入精氨酸盐酸盐至0. 5%，甘氨酸至3%，做为稳定剂；在FIX 溶液中加入组氨酸〇. 5%，甘氨酸至3%，做为稳定剂； 10, 分别用20纳米滤芯对以上凝血FVII及FIX溶液进行除病毒过滤； 11，分别用0. 22Pm滤芯对以上凝血FVII及FIX溶液进行除菌过滤并分装； 12, 将以上分装好的样品放入两台冻干机分别冻干，得到凝血FVII及FIX冻干品； 13, 同时将FVII及FIX冻干品在100°C沸水浴中保温30分钟，进行干热病毒灭活。
[0019] 实施例二 1，去冷胶血浆的制备：同实施例一； 2,第一次强阴离子交换柱层析：将步骤1得到的澄清去冷胶血浆上Capto-Q柱，柱子 预先用平衡缓冲液（PH7. 30-7.40，0.02M柠檬酸钠，0.1M氯化钠，）平衡；上柱结束后， 用以上平衡缓冲液冲洗柱子，然后用洗脱缓冲液（PH7. 30-7. 40，0. 02M柠檬酸钠，0. 8M 氯化钠，0. 02M盐酸精氨酸）洗脱柱子，收集洗脱液(富含凝血FVII与FIX); 3，PEG沉淀去杂蛋白：以上洗脱液中加入50%PEG溶液使最终PEG浓度至6%，搅拌0. 5 小时，后用1.OMffl串联0. 45μπι滤芯过滤，得到澄清的滤液； 4, S/D病毒灭活：同实施例一； 5, 第二次强阴离子柱层析：将上述S/D后的溶液用稀释液（PH7. 30-7. 40，0. 02M柠檬 酸钠，〇. 02M盐酸精氨酸）稀释到电导率小于15ms/cm(25°C)，然后上Capto-Q柱，柱子预 先用平衡缓冲液（PH7. 30-7.40，0.02M柠檬酸钠，0. 15M氯化钠，）平衡；上柱结束后，用 以上平衡缓冲液洗涤柱子，然后用洗脱缓冲液A(PH7. 30-7.40，0.02M柠檬酸钠，0. 3M氯 化钠，0.02M盐酸精氨酸）洗脱柱子，收集洗脱液A(凝血七因子粗品）；再用洗脱缓冲液 B(PH7. 30-7. 40，0. 02M柠檬酸钠，1. 0M氯化钠，0. 02M盐酸精氨酸）洗脱，收集洗脱液B (凝血九因子粗品）；得到凝血FIX粗品，置于2-8°C; 6, 弱阴离子柱层析纯化凝血FVII:将上述洗脱液A用稀释液（PH7. 30-7.40，0.02M柠 檬酸钠，0.02M盐酸精氨酸）稀释到原来的3倍，然后上DEAE-S印haroseFF柱，柱子预 先用平衡缓冲液（PH7. 30-7.40，0.02M柠檬酸钠，0. 1M氯化钠，）平衡；上柱结束后，用 以上平衡缓冲液洗涤柱子，然后用洗脱缓冲液（PH7. 30-7.40，0.02M柠檬酸钠，0. 3M氯化 钠，0. 02M盐酸精氨酸）洗脱柱子，得到精制的凝血七因子溶液；用0. 45μπι滤芯过滤得到澄 清滤液，置于2-8°C; 7, 肝素亲和柱层析纯化凝血FIX:将步骤5得到的洗脱液B用稀释液（PH7. 30-7. 40， 0· 02M柠檬酸钠，0· 02M盐酸精氨酸）稀释到电导率小于15ms/cm(25°C)，上！feparin S印haroseCL-6B柱，柱子预先用平衡缓冲液（0.02M柠檬酸钠，0. 15M氯化钠溶 液，PH7. 30-7. 40)平衡，，后用洗涤缓冲液（0. 02M柠檬酸钠，0. 25M氯化钠溶液， PH7. 30-7. 40)洗涤，再用洗脱缓冲液（0. 02M柠檬酸钠，0. 04M盐酸精氨酸，1. 0M氯化钠 溶液，PH7. 30-7. 40)洗脱，收集洗脱液，用0. 45Mm滤芯过滤以上洗脱液得到精制的凝血FIX 溶液； 8, 用10k分子量的超滤膜包分别浓缩步骤6, 7得到的凝血FVII及FIX滤液，并用透 析液（0. 02M柠檬酸钠，0. 1M氯化钠溶液，PH6. 90-7. 10)分别透析，后浓缩至所需活力效 价后移出超滤膜包，分别得到凝血FVII及凝血FIX浓缩液196克，219克，活力分别为 41.lIU/ml, 38. 2IU/ml; 9~13,同实施例一。
[0020] 实施例三 1，去冷胶血浆的制备：同实施例一； 2, 第一次强阴离子交换柱层析：将步骤1得到的澄清去冷胶血浆上Capto-Q柱，柱子 预先用平衡缓冲液（PH6. 50-6.60，0.02M柠檬酸钠，0. 15M氯化钠，）平衡；上柱结束后， 用以上平衡缓冲液冲洗柱子，然后用洗脱缓冲液（PH7. 30-7. 40，0. 02M柠檬酸钠，0. 6M 氯化钠，0. 02M盐酸精氨酸）洗脱柱子，收集洗脱液(富含凝血FVII与FIX); 3, PEG沉淀去杂蛋白：以上洗脱液中加入50%PEG溶液使最终PEG浓度至4%，搅拌1 小时，后用1.OMffl串联0. 45μπι滤芯过滤，得到澄清的滤液； 4, S/D病毒灭活：同实施例一； 5, 第二次强阴离子柱层析：将上述S/D后的溶液用稀释液（PH6. 50-6. 60，0. 02M柠檬 酸钠，〇. 02M盐酸精氨酸）稀释到电导率小于15ms/cm(25°C)，然后上Capto-Q柱，柱子预 先用平衡缓冲液（PH6. 50-6.60，0.02M柠檬酸钠，0. 15M氯化钠，）平衡；上柱结束后， 用以上平衡缓冲液洗涤柱子，然后用洗脱缓冲液A(PH7. 30-7. 40，0. 02M柠檬酸钠，0. 25M 氯化钠，0.02M盐酸精氨酸）洗脱柱子，收集洗脱液A(凝血七因子粗品）;再用洗脱缓冲液 B(PH7. 30-7. 40，0. 02M柠檬酸钠，0. 7M氯化钠，0. 02M盐酸精氨酸）洗脱，收集洗脱液B (凝血FIX粗品），置于2-8°C; 6, 弱阴离子柱层析纯化凝血FVII:将上述洗脱液A用稀释液（PH6. 50-6.60，0.02M柠 檬酸钠，0. 02M盐酸精氨酸）稀释到原来的2倍，然后上DEAE-S印haroseFF柱，柱子预先 用平衡缓冲液（PH6. 50-6.60，0.02M柠檬酸钠，0. 1M氯化钠，）平衡；上柱结束后，用以 上平衡缓冲液洗涤柱子，然后用洗脱缓冲液（PH6. 50-6.60，0.02M柠檬酸钠，0. 25M氯化 钠，0. 02M盐酸精氨酸）洗脱柱子，得到精制的凝血七因子溶液；用0. 45μπι滤芯过滤得到澄 清滤液，置于2-8°C; 7, 肝素亲和柱层析纯化凝血FIX:将步骤5得到的洗脱液B用稀释液（PH6. 90-7. 10， 0. 02M柠檬酸钠，0. 02M盐酸精氨酸）稀释到电导率小于15ms/cm(25°C)，上 ifeparinS印harose6FF柱，柱子预先用平衡缓冲液（0.02M柠檬酸钠，0.15M氯化钠 溶液，PH6.90-7. 10)平衡，，后用洗涤缓冲液（0.02M柠檬酸钠，0. 25M氯化钠溶液， PH6.90-7. 10)洗涤，再用洗脱缓冲液（0.02M柠檬酸钠，0.04M盐酸精氨酸，0.6M氯化钠 溶液，PH6. 90-7. 10)洗脱，收集洗脱液，用0. 45Mm滤芯过滤以上洗脱液得到精制的凝血FIX 溶液； 8, 同实施例一，最后分别得到凝血FVII及凝血FIX浓缩液219克，242克，活力分别为 37.8IU/ml, 36.7IU/ml； 9~13,同实施例一。
[0021] 附表试制品FVII及FIX收率及比活一览表
【主权项】
1. 一种从去冷胶血浆中同时制备人凝血因子IX及VII的方法，其特征在于：包括如下 步骤： (1) 去冷胶血浆的制取 将新鲜冰冻血浆融化，在〇-3°C下连续离心，去除冷胶，上清即为去冷胶血浆，后用 颇尔公司生产的Supradur50P滤板串联0. 45Mm滤芯过滤，得到澄清的去冷胶血衆；过 滤前，用缓冲液预洗滤芯；缓冲液由柠檬酸钠、氯化钠及水组成，其中柠檬酸钠浓度为 0. 01M-0. 02M，氯化钠浓度为0. 075M-0. 15M氯化钠，缓冲液PH值为6. 50-7. 50,温度 10-15。。； (2) 第一次强阴离子交换柱层析 步骤（1)得到的澄清去冷胶血浆上强阴离子交换柱，柱子预先用平衡缓冲液1平衡；上 柱过程中收集穿透液于带低温冷媒夹套的坦克中，用于后续