019] 下面通过具体实施例对本发明组合抗菌肽的合成作进一步说明。
[0020] 实施例1、组合抗菌肽J-AR的合成 以H2O和t-BuOH (I: I，V/V)为反应介质，CuSO4. 5H20为催化剂(用量是肽AC-Nle (N3) -RW摩尔量的5倍)，抗坏血酸钠为抗氧化剂(用量是肽AC-Nle (N3) - RW摩尔量的18倍)，分别 将纯化的肽AC-pra-Anoplin与肽AC-Nle (N3) - RW以1:1的摩尔比在室温下快速搅拌反应 24h后，将反应液用水稀释终止反应后送冻干，冻干粉末经RP-HPLC纯化得到目标肽J-AR， 产率为25. 2%。产物质谱图见图2。
[0021 ] 实施例2组合抗菌肽J-AR的合成 以H2O和t-BuOH (1:5, V/V)为反应介质，CuSO4. 5H20为催化剂(用量是肽AC-Nle (N3) -RW摩尔量的8倍)，抗坏血酸钠为抗氧化剂，（用量是肽AC-Nle (N3) - RW摩尔量的15倍)，分 别将纯化的肽AC-pra-Anopl in与肽AC-Nle (N3) - RW以1:2的摩尔比在室温下快速搅拌反 应24h~28h后，将反应液用水稀释终止反应后送冻干，冻干粉末经RP-HPLC纯化得到目标肽 J-AR，产率为25. 6%。产物质谱图见图2。
[0022] 实施例3、合抗菌肽J-AR的合成 以!120和〖-8110!1(1:0.1，￥/￥)为反应介质，(：11504.5!1 20为催化剂(用量是肽4(：-犯6(队)-RW摩尔量的10倍)，抗坏血酸钠为抗氧化剂(用量是肽AC-Nle (N3) - RW摩尔量的25倍)，分 别将纯化的肽AC-pra-Anopl in与肽AC-Nle (N3) - RW以1:1. 5的摩尔比在室温下快速搅拌 反应24h~28h后，将反应液用水稀释终止反应后送冻干，冻干粉末经RP-HPLC纯化得到目标 肽J-AR，产率为25. 3%。产物质谱图见图2。
[0023] 实施例4、组合抗菌肽J-RR的合成 以H2O和t-BuOH (I: I，V/V)为反应介质，CuSO4. 5H20为催化剂(用量是肽AC-Nle (N3) -RW摩尔量的10倍)，抗坏血酸钠为抗氧化剂（用量是肽AC-Nle (N3)- RW摩尔量的15倍)， 分别将纯化的肽AC-pra-RW与肽AC-Nle (N3) - RW以1:1的摩尔比在室温下快速搅拌反应 24h~28h后，将反应液用水稀释终止反应后送冻干，冻干粉末经RP-HPLC纯化得到目标肽 J-RR，产率为28. 4%。产物质谱图见图3。
[0024] 实施例5、组合抗菌肽J-RR的合成 以H2O和t-BuOH( 1:10, V/V)为反应介质，CuSO4. 5H20为催化剂(用量是肽AC-Nle (N3) -RW摩尔量的8倍)，抗坏血酸钠为抗氧化剂(用量是肽AC-Nle (N3) - RW摩尔量的20倍)，分 别将纯化的肽AC-pra-RW与肽AC-Nle (N3) - RW以1:1. 3的摩尔比在室温下快速搅拌反应 24h~28h后，将反应液用水稀释终止反应后送冻干，冻干粉末经RP-HPLC纯化得到目标肽 J-RR，产率为28. 3%。产物质谱图见图3。
[0025] 实施例6、组合抗菌肽J-RR的合成 以!120和〖-8110!1(1:0.1，￥/￥)为反应介质，(：11504.5!1 20为催化剂(用量是肽4(：-犯6(队)-RW摩尔量的5倍)，抗坏血酸钠为抗氧化剂(用量是肽AC-Nle (N3) - RW摩尔量的25倍)， 分别将纯化的肽AC-pra-RW与肽AC-Nle (N3) - RW以1:2的摩尔比在室温下快速搅拌反应 24h~28h后，将反应液用水稀释终止反应后送冻干，冻干粉末经RP-HPLC纯化得到目标肽 J-RR，产率为27. 9%。产物质谱图见图3。
【主权项】
1. 具有抗耐药性的含三唑结构链接子的组合抗菌肽，其结构式如下所示：2. 如权利要求1所述具有抗耐药性的含三唑结构链接子的组合抗菌肽的制备方法，以 含炔丙基甘氨酸和叠氮基赖氨酸的前体肽为底物，以CuSO4. 5H20为催化剂，以抗坏血酸钠 为抗氧化剂，以水-叔丁醇为混合溶剂，采用点击化学的1，3-偶极环加成反应24~28小时， 产生一个1，4-二取代-1片1，2, 3-三唑结构将上述叠氮基赖氨酸的前体肽链接而得。3. 权利要求2所述具有抗耐药性的含三唑结构链接子的组合抗菌肽的制备方法，其特 征在于：所述含炔丙基甘氨酸的前体肽序列为AC-Pra-Gly-Leu-Leu-Lys-Arg-Ile-Lys-Th r-Leu-Leu_NH2或 AC-Pra-Arg-Arg-Trp-Trp-Arg-Phe-NH 2〇4. 权利要求2所述具有抗耐药性的含三唑结构链接子的组合抗菌肽的制备方法，其特 征在于：所述含炔丙基甘氨酸和含叠氮基赖氨酸的前体肽的摩尔比为2。5. 权利要求2所述具有抗耐药性的含三唑结构链接子的组合抗菌肽的制备方法，其特 征在于：催化剂CuSO4. 5H20的用量为叠氮基赖氨酸的前体肽摩尔量的5~10倍。6. 权利要求2所述具有抗耐药性的含三唑结构链接子的组合抗菌肽的制备方法，其特 征在于：抗氧化剂抗坏血酸钠的用量为叠氮基赖氨酸的前体肽摩尔量的15~25倍。7. 权利要求2所述具有抗耐药性的含三唑结构链接子的组合抗菌肽的制备方法，其特 征在于：混合溶剂水-叔丁醇中，水与叔丁醇的体积比为1:0.
【专利摘要】本发明公开了一种含三唑结构链接子的新型组合抗菌肽及其制备方法，属于生化技术领域。本发明以含炔丙基甘氨酸和叠氮基赖氨酸的前体肽为底物，CuSO4.5H2O为催化剂，抗坏血酸钠为抗氧化剂，水-叔丁醇为混合溶剂，采用点击化学的1,3-偶极环加成反应24~28小时，产生一个1,4-二取代-1H-1,2,3-三唑结构，将上述前体肽链接而得。通过对常见的标准菌以及临床分离的耐药菌的抗菌实验，表明本发明合成的J-AR肽和J-RR肽具有较强的抗菌活性、抗耐药菌活性，同时扫描电镜实验观察侧链链接组合抗菌肽可以引起大肠杆菌菌膜的破坏。因此，本发明公开的含三唑结构链接子的新型组合抗菌肽在制备临床治疗药物方面具有很好的应用前景。
【IPC分类】C07K7/02, C07K1/02
【公开号】CN104892727
【申请号】CN201510266193
【发明人】倪京满, 王锐, 刘倍均
【申请人】兰州大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月22日