44] 因此，本公开在一实施方式中涉及一种具有多能性的干细胞的培养方法，其包括 在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养（以下，也称为"本公开中所述的培养 方法"。）。根据本公开中所述的培养方法，在一实施方式中，能够起到可以除去在具有多能 性的干细胞的培养中的集落产生的"脱离未分化状态的细胞"的效果。
[0045] 因此，本公开在其它实施方式中涉及一种除去在具有多能性的干细胞的培养中产 生的或可产生的脱离未分化状态的细胞的方法，其包括在可阻碍细胞间粘接的物质的存在 下进行细胞培养（以下，也称为"本公开中所述的除去方法"。）。根据本公开中所述的培养 方法、和/或本公开中所述的除去方法，在一实施方式中，可以从产生脱离未分化状态的细 胞并劣化了的未分化状态的细胞的集落中除去脱离未分化状态的细胞，制成未分化状态的 细胞的集落或由未分化状态的细胞构成的集落。
[0046] 因此，本公开在其它实施方式中涉及一种从产生脱离未分化状态的细胞并劣化 的集落出发，形成由未分化状态的细胞构成的集落的方法，其包括在可阻碍细胞间粘接的 物质的存在下将所述劣化的集落进行培养（以下，也称为"本公开中所述的集落形成方 法"。）。
[0047] 另外，根据本公开中所述的培养方法、和/或本公开中所述的除去方法，在一实施 方式中，可以培养未分化状态细胞或仅培养未分化状态细胞。因此，本公开在其它实施方式 中涉及一种维持具有多能性的干细胞的未分化状态的方法，其包括在可阻碍细胞间粘接的 物质的存在下进行细胞培养（以下，也称为"本公开中所述的维持方法"。）。
[0048][具有多能性的干细胞]
[0049] 在本公开中，具有多能性的干细胞在没有限定的一个或多个实施方式中为人多能 性（pluripotent)干细胞。在本公开中，人多能性干细胞在没有限定的一个或多个实施方 式中为人iPS细胞或人ES细胞。
[0050] [脱离未分化状态的细胞]
[0051] 在本公开中，就脱离未分化状态的细胞而言，在没有限定的一个或多个实施方式 中，细胞的形态与未分化状态的细胞的形态不同，可以判别。在本公开中，"脱离未分化状态 的细胞"有时也称为"脱未分化细胞"或"未分化脱离细胞"。在没有限定的一个或多个实施 方式中，成为脱未分化细胞，可以通过未分化标记的消失来确认。所述未分化标记在没有限 定的一个或多个实施方式中为0ct3/4、Nanog、SSEA-4、TRA-1-60。
[0052] [可阻碍细胞间粘接的物质]
[0053] 在本公开中，可阻碍细胞间粘接的物质在没有限定的一个或多个实施方式中为具 有E-钙粘蛋白（E-cadherin)的功能阻碍活性的物质。在本公开中，就可阻碍细胞间粘接的 物质而言，在没有限定的一个或多个实施方式中，从有效地除去脱未分化细胞的观点出发， 除E-钙粘蛋白的功能阻碍活性之外，优选具有对细胞表面的结合能力。对所述细胞表面的 结合能力在没有限定的一个或多个实施方式中为对具有多能性的干细胞的细胞表面的结 合能力。
[0054] [HA]
[0055] 在本公开中，可阻碍细胞间粘接的物质在没有限定的一个或多个实施方式中为肉 毒杆菌（Clostridiumbotulinum)的神经毒素复合体中的血凝素（HA)。在本公开中，就可 阻碍细胞间粘接的物质而言，在没有限定的一个或多个实施方式中，从有效地除去脱未分 化细胞的观点出发，包含由选自由肉毒杆菌（Clostridiumbotulinum)的神经毒素复合体 中的3个血凝素亚组分HA1 (HA33)、HA2 (HA17)、及HA3 (HA70)组成的组中的2种或3种成分 构成的复合体或其复合体。另外，就可阻碍细胞间粘接的物质而言，在没有限定的一个或多 个实施方式中，从有效地除去脱未分化细胞的观点出发，包含由HA2(HA17)及HA3(HA70)构 成的复合体或由3种成分构成的复合体或其复合体。就所述亚组分HA3(HA70)而言，在一个 或多个实施方式中，从表达E-钙粘蛋白的功能阻碍活性的观点、及有效地除去脱未分化细 胞的观点出发，优选为A型或B型的肉毒杆菌的成分。另外，亚组分HA1 (HA33)及HA2 (HA17) 在没有限定的一个或多个实施方式中可以为A型、B型及C型的任一种肉毒杆菌的成分。就 HA而言，在没有限定的一个或多个实施方式中，各亚组分可以分别为重组体，也可以为天然 型。
[0056][可阻碍细胞间粘接的物质的存在下的细胞培养]
[0057] 在本公开中，"可阻碍细胞间粘接的物质的存在下的细胞培养"可以采用目前所使 用的和/或今后被开发的、具有多能性的干细胞的培养条件及培养培养基等，通过在该培 养条件的培养基中使可阻碍细胞间粘接的物质存在而进行。在没有限定的一个或多个实施 方式中，可以将可阻碍细胞间粘接的物质添加于培养中的培养培养基，或者可以使用预先 添加有可阻碍细胞间粘接的物质的培养基进行培养。培养培养基、培养板等可以使用市售 的培养培养基、培养板。
[0058] "可阻碍细胞间粘接的物质"可以在确认脱未分化细胞后添加于培养基，也可以在 不产生脱未分化细胞的阶段添加于培养基。
[0059] 存在于培养基的"可阻碍细胞间粘接的物质"的浓度在没有限定的一个或多个实 施方式中为可以除去脱未分化细胞的实质的有效浓度，只要是本领域技术人员，就可以设 定。就存在于培养基的"可阻碍细胞间粘接的物质"的浓度而言，在没有限定的一个或多个 实施方式中，从有效地除去脱未分化细胞的观点出发，可列举5nM以上、10nM以上、或15nM 以上。从同样的观点出发，为200nM以下、150nM以下、或100nM以下。
[0060] 作为使"可阻碍细胞间粘接的物质"存在于培养基的没有限定的一个或多个实施 方式，既可以将以下的培养基交换作为分割点进行单次的给药，也可以为连续的给药，还可 以为间断的给药。
[0061] 在本公开中，细胞培养在没有限定的一个或多个实施方式中包含继代培养。根据 本公开中所述的培养方法、和/或本公开中所述的除去方法，在一实施方式中，起到可以提 高继代培养后形成的集落中的未分化集落（由未分化细胞形成，实质上不含有未分化脱离 细胞的集落）的比例的效果。继代在没有限定的一个或多个实施方式中可以通过现有公知 及今后被开发的技术来进行。
[0062] 在本公开中，细胞培养在没有限定的一个或多个实施方式中既可以为使用有饲养 细胞的培养，也可以为无饲养层培养。饲养细胞在没有限定的一个或多个实施方式中，可列 举MEF (Mouse Embryo Fibroblast)细胞、SL10、及SNL76/7饲养细胞等。饲养细胞在没有 限定的一个或多个实施方式中，在饲养细胞中，优选具有多能性的干细胞的游走速度比较 缓慢的饲养细胞。就饲养细胞而言，在没有限定的一个或多个实施方式中，从具有多能性的 干细胞的游走比较缓慢、在具有多能性的干细胞的培养中的集落中可以使未分化脱离细胞 在集落中央部产生的方面考虑，优选SNL76/7饲养细胞。
[0063] 就细胞培养而言，在没有限定的一个或多个实施方式中，从可以有效地除去未分 化脱离细胞的方面考虑，优选可以在具有多能性的干细胞的培养中的集落中央部使未分化 脱离细胞产生的条件下进行。在没有限定的一个或多个实施方式中，通过阻碍和/或抑制 具有多能性的干细胞的游走，可以在集落中央部使未分化脱离细胞有效地产生。
[0064] 在其它的一实施方式中，本公开涉及一种具有多能性的干细胞的培养方法，其包 括在可阻碍游走的物质的存在下进行细胞培养，及在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进 行细胞培养。根据本实施方式中所述的培养方法，在一实施方式中，可以在具有多能性的干 细胞的培养中的集落中方使未分化脱离细胞在集落中央部产生，因此，能够起到可以有效 地除去未分化脱离细胞的效果。
[0065] 在其它实施方式中，本公开涉及一种除去在具有多能性的干细胞的培养中产生的 或可产生的未分化脱离细胞的方法，其包括在可阻碍游走的物质的存在下进行细胞培养， 以及在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养。根据本实施方式中所述的培养方 法、和/或本实施方式中所述的除去方法，在一实施方式中，可以从产生未分化脱离细胞并 且劣化的未分化状态的细胞的集落中除去未分化脱离细胞，制成未分化状态的细胞的集落 或由未分化状态的细胞构成的集落。
[0066] 在其它实施方式中，本公开涉及一种从产生未分化脱离细胞并劣化的集落出发， 形成由未分化状态的细胞构成的集落的方法，其包括在可阻碍游走的物质的存在下进行细 胞培养，以及在可阻碍细胞间粘接的物质的存在下将所述劣化的集落进行培养。
[0067] 在本公开中，可阻碍游走的物质在没有限定的一个或多个实施方式中可列举抑制 /阻碍与具有多能性的干细胞的游走相关的物质的活性的物质等。在本公开中，就可阻碍游 走的物质而言，在没有限定的一个或多个实施方式中，可列举游走抑制剂。就可阻碍游走的 物质而言，在没有限定的一个或多个实施方式中，可列举Rac-1抑制剂等。就存在于培养基 的"可阻碍游走的物质"的浓度而言，在没有限定的一个或多个实施方式中，从使未分化脱 离细胞有效地移动至集落中央部、有效地除去未分化脱离细胞的观点出发，为50yM以上、 100yM以上、或150yM以上，从同样的观点出发，为200yM以下。
[0068] 就可阻碍游走的物质而言，在没有限定的一个或多个实施方式中，既可以在培养 开始时添加于培养基，也可以在培养基交换时添加。就可阻碍游走的物质而言，在没有限定 的一个或多个实施方式中，既可以在不产生未分化脱离细胞的阶段添加于培养基，也可以 在确认未分化脱离细胞后添加于培养基。
[0069] 根据本公开中所述的培养方法、和/或本公开中所述的除去方法，通过在可阻碍 细胞间粘接的物质的存在下进行细胞培养，在一实