一种天然溶血磷脂酰胆碱的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于制药工程技术领域，具体地说，涉及一种天然溶血磷脂酰胆碱的制备 方法。
【背景技术】
[0002] 溶血磷脂酰胆碱（Iysophosphatidylcholine简称LPC)是一种润湿能力、乳化能 力、乳化稳定性等性能均优于普通磷脂的优良乳化剂且同时具有抗氧化性和抗菌性，在食 品、化工、医药等领域应用广泛。在医药领域中高纯度溶血磷脂酰胆碱（LPC> 98% )主要 作为脂质体的乳化剂使用，其乳化效果较磷脂酰胆碱更佳，是新型靶向制剂的关键辅料。高 纯度的溶血磷脂酰胆碱作为合成磷脂的起始原料，应用前景广阔。目前中国药典收载的药 用磷脂主要控制指标包括甘油三酯、游离脂肪酸、酸值、过氧化值等，另外甲氧基苯胺值是 过氧化物的再次氧化产物指标，在制剂中有严格控制，因此开发药用溶血磷脂酰胆碱需要 严格控制上述关键指标。
[0003] 目前制备高纯溶血磷脂酰胆碱的方法主要有化学合成、酸碱水（醇）解、酶水 (醇）解和物理分离等方法。
[0004] 化学合成法由于存在使用毒性较大的反应试剂导致所得产品色泽、氧化指标等不 符合药用要求等问题，因此其产品在医药领域的使用受到很大的限制。酸碱水（醇）解法 由于催化剂对磷脂1位或2位酯键的水（醇）解专属性差，难以控制水解反应程度。酶水 (醇）解法使用的磷脂酶或脂肪酶对反应条件要求苛刻且容易失活，价格昂贵。
[0005] 物理分离方法包括：超临界萃取法、膜分离法、溶剂提取法、吸附法、柱层析等方 法。其中CO2超临界萃取法只适合制备混合磷脂，所得产品溶血磷脂酰胆碱含量普遍偏低。 溶血磷脂酰胆碱与其他溶血磷脂的分子量较接近，目前膜分离技术尚不能完全分离分子量 相近的组分，要得到单一溶血磷脂酰胆碱仍存在困难。溶剂提取法是通过利用溶血磷脂酰 胆碱在两相溶剂中的溶解度的差异达到富集纯化的目的，对理化性质非常相似的各类磷脂 的选择性较差。吸附法是一种较常用的纯化方法，通过选择不同理化特性的吸附剂对待吸 附原料液进行搅拌吸附，达到纯化的效果，常见的吸附剂有：三氧化二铝、硅胶等，该方法 难以制备高纯度的溶血磷脂酰胆碱产品且控制其它磷脂等杂质的限度存在较大困难。
[0006] 硅胶柱层析法是另一种较常用的分离纯化方法，固定相与待分离物质的比例、洗 脱溶剂种类和比例对柱层析的分离效果与除杂能力有巨大的影响，柱层析方法的溶剂及比 例选择与产品本身的性质以及杂质性质有关。该方法虽常见，但能够使产品纯度高同时又 能符合药用要求的方法未见报道。
[0007] 日本专利JP01311088A公开以甘油磷脂酰胆碱和酰氯为原料反应得到溶血磷脂 酰胆碱并通过硅胶柱层析，以氯仿-甲醇为洗脱剂，得到溶血磷脂酰胆碱含量为90%? 95 %的产品；日本专利JP63091306A公开了一种以大豆磷脂为原料，经过丙酮脱油，磷脂酶 A2水解，硅胶柱层析，乙醇-水洗脱，溶血磷脂酰胆碱含量为87%、溶血磷脂酰乙醇胺含量 为6%的产品，上述两篇专利技术为化学合成或酶改性法得到的产品为非天然溶血磷脂酰 胆碱，且杂质较高，氧化指标无法控制。
[0008] 日本专利JP03011086A公开了一种以双棕榈酰磷脂酰胆碱为原料，经过磷脂酶A2 水解，十八烷基键合硅胶（ODS)柱层析，氯仿-甲醇-水洗脱，溶血磷脂酰胆碱含量为99% 的产品；中国专利CN103131736A公开了以磷脂酰胆碱为原料经过加入蓖麻油提取物，经过 磷脂酶A2水解，丙酮沉淀，得到溶血磷脂酰胆碱含量为95. 4?99. 1 %的产品，上述两篇专 利技术得到的产品为非天然溶血磷脂酰胆碱且不能有效控制氧化指标。
[0009] 以上报道的方法在产品杂质、氧化指标等方面均没法控制，难以将上述技术方法 应用在医药领域。目前开发天然溶血磷脂酰胆碱的技术领域里，没有专门针对控制过氧化 值、甲氧基苯胺值等理化指标的方法。溶血磷脂酰胆碱本身具有高不稳定性，开发该类产品 需要过度依赖于起始原料的新鲜度。受技术约束，国内天然溶血磷脂酰胆碱主要依赖进口， 不仅价格昂贵，供货周期长，且不利于天然溶血磷脂酰胆碱产品市场的普及应用。
【发明内容】
[0010] 本发明的目的在于提供一种天然溶血磷脂酰胆碱的制备方法。以大豆或蛋黄来源 的磷脂为原料，通过柱层析以三元混合溶剂为洗脱剂进行两次洗脱，一步提高溶血磷脂酰 胆碱含量并且有效控制产品中杂质限度（磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺）和氧化指标（酸值、 过氧化值、甲氧基苯胺值），以满足药用磷脂的质量要求。
[0011] 本发明的技术方案：
[0012] 以大豆或蛋黄来源的磷脂为原料，加入多卤代烷烃溶解，经过柱层析以多卤代烷 烃-低碳醇-水所组成的三元混合溶剂进行两次洗脱，干燥，得到天然溶血磷脂酰胆碱。
[0013] 所用原料为蛋黄磷脂或大豆磷脂。
[0014] 所用填料为硅胶或二醇基硅胶。
[0015] 所用填料与原料的比例为1:2?14:2(kg/kg)。
[0016] 所用的多卤代烷烃包括二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷。
[0017] 所用的低碳醇包括无水乙醇、丙醇、异丙醇或正丁醇。
[0018] 第一次洗脱所用的三元混合溶剂包括多卤代烷烃，低碳醇和水。其中多卤代烷烃 占混合溶剂的比例为46. 8 %?60. 0 %，水占混合溶剂的比例为1. 5 %?3. 0 %，其余为低碳 醇。
[0019] 第二次洗脱所用的三元混合溶剂包括多卤代烷烃，低碳醇和水。其中多卤代烷烃 占混合溶剂的比例为30. 0 %?45. 3 %，水占混合溶剂的比例为2. 5 %?6. 0 %，其余为低碳 醇。
[0020] 方法所述第一次洗脱体积用量（V)与原料重量（W)比为3:1?18:1 (L/Kg)。
[0021] 方法所述第二次洗脱体积用量（V)与原料重量（w)比为10:1?60:1 (L/Kg)。
[0022] 本发明的有益效果：
[0023] (1)本发明在保证溶血磷脂酰胆碱含量符合要求的同时达到脱色、除杂（降低磷 脂酰胆碱、甘油三酯、游离脂肪酸等杂质限度）、降值（降低酸值、过氧化值、甲氧基苯胺值） 的效果。
[0024] (2)本发明所得到的溶血磷脂酰胆碱为动植物原料中含有的内源性物质，通过物 理过程获得的天然磷脂产品，无人工化学修饰。
[0025] (3)本发明突破了现有同类专利技术所存在的技术瓶颈，从技术层面解决了降低 过氧化值、甲氧基苯胺值等理化指标的难题，大大减少了溶血磷脂酰胆碱产品对起始原料 新鲜程度的过度依赖。
[0026] (4)本发明对原料的处理量大，生产操作简便，可商业化大生产得到天然来源的溶 血磷脂酰胆碱产品，有利于国内溶血磷脂酰胆碱市场的开发与普及。
【具体实施方式】
[0027] 以下实施例所得产品中溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、甘油三酯、 游离脂肪酸含量以及酸值、过氧化值等关键均按照中国药典收载的磷脂检测方法进行测 定，甲氧基苯胺值按照欧洲药典8. 0版2. 5. 36方法测定。
[0028] 实施例1:
[0029] 取大豆磷脂原料1公斤，加入氯仿溶解配成原料液，填装10公斤硅胶进行柱层析， 第一次以洗脱剂（氯仿52. 8%、乙醇44. 2%、水3.0%)洗脱18升，第二次再以洗脱剂（二 氯甲烷45. 3%、乙醇54. 0%、水2. 5% )洗脱60升收集洗脱液，经过真空浓缩，冷冻干燥得 到溶血磷脂酰胆碱产品，LPC转移率为70. 3%，溶血磷脂酰胆碱纯度为99. 5%，磷脂酰胆碱 未检出、磷脂酰乙醇胺未检出、甘油三酯、游离脂肪酸均符合规定，酸值为0.6,过氧化值未 检出，甲氧基苯胺值为3. 8。
[0030] 实施例2:
[0031] 取大豆磷脂原料10公斤，加入二氯乙烷溶解配成原料液，填装70公斤二醇基硅胶 进行柱层析，第一次以洗脱剂（二氯乙烷55. 0%、异丙醇42. 0%、水3. 0% )洗脱180升， 第二次再以洗脱剂（氯仿43. 0%、丙醇54. 0%、水3. 0% )洗脱560升收集洗脱液，经过真 空浓缩，冷冻干燥得到溶血磷脂酰胆碱产品，LPC转移率为80. 9 %，溶血磷脂酰胆碱纯度为 99. 1%，磷脂酰胆碱0.2%、磷脂酰乙醇胺未检出、甘油三酯、游离脂肪酸均符合规定，酸值 为0. 5,过氧化值未检出，甲氧基苯胺值为2. 9。
[0032] 实施例3:
[0033] 取大豆磷脂原料20公斤，加入二氯甲烷溶解配成原料液，填装100公斤硅胶进行 柱层析，第一次以洗脱剂（二氯甲烷60. 0%、乙醇38. 5%、水1. 5% )洗脱200升，第二次再 以洗脱剂（氯仿35. 0%、正丁醇59. 0%、水6. 0% )洗脱400升收集洗脱液，经过真空浓缩， 冷冻干燥得到溶血磷脂酰胆碱产品，LPC转移率为83. 3%，溶血磷脂酰胆碱纯度为99. 4%， 磷脂酰胆碱0. 3%、磷脂酰乙醇胺未检出、甘油三酯、游离脂肪酸均符合规定，酸值为0. 7， 过氧化值未检出，甲氧基苯胺值为4. 0。
[0034] 实施例4:
[0035] 取大豆磷脂原料50公斤，加入二氯乙烷溶解配成原料液，填装250公斤硅胶进行 柱层析，第一次以洗脱剂（二氯乙烷58.0%、乙醇40.0%、水2.0% )洗脱600升，第二次 再以洗脱剂（二氯乙烷45. 3%、丙醇49. 7%、水5. 0% )洗脱2250升收集洗脱液，经过真 空浓缩，冷冻干燥得到溶血磷脂酰胆碱产品，LPC转移率为85. 8