多酚黄酮类化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种多酚黄酮类化合物及其制备方法和应 用。
【背景技术】
[0002] 板栗（Castanea mollissima Blume)又名栗子、栗、风錯，是壳斗科（Fagceae)栗 属（Castanea)植物，板栗种仁素有"干果之王"的美誉，是我国特产，在国外它还被称为"人 参果"。中医认为，板栗性温，昧甘平，入脾、胃、肾经。关于板栗的药用价值，中医认为，栗果 有养胃健脾，补肾强筋，活血止血之功能，并有益于高血压、冠心病的防治。在临床上，板栗 还可用于治疗反胃、泄泻、腰腿软弱、吐血、便血、金疮等症。同时，板栗加上其他中药或食品 原材料可以制成药膳，治疗气管炎、肾虚，消化不良、腹泻、中风等疾病。板栗的药理作用涉 及抗凝血、升高白细胞、治疗菌痢、治疗慢性支气管炎等各个方面。
[0003] 栗属植物中富含酚酸类化合物，板栗总苞、花絮、外壳中主要的化学成分皆为多 酸。我们前期从板栗仁、板栗花、板栗总苞、板栗壳中分离得到数种多酚黄酮类化合物，结构 含有桂皮酰基、香豆酰基、阿魏酰基、没食子酸酰基的黄酮苷类化合物结构新颖，在抗肿瘤 活性评价中，均有抑制活性，该类成分和化合物可作为一种或多种可作为治疗或辅助性治 疗癌症的药物。
【发明内容】
[0004] 为解决上述问题，本发明提供了一种多酚黄酮类化合物及其制备方法和应用，制 备过程简便易行，所制备的组分、单体化合物有广谱的抗肿瘤活性。
[0005] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
[0006] 一种式（I)所示的多酚黄酮类化合物，
[0007]
[0008] 其中R1、私可同时为H或OH或其中的1个；R2、心和R5其中至少有1个为糖基，其 余为H或OH ;糖基种类有葡萄糖（Glc)、半乳糖（Gala)、甘露糖（Man)、鼠李糖（Rham);糖之 间还可连接形成二糖苷或三糖苷，连接方式有1-2连接，1-3连接，1-4连接和1-6连接。所 述糖的C-2位、C-3位、C-4位和C-6位还可连接式（II)或式（III)，
[0009]
[0010] 式（II)和式（III)中的Rf^M5PR8具有相同意义，可同时为h、oh、och 3，Sh、oh、 OCH3中的一个或两个。
[0011] 本发明还提供了上述化合物的三种制备方法：
[0012] 方法一，包括如下步骤：
[0013] S11、取药材粗粉利用超声或溶剂加热提取法，采用3-15倍量水煎煮或 30% -100%乙醇回流提取或30% -100%甲醇回流提取，减压回收水或醇溶剂，残渣挥至无 醇味或醇度低于10%后，以水溶解后离心取上清液。
[0014] S12将所得上清液用聚酰胺或大孔树脂处理，用水-醇溶液梯度洗脱，富集 30% -80%醇洗脱部分，得到粗黄酮；
[0015] S13、将所得粗黄酮经硅胶柱色谱进行分离，采用不同溶剂系统进行梯度洗脱，结 合中低压制备分离色谱、高效液相色谱进行制备分离，以乙腈-水系统、甲醇-水系统进行 分离，得多酚黄酮类化合物。
[0016] 方法二，包括如下步骤：
[0017] S21、取药材粗粉利用超声或溶剂加热回流提取法，采用3-10倍量的30% -100% 乙醇或甲醇回流提取，减压回收醇溶剂，残渣挥至无醇味或醇度低于10%后，以水溶解，得 混悬液；
[0018] S22、将所得混悬液依次用乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取次数1-5次，萃取体积 (1 : 1-1 : 8)获得各萃取部位，分别回收溶剂，得浸膏，其中乙酸乙酯层浸膏为粗总黄酮苷 元组分；正丁醇层为总多酚黄酮苷类；
[0019] S23、将所得浸膏经硅胶柱色谱进行分离，采用不同溶剂系统进行梯度洗脱，结合 中低压制备分离色谱、高效液相色谱进行制备分离，以乙腈/水系统、甲醇/水系统进行分 离，得多酚黄酮类化合物。
[0020] 方法三，包括如下步骤：
[0021] S31、取药材粗粉利用超声或溶剂加热回流提取法，采用3-10倍量乙酸乙酯或丙 酮回流提取，减压回收溶剂得浸膏，为粗总黄酮；
[0022] S32、将所得的粗总黄酮经硅胶柱色谱进行分离，采用石油醚、乙酸乙酯、二氯甲 烷、三氯甲烷、丙酮、甲醇等组成的不同溶剂系统进行梯度洗脱，结合中低压制备分离色谱、 高效液相色谱进行制备分离，以乙腈-水系统、甲醇-水系统进行分离，得多酚黄酮类化合 物。
[0023] 其中，所述甲醇的浓度为10% -100%，所述乙醇的浓度为10% -100%。
[0024] 其中，所述的聚酰胺为 PA6、PA66、PA 11、PA 12、PA46、PA610、PA612、PA 1010 中的一 种或几种的混合物，所述的大孔树脂包括但不限于极性、非极性大孔树脂D-10UDM-301、 HPD-100、AB-8。
[0025] 其中，所述不同溶剂系统包括但不限于石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙 酮、甲醇。
[0026] 其中，所述药材粗粉采用栗属等中药或植物，为板栗总苞、板栗花、板栗壳、板栗枝 条、板栗仁中的一种。
[0027] 其中，备分离色谱、高效液相色谱中流动相为甲醇/水、或乙腈/水、或乙醇/水， 混合比例为1 : 10-90 : 10,或甲醇/乙腈/水，混合比例为I : 1 : 10-40 : 40 : 20。
[0028] 上的化合物和粗总黄酮可用来制备抗肿瘤细胞生长的药物，所述肿瘤为人肺癌、 人肝癌、人胰腺癌、人胃癌及人结肠癌中的一种，同时还可以配制一种药物组合物用于治疗 癌症，该组合物包含治疗有效剂量的化合物、粗总黄酮和药学上可接受的载体。
[0029] 本发明具有以下有益效果：
[0030] 制备过程简便易行，所制备的组分、单体化合物有广谱的抗肿瘤活性。
【具体实施方式】
[0031] 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步 详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发 明。
[0032] 实施例1
[0033] 从板栗中分离粗多酚黄酮1
[0034] 分别取栗总苞、板栗花、板栗壳、或板栗仁粗粉各2kg，均以8倍量70%乙醇回流提 取3次，每次2h，减压回收乙醇，残渣挥至无醇味，以水溶解后离心取上清液。
[0035] 上清液用2Kg大孔吸附树脂（AB-8)开放柱色谱处理，用水-醇溶液梯度洗脱，富 集30%-80%醇洗脱部分，分别得到粗黄酮18(^、1678、11(^、109 8。
[0036] 实施例2
[0037] 从板栗中分离粗黄酮2
[0038] 取药材粗粉即栗总苞、板栗花、板栗壳、板栗仁各0. 5kg，均以6倍量70%乙醇超声 提取lhr，减压回收醇溶剂，残渣挥至无醇味或醇度低于5%，以水溶解后离心取上清液。上 清液用开发聚酰胺（PA66)柱色谱处理，用水-乙醇溶液梯度洗脱，富集30% -70%醇洗脱 部分，分别得到粗黄酮27g，23g，18g，16g。
[0039] 实施例3
[0040] 从板栗中分离粗黄酮3
[0041] 分别取栗总苞、板栗花、板栗壳、或板栗仁粗粉各2kg，均以8倍量70%乙醇回流提 取3次，每次2h，减压回收乙醇，残渣挥至无醇味，以水溶解得各悬浮液2L。混悬液依此用 等体积的乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，各萃取3次，各萃取部位分别回收溶剂得浸膏，其中 乙酸乙酯层浸膏为粗总黄酮苷元组分，分别为45-67g。正丁醇层浸膏为总多酚黄酮苷类，分 别为61-102g，将乙酸乙酯及正丁醇层组分合并，即得粗黄酮。
[0042] 实施例4
[0043] 从板栗中分离粗黄酮4
[0044] 分别取栗总苞、板栗花、板栗壳、或板栗仁粗粉各2Kg，以8倍量丙酮加热回流提 取，每次2h，减压回收溶剂，可得粗黄酮210-320g。
[0045] 实施例5
[0046] 从板栗粗黄酮中分离多酚黄酮类化合物
[0047] 取上述实施例1中粗总黄酮100g，经硅胶（100-300目）开放柱色谱进行分离， 以氯仿：甲醇（100 : 0-1 : 100)进行梯度洗脱，所得流份经薄层色谱分析，合并相同组 分，得到10个流份。流份1-10分别经中低压柱色谱分离处理，依此以甲醇：水（1 : 9; 2 : 8;3 : 7;6 : 4;5 : 5)进行洗脱，佐以薄层色谱分析合并相同流份，除去溶剂后 得各洗脱物，洗脱物经HPLC分析后进制备型HPLC制备，色谱条件为甲醇-水-甲酸 (10 : 90 : 0.02-65 : 35 : 0.02)，得如下15个结构的化合物。
[0048] 化合物1-15结构如下
[0051] 化合物1-15结构鉴定的碳氢谱数据如下：
[0052] 化合物1:黄色粉末（甲醇）。盐酸-镁粉、MoIisch反应为阳性。1H-Nmr^oomhz, DMS0-d6)SH:6.70(lH，br s，H-6)，6.70(lH，br s，H-8)，8.45(2H，d，J = 8.4Hz，H-2，， 6，），7.16(2H，d，J = 8.4Hz，H-3，，5，），5.27(lH，d，J = 7.6Hz，H-l" )，7.51(2H，d，J = 8·4Ηζ，Η-2"，，6"，），7.16(2H，d，J = 8.4Hz，H-3"，，5"，），7.84(lH，d，J=16.2Hz， H-7"，），6.51(lH，d，J=16.2Hz，H-8"，）.13C-NMR(150MHz，DMS0-d 6)Sc:157.8(C-2)， 133. 4 (C-3)，178. 4 (C-4)，162. 8 (C-5)，99. 9 (C-6)，166. O (C-7)，94. 7 (C-8)，157. 7 (C-9)， 105.2(010),121.9(01' )，131.9 (C-2'，6' )，116.1 (C-3'，5' )，161.8 (C-4')， 104.1(C-1" )，76.0(C-2" )，78.4(C-3" )，71.3(C-4" )，76.0(C-5" )，64.2(C-6")， 126.1(C-1" ' )，130.8(C-2" '，6" ' )，116.8(C-3" '，5" ' )，161.4(C-4"')， 145.2(C-7"' )，114.9(C-8"' )，167.3(C-9"' )·
[0053] 化合物2 :黄色粉末（甲醇）。盐酸-镁粉、Molisch反应为阳性。1H NMR(600MHz，DMS0-d6) δΗ:6· 11(1H，d，J = 2. 1Hz，H-6)，6.27(1H，d，J = 2. 1Hz，H-8)， 7. 60(1H，d，J = 2. 1Hz，H-2， ），6. 79 (1H，m，J = 8. 4Hz，H_5， ），7. 57 (1H，dd，J1 = 8.4,2.1Hz，H-6' )，5.25(lH，d，J = 7.2Hz，H-l" )，7.29(2H，d，J = 8.7Hz，H-2"'， 6" ' )，6.79(2H，H-3" '，5" ' )，6.06(lH，d，J=15.9Hz，H-7" ' )，7.39(1H， d，J = 15. 9Hz ;H-8 " ' ) · 13C-NMR (150MHz，DMS0_d6) δ c: 157. 8 (C_2)，133. 4 (C_3)， 178. I (C-4)，162. 9 (C-5)，100. 0 (C-6)，165. 9 (C-7)，94. 8 (C-8)，159. I (C-9)，105. 6 (C-IO)， 123. 1(C-1 r )，117.4(C-2 ' )，145.9(C-3 ' )，149. 7 (C_4 ' )，115.9 (C_5 ')， 123.4(C-6' )，103.9(C-1" )，75.7(C-2" )，78.1(C-3" )，71.8(C-4" )，75.9(C-5")， 64.4(C-6" )，127.1(C-1" ' )，131.2(C-2" ' )，116.8(C-3" ' )，161.1(C-4"')， 13L3(C-5'h )，116.8(C-6"' )，146.5(C-7"' )，114.8(C-8"' )，168.9(C-9"' )·
[0054] 化合物3:黄色粉末（甲醇）。盐酸-镁粉、Moiisch反应为阳性。1H-Nmrgoomhz, CD3OD) δ h:6. 09(1H，br s H-6)，6. 27(1H，br s，H-8)，7. 99(2H，d，J = 9· OHz，H-2 '， 6' )，6.87(2H，d，J = 8.5Hz，H-3'，5' )，5.67(lH，d，J = 7.5Hz，H-l" )，5·24(1Η， br s，H-l"，），7.27(2H，d，J = 8.0Hz，H-2"，，6"，），6.81(2H，d，J = 8.0Hz， H-3 " ，，5 " ，），7. 38(1H，d，J = 16. 0Hz，H-7 " r ) ,6. 03 (1H, d, J = 16. 0Hz, H-8" ' )· 13C-NMR(100MHz，CD3OD) δ c:161. 6(C-2)，134. 4(C-3)，178. 7(C-4)，164. 3(C-5)， 100. 4 (C-6)，166. 5 (C-7)，95. I (C-8)，158. 7 (C-9)，106