干，转入聚酰胺柱进 行分离，用体积比为5:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有荸荠甲素 的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B 0. 83g。
[0029] 将粗品B溶于4. OmL的甲醇中，加入4. OmL水制成悬池液，用Sephadex LH-20凝 胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有荸荠甲素的洗脱液，减压浓缩， 获得粗品C 0· 18g。
[0030] 将所得粗品C溶于I. OmL甲醇中，加入2. OmL水制成悬浊液，用RP-18色谱柱纯化， 用75%体积百分比的甲醇水溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有荸荠甲素的洗脱液， 减压浓缩，干燥，获得含量为95. 3%的荸荠甲素7. Omg。
[0031] 实施例2
[0032] 将8kg新鲜荸荠皮粉末加入在提取罐中，加入32L 70%体积百分比的丙酮水溶 液，在25°C下浸泡24h，共浸泡3次，过滤，合并滤液，减压浓缩膏状，获得提取物I. 05kg。
[0033] 将提取物加入5. OL水中制成浑浊液，用5. OL乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减 压浓缩，获得萃取物120g。
[0034] 往萃取物中加入300mL甲醇溶解，用260g聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，装柱，连 接MCI柱进行中压分离，用40-100%体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，按每份 500mL收集，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90%体积百分比的洗脱液，减压 浓缩，获得粗品A 31g。
[0035] 将粗品A溶于90mL甲醇中，加入60g聚酰胺拌样，将甲醇挥发干，转入聚酰胺柱进 行分离，用体积比为4:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有荸荠甲素 的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B 0. 96g。
[0036] 将粗品B溶于4. OmL的甲醇中，加入4. OmL水制成悬池液，用Sephadex LH-20凝 胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有荸荠甲素的洗脱液，减压浓缩， 获得粗品C 0· 19g。
[0037] 将所得粗品C溶于I. OmL甲醇中，加入2. OmL水制成悬浊液，用RP-18色谱柱纯 化，用70%体积百分比的甲醇水溶液洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集合并含有荸荠甲素的 洗脱液，减压浓缩，干燥，获得含量为96. 3 %的荸荠甲素9. Omg。
[0038] 实施例3
[0039] 将8kg新鲜荸荠皮粉末加入在提取罐中，加入32L 70%体积百分比的丙酮水溶 液，在25°C下浸泡24h，共浸泡3次，过滤，合并滤液，减压浓缩膏状，获得提取物I. 05kg。
[0040] 将提取物加入5. OL水中制成浑浊液，用5. OL乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减 压浓缩，获得萃取物120g。
[0041] 往萃取物中加入300mL甲醇溶解，用260g聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，装柱，连 接MCI柱进行中压分离，用40-100%体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，按每份 500mL收集，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90%体积百分比的洗脱液，减压 浓缩，获得粗品A 31g。
[0042] 将粗品A溶于90mL甲醇中，加入60g聚酰胺拌样，将甲醇挥发干，转入聚酰胺柱进 行分离，用体积比为3:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集合并含有荸荠 甲素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B 1.05g。
[0043] 将粗品B溶于5. OmL的甲醇中，加入5. OmL水制成悬浊液，用S印hadex LH-20凝 胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有荸荠甲素的洗脱液，减压浓缩， 获得粗品C 0. 23g。
[0044] 将所得粗品C溶于I. OmL甲醇中，加入2. OmL水制成悬浊液，用RP-18色谱柱纯化， 用65%体积百分比的甲醇水溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有荸荠甲素的洗脱液， 减压浓缩，干燥，获得含量为95. 6%的荸荠甲素8. 5mg。
[0045] 所得产品通过1H-NMI^13C-NMIMKHREMSjV进行结构鉴定。波谱数据证实，所纯 化得到的荸荠甲素的化学结构式如下：
[0046]
【主权项】
1. 一种荸荠甲素的提取方法，其具体步骤如下： (1) 将新鲜的荸荠皮风干，粉碎，备用；以重量计，称取荸荠皮粉末1份，加入提取罐中， 每次加入4-10份70%体积百分比的丙酮水溶液，在25°C下浸泡24h，浸泡3次，过滤，合并 滤液，减压浓缩至膏状，获得提取物。 (2) 以重量计，将提取物1份分散在5份水中制成悬浊液，用1-2倍水体积的乙酸乙酯 萃取3次，合并萃取液，减压浓缩至干，获得萃取物。 (3) 往萃取物中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍萃取物质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发 至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，以40-100%体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度 洗脱，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90%体积百分比的洗脱液，减压浓缩，获 得粗品A。 (4) 往粗品A中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，转 入聚酰胺色谱柱进行分离，用体积比为5:1-2:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法检测， 收集合并含有荸荠甲素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B。 (5) 以重量计，将粗品B1份溶于4-8份甲醇中，加入等量甲醇体积的水制成悬浊液，用 Sephadex LH-20凝胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有荸荠甲素的 洗脱液，减压浓缩，获得粗品C。 (6) 以重量计，将所得粗品C1份溶于4-8份甲醇中，加入2倍甲醇体积的水制成悬浊 液，用RP-18色谱柱纯化，用62-78%体积百分比的甲醇水溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集 合并含有荸荠甲素的洗脱液，减压浓缩，干燥，获得含量达95%以上的荸荠甲素产品。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3)中的所述的MCI柱规格 为70X460mm，填充材料为MCI-gel CHP-20P，柱色谱条件为：柱压为80Psi，流动相流速为 50mL/min，检测波长为245nm ;所述的流动相为40-100%体积百分比的甲醇水溶液。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4)中所述的聚酰胺，规格为 200-300目；所用洗脱液为体积比为5:1-3:1的氯仿-甲醇溶液。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（6)中所述的RP-18柱层析材料 为RP-18反相硅胶，孔径为50 ym ;所用洗脱液为62-78%体积百分比的甲醇水溶液。
【专利摘要】本发明的荸荠甲素的提取方法，特别涉及一种从荸荠皮中提取分离荸荠甲素的方法，属于天然有机化学领域，其特征在于，以丙酮水溶液为溶剂，提取荸荠皮中的荸荠甲素，提取物用乙酸乙酯萃取后，萃取物经中压MCI柱色谱和聚酰胺柱色谱分离，然后用Sephadex LH-20凝胶和RP-18色谱柱纯化，获得含量在95％以上的荸荠甲素甲产品。本发明利用被废弃的荸荠皮为原料提取分离荸荠甲素，分离效果好，产品纯度高，将荸荠皮变废为宝，所选用的层析材料MCI、聚酰胺、凝胶和RP-18均可反复使用，原料易得，资源丰富，生产成本低，可进行规模化生产，具有较好的应用前景。
【IPC分类】C07D493-04
【公开号】CN104530070
【申请号】CN201410834966
【发明人】伍淑婕, 罗杨合, 方方, 李行任, 李国仙
【申请人】贺州学院
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月29日