菌丝悬浮液，以未添加天然底物或硫酸铜的试样为对照，在摇床中180rpm，30°C恒温震荡培 养。培养过程中定时提取发酵液，离心后上清液即为粗酶液，用于漆酶活力的测定。
[0030] 产酶培养基：NaN032. 5g，KH2PO4Ig, CaCl2 · 6H20 0· lg，MgSO4O. 3g，NaCl 0· lg， FeCl3O. Olg，油菜秸杆粉0· 5g，蒸馏水1000mL，pH用稀盐酸调至6. 0-7. 0。
[0031] (3)将步骤（2)所得的发酵菌液于4°C，8000r/min离心，取上清液即所得酶液，然 后经DNS比色法测定，漆酶活力为100-300U/ml其在ρΗ5· 0-6. 0,20-50°C下酶活力较为稳 定。
[0032] 实施例2
[0033] 由卷枝毛霉DKl制备漆酶粗酶液用于亚麻、黄麻、红麻或竹纤维的脱胶工艺如下：
[0034] 将5g亚麻、黄麻、红麻或竹纤维原茎置于250ml锥形瓶，以亚麻、黄麻、红麻或竹纤 维原茎与漆酶粗酶液按质量比1 :20分装于锥形瓶中，装液量为100ml，在40°C，200rpm摇 床中分别脱胶1天、2天和4天；脱胶时间到时，除去脱胶液，在沸水浴中煮沸5min，用自来 水冲洗数次，以除去亚麻上的细菌，停止脱胶。
[0035] 通过对亚麻、黄麻、红麻或竹纤维脱胶观察发现，1天后亚麻、黄麻、红麻或竹纤维 脱胶有明显分散，发酵液颜色变深变浑浊；脱胶两天后，原本成束的亚麻、黄麻、红麻或竹纤 维分散成纤维状，发酵液明显变稠；脱胶四天后，亚麻、黄麻、红麻或竹纤维脱胶率达90% 以上。
[0036] 实施例3
[0037] 由卷枝毛霉DKl制备漆酶酶液用于亚麻、黄麻或红麻纱线中脱胶的工艺如下：
[0038] 将5g亚麻、黄麻或红麻纱线置入250ml锥形瓶，以亚麻、黄麻或红麻纱线与漆酶酶 液按质量比1 :20分装于锥形瓶中，装液量为100ml，在40°C，200rpm摇床中分别脱胶1天、 2天和4天；脱胶时间到时，除去脱胶液，在沸水浴中煮沸5min，用自来水冲洗数次，以除去 亚麻、黄麻或红麻纱线上的细菌，停止脱胶。
[0039] 通过对亚麻、黄麻或红麻纱线脱胶观察发现，1天后亚麻纤维有明显分散，发酵液 颜色变浑浊；脱胶两天后，原本成束的亚麻分散成纤维状，发酵液明显变稠；脱胶四天后， 亚麻脱胶率达90%以上。
[0040] 实施例4
[0041] 由卷枝毛霉DKl制备漆酶酶液用于亚麻、黄麻、红麻或竹纤维织物脱胶的工艺如 下：
[0042] 将5g灭菌后的亚麻、黄麻、红麻或竹纤维织物置于250ml锥形瓶，以亚麻、黄麻、 红麻或竹纤维织物与漆酶酶液按质量比1 :20分装于锥形瓶中，装液量为100ml，在40°C， 200rpm摇床中分别脱胶1天、2天和4天；脱胶时间到时，除去脱胶液，在沸水浴中煮沸 5min，用自来水冲洗数次，以除去亚麻上的细菌，停止脱胶。
[0043] 通过对亚麻、黄麻、红麻或竹纤维织物观察发现，1天后亚麻织物白度、柔软度显著 改善，刺痒感显著减低。
【主权项】
1. 一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，包括： (1) 将卷枝毛霉DK1菌株由PDA斜面培养基转接入装有基础液体培养基的三角瓶中，在 摇床中30?40°C恒温震荡培养3?4d后，发酵液经过滤得到菌丝体，菌丝体用无菌水洗净 打散，随后收集于无菌水中制成菌丝悬浮液，保存备用； (2) 在基础液体培养基中分别加入1?2% w/v的天然底物和不同浓度的CuS04 ? 5H20 作为产酶培养基，在三角瓶中装入产酶培养基，接入上述菌丝悬浮液，在摇床中30?40°C 恒温震荡培养，培养过程中定时提取发酵液，离心后取上清液即为粗酶液； (3) 将上述粗酶液于4?6°C离心，取上清液即得漆酶。
2. 根据权利要求1所述的一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，其特征在于：所述 步骤（1)中的卷枝毛霉DK1菌株的ITS序列如SEQ ID NO: 1所示。
3. 根据权利要求1所述的一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，其特征在于：所述 步骤⑴中的基础液体培养基的组成为：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL，pH自然。
4. 根据权利要求1所述的一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，其特征在于：所述 步骤（1)中的收集所用的无菌水与发酵液等体积。
5. 根据权利要求1所述的一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，其特征在于：所述 步骤（1)中的保存温度为40 °C。
6. 根据权利要求1所述的一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，其特征在于：所述 步骤（2)中的天然底物为茶叶、稻草或麦草；CuS0 4 ? 5H20的浓度范围为0-4mM。
7. 根据权利要求1所述的一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，其特征在于：所述 步骤（2)中的产酶培养基的组成为：NaN0 32. 5g，KH2P04lg，CaCl2 ? 6H20 0. lg，MgS040. 3g， NaClO. lg，FeCl30,01g，油菜秸杆粉0? 5g，蒸馏水1000mL，pH用稀盐酸调至6. 0-7. 0。
8. 根据权利要求1所述的一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，其特征在于：所述 步骤⑴和⑵中的震荡转速为180rpm。
9. 根据权利要求1所述的一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，其特征在于：所述 步骤（3)中的离心转速为8000r/min。
10. 根据权利要求1所述的一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，其特征在于：所述 步骤（3)得到的漆酶活力为100-300U/ml，在pH5.0-6.0、20-50°C下酶活力稳定。
【专利摘要】本发明涉及一种卷枝毛霉DK1菌株制备漆酶的方法，包括：(1)将卷枝毛霉DK1菌株由PDA斜面培养基转接入装有基础液体培养基的三角瓶中，震荡培养，发酵液经过滤得到菌丝体，菌丝体用无菌水洗净打散，随后收集于无菌水中制成菌丝悬浮液，保存备用；(2)在三角瓶中装入产酶培养基，接入上述菌丝悬浮液，震荡培养，培养过程中定时提取发酵液，离心后取上清液即为粗酶液；(3)将上述粗酶液离心，取上清液即得漆酶。本发明具有工艺简单、适合大规模工业化生产等特点，制备的漆酶可以有效去除亚麻、黄麻、红麻或竹纤维中的非纤维素胶质，具有脱胶效率高，脱胶周期短，纤维分散率高，精干麻质量好等优点，具有良好的应用前景。CGMCC No.1014320141215
【IPC分类】C12R1-785, C12N9-02
【公开号】CN104611309
【申请号】CN201510080794
【发明人】丁若垚, 郁崇文, 张兴群, 郭营, 李晓龙, 关赛鹏
【申请人】东华大学
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月15日