒感染，包括猫免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒和犬免疫缺陷病毒。
当术语“irak-4相关病症”或“irak-4相关疾病或障碍”在本文中使用时，每种术语旨在包括上文以重复详尽定义的所有病症以及受irak-4激酶活性影响的任何其它病症。
本发明因此提供了治疗这些病症的方法，其包括给药有此需要的受试者治疗有效量的至少一种式(i)化合物或其盐。“治疗有效量”旨在包括当单独给药或组合给药时可有效抑制irak-4和/或治疗疾病的本发明化合物的量。
治疗irak-4激酶相关病症的方法可包括将式(i)化合物单独给药或相互组合给药和/或与可用于治疗所述病症的其它合适的治疗药物组合给药。因此，“治疗有效量”也旨在包括可有效抑制irak-4和/或治疗irak-4相关疾病的所述化合物的组合的量。
所述其它治疗药物的实例包括皮质激素、咯利普兰、钙感光蛋白、细胞因子抑制性抗炎药(csaid)、白介素-10、糖皮质激素、水杨酸酯、氧化亚氮和其它免疫抑制剂；核转位抑制剂，如脱氧精胍菌素(dsg)；非甾类抗炎药(nsaid)，如布洛芬、塞来考昔和罗非考昔；甾体类，如泼尼松或地塞米松；抗病毒剂，如阿巴卡韦；抗增生剂，如甲氨喋呤、来氟米特、fk506(他克莫司、
上述其它治疗药物，当与本发明化合物联用时，可例如以physicians’deskreference(pdr)中标示的那些量或本领域技术人员所确定的其它量使用。在本发明的方法中，所述其它治疗药物可在给药本发明化合物之前、同时或之后给药。如上文所述，本发明还提供了能够治疗irak-4激酶相关病症(包括tlr和il-1家族受体介导的疾病)的药物组合物。
本发明组合物可含有上述其它治疗药物，并且可例如如下配制：按照例如药物制剂领域公知的技术，使用常规的固态或液态载剂或稀释剂以及适于所期望给药模式的药物添加剂(例如赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、香料等)。
因此，本发明还包括组合物，所述组合物包含一种或多种式(i)化合物和药用载体。
“药用载体”是指本领域通常接受的用于将生物活性药物递送至动物特别是哺乳动物的介质。药用载体根据本领域普通技术人员知识范围内所熟知的多种因素来配制。这些因素包括但不限于所配制的活性药物的类型和性质；待给药含试剂组合物的受试者；组合物的预期给药途径；和所靶向的治疗适应症。药用载体包括水性和非水性液体介质以及各种固体和半固体剂型。除活性药物之外，所述载体还可包括多种不同的成分和添加剂，这样的其它成分出于本领域普通技术人员所熟知的各种原因(例如使活性药物、粘合剂等稳定)而包含于制剂中。有关合适的药用载体和选择它们时所涉及的因素的描述可很容易找到，参考如remington’spharmaceuticalsciences，第17版，1985，将其全文引入本申请作为参考。
式(i)化合物可以适于待治疗病症的任何方式给药，这可取决于对位点特异性治疗或待递送药物的量的需要。
本发明也涵盖一类药物组合物，其包含至少一种式(i)化合物；和一种或多种无毒的药用载体和/或稀释剂和/或辅料(本申请统称作“载体”物质)和必要时选用的其它活性成分。式(i)化合物可通过任何适合途径，优选以适于所述途径的药物组合物形式且以有效用于预期治疗的剂量给予。本发明的化合物和组合物可以含有常规药用载体、辅料和媒介物的剂量单位制剂形式，例如口服、经粘膜或肠胃外(包括血管内、静脉内、腹膜内、皮下、肌内和胸骨内)给予。举例而言，药物载体可含有甘露糖醇或乳糖和微晶纤维素的混合物。混合物可含有其它组分，诸如润滑剂，例如硬脂酸镁；和崩解剂，诸如交聚维酮(crospovidone)。载体混合物可填充至明胶胶囊中或压制成片剂。药物组合物可以例如口服剂型或输注剂形式给予。
对于口服给药，药物组合物可呈例如片剂、胶囊剂、液体胶囊剂、混悬剂或液体形式。药物组合物优选以含有特定量的活性成分的剂量单位形式制成。举例而言，药物组合物可以包含约0.1mg至1000mg，优选约0.25mg至250mg，且更优选约0.5mg至100mg范围内的量的活性成分的片剂或胶囊剂形式提供。虽然适用于人类或其它哺乳动物的日剂量可视患者的病症和其它因素而广泛变化，但可使用常规方法确定。
本申请涵盖的任何药物组合物可例如经由任何可接受且适合的口服制剂来口服递送。示例性口服制剂包括(但不限于)例如片剂、糖衣锭(troches)、口含锭(lozenges)、水性和油性混悬剂、液体胶囊剂、可分散性散剂或颗粒剂、乳剂、硬胶囊剂和软胶囊剂、糖浆剂和酏剂。意欲口服给予的药物组合物可根据此项技术中已知用于制造意欲口服给予的药物组合物的任何方法来制备。为提供药学上可口的制剂，本发明药物组合物可含有至少一种选自甜味剂、矫味剂、着色剂、缓和剂、抗氧化剂和防腐剂的试剂。
片剂可例如通过混合至少一种式(i)化合物与至少一种适用于制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂来制备。示例性赋形剂包括(但不限于)例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙和磷酸钠；粒化剂和崩解剂，诸如微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠、玉米淀粉和海藻酸；粘合剂，诸如淀粉、明胶、聚乙烯-吡咯烷酮和阿拉伯胶(acacia)；和润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。另外，片剂可无包衣，或通过已知技术包覆包衣以掩蔽味道令人不悦的药物的不良味道，或延迟活性成分在胃肠道中的崩解和吸收，从而使活性成分的作用持续较长时段。示例性水溶性味觉掩蔽物质包括(但不限于)羟基丙基甲基纤维素和羟基丙基纤维素。示例性时间延迟物质包括(但不限于)乙基纤维素和乙酸丁酸纤维素。
硬明胶胶囊剂可例如通过混合至少一种式(i)化合物与至少一种惰性固体稀释剂(诸如碳酸钙；磷酸钙；和高岭土(kaolin))来制备。
软明胶胶囊剂可例如通过混合至少一种式(i)化合物与至少一种水溶性载体(诸如聚乙二醇)；和至少一种油介质(诸如花生油、液体石蜡和橄榄油)来制备。
水性混悬剂可例如通过混合至少一种式(i)化合物与至少一种适用于制造水性混悬剂的赋形剂来制备。适用于制造水性混悬剂的示例性赋形剂包括(但不限于)例如助悬剂，诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、海藻酸钠、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂，诸如天然存在的磷脂，例如卵磷脂；环氧烷与脂肪酸的缩合产物，诸如聚氧乙烯硬脂酸酯；环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，诸如十七亚乙基-氧基十六醇；环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，诸如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯；和环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，诸如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。水性混悬剂也可含有至少一种防腐剂，诸如对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸正丙酯；至少一种着色剂；至少一种矫味剂；和/或至少一种甜味剂，包括(但不限于)例如蔗糖、糖精和阿斯巴甜(aspartame)。
油性混悬剂可例如通过将至少一种式(i)化合物悬浮于植物油(诸如花生油；橄榄油；芝麻油；和椰子油)；或矿物油(诸如液体石蜡)中来制备。油性混悬剂也可含有至少一种增稠剂，诸如蜂蜡；硬石蜡；和十六醇。为提供可口的油性混悬剂，可将至少一种上文已描述的甜味剂和/或至少一种矫味剂添加至油性混悬剂中。油性混悬剂可进一步含有至少一种防腐剂，包括(但不限于)例如抗氧化剂，诸如丁基化羟基苯甲醚和α-生育酚。
可分散性散剂和颗粒剂可例如通过混合至少一种式(i)化合物与至少一种分散剂和/或湿润剂；至少一种助悬剂；和/或至少一种防腐剂来制备。适合的分散剂、湿润剂和助悬剂如上文已描述。示例性防腐剂包括(但不限于)例如抗氧化剂，例如抗坏血酸。另外，可分散性散剂和颗粒剂也可含有至少一种赋形剂，包括(但不限于)例如甜味剂；矫味剂；和着色剂。
至少一种式(i)化合物的乳剂可例如制备成水包油乳剂。包含式(i)化合物的乳剂的油相可由已知成分以已知方式构成。油相可由(但不限于)例如植物油(诸如橄榄油和花生油)；矿物油(诸如液体石蜡)；和其混合物提供。虽然所述相可仅包含乳化剂，但其可包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。适合的乳化剂包括(但不限于)例如天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂；源自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，诸如脱水山梨糖醇单油酸酯；和偏酯与环氧乙烷的缩合产物，诸如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。优选地，亲水性乳化剂连同用作稳定剂的亲脂性乳化剂一起包括在内。也优选包括油和脂肪两者。具有或不具有稳定剂的乳化剂一起组成所谓乳化蜡，且所述蜡与油和脂肪一起组成所谓乳化软膏基质，所述乳化软膏基质形成乳膏剂制剂的油性分散相。乳剂也可含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和/或抗氧化剂。适用于本发明制剂中的乳化剂和乳剂稳定剂包括吐温(tween)60、斯潘(span)80、十六醇十八醇混合物(cetostearylalcohol)、十四烷醇、单硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸钠、单独或与蜡一起的二硬脂酸甘油酯，或本领域中熟知的其它物质。
式(i)化合物也可例如经由任何药学上可接受且适合的可注射形式静脉内、皮下和/或肌内递送。示例性可注射形式包括(但不限于)例如包含可接受的媒介物和溶剂(诸如水、林格溶液(ringer'ssolution)和等张氯化钠溶液)的无菌水溶液；无菌水包油微乳剂；和水性或油性混悬剂。
用于肠胃外给予的制剂可为水性或非水性等张无菌注射溶液剂或混悬剂的形式。这种溶液剂和混悬剂可使用所提及的用于口服给予的制剂的一种或多种载体或稀释剂或通过使用其它适合的分散剂或湿润剂和助悬剂由无菌粉末或颗粒制备。这种化合物可溶解于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠、黄蓍胶和/或各种缓冲液中。其它辅料和给药方式在医药技术中为广泛熟知的。活性成分也可以作为含适合载体(包括盐水、右旋糖或水)或含环糊精(也即captisol)、共溶剂溶解(也即丙二醇)或胶束溶解(也即吐温80)的组合物形式通过注射给予。
无菌可注射制剂也可为于无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂，例如于1,3-丁二醇中的溶液剂。可使用的可接受的媒介物和溶剂为水、林格溶液和等张氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油惯常用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。另外，在可注射剂制备中可使用脂肪酸，诸如油酸。
无菌可注射水包油微乳剂可例如通过以下来制备：1)将至少一种式(i)化合物溶解于油相(诸如大豆油与卵磷脂的混合物)中；2)组合含有式(i)的油相与水和甘油混合物；和3)加工所述组合，形成微乳剂。
无菌水性或油性混悬剂可根据本领域早已已知的方法来制备。举例而言，无菌水溶液剂或混悬剂可用无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂来制备，诸如1,3-丁二醇；且无菌油性混悬剂可用无菌无毒可接受的溶剂或悬浮介质来制备，诸如无菌不挥发性油，例如合成单酸甘油酯或二酸甘油酯；和脂肪酸，诸如油酸。
可用于本发明药物组合物中的药用载体、辅料和媒介物包括(但不限于)离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂；自乳化药物递送系统(sedds)，诸如d-α-生育酚聚乙二醇1000丁二酸酯；用于药物剂型中的表面活性剂，诸如吐温、聚乙氧基蓖麻油，诸如cremophor表面活性剂(basf)，或其它类似聚合递送基质；血清蛋白，诸如人血清白蛋白；缓冲物质，诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。环糊精(诸如α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精)或经化学修饰的衍生物(诸如羟基烷基环糊精，包括2-羟基丙基-环糊精和3-羟基丙基-环糊精)或其它溶解的衍生物也宜用于增强本申请所述式的化合物的递送。
本发明的药物活性化合物可根据常规药学方法加工以产生用于向患者(包括人类和其它哺乳动物)给予的医药药物。药物组合物可经受常规医药操作(诸如杀菌)和/或可含有常规辅料，诸如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、缓冲剂等。片剂和丸剂可另外用肠溶包衣制备。这些组合物也可包含辅料，诸如湿润剂、甜味剂、矫味剂和香化剂。
所给予的化合物的量和以本发明的化合物和/或组合物治疗疾病病症的给药方案视多种因素而定，包括个体的年龄、体重、性别、医学病症、疾病类型、疾病严重度、给药途径和频率和所采用的特定化合物。因此，给药方案可广泛不同，但可常规地使用标准方法来确定。每公斤体重约0.001mg至100mg，优选每公斤体重约0.0025mg至约50mg和最优选每公斤体重约0.005mg至10mg的日剂量可为适当的。日剂量可以每天一至四次给药给予。其他给药方案包括每周一个剂量及每两天周期一个剂量。
为达治疗目的，通常将本发明的活性化合物与适用于所示给药途径的一种或多种辅料组合。若口服给予，则可将化合物与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，接着制成片剂或胶囊剂以方便给予。这些胶囊剂或片剂可含有控制释放制剂，如可以活性化合物于羟基丙基甲基纤维素中的分散液的形式提供。
本发明的药物组合物包含至少一种式(i)化合物和任选其它的选自任何药用载体、辅料和媒介物的试剂。本发明的替代组合物包含本申请所述的式(i)化合物或其前药和药用载体、辅料或媒介物。
本发明还涵盖制品。如本申请所用，制品意在包括但不限于试剂盒及包装。本发明的制品包含：(a)第一容器；(b)位于该第一容器内的药物组合物，其中所述组合物包含：第一治疗剂，其包含本发明的化合物或其药用盐形式；以及(c)阐述药物组合物可用于治疗心血管病症、多尿症和/或尿钠排泄的包装说明书。在另一实施方案中，包装说明书阐述药物组合物可与治疗心血管病症、多尿症和/或尿钠排泄的第二治疗剂组合使用(如上文所定义)。制品可进一步包含：(d)第二容器，其中组分(a)及(b)位于该第二容器中，且组分(c)位于第二容器中或外部。位于第一及第二容器内意谓各别容器将物品保持于其边界内。
第一容器为用于支持药物组合物的容器。此容器可用于制造、储存、运送和/或个别/整体出售。第一容器意在涵盖瓶、罐、小瓶、烧瓶、注射器、管(例如用于乳膏制剂)或用于制造、固持、储存或分配医药产品的任何其他容器。
第二容器为用于固持第一容器及任选存在的包装说明书的容器。第二容器的实例包括但不限于盒(例如卡纸板或塑胶)、板条箱、纸盒、袋(例如纸或塑胶袋)、小袋及大袋。包装说明书可经胶带、胶、钉或另一附接方法与第一容器的外部物理附接，或其可留在第二容器内部而不借助于附接于第一容器的任何物理方式。或者，包装说明书位于第二容器外部上。当位于第二容器外部上时，包装说明书优选经胶带、胶、钉或另一附接方法物理附接。或者，其可与第二容器外部相邻或接触但不物理附接。
包装说明书为叙述与位于第一容器内的药物组合物相关的信息的标注、标签、标记物或其他书写纸片。所述信息通常将由管理出售制品的地区的监管机构(例如美国食品与药品管理局(theunitedstatesfoodanddrugadministration))决定。优选地，包装说明书具体叙述药物组合物已审批用于的适应症。包装说明书可由任何材料制成，个人可自上面读取其中或其上所含的信息。优选地，包装说明书为上面已形成所需信息(例如印刷或涂覆)的可印刷材料(例如纸、塑胶、卡纸板、箔、胶粘纸或塑胶)。
制备方法
可以有机合成领域技术人员熟知的多种方式制备本发明化合物。本发明化合物可使用下文所述的方法，以及合成有机化学的技术中已知的合成方法，或如本领域技术人员所了解的其变体来合成。优选方法包括(但不限于)下文所述的方法。本申请引用的所有参考文献以全文引用的方式并入本申请中。
本章节所述的反应和技术在适于所采用的试剂和物质的溶剂中进行且适于所达成的转化。同样，在下文所述的对合成方法的描述中，应了解所有建议的反应条件，包括溶剂的选择、反应气氛、反应温度、实验持续时间和处理操作是选择为所述反应的标准条件，其应由本领域技术人员轻易地识别。有机合成领域技术人员应了解，存在于分子的各种部分上的官能团应与所建议的试剂和反应相容。这种对与反应条件相容的取代基的限制对本领域技术人员而言应显而易见，且因而应使用替代方法。这有时需要判断修改合成步骤顺序或选择一个特定方法方案而非另一个以获得所需的本发明化合物。也应了解，此领域中设计任一合成途径的另一主要考虑事项为正确选择用于保护本发明中所述化合物中存在的反应性官能团的保护基。向经专门训练的专业人员描述许多替代方案的权威性说明为greene等人(protectivegroupsinorganicsynthesis,第三版,wileyandsons(1999))。
通式i的化合物可根据以下方案中所概述的方法制备。举例而言，在方案1中，溴化物1.1可与xxx反应，形成氯三唑1.2。随后在金属催化剂存在下与各种杂环交叉偶联试剂诸如杂环甲锡烷或硼酸衍生物反应，可得到诸如1.3的化合物。
方案1
方案2证实了获得该通式化合物的替代步骤次序。以溴化物1.1为起始物，可使用标准交叉偶联方法，使诸如吡唑的杂环偶联。这些方法可尤其利用杂环硼酸或甲锡烷，得到式2.1的中间体。随后与其他官能化杂环偶联，可得到诸如通式2.2的化合物。在第一步可取代其他官能化杂环。举例而言，适当经取代的咪唑可替换方案2中的吡唑。诸如2.2的化合物的替代次序可自碘化物2.3开始。c4胺的烷基化可得到通式2.4的化合物，其在与各种杂环交叉偶联试剂反应后可形成诸如2.1的化合物。中间体2.1可如先前所述处理成2.2。
方案2
这些分子的合成的另一变化形式示于方案3。使胺3.1与适当胺(诸如异丙基胺)反应，可得到化合物3.2。用诸如lah的还原试剂处理3.2可得到醇3.3，可用适当氧化试剂将其转变成醛3.4。可在诸如甲醇的溶剂中，使用碱及(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯，将醛3.4转变成炔。在诸如铜的金属存在下用烷基叠氮化物处理3.5，可得到三唑并吡啶，诸如3.6。可用六甲基二锡及钯催化剂将3.6的氯化物转变成烷基甲锡烷，得到3.7。3.7与多种杂环卤化物反应，可得到式3.8的化合物。
方案3
这些化合物制备中的另一变化形式示于方案4。使用本领域技术人员已知的标准转化，可将酸4.1转化成酮4.2。酮与含羰基的基团(诸如醛)反应，可形成二酮4.3。4.3与诸如肼的试剂反应可形成化合物4.4中所示的吡唑环。适当取代的吡唑(ra等于反应性官能基，诸如酯)可使用标准化学操作进一步转化。化合物4.4中的氯化物转化成诸如4.5的甲锡烷或诸如硼衍生物的其他官能基将得到允许转变成4.6的有用的化合物。化合物4.6可使用各种交叉偶联方法诸如stille偶联，在诸如钯的催化剂存在下制备。
方案4
实施例
本发明的化合物及用于制备本发明化合物的中间体可使用以下实施例中所显示的操作及相关操作制备。用于这些实施例中的方法及条件及这些实施例中制备的实际化合物并不意在为限制性的，而是意在表明可如何制备本发明的化合物。当未通过本申请所描述的操作制备时，用于这些实施例中的起始物质及试剂通常为市售或在化学文献中报导或可通过使用化学文献中所描述的操作制备。本发明在以下实施例中进一步定义。应了解实施例仅为了说明而提供。依据以上论述及实施例，本领域技术人员可确定本发明的基本特征，且在不背离其精神及范畴的情况下，可进行各种改变及修改以使本发明适于各种用途及条件。因此，本发明不受下文所述的说明性实施例限制，而是由其随附的申请专利范围限定。
在所给出的实施例中，短语“干燥且浓缩”一般是指在有机溶剂中经硫酸钠或硫酸镁对溶液进行干燥，接着由滤液过滤及移除溶剂(一般减压及在适合于物质稳定性的温度)。使用isco中压色谱设备(teledynecorporation)，利用预装填的硅胶柱，用所指示的溶剂或溶剂混合物洗脱进行柱色谱法。使用大小适于待分离物质的量，通常用递增浓度的甲醇或乙腈/水梯度洗脱，还含有0.05％或0.1％三氟乙酸或10mm乙酸铵，在适合于柱大小及待实现的分离的洗脱速率下的反相柱(waterssunfirec18、watersxbridgec18、
aq.水溶液
bispin二(频哪醇合)二硼
盐水饱和氯化钠水溶液
dcm二氯甲烷
dman,n-二甲基乙酰胺
dmfn,n-二甲基甲酰胺
dmso二甲基亚砜
dppf1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁
etoac乙酸乙酯
etoh乙醇
g克
h小时
hplc高效液相色谱法
koac乙酸钾
lah氢化锂铝
lcms液相色谱-质谱
mecn乙腈
memgbr甲基溴化镁
meoh甲醇
mplc中压液相色谱法
mtbe甲基叔丁基醚
nbsn-溴琥珀酰亚胺
nh4oac乙酸铵
nisn-碘琥珀酰亚胺
pd2(dba)3三-(二亚苄基丙酮)二钯
petether石油醚
t-buoh叔丁醇
tfa三氟乙酸
thf四氢呋喃
hplc条件：
a.sunfirec18(3×150mm)，3.5微米，流动相a：95:5水/mecn，0.05％tfa；流动相b：95:5mecn/水，0.05％tfa；1ml/min，12min梯度。
b.xbridgephenyl(3×150mm)，3.5微米，流动相a：95:5水/mecn，0.05％tfa；流动相b：95:5mecn/水，0.05％tfa；1ml/min，12min梯度。
c.watersacquityuplcbehc18柱(2.1×50mm)，流动相a：5:95mecn/10mm乙酸铵水溶液；流动相b：95:510mm乙酸铵水溶液/mecn；梯度经3分钟0-100％b，接着0.75分钟保持在100％b下；50℃柱温度
d.watersacquityuplcbehc18柱(2.1×50mm)，流动相a：5:95mecn/0.1％tfa；流动相b：95:50.1％tfa/mecn；梯度经3分钟0-100％b，接着0.75分钟保持在100％b下；50℃柱温度
e.ascentisexpressc18(2.1×50mm)，2.7微米，流动相a：98:2水/mecn，10mmnh4oac；流动相b：2:98水/mecn，10mmnh4oac；1.1ml/min，3min梯度
f.ascentisexpressc18(2.1×50mm)，2.7微米，流动相a：95:5水/mecn，0.01％tfa；流动相b：5:95水/mecn，0.01％tfa；1.1ml/min，3min梯度
g.xbridgephenyl(4.6×150mm)，3.5微米，流动相a：95:5水/mecn，0.05％tfa；流动相b：95:5mecn/水，0.05％tfa；1ml/min，18min梯度。
实施例1
3-(5-(4-(2-羟基丙-2-基)-1h-吡唑-1-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-甲腈
中间体1a：1-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-4-羧酸乙酯
向搅拌的2-氯-5-碘-n-异丙基吡啶-4-胺(400mg，1.35mmol)于1,4-二噁烷(10ml)中的溶液添加1h-吡唑-4-羧酸乙酯(189mg，1.35mmol)、cui(51mg，0.27mmol)、k2co3(373mg，2.7mmol)及反式-n,n'-二甲基环己-1,2-二胺(115mg，0.81mmol)。将混合物密封且在110℃加热14小时。移除溶剂且混合物分配于etoac与水之间。有机层经na2so4干燥，过滤，且浓缩。产物经由柱色谱法(15％etoac/石油醚)纯化，得到1-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-4-羧酸乙酯(300mg，72％产率)。lcms309.4(m+h)。
中间体1b：2-(1-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-4-基)丙-2-醇
在0℃向搅拌的1-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-4-羧酸乙酯(220mg，0.72mmol)于thf(10ml)中的溶液添加memgbr(0.71ml，2.14mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时，接着用饱和nh4cl水溶液淬灭。移除溶剂且混合物分配于etoac与水之间。有机层经na2so4干燥，过滤，且浓缩。产物经由柱色谱法(15％etoac/石油醚)纯化，得到2-(1-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-4-基)丙-2-醇(45mg，30％产率)。lcms295.4(m+h)。
中间体1c：3-溴吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈
向搅拌的吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(0.7g，4.86mmol)于mecn(20ml)中的溶液添加nbs(0.86g，4.86mmol)。接着反应混合物在25℃搅拌3小时。反应混合物用水稀释且用etoac(3次)萃取。有机层经na2so4干燥，过滤，且浓缩。产物经由柱色谱法(33％ea/h)纯化，得到呈琥珀色固体状的3-溴吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(0.94g，78％产率)。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.05(s,1h),8.66(s,1h),8.34(s,1h)；lcms221.1(m+h)。
中间体1d：3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈
向搅拌的3-溴吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(250mg，1.121mmol)于1,4-二噁烷(10ml)中的溶液添加koac(220mg，2.242mmol)及bispin(1139mg，4.48mmol)且用氮气脱气20分钟，接着添加二(三苯基膦)pd(ii)cl2(39.3mg，0.056mmol)。将反应混合物加热至110℃，保持16小时。反应混合物冷却且经硅藻土过滤且用戊烷洗涤。滤液减压浓缩，得到呈树胶状化合物的粗化合物。残余物用戊烷研磨且将所得固体用戊烷洗涤，得到3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(150mg，50％产率)。
实施例1：
向搅拌的2-(1-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-3-基)丙-2-醇(40mg，0.14mmol)及3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(73mg，0.27mmol)于1,4-二噁烷(2ml)中的溶液添加koac(40mg，0.407mmol)。混合物用氮气脱气5分钟，接着添加四(三苯基膦)pd(0)(31mg，0.027mmol)。混合物进一步脱气5分钟，且接着在微波照射下在120℃加热1小时。混合物冷却，过滤，且浓缩。产物经由制备型tlc(5％meoh/dcm)纯化，得到3-(5-(4-(2-羟基丙-2-基)-1h-吡唑-1-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-甲腈(8mg，14％产率)。1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ9.70(s,1h),8.94(s,1h),8.85(s,1h),8.2(s,1h),8.00(s,1h),7.95(s,1h),7.81(s,1h),3.90(m,1h),1.61(s,6h),1.31(s,3h),1.25(s,3h)；lcms403.5(m+h)；hplcrt12.9min,条件g。
实施例2
2-(7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-n-异丙基-5-(4-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-1-基)吡啶-4-胺
中间体2a：2-氯-5-碘吡啶-4-胺
向搅拌的2-氯吡啶-4-胺(5g，39mmol)于dmf(50ml)中的溶液添加nis(8.75g，39mmol)。接着反应混合物在80℃加热3小时。混合物冷却且真空移除dmf。残余物分配于etoac与水之间且分离各层。有机层经na2so4干燥，过滤，且浓缩。产物经由柱色谱法(10％etoac/石油醚)纯化，得到2-氯-5-碘吡啶-4-胺(4g，39％产率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.20(s,1h),6.64(s,1h),6.50(brs,2h)；lc/ms：254.8(m+)。用12％etoac/石油醚进一步洗脱，得到2-氯-3-碘吡啶-4-胺(4g，39％产率)。
中间体2b：2-氯-5-碘-n-异丙基吡啶-4-胺
在0℃向搅拌的2-氯-5-碘吡啶-4-胺(4g，15.7mmol)于dmf(40ml)中的溶液添加nah(2.26g，47.2mmol)。使混合物温热至室温且接着在80℃加热。逐滴添加含2-碘丙烷(3.14ml，31.4mmol)的4mldmf且继续加热4小时。混合物冷却至室温且用碎冰淬灭。产物用dcm(2×20ml)萃取且有机层经na2so4干燥，过滤，且浓缩。经由柱色谱法(10％ea/石油醚)纯化，得到呈无色液体状的2-氯-5-碘-n-异丙基吡啶-4-胺(2.8g，60％产率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.23(s,1h),6.61(s,1h),5.34(d,j＝8.0hz,1h),3.80(m,1h),1.21(s,3h),1.19(s,3h)；lc/ms：296.6(m+)。
中间体2c：2-氯-n-异丙基-5-(1h-吡唑-4-基)吡啶-4-胺
向搅拌的2-氯-5-碘-n-异丙基吡啶-4-胺(500mg，1.7mmol)于dmf(10ml)及水(1ml)中的溶液添加4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯(496mg，1.7mmol)及k2co3(700mg，5.06mmol)。混合物经由氮气鼓泡来脱气2分钟且添加第二代xphos前催化剂(133mg，0.169mmol)且再继续脱气2分钟。混合物密封且在100℃加热3小时。反应混合物冷却且浓缩。添加etoac(150ml)且有机层用冰冷水(2×20ml)洗涤。有机层经na2so4干燥，过滤且浓缩。产物经由柱色谱法(30％etoac/石油醚)纯化，得到2-氯-n-异丙基-5-(1h-吡唑-4-基)吡啶-4-胺(250mg，63％产率)。lc/ms：236.9(m+)。
中间体2d：2-氯-n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)吡啶-4-胺
向搅拌的2-氯-n-异丙基-5-(1h-吡唑-4-基)吡啶-4-胺(200mg，0.845mmol)于dmf(4ml)中的溶液添加cs2co3(413mg，1.27mmol)及4-溴四氢-2h-吡喃(167mg，1.01mmol)。反应混合物在微波照射下在160℃加热2.5小时。冷却后，混合物浓缩至干且接着分配于etoac(150ml)与冰水(20ml)之间。分离各层且有机层再用冷水洗涤。有机层经na2so4干燥，过滤，且浓缩。产物经由柱色谱法(30％etoac/石油醚)纯化，得到2-氯-n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)吡啶-4-胺(80mg，30％产率)。lcms321.1(m+h)。
中间体2e：n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)-2-(三甲基甲锡烷基)吡啶-4-胺
向搅拌的2-氯-n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)吡啶-4-胺(70mg，0.218mmol)于1,4-二噁烷(10ml)中的溶液添加六甲基二锡(0.090ml，0.436mmol)。添加1,1'-二(二叔丁基膦)二茂铁二氯化钯(7.1mg，10.9μmol)且混合物脱气5分钟。反应混合物在密封管中在115℃加热3小时。反应混合物经硅藻土过滤，且用20ml乙酸乙酯洗涤。滤液浓缩，得到n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)-2-(三甲基甲锡烷基)吡啶-4-胺(90mg，92％产率)，其未经进一步纯化即使用。
中间体2f：7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪
将5-氯哒嗪-3-胺(14.4g，111mmol)及氯乙醛(81ml，556mmol)于2-丙醇(150ml)中的溶液在100℃加热16小时。混合物冷却至室温且浓缩。向残余物添加水(400ml)且用etoac(3×500ml)洗涤。用饱和nahco3溶液使水层达到约ph8且用etoac(3×50ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤且浓缩。该物质经由柱色谱法(40％etoac/pe)纯化，得到呈棕色固体的7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪(10.2mg，59％产率)。1hnmr:(400mhz,cdcl3)δ8.27(s,1h),7.96(s,2h),7.78(s,1h)；lcms154.3(m+h)。
中间体2g：7-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪
向7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪(250mg，1.63mmol)于dmf(10ml)中的搅拌溶液中添加nis(733mg，3.26mmol)且将反应混合物搅拌3小时。混合物浓缩至干，接着分配于etoac(100ml)与冰水(30ml)之间。分离各层且有机层再用冷水洗涤。有机层经na2so4干燥，过滤，且浓缩。产物经由柱色谱法(20％etoac/石油醚)纯化，得到7-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪(390mg，77％产率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.77(s,1h),8.45(s,1h),7.90(s,1h)；lcms279.9(m+)。
实施例2：
向n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)-2-(三甲基甲锡烷基)吡啶-4-胺(45mg，0.100mmol)及7-氯-3-碘咪唑并[1,2-b]哒嗪(28.0mg，0.100mmol)于1,4-二噁烷(10ml)中的搅拌溶液中添加cui(1.91mg，10μmol)。混合物用氮气脱气5分钟，接着添加四(三苯基膦)pd(0)(12mg，0.01mmol)。混合物进一步脱气5分钟，接着在密封管中在110℃加热15小时。混合物冷却，经硅藻土过滤且淋洗。滤液浓缩且分配于dcm与1.5nhcl之间。水层用dcm洗涤且接着用nahco3处理。产物萃取至etoac中且经由制备型hplc纯化，得到2-(7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)吡啶-4-胺(7mg，17％产率)。1hnmr:(400mhz,dmso-d6)δ8.85(d,j＝2.0hz,1h),8.56(d,j＝2.5hz,1h),8.38(s,1h),8.21(s,1h),8.14(s,1h),7.86(s,1h),7.78(s,1h),5.21(d,j＝7.5hz,1h),4.48(br.s.,1h),4.00(d,j＝11.5hz,2h),3.79(br.s.,1h),3.57-3.43(m,2h),2.10-1.94(m,4h),1.27(d,j＝6.5hz,6h)；lcms438.3(m+h),hplcrt1.61min,条件e。
表1中的实施例使用针对实施例2所概述的一般方法，使用适当起始物质制备。
表1
实施例11
2-(6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-n-异丙基-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-4-胺
中间体11a：5-溴-2-氯-n-异丙基吡啶-4-胺
室温搅拌的5-溴-2,4-二氯吡啶(3.0g，13.22mmol)、异丙基胺(1.7ml，19.83mmol)及许尼希碱(11.6ml，66.1mmol)于dmf(5ml)中的溶液接着在防护罩后在120℃加热4小时，此刻，通过lcms判断其完成。反应混合物用乙酸乙酯稀释且用10％licl(3次)洗涤。有机层经na2so4干燥，过滤且浓缩，得到粗物质。产物通过柱色谱法(己烷/etoac)纯化，得到呈无色油状的5-溴-2-氯-n-异丙基吡啶-4-胺(1.29g，37％产率)。lcmsm/z249.0(m+h)。
中间体11b：2-氯-n-异丙基-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-4-胺
在室温向搅拌的5-溴-2-氯-n-异丙基吡啶-4-胺(100mg，0.401mmol)、叠氮化钠(52.1mg，0.801mmol)、抗坏血酸钠(7.94mg，0.040mmol)、n1,n2-二甲基乙-1,2-二胺(10.60mg，0.120mmol)于乙醇(1.4ml)及h2o(0.600ml)中的悬浮液中鼓泡氮气5分钟，接着添加碘化亚铜(i)(15.26mg，0.080mmol)及戊-1-炔(136mg，2.0mmol)。反应混合物在90℃加热2小时，冷却至25℃且添加如上另一组试剂。继续加热16小时，此刻，通过lcms判断其完成。反应混合物用乙酸乙酯(2ml)稀释，过滤，且真空浓缩。通过mplc(己烷/etoac)纯化，得到2-氯-n-异丙基-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-4-胺(46mg，37％产率)。lcms252.2(m-n2)+。
中间体11c：3-溴-6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶
在0℃向搅拌的6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶(0.3g，1.954mmol)于dcm(10ml)中的溶液添加nbs(0.348g，1.954mmol)。在相同温度将反应混合物搅拌5小时。混合物用水稀释且用乙酸乙酯(3×15ml)萃取。合并的有机层经无水na2so4干燥且减压蒸发，得到粗化合物。粗化合物未经进一步纯化即用于下一步。lcmsm/z231.8(m+h)；1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ9.63(d,j＝2.3hz,1h),8.70(d,j＝2.3hz,1h),8.43(s,1h)。
中间体11d：6-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶
向3-溴-6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶(2.0g，8.6mmol)于1,4-二噁烷(100ml)中的溶液添加4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(5.46g，21.5mmol)，接着添加乙酸钾(2.53g，25.8mmol)且溶液通过氮气脱气5分钟。向此反应混合物添加1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(ii)二氯甲烷复合物(0.35g，0.43mmol)且混合物再脱气15分钟。将反应容器密封且加热至100℃，保持18小时。反应混合物经硅藻土床过滤且用3；2etoac/石油醚洗涤。减压浓缩滤液。粗化合物原样使用，其为呈棕色固体状的6-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(1.2g，50％产率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.63(d,j＝2.0hz,1h),8.74(d,j＝2.5hz,1h),8.37(s,1h),1.31(s,13h)；lcmsm/z198.0(m+h)。
中间体11e：咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈
1l瓶中7-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪(21g，137mmol)及dma(420ml)的混合物用氮气净化5分钟。添加氰化锌(24.08g，205mmol)及锌(1.788g，27.3mmol)且瓶用氮气净化5分钟。添加dppf(15.16g，27.3mmol)及pd2(dba)3(12.52g，13.67mmol)且反应混合物在130℃加热12小时。反应混合物冷却至室温，经硅藻土过滤，且用乙酸乙酯洗涤。移除溶剂且残余物分配于etoac与水之间。分离各层且有机层浓缩。添加mtbe(250ml)且所得固体充分搅拌且过滤，得到21g棕色固体，其经由柱色谱法(60-70％etoac/石油醚)纯化，得到呈浅棕色固体状的咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(12.8g，65％产率)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.98(s,1h),8.89(s,1h),8.60(s,1h),8.10(s,1h)；lcmsm/z145.0(m+h)。
中间体11f：3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈
在2l4颈圆底烧瓶中制备咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(25g，173mmol)于mecn(500ml)中的溶液。内容物冷却至0-5℃且经30分钟逐滴添加nbs(32.4g，182mmol)于mecn(250ml)中的溶液。添加后，反应混合物缓慢达至25-30℃且搅拌2小时。反应混合物在50-55℃真空浓缩且向粗残余物添加水(250ml)且搅拌10分钟。收集所得固体且用水淋洗。固体在mtbe(150ml)中形成浆状物，搅拌约10分钟，过滤，且用新鲜mtbe(100ml)洗涤且在滤纸上干燥。物质经由柱色谱法(含30-50％乙酸乙酯的石油醚)纯化，再次在mtbe(100ml)中浆化后得到3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(18g，46％产率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(m,2h),8.25(s,1h)；lcmsm/z225.0(m+2h)。
实施例11：
2-氯-n-异丙基-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-4-胺(30mg，0.107mmol)溶于1,4-二噁烷(2ml)及dma(0.5ml)中，接着添加0.2ml水、6-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(59.9mg，0.214mmol)及koac(31.6mg，0.322mmol)。混合物脱气10分钟，接着添加四(三苯基膦)pd(0)(25mg，0.021mmol)且脱气5分钟。混合物在微波反应器中在100℃加热2小时。反应混合物冷却，过滤，且滤液在高真空下浓缩。残余物溶于dmf中且经由制备型hplc纯化，得到2-(6-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-n-异丙基-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-4-胺(9.7mg，18％产率)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ9.75(s,1h),8.99(s,1h),8.93(s,1h),8.43(s,1h),8.33(s,1h),7.90(s,1h),7.27(br.s.,1h),3.97(d,j＝6.5hz,0.5h),3.58(br.s.,0.5h),2.73(t,j＝7.6hz,2h),1.72(sxt,j＝7.4hz,2h),1.27(d,j＝6.3hz,6h),0.99(t,j＝7.3hz,3h)。
表2
实施例15
3-(4-(异丙基氨基)-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈
中间体15a：n-异丙基-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)-2-(三甲基甲锡烷基)吡啶-4-胺
在适合加热的小瓶中，搅拌的2-氯-n-异丙基-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-4-胺(70mg，0.250mmol)、六甲基二锡(0.062ml，0.300mmol)于甲苯(4ml)中的溶液用氮气脱气10分钟。添加1,1'-二(二叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(11.73mg，0.018mmol)且再脱气5分钟。闭合压力管且在防护罩后加热至110℃，保持3小时。使混合物达到室温且过滤。固体用甲苯(2ml)洗涤两次，且合并的滤液及淋洗液真空浓缩，得到棕色油状物(150mg，73％产率)，其立即原样用于下一步。lcms409.1(m+h)。
实施例15：
在5ml微波管中，n-异丙基-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)-2-(三甲基甲锡烷基)吡啶-4-胺(100mg，0.184mmol)、3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(41mg，0.184mmol)及cui(3.50mg，0.018mmol)于二噁烷(3ml)中的混合物用氮气脱气5分钟。混合物用四(三苯基膦)pd(0)(42.5mg，0.037mmol)处理，再脱气5分钟，接着小瓶密封。反应混合物经由微波反应器在150℃加热20分钟。反应混合物过滤，且滤液在高真空下浓缩。残余物经由制备型hplc纯化，得到3-(4-(异丙基氨基)-5-(4-丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(3.4mg，5％产率)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ9.10(d,j＝7.2hz,2h),8.71(brs,1h),8.52-8.32(m,2h),8.12(brs,1h),6.57(d,j＝7.2hz,1h),3.94-3.74(m,1h),2.72(t,j＝7.3hz,2h),1.78-1.64(m,2h),1.27(d,j＝6.2hz,6h),0.99(t,j＝7.2hz,3h)；lcms388.3(m+h)；hplcrt1.65min,条件c。
实施例16
3-(4-(异丙基氨基)-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈
中间体16a：6-氯-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯
在装备有teflon螺旋帽的厚壁烧瓶中，4,6-二氯烟酸乙酯(12.3g，55.9mmol)及异丙基胺(14.37ml，168mmol)于乙醇(100ml)中的混合物在80℃搅拌18小时，此刻，通过lcms判断反应完成。混合物浓缩至干，且粗物质经由mplc，在330g硅胶柱上，用0-10％乙酸乙酯/己烷洗脱进行色谱纯化。含有产物的馏分汇集且真空浓缩，得到呈无色固体状的6-氯-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯(12.3g，90％产率)。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.69(s,1h),8.11(br.s.,1h),6.56(s,1h),4.36(q,j＝7.1hz,2h),3.71(dq,j＝13.3,6.5hz,1h),1.41(t,j＝7.2hz,3h),1.31(d,j＝6.4hz,6h)；lcms243.1(m+h)+。
中间体16b：(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)甲醇
搅拌的6-氯-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯(1.42g,5.85mmol)溶液冷却至-78℃，且用1mlah的thf溶液(18.14ml，18.14mmol)逐滴处理10分钟。当添加结束时，将反应混合物在-78℃搅拌60分钟，接着使其温热至0℃。容器置于冰/水浴中，且反应混合物小心用水(0.7ml)淬灭，接着1mnaoh(2.8ml)淬灭。搅拌1小时后，所得不溶性粉末通过过滤来移除，用thf彻底淋洗，且合并的滤液及淋洗液真空浓缩，得到呈无色固体状的(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)甲醇(1.14g，97％产率)。lcms201.2(m+h)+。
中间体16c：6-氯-4-(异丙基氨基)烟碱醛
搅拌的(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)甲醇(1.14g，5.68mmol)溶液用二氧化锰(2.469g，28.4mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌60小时(周末)，此刻，通过lcms判断其完成。混合物过滤，固体用thf淋洗两次且用二氯甲烷淋洗一次，且合并的滤液及淋洗液真空浓缩。残余物经由mplc，在40g硅胶柱上，以40ml/min用15-50％乙酸乙酯/己烷洗脱进行色谱纯化。将含有所需产物的馏分汇集且真空浓缩，得到呈无色油状的6-氯-4-(异丙基氨基)烟碱醛(967mg，86％产率)。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δ9.84(d,j＝0.7hz,1h),8.56(br.s.,1h),8.30(s,1h),6.60(s,1h),3.81-3.66(m,1h),1.33(d,j＝6.4hz,6h)；lcms199.2(m+h)+。
中间体16d：2-氯-5-乙炔基-n-异丙基吡啶-4-胺
搅拌的6-氯-4-(异丙基氨基)烟碱醛(3.16g，15.91mmol)及碳酸钾(5.50g，39.8mmol)于无水甲醇(30ml)中的混合物冷却至5℃且用(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(7.64ml，31.8mmol)处理。使反应混合物温热至室温且搅拌6小时。lcms显示反应未完成。混合物用碳酸钾(1.646g，11.93mmol)及(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(1.5g，7.81mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌3天，此刻，通过lcms判断其完成。大部分甲醇与氮气流一起蒸发，且剩余混合物倾倒至乙酸乙酯(75ml)中。浑浊溶液用水洗涤一次，用饱和碳酸氢钠洗涤2次，用盐水洗涤一次，接着有机相经硫酸钠干燥且真空浓缩。残余物经由mplc，在80g硅胶柱上，以60ml/min用15％至50％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱10倍柱体积进行色谱纯化。将含有所需产物的馏分汇集且真空浓缩，得到呈紫色固体状的2-氯-5-乙炔基-n-异丙基吡啶-4-胺(2.26g，73％产率)。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.13(s,1h),6.48(s,1h),4.97(br.s.,1h),3.70(dq,j＝13.5,6.5hz,1h),3.53(s,1h),1.30(d,j＝6.4hz,6h)；lcms194.9(m+h)+。
中间体16e：2-氯-n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-胺
在密封小瓶中，将4-叠氮基四氢-2h-吡喃(111mg，0.873mmol)、2-氯-5-乙炔基-n-异丙基吡啶-4-胺(85mg，0.437mmol)、抗坏血酸钠(17.30mg，0.087mmol)及硫酸铜(ii)(6.97mg，0.044mmol)的混合物在50℃搅拌2小时，接着在室温搅拌48小时。混合物用乙酸乙酯(25ml)稀释，且浑浊溶液用水洗涤3次，用盐水洗涤一次，接着经硫酸钠干燥且真空浓缩。残余物经由柱色谱法，在24g硅胶柱上，以40ml/min用0.5％至10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱10倍柱体积纯化。将含有所需产物的馏分汇集且真空浓缩，得到呈无色固体状的2-氯-n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-胺(125mg，89％产率)。lcms322.1(m+h)；1hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.30-8.14(m,2h),7.89(s,1h),6.60(s,1h),4.87-4.68(m,1h),4.20(dt,j＝11.9,3.4hz,2h),3.85-3.70(m,1h),3.70-3.49(m,2h),2.33-2.15(m,4h),1.59(s,3h),1.36(d,j＝6.4hz,6h)。
中间体16f：n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-2-(三甲基甲锡烷基)吡啶-4-胺
在5ml微波小瓶中，2-氯-n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-4-胺(55mg，0.171mmol)及六甲基二锡(0.043ml，0.205mmol)于甲苯(2ml)中的混合物通过氮气鼓泡进行脱气5分钟。混合物用1,1'-二(二叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(11.1mg，0.017mmol)处理且再脱气5分钟，接着小瓶密封。将反应混合物在80℃加热18小时。使混合物达到室温且过滤。将固体用甲苯(1ml)洗涤，且合并的滤液及淋洗液真空浓缩，得到深棕色油状物，其原样用于下一步。
实施例16：
在5ml微波管中，n-异丙基-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-2-(三甲基甲锡烷基)吡啶-4-胺(77mg，0.17mmol)、3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(45.5mg，0.204mmol)及cui(3.24mg，0.017mmol)于二噁烷(1ml)中的混合物通过氮气鼓泡进行脱气5分钟。混合物用四(三苯基膦)pd(0)(39.3mg，0.034mmol)处理，再脱气5分钟，接着小瓶密封。反应混合物经由微波在150℃加热。蒸发溶剂，且残余物溶解于dmso(2ml)中。溶液过滤，经由制备型hplc纯化，得到3-(4-(异丙基氨基)-5-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(6mg，8％产率)，1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ9.05(brs,1h),9.01(s,1h),8.88(s,1h),8.69(brs,1h),8.66(s,1h),8.22(d,j＝6.9hz,1h),8.01(s,1h),4.86(br.s.,1h),4.01(d,j＝12.8hz,2h),2.19-2.01(m,4h),1.33(d,j＝6.2hz,6h)。
表3
实施例27
3-(5-(1-(3-羟基-3-甲基丁基)-1h-吡唑-4-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈
中间体27a：6-氯-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯
向6-氯-4-(异丙基氨基)烟酸(3g，14mmol)于dmf(20ml)中的溶液接连添加hatu(5.31g，14mmol)、n,o-二甲基羟胺盐酸盐(1.36g，14mmol)及dipea(7.32ml，41.9mmol)。将反应混合物搅拌18小时。反应混合物真空浓缩且接着分配于水与乙酸乙酯之间。分离各层且水层进一步用乙酸乙酯(3次)萃取。合并的有机层经na2so4干燥，过滤，且真空浓缩。残余物经由硅胶色谱法，使用0-15％乙酸乙酯/石油醚纯化，得到呈无色浆状的化合物6-氯-4-(异丙基氨基)-n-甲氧基-n-甲基烟酰胺(3.2g，89％产率)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.03(s,1h),6.71(s,1h),6.53(d,j＝7.8hz,1h),3.75(m,1h),3.54(s,3h),3.25(s,3h),1.31(m,6h)；lcms258.2(m+h)+。
中间体27b：1-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)乙酮
在0℃向搅拌的6-氯-4-(异丙基氨基)-n-甲氧基-n-甲基烟酰胺(3.2g，12.42mmol)于thf(45ml)中的溶液添加甲基溴化镁(12.42ml，37.3mmol)。使反应混合物温热至室温且继续搅拌1小时。反应混合物接着冷却至-20℃且通过添加nh4cl(水溶液)来淬灭。混合物达到室温且用乙酸乙酯稀释。有机层分离且水层用乙酸乙酯(2次)萃取。合并的有机层经na2so4干燥，过滤，且真空浓缩，得到呈淡黄色浆状的1-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)乙酮(2.5g，11.75mmol，95％产率)，其未经进一步纯化即使用。lcms213.1(m+h)+。
中间体27c：6-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-4,6-二氧代己酸
在室温向1-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)乙酮(1.0g，4.7mmol)及二氢呋喃-2,5-二酮(0.471g，4.7mmol)[琥珀酸酐]于thf中的溶液添加叔丁醇钾(14.11ml，14.11mmol，1.0mthf溶液)。将所得微红色溶液搅拌隔夜。添加额外7ml叔丁醇钾(1.0mthf溶液)且继续搅拌8小时。反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯萃取。水层用1.5nhcl酸化且用乙酸乙酯(3次)萃取。合并的有机层经na2so4干燥，过滤，且真空浓缩，得到6-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-4,6-二氧代己酸(800mg，54％产率)，其未经进一步纯化即使用。
中间体27d：3-(3-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)丙酸
向搅拌的6-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-4,6-二氧代己酸(800mg，2.56mmol)于乙醇(10ml)中的溶液添加肼(0.080ml，2.56mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时。反应混合物真空浓缩且悬浮于水中。混合物用1.5nhcl溶液中和且所得固体过滤且干燥，得到呈棕色固体状的3-(3-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)丙酸(680mg，86％产率)。
中间体27e：3-(3-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)丙酸乙酯
向搅拌的3-(3-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)丙酸(680mg，2.2mmol)于乙醇(0.129ml，2.2mmol)中的溶液逐滴添加亚硫酰氯(0.5ml，6.85mmol)。反应混合物在65℃加热3小时。浓缩反应混合物且所得红色浆状物用10％nahco3溶液处理。所得固体过滤且真空干燥，得到呈淡红色固体状的3-(3-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)丙酸乙酯(550mg，1.633mmol，74.1％产率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.94(s,1h),8.53-8.42(m,1h),8.36-8.26(m,1h),6.70-6.60(m,2h),4.18-3.94(m,2h),3.87-3.71(m,1h),2.98-2.84(m,2h),2.77-2.63(m,2h),1.31-1.08(m,9h)；lcmsm/z337.4(m+h)+。
中间体27f：4-(3-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)-2-甲基丁-2-醇
在0℃向搅拌的3-(3-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)丙酸乙酯(550mg，1.63mmol)于thf(20ml)中的溶液逐滴添加溴化甲基镁(2.72ml，8.16mmol)。将反应混合物在0℃搅拌2小时且接着在室温搅拌18小时。反应混合物冷却至-20℃。反应混合物通过添加nh4cl水溶液来淬灭。产物用乙酸乙酯(2次)萃取且合并的有机层经na2so4干燥，过滤，且浓缩。产物经由硅胶色谱法，使用0-5％甲醇/dcm纯化，得到呈棕色固体状的4-(3-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)-2-甲基丁-2-醇(400mg，76％产率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.98-12.81(m,1h),8.59-8.42(m,1h),8.39-8.22(m,1h),6.72-6.54(m,2h),4.39-4.28(brs,1h),3.86-3.72(m,1h),2.76-2.62(m,2h),1.78-1.64(m,2h),1.34-0.94(m,12h)；lcmsm/z323.3(m+h)+。
中间体27g：4-(3-(4-(异丙基氨基)-6-(三甲基甲锡烷基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)-2-甲基丁-2-醇
通过氩气鼓泡通过反应混合物，使搅拌的4-(3-(6-氯-4-(异丙基氨基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)-2-甲基丁-2-醇(210mg，0.650mmol)及六甲基二锡(0.162ml，0.781mmol)于甲苯(10ml)中的溶液脱气10分钟。添加1,1'-二(二叔丁基膦)二茂铁二氯化钯(42.4mg，0.065mmol)且再脱气5分钟。闭合压力管且加热至110℃，保持3小时。反应混合物过滤且真空浓缩，得到呈黑色浆状的化合物4-(3-(4-(异丙基氨基)-6-(三甲基甲锡烷基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)-2-甲基丁-2-醇(250mg，85％产率)，其未经纯化即进一步使用。
实施例27：
向搅拌的4-(3-(4-(异丙基氨基)-6-(三甲基甲锡烷基)吡啶-3-基)-1h-吡唑-5-基)-2-甲基丁-2-醇(121mg，0.269mmol)于二噁烷(4ml)中的溶液[压力管中]添加3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(50mg，0.224mmol)且混合物用氩气脱气10分钟。向此混合物添加pd(ph3p)4(52mg，0.045mmol)且再脱气5分钟。闭合压力管且在110℃加热16小时。反应混合物经分析滤器过滤，用乙酸乙酯彻底洗涤，且浓缩，得到粗化合物。产物经由制备型hplc纯化，得到3-(5-(5-(3-羟基-3-甲基丁基)-1h-吡唑-3-基)-4-(异丙基氨基)吡啶-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-7-甲腈(13.2mg，13.5％产率)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.21(s,1h),9.21-9.19(m,2h),8.85(s,1h),8.74(s,1h),7.90(s,1h),6.88(s,1h),4.50(brs,1h),4.12-4.07(m,1h),2.76-2.72(m,2h),1.77-1.73(m,2h),1.38(d,j＝6.4hz,6h),1.15(s,6h)。
表4
生物学测定
本发明化合物的药理学性质可通过多种生物学测定证实。已对本发明化合物进行下文所例示的生物学测定。
irak4抑制测定
测定在u形底384孔板中进行。最终测定体积为30μl，由测定缓冲液(20mmhepesph7.2、10mmmgcl2、0.015％brij35及4mmdtt)中酶及底物(荧光化肽及atp)及测试化合物的15μl添加物制备。反应通过irak4与底物及测试化合物的组合开始。反应混合物在室温孵育60分钟，且通过添加45μl35mmedta至各样品而终止。在caliper
caco-2渗透性测定方案
在测定前13天至27天，caco-2细胞以1.45×105个细胞/cm2(约每孔4.8×104个细胞)的密度接种至24孔transwell板中经胶原涂覆的聚碳酸酯滤膜上。细胞在由补充有10％胎牛血清、10mmhepes、1％非必需氨基酸、2mml-谷氨酰胺、100u/ml青霉素-g及100μg/ml链霉素的dmem组成的培养基中生长。培养基每3天替换且细胞在37℃保持在95％相对湿度及5％co2气氛中。在即将测定时，评价细胞的紧密连接形成。测试化合物在100％dmso中溶解至10mm且在测定缓冲液中稀释至3μm。渗透性研究通过添加200μl测定缓冲液加上/减去化合物至顶部transwell隔室及600μl测定缓冲液加上/减去化合物至24孔transwell低结合组板的底外侧隔室来开始。对于顶部至底外侧(a至b)渗透性(吸收方向)，含有化合物的缓冲液置于顶部隔室(供体孔)中，而单独缓冲液置于相应的底外侧隔室(接受孔)中。对于底外侧至顶部(b至a)的渗透性(分泌方向)，含有化合物的缓冲液置于底外侧隔室(供体孔)中，而单独缓冲液置于相应的顶部隔室(接收孔)中。接着在轻微振摇下，transwell在95％相对湿度及5％co2气氛中在37℃孵育2小时。孵育后，由各顶部及底外侧隔室移除100μl，且转移至先前负载有100μl/孔的含有250nm普萘洛尔、250nm双氯芬酸及500nm甲苯磺丁脲作为内标的乙腈的96孔低结合板。随后通过lc-ms/ms分析样品以确定化合物浓度。
irak4全血测定
含有抗凝血剂acd-a的人类全血接种于384孔板(25μl/孔)中且与化合物在5％co2培养箱中在37℃一起培养60分钟。在5％co2培养箱中血液用25μlrpmi(gibco)中的tlr2激动剂10μg/ml最终浓度的脂磷壁酸(invivogen,sandiego,ca)刺激5小时。在培养结束时，板在2300rpm离心5分钟。收集上清液且通过流式细胞计量术珠粒测定(bdbiosciences,sanjose,ca)分析il-6水平。
pbmctlr2诱导的il-6测定
外周血单核细胞(pbmc)由含有抗凝血剂edta(2.5mm)的人类血液通过在ficoll梯度上离心分离。pbmc(250000个细胞/孔)在测定培养基(具有10％热失活fcs的rpmi)中与化合物在37℃在5％co2培养箱中一起培养30分钟。用化合物预处理后，细胞用tlr2激动剂10μg/ml脂磷壁酸(invivogen,sandiego,ca)刺激5小时。在培养结束时，板在1800rpm离心10分钟以使细胞成团。收集上清液且通过elisa(bdbiosciences,sanjose,ca)分析il-6水平。
下表列出在irak4抑制测定、irak4全血测定及caco-2渗透性测定中测量的本发明的以下实施例的irak4ic50值、全血ec50值及caco-2渗透性值。如以下实施例所例示的本发明化合物显示小于0.6μm的irakic50抑制值。
表4