蛋白质VdAL在提高植物产品品质中的应用_3

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进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐 明本发明,而不是为了限制本发明的范围。
[0116] 下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。
[0117] 下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
[0118] 下述实施例中的大肠杆菌JM109为北京索莱宝科技有限公司产品,产品目录号为 C1300。
[0119] 下述实施例中的载体祀T42a(+)为北京碧澄蓝生物科技有限公司产品,产品目录 号为S18-16。
[0120] 下述实施例中的新陆早58号为新疆锦棉种业科技股份有限公司产品,鲁30号、 616、鲁25号和鲁研棉24号为山东农兴种业有限责任公司产品。 阳121] 下述实施例中的西瓜品种金丽都为寿光积善商贸有限公司产品。 阳122] 下述实施例中的中麦816为北京龙盛源科技发展有限公司产品。 阳123] 下述实施例中的番茄品种富克斯为寿光市金鹏种业有限公司产品。
[0124] 下述实施例中的华丽青梗菜F1为上海虹桥天龙种业有限公司产品。 阳125] 下述实施例中的黄瓜品种津杂1号为山东农兴种业有限公司产品。 阳126] 下述实施例中的圣女果品种京丹2号为北京北农绿亨科技发展有限公司产品。 阳127] 下述实施例中的草替品种丰香为北京北农绿亨科技发展有限公司产品。
[0128] 下述实施例中的超级翠宝香甜瓜品种为济南眷麦农业科技开发有限公司产品。
[0129] 下述实施例中的甜椒品种眷优816为济南眷麦农业科技开发有限公司产品。
[0130] 下述实施例中的大豆品种中华大豆王为济南眷麦农业科技开发有限公司产品。 阳131]实施例1、维达利安的制备 阳132] 维达利安由中国农业大学研制,由山东惠民湖浩生物科技有限公司开发生产。 阳133] 1、重组载体及重组菌的构建
[0134] 人工合成序列表中序列2的第1-894位核巧酸所示的DNA分子,即VdAL基因。将 载体祀T42a(+)的Ndel和化nl识别位点间的序列替换为序列表中序列2的第1-894位核 巧酸所示的DNA分子(即VdAL基因),保持祀T42a(+)的其他序列不变,得到重组载体,将 得到的重组载体命名为祀T42a-VdAL。重组载体祀T42a-VdAL表达序列表中序列1所示的 蛋白质VdAL。
[0135] 其中,序列2由894个核巧酸组成,编码序列1所示的氨基酸序列。
[0136] 将祀T42a-VdAL导入根癌农杆菌大肠杆菌JM109中,得到重组菌,将得到的重组菌 命名为JM109-pET42a-VdALJM109-pET42a-VdAL表达序列1所示的蛋白质。 阳137] 2、维达利安的制备
[0138] 将JM109-pET42a-VdAL在37°C条件下进行发酵至0D值为0. 6得到预发酵液,向预 发酵液中加入IPTG,使IPTG的浓度为ImM,得到诱导液,将诱导液在25°C条件下发酵6小时 得到发酵液。将发酵液进行离屯、,弃上清液,将得到的菌体沉淀破碎,然后在150°C进行喷雾 干燥得到干粉制剂(图1中A),将其命名为维达利安。
[0139] 利用western-blot的方法对维达利安中的VdAL进行检测,一抗为VdAL抗体 (VdAL抗体为序列2所示的蛋白质为免疫原制备得到的多克隆抗体),结果表明,维达利安 中含有VdAL(图1中B),维达利安中VdAL的含量为7. 28mg/g。
[0140]用清水将维达利安溶解,分别得到维达利安浓度分别为10g/3kg、10g/化g、 10g/9kg、Ig/kg、lg/2kg、lg/2.化g、lg/3kg、lg/4kg、lg/5kg、lg/7.化g、Ig/lOkg和lg/20kg 的液体,将运些液体分别命名为稀释300倍的VdAL稀释600倍的VdAL稀释900倍的VdAL 稀释1000倍的VdAL稀释2000倍的VdAL稀释2500倍的VdAL稀释3000倍的VdAL稀释 4000倍的VdAL稀释5000倍的VdAL稀释7500倍的VdAL稀释10000倍的VdAL和稀释 20000 倍的VdAL。 阳141]实施例2、维达利安可W促进棉花的生长 阳142] 1、维达利安可W促进棉花种子的发芽
[0143] 分别用实施例1的稀释5000倍的VdAL稀释7500倍的VdAL和稀释10000倍的 VdAL和清水浸泡新陆早58号种子24小时,在大花盆中进行发芽试验,溫度为25°C,在播种 第8天,统计棉花种子发芽率。每种处理100粒种子,实验重复=次。
[0144] 结果显示,稀释5000倍的VdAL稀释7500倍的VdAL和稀释10000倍的VdAL和清 水处理棉花种子后棉花的平均发芽率分别为74. 00%、75. 50%、71. 00%和70. 23%,稀释 5000倍的VdAL稀释7500倍的VdAL和稀释10000倍的VdAL处理棉花种子后棉花的平均 发芽率分别为清水处理棉花种子后棉花的平均发芽率的1. 05倍、1. 08倍、1. 01倍,表明,维 达利安可w提高棉花种子的发芽率,维达利安提高棉花种子发芽率的能力随维达利安浓度 的变化而变化。
[0145] 2、维达利安可W提高棉花的产量 阳146] 实验一;
[0147] 田间试验设计如下:实验采用随机区组设计,设置3个重复区,每个重复区随机设 置九个处理区,分别为鲁30号VdAL处理1区、鲁30号VdAL处理2区、鲁30号对照处理 区、616VdAL处理1区、616VdAL处理2区、616对照处理区、鲁25号VdAL处理1区、鲁25号 VdAL处理2区、和鲁25号对照处理区,每个处理区的面积均为0. 2亩。
[0148] 在鲁30号VdAL处理1区的鲁30号的苗期和花铃前期分别按照下述方式进行处 理:采用顶喷(机械喷施)的方式对棉花叶片喷施实施例1的稀释3000倍的VdAL每亩喷 施45-50kg,得到稀释3000倍的VdAL处理的鲁30号。苗期和花铃前期各喷施1次;喷施 时间在早晨或傍晚,最好避开正午高溫时段;喷施时严禁与药物及肥料混合;喷施后若2小 时内下雨需要补喷施一次。
[0149] 按照鲁30号VdAL处理1区的处理方法,将稀释3000倍的VdAL替换为稀释5000 倍的VdAL对鲁30号VdAL处理2区进行处理,其他步骤均不变,得到稀释5000倍的VdAL 处理的鲁30号。
[0150] 按照鲁30号VdAL处理1区的处理方法,将稀释3000倍的VdAL替换为清水对鲁 30号对照处理区进行处理,其他步骤均不变,得到未处理的鲁30号。 阳151]按照鲁30号VdAL处理1区的处理方法,分别对616VdAL处理1区和鲁25号VdAL处理1区进行处理,其他步骤均不变,分别得到稀释3000倍的VdAL处理的616、鲁25号。 阳152]按照鲁30号VdAL处理1区的处理方法,将稀释3000倍的VdAL替换为稀释5000 倍的VdAL分别对616VdAL处理2区和鲁25号VdAL处理2区进行处理,其他步骤均不变, 分别得到稀释5000倍的VdAL处理的616、鲁25号。
[0153] 按照鲁30号VdAL处理1区的处理方法,将稀释3000倍的VdAL替换为清水,分 别对616对照处理区和鲁25号对照处理区进行处理,其他步骤均不变,分别得到未处理的 616、鲁 25 号。
[0154] 分别统计稀释3000倍的VdAL处理的鲁30号、稀释5000倍的VdAL处理的鲁30 号、未处理的鲁30号、稀释3000倍的VdAL处理的616、稀释5000倍的VdAL处理的616、未 处理的616、稀释3000倍的VdAL处理的鲁25号、稀释5000倍的VdAL处理的鲁25号和未 处理的鲁25号的霜前花产量W、霜后花产量W及总产量,结果如表1所示。 阳155]表1、不同处理的棉花的平均产量阳巧6]
[0158] 注:处理1表示稀释3000倍的VdAL进行的处理,处理2表示稀释5000倍的VdAL 进行的处理,CK表示未处理(即用清水进行的处理)。
[0159] 结果显示,适当浓度的维达利安可W提高棉花的产量:用稀释3000倍的VdAL处理 鲁30号,霜前花产量提高19. 48%,总产量提高17.04% ;用稀释5000倍的VdAL进行处理 时,鲁30号霜前花产量提高21. 25 %,总产量提高20. 00 %,616霜前花产量提高19. 06%, 总产量提高19. 69%,鲁25号霜前花产量提高16. 37%,总产量提高17. 60%。
[0160]实验二: 阳161] 田间试验设计如下:实验采用随机区组设计,设置3个重复区,每个重复区随机设 置四个处理区,分别为VdAL处理1区、VdAL处理2区、VdAL处理3区和对照处理区,每个处 理区的面积均为10亩。
[0162] 在VdAL处理1区的鲁研棉24号的苗期和花铃前期分别按照下述方式进行处理: 采用顶喷(机械喷施)的方式对棉花叶片喷施实施例1的稀释3000倍的VdAL每亩喷施 45-50kg,机车作业速度控制在时速6公里左右,得到稀释3000倍的VdAL处理的鲁研棉24 号。苗期和花铃前期各喷施1次;喷施时间在早晨或傍晚,最好避开正午高溫时段;喷施时 严禁与药物及肥料混合;喷施后若2小时内下雨需要补喷施一次。
[0163] 按照VdAL处理1区的处理方法,将稀释3000倍的VdAL替换为稀释5000倍的VdAL 对VdAL处理2区进行处理,其他步骤均不变,得到稀释5000倍的VdAL处理的鲁研棉24号。
[0164] 按照VdAL处理1区的处理方法,将稀释3000倍的VdAL替换为稀释10000倍的 VdAL对VdAL处理3区进行处理,其他步骤均不变,得到稀释10000倍的VdAL处理的鲁研棉 24号。
[01化]按照VdAL处理1区的处理方法,将稀释3000倍的VdAL替换为清水对对照处理区 进行处理,其他步骤均不变,得到未处理的鲁研棉24号。
[0166] 统计各处理的鲁研棉24号的每亩植株数、单株成铃数、亩总铃数、单铃重、衣分和 亩产量,各项目的平均值W及与对照相比的增量如表2和表3所示。 阳167] 表2、各处理的鲁研棉24号各项目的平均值和增量
[0168]
[0170]注:处理1表示稀释3000倍的VdAL进行的处理,处理2表示稀释5000倍的VdAL进行的处理,处理3表示稀释10000倍的VdAL进行的处理,CK表示未处理(即用清水进行 的处理)。 阳171] 表3、各处理的鲁研棉24号各项目的平均值和增量 阳172]
[0173] 注:处理1表示稀释3000倍的VdAL进行的处理,处理2表示稀释5000倍的VdAL 进行的处理,处理3表示稀释10000倍的VdAL进行的处理,CK表示未处理(即用清水进行 的处理)。
[0174] 结果显示,适当浓度的维达利安可W提高棉花的每亩植株数、单株成铃数、亩总铃 数、单铃重、衣分和亩产量:用稀释3000倍的VdAL处理时,单株成铃数、亩总铃数、衣分和亩 产量均有增加,增加率分别为4. 5%、1. 98%、0. 24%和1. 76% ;用稀释5000倍的VdAL处 理时,每亩植株数、单株成铃数、亩总铃数、单铃重、衣分和亩产量均有增加,增加率分别为 1. 4%、3. 41 %、4. 41 %、1. 9%、0. 49%和 5. 22% ;用稀释 10000 倍的VdAL处理时,各项目的 增加量没有用稀释3000倍的VdAL处理和稀释5000倍的VdAL处理时各项目的增加量高。 表明,施用适当浓度的维达利安可W提高棉花的品质和产量。 阳1巧]实施例3、维达利安可W提高西瓜的品质和产量
[0176] 田间试验设计如下:实验采用随机区组设计,设置3个重复区,每个重复区随机设 置2个处理区,分别为V化A处理区和对照处理区,每个处理区的面积均为0. 2亩。
[0177] 在V化A处理区的西瓜品种金丽都按照下述方式进行处理:采用顶喷(机械喷施) 的方式对西瓜叶片喷施实施例1的稀释2000倍的VdLA,每亩喷施30kg,得到稀释2000倍 的VdAL处理的西瓜。喷施从西瓜的幼苗期,并于第一次喷施15天后再喷施1次,共喷2 次;喷施时间在早晨或傍
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