浙白术pcr鉴定试剂盒及鉴定方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种DNA分子鉴定方法，特别涉及中药浙白术PCR鉴定试剂盒、特异性 引物、模板及鉴定方法。 (二）
【背景技术】
[0002] 白术是为菊科植物白术（AtractylodesmacrocephalaKoidz.)的干燥根莖，在临 床上应用广泛，俗有"十方九术"、"北参南术"之称，具有治脾益气，燥湿利水，止汗安胎的功 效。浙江是白术的主产区，有上百年的栽培历史。浙江磐安、新昌、嵊县、东阳等地所产品种 称为"浙白术"（RhizomaAtractylodisMacrocephalae)，为著名的道地药材"浙八味"之 一，其特点为术形较为丰满，"术腿"粗短，"云头"膨大。
[0003] 近年来，由于白术市场的不断扩大，种植户应用的种质混杂和种植方法不规范， 商家以次充好等原因，使辨析白术品种及其真伪较为困难，导致了白术成药质量的降低。目 前白术品种的鉴定方法主要包括外观形态观察，利用化学试剂、光谱、核磁共振等技术对其 进行区分，但由于不同产地白术的亲缘关系较近，外观相似，且含有的化学成分较雷同，利 用传统的中药鉴定方法较难进行鉴定。利用分子生物学的技术，从基因水平进行的中药分 子鉴定方法，由于不受外界因素和生物体发育阶段及组织器官差异的影响，具有准确性高、 重现性好等特点。本发明提供的PCR检测法就是一种浙白术的DNA分子鉴定方法，能够准 确鉴定浙白术。目前利用PCR检测法对浙白术进行鉴定尚未见报道。 (三）
【发明内容】
[0004] 本发明目的是提供一种能够准确鉴定中药浙白术的PCR鉴定试剂盒和检测方法， 包括PCR检测法关键试剂PCR引物、模板和PCR检测法的检测步骤。
[0005] 本发明采用的技术方案是：
[0006] 本发明提供一种浙白术PCR鉴定试剂盒，所述试剂盒中的特异性引物为ZBZ1和ZBZ2 ：
【主权项】
1. 一种浙白术PCR鉴定试剂盒，其特征在于所述试剂盒中的特异性引物为ZBZl和 ZBZ2 ： 上游：5' -CAAGTTGGATACACTCCTGG-3' 下游：5' -CTACTACCATCGCAAACTCT-3'。
2. 如权利要求1所述浙白术PCR鉴定试剂盒，其特征在于所述的浙白术PCR鉴定试剂 盒的组成为：
3. -种利用权利要求1所述浙白术PCR鉴定试剂盒对浙白术进行鉴定的方法，其特征 在于所述方法为： (1) 模板DNA的提取和质量鉴定：提取供试品DNA作为PCR的模板；以电泳法检测模板 DNA的质量，条带清晰无弥散的，即为符合PCR反应的模板DNA ; (2) PCR鉴定：利用浙白术PCR鉴定试剂盒中的特异性引物ZBZl和ZBZ2,进行PCR扩 增： PCR反应溶液：
将PCR反应溶液放入PCR自动扩增仪器中进行PCR扩增反应，反应程序设置为：94°C 预变性3min，94°C变性45s，60?65°C复性45s，72°C延伸lmin，35个循环，最后72°C延伸 7min ； (3) PCR产物进行电泳检测：取出PCR扩增产物5 μ L与加样缓冲液1 μ L混合，用I. 2% 琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，在540bp处出现扩增条带的为浙白术。
【专利摘要】本发明公开了一种浙白术PCR鉴定试剂盒及鉴定方法，所述试剂盒中的特异性引物为ZBZ1和ZBZ2，ZBZ1：5’-CAAGTTGGATACACTCCTGG-3，ZBZ2：5’-CTACTACCATCGCAAACTCT-3’；本发明提供了一种快速、准确鉴定浙白术的方法，可以广泛应用于浙白术中药选种育种、种植、采收储存、销售、临床应用各环节的品种鉴定，在鉴别中药真伪，打击伪品，加强中药质量监管，促进中药现代化发展方面具有重大意义。
【IPC分类】C12Q1-68
【公开号】CN104531838
【申请号】CN201410704727
【发明人】李敏, 陈强, 茅学群, 黄龙妹
【申请人】浙江工业大学
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年11月27日