-6" )，120.1(C-1" ' )，107.5(C-2" '，C-6" ' )，142.5(C-3"'， C-5^ r ),136.62(0-4^ r ),166.8(0-7^ r ).
[0076] 化合物20 :黄色粉末（甲醇）。盐酸-镁粉、Molish反应阳性。1H-NMR(400MHz， DMS0) δ Η:6· 20(1H，d，J = 2. 2Hz，H-6)，6· 44(1H，d，J = 2. 2Hz，H-8)，6· 60(1H，d， J = 8. 1Hz，H-5，），7. 49(1H，d，J = 3. 0Hz，H-2，），7. 12(1H，dd，J1= 8. 1，3. 0Hz， H-6，），5.28(1H，d，J = 7.8Hz，H-l" )，6.71(2H，d，J = 8.7Hz，H-2"，，H-6"，）， 7. 58(2H，d，J = 8. 7Hz，H-3 " '，H_5 " ' ) · 13C-NMR(100MHz，DMSO) δ c:157. 2 (C_2)， 134. 0 (C-3)，177. 9 (C-4, C = 0)，161. 8 (C-5)，99. 9 (C-6)，165. 0 (C-7)，93. 2 (C-8)， 159. 9 (C-9)，103. 6 (C-10)，121. 8 (CM' )，116. 6 (C-2' )，144. 8 (C-3' )，148. 2 (C-4')， 115. 2(C-5' ),121.7(06' )，103. 3(C-1" )，73. I (C-2" )，74. I (C-3" )，69. 0(C-4")， 75.2(C-5" )，63.9(C-6" )，161.9(C-1" ' )，114.8(C-2" '，C-6" ' )，132.5(C-3"'， C-5" ' )，121.1(C-4" ' )，166.8(C-7" ' )·
[0077] 化合物2i:黄色粉末（甲醇）。盐酸-镁粉、Moiisch反应为阳性。1H-Nmrgoomhz, DMSO) δΗ:6· 18(lH，d，J = 2. 5Hz，H-6)，6. 37(lH，d，J = 2. 5Hz，H-8)，6. 73(lH，d，J = 8.0Hz， H-5，），7.45 (lH，d，J = 3. 0Hz，H-2，），7.59 (1H，（IcbJ1= 8.0, 3.0Hz，H-6，），5.44 (1H， d，J = 7.5Hz，H-l" )，4.25(lH，d，J=12.0Hz，Ha-6" )，4·32((Μ，Λ=12·0,5·0Η「6")， 3. 3-3. 8(m，sugar protons)，6·90(2Η，s，H-2 "'，H-6 ).13C-NMR(100MHz，DMSO) δ c: 156. 3 (C-2)，133. 2 (C-3)，177. O (C-4, C = 0)，161. 2 (C-5)，98. 9 (C-6)，165. O (C-7)， 93.6(C-8)，160.9(C-9)，103.6(C-10)，121.7(C-1 ' )，115.6(C-2 ' )，144.8(C-3 ')， 148.8(C-4' )，115.2(C-5' )，120.7(C-6' )，104.3(C-1" )，73.9(C-2" )，74.1(C-3")， 69.3(C-4" )，76.2(C-5" )，62.9(C-6" )，119.1(C-1" ' )，108.5(C-2" '，C-6"')， 145.5(C-3" '，C-5" ' )，138.62(C-4" ' )，165.8(C-7" ' )·
[0078] 化合物22:黄色粉末（甲醇）。盐酸-镁粉、Moiish反应为阳性。1H-Nmr^oomh z, DMS0-d6) δ h:6. 13(1H，d，J = 2. OHz，H-6)，6. 38(1H，d，J = 2. OHz，H-8)，8. 01(2H，d，J = 8.5Hz，H-2'，6' )，6.87(2H，d，J = 8.5Hz，H-3'，5' )，5.70(lH，d，J = 4.0Hz，H-l")， 7.36(2H，d，J = 8.5Hz，H-2"，，6"，），6.79(2H，d，J = 8.5Hz，H-3"，，5"，）， 7. 55(1H，d，J = 15. 9Hz，H-7"，），6. 15 (1H，d，J = 15. 9Hz，H_8 "，），7. 44 (2H，d，J = 8.5Hz，H-2" "，6" " )，6.77(2H，d，J = 8.5Hz，H-3" "，5" " )，7.61(lH，d，J=15.8Hz， H-7" " )，6.43(lH，d，J=15.8Hz，H-8" " ).13C-NMR(150MHz，DMS0-d6)Sc:157.1(C-2)， 133. I (C-3)，177. 5 (C-4)，161. I (C-5)，98. 5 (C-6)，164. 5 (C-7)，94. 0 (C-8)，156. 9 (C-9)， 104. 3 (C-10), 121. 0(C-1 r ),131. I (C-2 r ,6r ),115. 4 (C-3 r ,5' ), 160.1 (C-4 r ), 98.5(C-1" )，73.1(C-2" )，73.5(C-3" )，70.1(C-4" )，74.2(C-5" )，62.3(C-6")， 125.5(C-1" ' )，130.0(C-2" '，6" ' )，115.2(C-3" '，5" ' )，159.2(C-4"')， 144.1(C-7" ' )，113.3(C-8" ' )，166.7(C-9" ' )，125.1(C-1" " )，130.4(C-2""， 6" " )，115.5(C-3" "，5" " )，160.0(C-4" " )，145.5(C-7" " )，114.8(C-8"")， 165. 2(C-9" " )·
[0079] 实施例7
[0080] 22个黄酮化合物及四种板栗粗黄酮的体外抗人肺癌细胞（H292)，人胃癌细胞 (N87)，人肝癌细胞（HuH-7)，人胰腺癌细胞（PANC-1)，和人结肠癌细胞（HT-29)的活性测 定。
[0081] 通过CCK-8法检测样品对肿瘤细胞株的增殖抑制作用，得IC5。。
[0082] 实验操作：
[0083] (1)细胞培养
[0084] 收集对数生长期细胞，计数，用完全培养基重新悬浮细胞，然后调整细胞浓度至合 适浓度，接种96孔板，每孔接种100 μ 1细胞悬液，最后细胞在37°C，100%相对湿度，5% CO2 培养箱中孵育24小时。
[0085] (2)样品制备
[0086] 用DMSO稀释化合物至相应浓度。
[0087] (3) IC5。实验
[0088] (a)收集对数生长期细胞，计数，用完全培养基重新悬浮细胞，调整细胞浓度至合 适浓度（依照细胞密度优化试验结果确定），接种96孔板，每孔加100 μ 1细胞悬液。细胞 在37°C，100%相对湿度，5% CO2培养箱中孵育24小时。
[0089] (b)用DMSO稀释待测化合物，化合物从终浓度至0 μ M，共10个浓度点。
[0090] (c)加药后，细胞置于37°C，100%相对湿度，5% CO2培养箱中孵育72小时；
[0091] (d)吸弃培养基，加入含10% CCK-8的完全培养基置于37°C培养箱中孵育2-6小 时。
[0092] (e)轻轻震荡后在酶标仪上测定450nm波长处的吸光度，以650nm处吸光度作为参 比，计算抑制率。
[0093] (4)按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率：
[0094] 肿瘤细胞生长抑制率％ = [(Ac-AsV(Ac-Ab)] X 100%
[0095] As :样品的OA (细胞+CCK-8+待测化合物）
[0096] Ac :阴性对照的 OA (细胞 +CCK-8+DMS0)
[0097] Ab :阳性对照的OA (培养基+CCK_8+DMS0)
[0098] 采用软件Graphpad Prism 5拟合IC5。曲线并计算出IC 5。值。
[0099] (5)活性结果如表1。
[0100] 表1 :22个化合物及板栗总黄酮的IC5。值。
种可作为治疗或辅助性治疗癌症的药物。
[0104] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种式（I)所示的多酚黄酮类化合物，其中&、私可同时为H或0H或其中的1个；R2、RdPR5其中至少有1个为糖基，其余为H或0H;糖基种类有葡萄糖（Glc)、半乳糖（Gala)、甘露糖（Man)、鼠李糖（Rham);糖之间还 可连接形成二糖苷或三糖苷，连接方式有1-2连接，1-3连接，1-4连接和1-6连接。所述糖 的C-2位、C-3位、C-4位和C-6位还可连接式（II)或式（III)，式（II)和式（III)中的&、馬和1?8具有相同意义，可同时为H、0H、0CH3,或H、0H、0CH3 中的一个或两个。2. 如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： S11、取药材粗粉利用超声或溶剂加热提取法，采用3-15倍量水煎煮或30% -100 %乙 醇回流提取或30% -100%甲醇回流提取，减压回收水或醇溶剂，残渣挥至无醇味或醇度低 于10%后，以水溶解后离心取上清液。 S12将所得上清液用聚酰胺或大孔树脂处理，用水-醇溶液梯度洗脱，富集30% -80% 醇洗脱部分，得到粗黄酮； S13、将所得粗黄酮经硅胶柱色谱进行分离，采用不同溶剂系统进行梯度洗脱，结合中 低压制备分离色谱、高效液相色谱进行制备分离，以乙腈-水系统、甲醇-水系统进行分离， 得多酚黄酮类化合物。3. 如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 521、 取药材粗粉利用超声或溶剂加热回流提取法，采用3-10倍量的30% -100%乙醇 或甲醇回流提取，减压回收醇溶剂，残渣挥至无醇味或醇度低于10%后，以水溶解，得混悬 液； 522、 将所得混悬液依次用乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取次数1-5次，萃取体积 (1 : 1-1 : 8)获得各萃取部位，分别回收溶剂，得浸膏，其中乙酸乙酯层浸膏为粗总黄酮苷 元组分；正丁醇层为总多酚黄酮苷类； 523、 将所得浸膏经硅胶柱色谱进行分离，采用不同溶剂系统进行梯度洗脱，结合中低 压制备分离色谱、高效液相色谱进行制备分离，以乙腈/水系统、甲醇/水系统进行分离，得 多酚黄酮类化合物。4. 如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 531、 取药材粗粉利用超声或溶剂加热回流提取法，采用3-10倍量乙酸乙酯或丙酮回 流提取，减压回收溶剂得浸膏，为粗总黄酮； 532、 将所得的粗总黄酮经硅胶柱色谱进行分离，采用石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三 氯甲烷、丙酮、甲醇等组成的不同溶剂系统进行梯度洗脱，结合中低压制备分离色谱、高效 液相色谱进行制备分离，以乙腈-水系统、甲醇-水系统进行分离，得多酚黄酮类化合物。5. 根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述甲醇的浓度为10% -100%， 所述乙醇的浓度为10% -100%。6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的聚酰胺为PA6、PA66、PA11、PA12、 PA46、PA610、PA612、PA 1010中的一种或几种的混合物，所述的大孔树脂包括但不限于极性、 非极性大孔树脂D-101、DM-301、HPD-100、AB-8。7. 如权利要求2或4所述的制备方法，其特征在于，所述不同溶剂系统包括但不限于石 油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、甲醇。8. 如权利要求2-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述药材粗粉采用栗属等 中药或植物，为板栗总苞、板栗花、板栗壳、板栗枝条、板栗仁中的一种。9. 如权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，中低压制备分离色谱、高效液相色 谱中流动相为甲醇/水、或乙腈/水、或乙醇/水，混合比例为1 : 10-90 : 10,或甲醇/乙 腈/水，混合比例为1 : 1 : 10-40 : 40 : 20。10. 如权利要求2-4任一项所制备的化合物和粗总黄酮在制备抗肿瘤细胞生长的药 物中的应用，其特征在于，所述肿瘤为人肺癌、人肝癌、人胰腺癌、人胃癌及人结肠癌中的一 种。
【专利摘要】本发明公开了一种如式(I)的多酚黄酮类化合物及其制备方法和应用，式(I)，其中R1、R3可同时为H或OH或其中的1个；R2、R4和R5其中至少有1个为糖基，其余为H或OH；糖基种类有葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gala)、甘露糖(Man)、鼠李糖(Rham)；糖之间还可连接形成二糖苷或三糖苷，其是从板栗总苞、板栗花、板栗壳、板栗仁中提取的含有多酚结构的黄酮类化合物，具有较好的抗人肺癌、人肝癌、人胰腺癌、人胃癌及人结肠癌活性可以和药学上可接受的载体结合制备临床上可接受的药物，用于肿瘤治疗。
【IPC分类】C07H1/08, A61P35/00, C07H17/07
【公开号】CN105017357
【申请号】CN201510490735
【发明人】高慧媛, 刘晓秋, 王达, 张琳, 孙博航
【申请人】沈阳药科大学
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年8月5日