选以本发明组合物 形式，优选应用于手部皮肤，和/或脸部皮肤和/或领口皮肤，和/或头颅皮肤，更特别的是 男性头颅皮肤，和/或用于指甲和/或毛发。
[0139] 本发明化合物、更特别的是式（IIa)和/或式（IIb)化合物，任选以本发明组合物 形式，优选应用浓度为IX 10 6至IX 10 1M,优选IX 10 5至IX 10 2M,更特别的是IX 10 4m。
[0140] 本发明还提供了用于合成本发明的式（I)化合物，更特别的是式（IIa)和/或式 (IIb)化合物或其盐；及其异构体的方法。
[0141] 有利地，用于合成本发明的式（I)化合物，更特别的是式（IIa)和/或式（IIb)化 合物的方法包括将酸与醇偶联的步骤，有利地通过酸催化。
[0142] 因此，对于合成本发明的式（I)化合物，酸优选式IIIa
[0153] 其中，n、R2和R3具有与式⑴相同的含义。
[0154] 对于合成式IIa)化合物，酸优选式Va
[0155]
[0162] 因此，用于偶联的酸优选选自芥子酸，特别是用于合成式⑴化合物，其中
表示CH = CH基团，更特别的是式（IIb)化合物，和/或二氢芥子酸，特别用于合 成式⑴化合物，其中
表示CH2-CH2基团，更特别的是用于合成式（IIa)化合物。
[0163] 芥子酸在商业上容易购买，但是也可以从含有芥子酸的植物中提取，例如葵花 (Helianthus annuus)，小麦（Triticum vulgare)，完菁（Brassica rapa)或远志（Polygala tenuifollia)〇
[0164] 为了合成二氢芥子酸，优选选择芥子酸作为起始化合物。在这种情况下，二氢芥子 酸将原位合成，换言之，在相同的反应器中通过进行连续反应合成。该合成优选通过氢化芥 子酸的双键进行，优选存在Pd-C(钯炭），优选5% Pd-C。该实施方案对于合成式（IIa)化 合物特别有利。
[0165] 因此，本发明同样提供了用于合成式（I)化合物的方法，其中η = 2。在该情况下， 用于偶联的醇优选羟基对羟苯基乙醇。
[0166] 羟基对羟苯基乙醇在商业上容易获得，或者可以从植物中提取，例如油橄榄（Olea europea)。但是，由于羟基对轻苯基乙醇的不稳定性，其优选由二羟基苯基乙酸原位合成， 二羟基苯基乙酸同样可以商购获得。
[0167] 因此，用于合成本发明的式（I)化合物、优选式（II)化合物，更特别的是式（IIa) 和/或式（IIb)化合物的方法，优选包括原位合成羟基对羟苯基乙醇的步骤，优选由二羟 基苯基乙酸开始，优选从二羟基苯基乙酸转化为甲酯，优选通过酸催化，优选使用对甲苯磺 酸。
[0168] 由此获得的甲酯优选随后还原成醇形成羟基对羟苯基乙醇。
[0169] 当用于偶联反应的酸是二氢芥子酸时，该原位合成羟基对羟苯基乙醇的步骤有利 地与原位合成二氢芥子酸平行进行。
[0170] 为了合成本发明的式⑴化合物，其中η不为2,羟基对羟苯基乙醇将被其它 用于偶联反应的化合物代替。例如且优选的是，当η = 1时其可能选择4_(羟基甲基） 苯-1，2-二醇（UICPA名称）作为醇用于偶联，并且当η = 3时例如4-(3-羟基丙基） 苯-1，2-二醇（UICPA 名称）。
[0171] 这些类型的起始化合物在商业上容易获得。
[0172] 根据优选的实施方案，本发明提供了合成式（IIb)化合物或其盐的方法，包括至 少以下步骤：
[0173] a)由二羟基苯基乙酸合成羟基对羟苯基乙醇，优选原位合成；
[0174] b)将步骤a)得到的羟基对羟苯基乙醇与芥子酸偶联。
[0175] 根据本发明优选的实施方案，合成式（IIa)化合物或其盐的方法包括至少以下步 骤：
[0176] a)由二羟基苯基乙酸合成羟基对羟苯基乙醇，优选原位合成；
[0177] b)由芥子酸合成二氢芥子酸，优选原位合成；
[0178] c)将步骤a)得到的羟基对羟苯基乙醇与步骤b)得到的二氢芥子酸偶联。
[0179] 步骤a)和b)有利地平行进行。
[0180] 当本发明合成的化合物的R1、私和/或R3基团不是氢原子时，使用相同的醇或酸 作为起始反应物，在烷基化、硫酸化和/或磷酸化和/或酯化后，取决于各基团R的性质，并 且根据常规技术。或者，对于这种烷基化、硫酸化、磷酸化和/或酯化反应，有可能在偶联反 应后以相同的方式进行。有利地，当化合物的&、私和/或1?3位置包含烷基时，烷基化反应 将在偶联反应前进行。由此获得的化合物优选是式（IIa)和/或式（IIb)化合物。
[0181] 本发明同样提供了由本发明的合成方法得到的化合物。
[0182] 下文的实施例形成本发明的组成部分，并且其用于说明但不构成任何限制。与任 何现有技术比似乎具有新颖性的任意特征，包括实施例，作为一个整体描述形成与其功能 及其通用性相关的本发明的整体部分。
[0183] 另外，在实施例中，所有的百分比都以重量计，除非另有说明，并且温度用摄氏度 表示，除非另有说明，并且压力为大气压，除非另有说明。 实施例
[0184] A.本发明化合物的合成
[0185] 实施例A. 1.:本发明式（IIb)的羟基对羟苯基乙醇芥子酸醅的合成
[0186] 步骤a):由二羟基苯基乙酸原位合成羟基对羟苯基乙醇
[0187] 将二羟基苯基乙酸溶于甲醇中，并且历经3小时，在无光和回流下，用对甲苯磺酸 催化酯化。将甲醇蒸发，并且加入甲基四氢呋喃（甲基THF)。将所得溶液用碳酸氢钠和盐 水洗涤。蒸发溶剂后，将残留物用四氢呋喃溶解，并且向混合物中添加氢化锂铝。将整个混 合物回流2小时。向混合物中加入5N HCl溶液，随后用甲基THF萃取。
[0188] 步骤b):步骤a)得到的羟基对羟苯基乙醇与芥子酸的偶联。
[0189] 将步骤a)中获得的羟基对羟苯基乙醇的甲苯溶液，和4%的对-甲苯磺酸加入到 芥子酸中。将反应混合物回流12小时。过滤以除去盐，并且洗涤有机相后，将反应混合物 在真空下浓缩至干。
[0190] 实施例A. 2.:本发_式（IIa)的羟基对羟苯基乙醇二氢芥子酸醅的合成
[0191] 步骤a):由二羟基苯基乙酸原位合成羟基对羟苯基乙醇
[0192] 通过上述实施例A. 1.步骤a)中描述的方案合成羟基对轻苯基乙醇。
[0193] 步骤b):由芥子酸原位合成二氢芥子酸。
[0194] 与步骤a)所定义的原位合成羟基对羟苯基乙醇平行的是，芥子酸的双键历经4小 时在含Pd-C(5% )的甲基THF的存在下，于环境温度5巴的氢气还原。在经Clarcel过滤 后，将溶液直接引入到步骤c)中。
[0195] 步骤c):步骤a)得到的羟基对羟苯基乙醇和步骤b)得到的二氢芥子酸的偶联。
[0196] 偶联反应根据上述实施例A. 1.的步骤b)定义的方案进行。
[0197] B.试验测试结果
[0198] 在下面的实施例中，参考对应于专利FR2892923的表11中实施例1的现有技术阿 魏酸衍生物。该化合物是下式的N-反式-阿魏酰基多巴胺：
[0199]
[0200] 实施例B. 1 :抑制黑色素牛成的试验
[0201] 原理：通过定量分析将化合物用于试验后,鼠系B16黑色素细胞合成的总的黑色 素，来测定本发明式（IIa)的羟基对羟苯基乙醇二氢芥子酸酯或现有技术中的阿魏酸衍生 物对黑色素生成的抑制百分比，
[0202] 方案:
[0203] 将黑色素细胞（B16细胞）在96孔板中用适宜的培养基培养24小时。取出培养 基，然后用补充或未补充含任一试验化合物或阴性对照（培养基和溶剂）或阳性对照（曲 酸）的a-MSH衍生物的培养基代替。培养72小时后，将培养基取出，并且通过测定相对于 0. 78至100 μ g/mL的合成黑色素标准范围的405nm处的吸光度定量总的黑色素。
[0204] 阳性试验对照是浓度为0. 025mg/mL的曲酸，其黑色素生成的抑制百分比为50%。
[0205] 结果:
[0206] 结果表示为相对于阴性对照的黑色素生成抑制百分比，并且在表1中显示。
[0207] 被试验产品对黑色素生成的抑制活性是根据下式计算的百分比：
[0208] %抑制=[(平均刺激的对照-平均基础的对照）-(样品值-平均基础的对照）]/ (平均刺激的对照-平均基础的对照）X 100
[0209] 其中：
[0210] -平均刺激的对照：用a -MSH衍生物补充的基质得到的平均值
[0211] -样品值：由试验化合物得到的值
[0212] -平均基础的对照：用未补充a -MSH衍生物的基质得到的平均值
[0213] 表1 :应用本发明的羟基对羟苯基乙醇二氢芥子酸醅或现有抟术的阿魏酸衍牛物 后Β16细朐中黑色素的抑制百分比。
[0215] 结论:
[0216] 这些结果显示，羟基对羟苯基乙醇二氢芥子酸酯（IIa)对黑色素的生成有很强的 抑制作用，甚至在低浓度。事实上，最小试验浓度（10 μΜ)获得75%的显著抑制作用。
[0217] 这些结果有效证明了本发明化合物的优点，以及它们相对于现有技术化合物的更 好的效果。
[0218] 实施例Β. 2 :抗人酪氨酸酶活件试验
[0219] 原理：通过定量分析作为单层培养的黑色素细胞在应用试验化合物后的人酪氨酸 酶活性，研究本发明式（IIa)的羟基对羟苯基乙醇二氢芥子酸酯与现有技术阿魏酸衍生物 相比对酪氨酸酶的抑制。
[0220] 方案:
[0221] 将正常人黑色素细胞（由腹部整形术获得）以80000个细胞/孔接种在24-孔 板中。将它们培养直至汇合，并且将试验化合物应用于培养基中24小时。24小时后，去除 培养基，并且通过机械作用分离黑色素细胞。通过热冲击进行提取，然后回收上清液，并且 用ΜΒΤΗ(甲基苯并噻唑啉酮腙）（Sigma)和L-多巴（Sigma)温育。温育30分钟后，测定在 490nm(OD4J的光密度，并且根据下式计算酪氨酸酶的抑制：
[0222] %抑制=100- [ 100 X (OD49。样品/样品中蛋白质的水平）AOD 49。阴性对照/阴性 对照中蛋白质的水平）]
[0223] 因此，OD49。与蛋白质的水平相关，其是在每个培养孔中的测定值。因此，计算相对 于阴性对照的抗-酪氨酸酶活性百分比，阴性对照是未处理的对照。
[0224] 阳性试验对照是ImM的曲酸和熊果苷，并且预期的抑制为约35%，从而使得试验 得以验证。
[0225] 结果:
[0226] 结果以酪氨酸酶活性的％抑制呈现，见表2。
[0227] 表2 :应用本发明的羟基对羟苯基乙醇二氢芥子酸醅或现有抟术的阿魏酸衍牛物 后对人酪氨酸酶的抑制。
[0229] 结论:
[0230] 这些结果表明，与现有技术中阿魏酸衍生物已观察到的相比，本发明的羟基对羟 苯基乙醇二氢芥子酸酯（IIa)没有抑制黑色素细胞中人酪氨酸酶的活性。
[0231] 这表明本发明化合物对黑色素的生成有抑制作用，特别是在上述实施例B. 1.中 观察到，该抑制作用通过与已知化合物不同的途径发挥。
[0232] 实施例B. 3 :自由基清除剂活件试验
[0233] 实施例B. 3a):用DPPH试验（I, 1-二苯基-2-苦基苯肼）的研究
[0234] 原理：本发明式(IIa)的羟基对羟苯基乙醇二氢芥子酸酯和现有技术的阿魏酸衍 生物的自由基清除剂活性研究，在非细胞体外模型中使用DPPH进行。
[0235] 方案:
[0236] 1，1-二苯基-2-苦基苯肼由于其顺磁性结构，能够接受电子或氢自由基，以成为 稳定的抗磁性分子。
[0237] 该自由基在乙醇中具有紫色，表现出强的530nm处的吸收带。
[0238] 加入提供电子的化合物会引起1，1-二苯基-2-苦基苯肼以与自由基接受电子的 数