一株猪源产果香白地霉菌株及其制备的液体饲料诱食剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一株猪源产果香白地霉菌株及应用其制备的液体饲料诱食剂。
【背景技术】
[0002] 我国GB10647-89标准中将能够改善饲料适口性、提高动物食欲和采食量而添加 于饲料中的添加剂称为饲料诱食剂，也称饲料调味剂、风味剂、食欲增进剂。最早开始使用 饲料诱食剂的是美国依阿华州大学D .V .Cat ron博士等人，他们分别在猪、鸡饲料中添 加一种能提高饲料适口性的物质后效果显著。1946年美国成立了饲料香味剂公司（FCA)， 1963年日本从FCA引进饲料香味剂并开始从仔猪香味剂着手自主研发，上世纪80年代欧美 已普遍使用饲料诱食剂，90年代饲料诱食剂扩展到东欧、独联体和东南亚国家。我国饲料诱 食剂的出现始于上世纪80年代末，90年代我国开始自己研发生产饲料诱食剂。
[0003] 研宄表明，动物对饲料风味的感受是通过其味觉和嗅觉来实现的。猪平均味蕾数 15000个，高于人味蕾数9000个，人的嗅觉敏感度迟钝于猪许多，因此猪的味觉和嗅觉均比 人的更加敏感。众所周知，动物采食量是决定动物生产性能优劣的主要因素之一，而猪摄食 量的多少在很大程度上取决于猪饲料风味的好坏。在猪饲料中，为了营养均衡，添加了可能 产生异味的物质，如某些微量元素、维生素及药物等；为了降低猪饲料的成本，饲料中添加 了适口性差的的农副产品下脚料，如菜籽柏、棉籽柏、玉米胚芽饼等；猪在应激状态下，如断 奶、生病、热应激、运输、惊吓等情况下，常出现摄食量下降。因此，为了在任何情况下保持猪 正常的摄食量，向饲料中添加诱食剂是非常必要的。
[0004] 诱食剂主要包括调味剂和香味剂，调味剂的成分包括芳香部分、味觉部分和味觉 调整部分。香味剂是只具有芳香部分的添加剂。诱食剂按照制备方法分为天然、人工合成 和复合型三类。按照剂型分为液体和固体两类，固体多为粉末状，又分为吸附型和微胶囊型 两种。目前国内外生产大多是粉末状吸附型。
[0005] 猪用诱食剂主要分为两大类：仔猪饲料诱食剂和生长肥育猪饲料诱食剂。子猪天 性偏爱母乳的气味，喜食具有奶香和甜味的饲料。因此，在子猪饲料中应首选具有奶香和甜 味的饲料调味剂。1997年Makinde给刚断奶的仔猪饲喂带有诱食剂补料的饲料，发现与没 有采食诱食剂补料的仔猪相比，具有良好的肠道发育形态和生长速度。泰国Kasetsart大 学研宄人员用乳香味饲料饲喂仔猪，结果采食量增加7%，日增重提高8%。美国的研宄也证 明添加乳香调味剂可使仔猪采食量增加4. 6%，增重提高11%。国内1992年杨加杰采用诱食 剂后，仔猪9~30日的采食量比对照组多0. 1~0. 29kg/头，日增重提高了 17%~25%，同 时仔猪成活率也明显提高。1995年华中农业大学用含诱食剂乳香素的饲料饲喂仔猪，增重 提尚14. 6%。1996年冯定远等在仔猪伺料中添加乳猪香，伺料米食量提尚5. 4% ;在应激情 况下，采食量提高9%~12%。与仔猪喜好相比，生长育肥猪在消化道发育、消化酶分泌及生 理功能等方面已比较完善，适应力较强。生长育肥猪喜欢水果风味饲料，如柑橘风味等。生 长肥育猪饲料诱食剂主要有甜乳香型、水果香型、甘草香型和谷实香型等。
[0006]目前，国内饲料诱食剂主要是人工合成和复合型的固体剂型。如成都大地饲料有 限公司生产的猪饲料诱食剂大帝香，其主要含有天然香料提取物、桔子油、乙酸异戊酯、乙 酸乙酯、丁酸乙酯、甜味剂及增效剂等，具有鲜水果香味、并伴有青苹果的清香、口味甘甜。 河北科瑞生物科技有限公司生产的科瑞香饲料诱食剂，主要成分为香兰素、乙基麦芽酚、乙 酸乙酯、丁酸乙酯、乳酸乙酯、椰子醛等，特点也是具有清新、自然的水果香气。国内饲料诱 食剂中采用的香味剂几乎是人工合成的香精香料。
[0007] 近年研宄结果已知，食用香精对人体和动物的毒害有积累作用，体现在损伤生物 有机体的生殖系统、肝脏、致癌性等方面。随着人类回归自然，崇尚天然食品，对生物香精、 香料的需求日益增加。但天然动植物香料由于原料生长周期长、数量有限，使天然香料的开 发和应用受到限制。因此，利用微生物开发和生产天然香料物质，受到广泛关注。
[0008] 1975年Gueguen等发现白地霉可以水解蛋白质而形成香气化合物，1982年 Koizumi等证明了一些白地霉菌株可以产脂肪酸醋而形成特殊的水果香气。Daigle等用白 地霉菌株ATCC 62217发酵酵母废水（含35%面包肩和65%水）产香气化合物（菠萝香 味）。2007年王庆国等从新疆土壤中分离得到的两株产果香白地霉菌株，产香成分主要为 醋类和P -苯乙醇。
[0009] 白地霉（feotricAtt? 最初归属于霉菌，丛梗孢科、地霉属，1983年 Barnett 等在其编写的《Yeasts: Characteristicsand Identification》一书中将其纳入 酵母类群中。20世纪50~70年代国内出现白地霉的研宄热潮。为了解决饲料中蛋白质 不足问题，曾经用淘米水培养白地霉用于饲料喂养，收效良好。近年来白地霉在香气化合 物、奶酪制作、污水处理以及饲料蛋白生产等方面的应用研宄进展迅速。1992年Nell等 利用南非石油煤气公司的一种酸性工业废水生产白地霉制品粗蛋白53.4%，其中含赖氨酸 1. 63%、蛋氨酸1. 14%。白地霉饲料营养价值高，一般白地霉饲料的粗蛋白50%~60%、粗脂肪 3%~6%、无氮浸出物3%~10%、粗灰分8%~10%、钙3%~11%、磷0? 01%~0? 1%。何国庆 利用小麦淀粉废水培养白地霉，生产单细胞蛋白产品中具有蛋白酶、糖化酶等多种消化酶。
[0010] 王志芳等用白地霉做发酵黄酒糟，生产的白地霉酵母培养物，粗蛋白含量达40 .2%，粗纤维2. 9%，活菌总数52亿/g。将此白地霉酵母培养物应用于育成猪饲喂试验，按 0.5%比例添加，白地霉试验组比对照组日增重提高了 9. 2%，每增重lkg节省饲料0.25 kg，饲料利用率提高7. 6%。
【发明内容】
[0011]目前市场上销售的猪用诱食剂都是采用人工合成的香精复配而成的，而利用微生 物发酵制备饲料诱食剂还未见报道。本发明涉及利用一株猪源产果香白地霉菌株及其制备 的一种液体饲料诱食剂。利用白地霉菌株发酵产生的天然果香风物物质刺激饲喂动物的嗅 觉器官，诱食动物摄食，促进动物的消化液分泌及胃肠蠕动，引发食欲，增加采食量，提高动 物生产能力。
[0012] 本发明中一株猪源产果香白地霉菌株及其制备的液体饲料诱食剂包括以下步 骤： 从健康母猪新鲜粪便中分离筛选得到一株产果香白地霉菌株YSJY-25。
[0013]该白地霉的菌落白色、扁平、圆形，边缘整齐或不整齐，菌丝短绒状或粉状，菌落中 心突起，菌落从中心向四周呈放射状分布，有的菌落近外缘呈同心圆。
[0014] 该白地霉菌丝体在固体PDA培养基上成熟后可形成两端平切的长筒形孢子，单个 或连成链状。
[0015] 该白地霉菌株名称YSJY-25,分类命名为白地霉feotricAw? 應，保存编号 为CGMCC No. 9061，保藏日期2014年4月16日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0016] 应用该产果香白地霉菌株经液态发酵可制备液体饲料诱食剂。将活化后的白地霉 液体种子液接种于液体PDA培养基中，28 °C~33 °C摇床振荡培养或发酵罐通风培养18h~ 48h。无菌条件下向上述发酵液中添加已灭菌葡萄糖至终浓度2%~5%，溶解后混匀，无菌 装入容器，加盖密封，即为含白地霉菌液、具有果香气味的液体饲料诱食剂，4°C~7°C冷藏。 或者将上述发酵液离心取上清液，无菌条件下添加已灭菌葡萄糖至终浓度2%~5%，溶解后 混匀，无菌密封包装，即为具有果香气味的液体饲料诱食剂，4°C~7°C冷藏。
[0017] 该液体饲料诱食剂能够产生异丁酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸异戊酯、正己酸乙酯、乙 酸异丁酯、2-甲基丁酸乙酯等果香物质。
[0018] 本发明所用白地霉菌株分离于健康母猪新鲜粪便，菌株具有宿主特异性，适于猪 饲料添加剂的应用。液体饲料中含有的葡萄糖及白地霉产生的水果香气适合猪生长的生理 特点，能够满足猪味觉和嗅觉对饲料诱食剂的要求。除此之外，含白地霉菌液的液体饲料诱 食剂还能够增加饲料中菌体蛋白含量，其代谢产物中还包括蛋白酶、糖化酶等多种消化酶， 白地霉培养物中还含有多糖、维生素、矿物质、多种氨基酸及促生长因子等。本发明利用猪 源白地霉制备的液体饲料诱食剂是集营养、保健、诱食、香气于一体的绿色饲料添加剂。
【附图说明】
[0019] 图1是本发明的生产