一种Nα-芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯的制备方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及多肽合成领域，具体涉及一种Ν α -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯及其中间体的制备方法。
【背景技术】
[0002]目前现有技术中，Να-芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯及其中间体的制备路线为先合成z-gln-oh，再通异丁稀做成z-gln-otbu，再经过加氢脱除z_基团，得到h-gln-otbu，再和fmoc-基团混合制得fmoc-gln-otbu，这种方法操作过程步骤比较繁琐，且需要加压催化加氢，控制条件比较苛刻，且得率低，周期长，成本高，有一定的危险性，不适宜商业化生产。
【发明内容】
[0003]本发明技术目的在于克服原工艺中的复杂性，周期长，成本高，收率低等技术问题，提供了一种Ν α -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯及其中间体的制备方法，该方法简单易控制，两步反应周期较短，成本低，适宜于规模化生产。
[0004]为了达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是:一种Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:
第一步反应，将gin制备成h-gln-otbu:将gin加入有机溶剂中，之后加入羧基保护剂，在强酸化合物的作用下进行反应，经过萃取碱洗，水洗，得到h-gln-otbu ;或将gin和z-cl混合制成z-gln-oh，再和醋酸叔丁酯混合制成z-gln-otbu，再在甲醇中经过催化加氢制得 h-gln-otbu ；
第二步反应，将h-gln-otbu制备成fmoc-gln-otbu ;将h-gln-otbu和fmoc-基团的保护剂混合，在有机溶剂参与下，用碱性化合物调节pH值为8-9，反应制得fmoc-gln-otbu，并经过处理得纯品fmoc-gln-otbu。
所述第一步反应第一方案；所述反应温度为15-25°C，反应时间为24-48小时； gln、羧基保护剂和强酸化合物的摩尔比为1: (5-20): (1.3-2.05)；
所述羧基保护剂和有机溶剂均为醋酸叔丁酯；
所述的碱洗，所用碱性化合物为:氢氧化钠；
所述的强酸化合物为:高氯酸。
所述第一步反应第二方案，其中gin和z-cl的摩尔比为1: (1-2)，gin和z_cl混合反应温度为15-25°C，反应时间为:6-10小时；其中z-gln-oh、醋酸叔丁酯和高氯酸的摩尔比为1: (5-20): (1.5-2.5)，体系反应温度为:10-20°C，反应时间为6小时;其中z-gln-otbu和甲醇的按lg溶解在10ml比例计入，反应温度为:20°C，反应时间为72小时。
[0005]所述第二步反应中，将h-gln-otbu与fmoc-基团保护剂按摩尔比为1:(1-1.5)的比例混合，反应温度为15-25°C，反应时间为:6-10小时；所述碱性化合物为碳酸钠水溶液。
[0006]所述fmoc-基团保护剂为fmoc-osu或fmoc-cl。
[0007]所述有机溶剂为THF、丙酮、二氧六环中的一种。
[0008]本发明所使用的缩写或英文全称的含义如下: gin:谷氨酰胺
Fmoc-osu:荷甲氧羰基琥?白酰亚胺 z-cl:氯甲酸节酯 DMF: N，N-二甲基甲酰胺 h-gln-otbu:L-谷氨酰胺叔丁酯 THF:四氢呋喃
z-gln-oh:节氧羰基-谷氨酰胺 z-gln-otbu:节氧羰基-谷氨酰胺-叔丁酯。
[0009]本发明的有益效果是:本发明通过醋酸叔丁酯和在强酸下进行转酯反应直接制备h-gln-otbu，大大简化了工艺，降低了成本，缩短了周期，适用于大规模生产，制得Να-芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯及其中间体收率高，质量也有明显的提高。
【附图说明】
[0010]图1为本发明产品质谱图。
[0011]图2为本发明产品核磁图谱。
【具体实施方式】
[0012]下面结合具体实例对本发明进行详细的描述，但不是对本发明的进一步限制。
[0013]实验所用主要检测仪器:
1、岛津20Α
2、检验条件:色谱柱:4.6*250 mm，sinochrom 0DS-BP 5 μ m
3、检测波长:220nm
4、流动相:A:0.lml三氟乙酸溶解在100ml水里
B:0.lml三氟乙酸溶解在100ml乙腈里
5、流速:1.0ml/min
6、柱温:25°Co
[0014]实施例1，
在2000ml的三口瓶中加入795g醋酸叔丁酯，之后加入100g gln，搅拌，降温至5°C以下，滴加入103.lg高氯酸，在20°C下反应36小时，之后加400ml水，用氢氧化钠调节体系pH值为8左右，并用500ml醋酸叔丁酯再萃取水相产品一次，合并产品相再用饱和盐水洗两次，之后浓缩至干得油35g，即为h-gln-otbu，收率:22.8%。
[0015]在2000ml 的三口瓶中加入 35g h-gln-otbu，再加入 58.3g 的 fmoc-osu 和 250ml的丙酮，用碳酸钠水溶液调节体系pH值为8-9，15°C下反应6小时，TLC跟踪监测反应进程，反应完成后，将体系用500ml的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂洗4次，之后用1L的醋酸乙酯萃取，用100g柠檬酸酸化并酸水洗涤3次，后经过水洗，饱和盐水，干燥，脱溶，得干品68g，即为:Να-芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯。
[0016]通过HPLC对产品Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯进行分析，Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯纯度为95.4%，NMR和MS正确，见图1和图2。
[0017]实施例2，
在2000ml的三口瓶中加入298.2g醋酸叔丁酯，之后加入75g gln，搅拌，降温至5°C以下，滴加入67.04g高氯酸，在15°C下反应24小时，之后加400ml水，用氢氧化钠调节体系pH值为8左右，并用500ml醋酸叔丁酯再萃取水相产品一次，合并产品相再用饱和盐水洗两次，之后浓缩至干得油30g，即为h-gln-otbu，收率:26.2%。
[0018]在2000ml 的三口瓶中加入 30g h-gln-otbu，再加入 62.6g 的 fmoc-osu 和 250ml的THF，用碳酸钠水溶液调节体系pH值为8-9，反应8小时，TLC跟踪监测反应进程，反应完成后，将体系用500ml的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂洗3次，之后用1L的醋酸乙酯萃取，用80g柠檬酸酸化并酸水洗涤3次，后经过水洗，饱和盐水，干燥，脱溶，得干品54g，即为:Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯。
[0019]通过HPLC对产品Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯进行分析，Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯纯度为96.2%，NMR和MS正确，见图1和图2。
[0020]实施例3，
在2000ml的三口瓶中加入788.6g醋酸叔丁酯，之后加入66.lg gln，搅拌，降温至5°C以下，滴加入81.8g高氯酸，在25°C下反应36小时，之后加如400ml 用氢氧化钠调节体系pH值为8左右，并用500ml醋酸叔丁酯再萃取水相产品一次，合并产品相再用饱和盐水洗两次，之后浓缩至干得油31g，即为h-gln-otbu，收率:30.6%。
[0021]在2000ml 的三口瓶中加入 31g h-gln-otbu，再加入 77.56g 的 fmoc-osu 和 290ml的二氧六环，用碳酸钠水溶液调节体系pH值为8-9，反应10小时，TLC跟踪监测反应进程，反应完成后，将体系用500ml的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂洗4次，之后用1L的醋酸乙酯萃取，用90g柠檬酸酸化并酸水洗涤3次，后经过水洗，饱和盐水，干燥，脱溶，得干品57g即为:Να-芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯。
[0022]通过HPLC对产品Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯进行分析，Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯纯度为98.2%，NMR和MS正确，见图1和图2。
[0023]实施例4，
在3000ml的三口瓶中加入1591g醋酸叔丁酯，之后加入100g gln，搅拌，降温至5°C以下，滴加入140.96g高氯酸，在25°C下反应48小时，之后加如400ml水，用氢氧化钠调节体系pH值为8左右，并用500ml醋酸叔丁酯再萃取水相产品一次，合并产品相再用饱和盐水洗两次，之后浓缩至干得油44g，即为h-gln-otbu，收率:31.7%。
[0024]在2000ml 的三口瓶中加入 44g h-gln-otbu，再加入 80.7g 的 fmoc-osu 和 300ml的丙酮，用碳酸钠水溶液调节体系pH值为8-9，反应8小时，TLC跟踪监测反应进程，反应完成后，将体系用500ml的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂洗4次，之后用1L的醋酸乙酯萃取，用120g柠檬酸酸化并酸水洗涤3次，后经过水洗，饱和盐水，干燥，脱溶，得干品81g即为:Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯。
[0025]通过HPLC对产品Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯进行分析，Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯纯度为98.2%，NMR和MS正确，见图1和图2。
[0026]实施例5
在3000ml的三口瓶中加入2000ml醋酸叔丁酯，之后加入100g gln，搅拌，降温至5°C以下，滴加入58.6ml高氯酸，在20°C下反应36小时，之后加如400ml 用氢氧化钠调节体系pH值为8左右，并用500ml醋酸叔丁酯再萃取水相产品一次，合并产品相再用饱和盐水洗两次，之后浓缩至干得油44g，即为h-gln-otbu，收率:31.7%。
[0027]在2000ml的三口瓶中加入44g h-gln-otbu，再加入62g的fmoc-cl和300ml的丙酮，用碳酸钠水溶液调节体系pH值为8-9，反应8小时，TLC跟踪监测反应进程，反应完成后，将体系用500ml的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂洗4次，之后用1L的醋酸乙酯萃取，用120g柠檬酸酸化并酸水洗涤3次，后经过水洗，饱和盐水，干燥，脱溶，得干品62.7g即为:Ν α -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯。
[0028]通过HPLC对产品Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯进行分析，Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯纯度为95.12%，NMR和MS正确，见图1和图2。
[0029]实施例6
在3000ml的三口瓶中加入146.lg的gln和1461ml叔丁醇，之后冰盐浴降温，之后缓慢滴加入80ml浓硫酸，反应完成后用三乙胺调节体系pH值至8.5，TLC检测有谷氨酰胺叔丁酯，之后向体系中加入800ml水，再加入fmoc-osu，分批加入，tic检测反应进程，共加入57gfmoc-osu，同时用三乙胺调节体系pH值为8.5，体系有白色固体产生，TLC全部反应完成后，将体系用500ml的醋酸乙酯和石油醚的混合溶剂洗4次，之后用500mL的醋酸乙酯萃取，用70g柠檬酸酸化并酸水洗涤3次，后经过水洗，饱和盐水，干燥，脱溶，得干品47g即为:Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯。
[0030]通过HPLC对产品Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯进行分析，Να -芴甲氧羰基-谷氨酰胺叔丁酯纯度为92.3%，NMR和MS正确，见图1和图2。
[0031]实施例7
在3000mL的三口瓶中加入100g的gln和1000ml的水，之后调节体系pH值为8_9，降温至0°C，之后滴加116.7