一种白细胞抗原结合多肽

文档序号:26050398发布日期:2021-07-27 15:25阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种白细胞抗原结合多肽,其特征在于,应用基因工程设计一种人源化抗cd3分子的单链抗体,对一种鼠抗cd3抗体的序列分析,通过替换骨架区序列,实现抗体人源化,通过突变重链可变区的半胱氨酸残基,构建目的基因的原核表达载体,选取表达宿主,发酵,获得融合的、带有纯化标签的融合蛋白,再通过亲和层析、酶切和分子筛层析获得纯化的、有活性的抗体蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种白细胞抗原结合多肽,其特征在于,所述单链抗体由重链可变区和轻链可变区组成。

3.根据权利要求2所述的一种白细胞抗原结合多肽,其特征在于,所述重链可变区蛋白序列包括四个骨架区和三个cdr区,重链可变区的cdr区包括vh-cdr1、vh-cdr2和vh-cdr3,重链可变区蛋白序列为:diqmtqspsslsasvgdrvtitcktssggastsqygnwyqqtpgkapkrwiyagcnrkgpgvpsrfsgsgsgtdytftisslqpediatyycglfssviwffgqgtklqitr。

4.根据权利要求3所述的一种白细胞抗原结合多肽,其特征在于,所述轻链可变区蛋白序列含四个骨架区和三个cdr区,轻链可变区的cdr区包括vl-cdr1、vl-cdr2和vl-cdr3,轻链可变区蛋白序列为:qvqlvqsgggvvqpgrslrlsckasgytftcsygmvwvrqapgkglewiggklrsrsnvsastygdtfrdrftisrdnskntaflqmdslrpedtgvyfcarhaqfaqstassfaswgqgtpvtvss。

5.根据权利要求4所述的一种白细胞抗原结合多肽,其特征在于,所述骨架区还包括人和哺乳类动物的抗体骨架区,cdr区高度特异,单个氨基酸残基的改变会影响抗体的亲和力。

6.根据权利要求1所述的一种白细胞抗原结合多肽,其特征在于,宿主系统包括脊椎动物、昆虫、植物、真菌、细菌和病毒,细菌选用大肠杆菌。

7.根据权利要求6所述的一种白细胞抗原结合多肽,其特征在于,所述宿主系统经过载体转化、转染或转导得到含有抗体蛋白的基因表达载体的宿主系统,并用于表达携带有重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列。

8.根据权利要求7所述的一种白细胞抗原结合多肽,其特征在于,所述抗体蛋白通过含有抗体基因表达载体的构建进行批量制备。

9.根据权利要求8所述的一种白细胞抗原结合多肽,其特征在于,携带有基因序列的质粒载体和其它密码子偏爱的编码同种蛋白的基因表达载体选用pet载体。

10.根据权利要求7所述的一种白细胞抗原结合多肽,其特征在于,基因载体经宿主系统大规模表达和纯化后的产物作为试剂、添加剂或用于临床。


技术总结
本发明公开一种白细胞抗原结合多肽,应用基因工程技术构建表达载体,高效表达一种CD3单链抗体并进行快速纯化的方法和技术,通过构建目的基因的原核的表达载体,选取大肠杆菌作为表达宿主,通过高密度发酵,获得目的蛋白,目的蛋白通过亲和层析和分子筛层析获得纯的、有活性的抗体蛋白ScFv。此ScFv抗体与CD3分子有良好的亲和力,可以用于分子检测和临床诊断和疾病。

技术研发人员:范小波;吴国球
受保护的技术使用者:东南大学
技术研发日:2021.04.26
技术公布日:2021.07.27
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