A环具有异戊烯基的醌式查尔酮化合物，制法与抗炎活性的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮结构的化合物、 制备方法，及含它们的药物组合物及其在抗炎中的应用。
【背景技术】
[0002] 血管内皮损伤是指血管内皮细胞因受物理、化学、射线、细胞因子及细菌等因素破 坏而出现直接或间接的损伤。血管内皮受损后，损伤局部不仅失去了内皮屏障的作用，同时 还会产生多种细胞因子，强烈刺激和诱导产生大量诱生型一氧化氮合成酶（iNOS)，iNOS迅 速表达，并催化生成1000倍正常生理量的N0,大量生成的NO与氧分子或过氧化物结合，分 别形成具有强氧化性功能的氧自由基ROS (00N0)或RNS (N02, N2O3)进行发挥细胞毒作用。 一方面，这些自由基使巯基蛋白和脂质过氧化，加重内皮损伤和脂质沉积；另一方面，这些 氧自由基可通过同氨基作用、DNA环的断裂、耗竭谷胱甘肽的储备来诱导DNA的损伤，从而 又促进加重炎症发生发展和细胞损伤。同时，iNOS活性可以维持数小时到数天，故可造成 长时间损伤作用，导致血管舒缩障碍、凝血异常、血流动力学改变，重者可出现受损血管器 质性改变，并由此引发一系列心脑血管相关疾病，如冠心病、继发性血栓形成、动脉硬化等。 这些疾病往往具有不可逆性，一旦发生，就很难根治，给临床治疗带来很大困难，疗效亦受 到很大影响。因此抑制iNOS活性，可减轻炎症的原发和继发，降低血管内皮损伤相关性疾 病的发病率，保护心脑血管。
[0003] 醌式查尔酮类化合物属于黄酮类化合物，此类化合物在天然资源中数量较少，是 传统中药红花水溶性成分红花黄色素的主要成分，其代表化合物为羟基红花黄色素A。羟 基红花黄色素A被认为是红花的主要有效成分，研究表明羟基红花黄色素A能通过抑制炎 症，降低低氧状态对血管内皮细胞的损伤，减轻缺血神经元变性坏死和胶质增生，预防和治 疗血管和神经炎症疾病及血管内皮损伤相关疾病。但是羟基红花黄色素A物理、化学性质 不稳定，在光、热、酸碱条件下，易被破坏，不易保存，限制了其进一步开发利用。
[0004] 目前关于醌式查尔酮相关的合成及药理研究还尚不深入，为有效阐释传统中药的 作用机制，并为寻找活性更好的抗炎药物提供理论依据和实践经验，我们合成了一类A环 具有异戊烯基的醌式查尔酮，并对其抗炎活性进行了评价。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物。
[0006] 本发明的另一目的在于提供该类化合物的制备的方法。
[0007] 本发明的再一目的在于提供一种药物组合物，其包括有效剂量的一类A环具有异 戊烯基的醌式查尔酮类化合物及药用载体和/或赋形剂。
[0008] 本发明的又一目的在于提供一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物在制 备用于治疗和/或预防炎症的药物或保健品中的应用。
[0009] 本发明提供如下技术方案：
[0010] 本发明第一方面提供一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮，其特征在于，具有通 式（I )所示的结构：
[0020] 其中R选自：氢，羟基，巯基，甲氧基，氨基，硝基，卤素，氰基，甲磺酸基，甲酸基。
[0021] 所述化合物中，R优选自：氢，羟基，甲氧基，氯，溴。
[0022] 所述化合物，优选自如下化合物：
[0023]
[0027] (I) 3, 5-二羟基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环己-2, 4-二烯酮的合成
[0028] 取2, 4, 6-三羟基苯乙酮加到碱水溶液中，冰水浴搅拌溶解，取2倍2, 4, 6-三羟基 苯乙酮摩尔量的溴代异戊烯烷，加到水溶液中；60分钟后，用稀盐酸调节PH到3,然后用乙 酸乙酯萃取，将其有机相洗涤、干燥，最后用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂体积比10 :1，硅胶 柱层析得到黄色油状物3, 5-二羟基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环己-2, 4-二烯酮。
[0029] (2) 3-羟基-5-甲氧甲氧基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环己-2, 4-二烯酮的合 成
[0030] 取3, 5-二羟基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环己-2, 4-二烯酮加入到无水丙酮 中，搅拌溶解后，取7. 4倍3, 5-二羟基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环己-2, 4-二烯酮摩 尔量的碳酸钾，搅拌15分钟后，再取2. 5倍3, 5-二羟基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环 己-2, 4-二烯酮摩尔量的氯甲基甲醚滴加入丙酮溶液中，搅拌5小时后，过滤，将其滤液 干燥，最后用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂体积比20:1，硅胶柱层析得到黄色油状物3-羟 基-5-甲氧甲氧基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环己-2, 4-二烯酮。
[0031] (3)甲氧甲氧基保护的一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物的合成
[0032] 取3-羟基-5-甲氧甲氧基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环己-2, 4-二烯酮与取 代苯甲醛以摩尔比I :1. 5混合，加入乙醇水溶液溶解，再加入2. 5倍3-羟基-5-甲氧甲氧 基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环己-2, 4-二烯酮摩尔量的氢氧化钾，常温反应3天后，用 稀盐酸调节PH到3,然后用乙酸乙酯萃取，将其有机相洗涤、干燥，最后用甲醇/水混合溶剂 体积比7 :3, YMC Rp-C18柱层析得到甲氧甲氧基保护的一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮 类化合物。
[0033] (4) -类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物的合成
[0034] 取甲氧甲氧基保护的一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物加入四氢呋 喃溶解后，加入稀盐酸，加热反应10小时，待反应物冷却至室温后，将其倒入水中，然后用 乙酸乙酯萃取，将其有机相洗涤、干燥，最后用甲醇/水混合溶剂体积比6 :4, YMC Rp-C18柱 层析得到一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物。
[0035] 其中，制备方法中所指的R和上述限定相同，优选的选自羟基，巯基，甲氧基，氨 基，硝基，卤素，氰基，甲磺酸基，甲酸基；更优选自羟基，甲氧基，氯，溴。
[0036] 本发明第三方面涉及一种含有药物有效剂量的如通式（I )各情况所述的化合物 和药学上可接受的载体的药物组合物。
[0037] 本发明还涉及含有作为活性成份的本发明化合物和常规药物赋形剂或辅剂的药 物组合物。通常本发明药物组合物含有〇. 1~95%重量的本发明化合物。在单元剂型中本 发明化合物一般含量为〇. 1~l〇〇mg，优选的单元剂型含有4~50mg。
[0038] 本发明化合物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果 需要，可将本发明化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作 为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。
[0039] 本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道 或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。本发明化合物或含有 它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内 注射和穴位注射等。
[0040] 给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒 剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混 悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。
[0041] 本发明化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种 微粒给药系统。
[0042] 例如为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于 载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡 萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二 醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素 钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂 粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、 甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等； 吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬 脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄 膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
[0043] 例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体 的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷 酮、单硬脂酸甘油脂、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液 糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、 乙基纤维素等。
[0044] 例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明化合物与上述的各种载体混 合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物 制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。
[0045] 例如，将本发明化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针 剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、 粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3_丙 二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂、肪酸酯等。另外，为了 制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添 加常规的助溶剂、缓冲剂、PH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。
[0046] 此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或 其它材料。
[0047] 为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给 药方法给药。
[0048] 本发明化合物药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病 的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、 治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使 用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含有的 实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目 的。本发明化合物的每天的合适剂量范围：本发明的化合物的用量为〇. 001~IOOmgAg体 重，优选为〇? 1~60mg/Kg体重，更优选为1~30mg/Kg体重，最优选为2~15mg/Kg体重。 成人患者服用的本发明化合物每日为10~500mg，优选为20~IOOmg,可一次服用或分2~ 3次服用；儿童服用的剂量按照每kg体重5~30mg，优选为10~20mg/kg体重。上述剂量 可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药，这受限于给药医生的临床 经验以及治疗手段的给药方案。本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物 或对症药物合并使用。
[0049] 本发明第四方面涉及一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物在预防和/或 治疗炎症药物或保健品中的应用。
[0050] 实验证明本发明的一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物在评价抗炎药 物疗效的模型，LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO抑制活性模型上显示出明显的抗炎活 性，且巨噬细胞增值率实验表明，本发明的一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物 细胞毒性较低。
[0051] 本发明的一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物可明显的通过抑制诱导 性一氧化氮合酶（iNOS)，减少NO的生成，从而减轻血管内皮和神经细胞的炎症损伤，临床 上可用于治疗哺乳动物和人类的血管和神经炎症性疾病及并发病，如脉管炎、骨关节炎、神 经炎症、冠心病、动脉粥样硬化。
[0052] 本发明的化合物以及含有本发明化合物的药物组合物的适应症，主要包括血管和 神经炎症性疾病和免疫性炎症疾病,如脉管炎、骨关节炎、神经炎、风湿性关节炎、强直性脊 椎炎、肩周炎、滑囊炎、肌腱炎。此外本发明化合物药物组合物还可治疗因血小板聚集引起 的血管栓塞，如心绞痛、动脉粥样硬化、心肌梗塞和脑血管梗塞等。
[0053] 有效技术效果
[0054] 1.本发明的一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物结构新颖，均未见文献 报道，具有进一步开发成抗炎方面新药的潜力。
[0055] 2.本发明的一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物制备方法路线新颖，分 离简便。
[0056] 3.本发明的一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物具有较好的抗炎活 性，在浓度为1X10 5mol/L时，所述化合物有明显的抗炎作用，NO生成抑制率为89. 4~ 99. 3%，该类化合物的抗炎活性目前没见相关报道。
【具体实施方式】
[0057] 下面的实施例及药理活性实验用于进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明 的任何限制。
[0058] 1、一类A环具有异戊烯基的醌式查尔酮类化合物1~9的制备方法
[0059] 实施例1
[0060] 化合物1的合成方法,包括以下步骤：
[0061] (1) 3, 5-二羟基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环己-2, 4-二烯酮的合成
[0062] 取lg2, 4, 6-三羟基苯乙酮和0. 68g氢氧化钾加到IOml水中，冰水浴搅拌溶解， 取I. 37ml溴代异戊烯，加到水溶液中；60分钟后，用稀盐酸调节PH到3,然后用乙酸乙酯萃 取，将其有机相洗涤、干燥，最后用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂体积比10 :1，硅胶柱层析得 到〇. 8g黄色油状物3, 5-二羟基-2-乙酰基-6, 6-二异戊烯基环己-2, 4-二烯酮，产率为 44% ;该过程发生如下反应：
[0064]产物的结构表征数据为=1H NMR(DMS0-d6, 300MHz) S I. 641 (12H, s, 4XCH3)，2 ? 566 (5H，m，-CH2CH = ,-CH3CO) ,2.660 (2H，m，-CH2CH = ),4.894 (2H，t，J = 7. 5Hz,= CHCH2)，5. 661 (1H, s, H-4) ? ESI-MS :m/z303. I [M-